Name: RNAi 게놈 넓은 검사 Oncolytic 바이러스 치료 변조 호스트 요소를 식별 하 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: 학습하세요 고처리량 RNAi 스크리닝을 통해 온코라이틱 바이러스 치료를 강화하는 숙주 표적을 식별하는 방법을. 이 기법은 바이러스 복제를 조절하는 숙주 유전자와 세포 경로를 포괄적으로 분석하여 암 치료 전략 개선에 활용됩니다.

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이 작품은 혁신, 오타와 지역 암 재단, 그리고 테리 폭스 연구소에 대 한 암 연구, 캐나다 재단에 대 한 온타리오 연구소에서 교부 금에 의해 지원 되었다. K.J.A. Vanier 캐나다 대학원 장학금, 건강 연구-마스터의 수상, 캐나다 연구소에 의해 지원 되었다 및 온타리오 대학원 장학금.

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저자는 공개 없다.

여기 선물이 oncolytic 바이러스 치료를 강화 하도록 조작 될 수 있는 호스트 대상을 식별 하기 위해 높은 처리량 RNAi 심사 위한 프로토콜. 이 성공적으로 oncolytic 라바 바이러스와 oncolytic vaccinia 바이러스, 테스트 되었습니다 하지만, 앞에서 언급 했 듯이, 그것은 적응 시킬 수 있다 다른 oncolytic 바이러스 또는 다른 바이러스와 함께 사용 하기 위해 일반적으로 바이러스 복제를 조절 하는 유전자를 호스트를 식별 하기 위해. 심사 프로토콜 또한 증가 하거나 감소 확산, 유전자를 식별 하도록 설계 되었습니다 하지만 다른 정보에 대 한 쉽게 수정할 수 있습니다. 마 라바 바이러스, 예를 들어, 우리의 스크린 oncolysis 점수 세포 생존 능력 분석 결과 간단한 resazurin 기반 중요 한 염료를 이용 하 여 조절 하는 유전자를 식별 하도록 설계 되었습니다 ( 그림 4참조)15. 바이러스, 부...

높은 처리량 게놈 넓은 RNAi 심사 공개 연구 바이러스 생물학 등의 다양 한 분야에서 생물 학적 통찰력을 위한 도구로 입증 되었습니다. 지난 십년 동안 수많은 그룹 인데요 셀 기반 대규모 RNAi 심사 광범위 하 게 변조 바이러스 복제 (,12,3,4 검토 됨 호스트 유전자를 식별 하 , 5 , 6 , 7). 흥미롭게도, 이러한 스크린 수가 많은 암 세포와 바이러스에 현재 oncolytic 바이러스 vaccinia 바이러스8,9,10 포함 하 여 여러 실시 되었습니다 , Myxoma 바이러스11, 포진 심 플렉스 바이러스12, vesicular 구내 염 바이러스13,14및 마 라바 바이러스15. 이러한 연구의 대부분의 초점은 바이러스 복제의 일부 측면에 영향을 주는 호스트 요소 식별에 그리고 oncolytic 바이러스 치료 향상을 위한 biotherapeutic 목표 식별에 동안, 귀중 한 데이터에 이러한 데이터 세트에서 채굴 수 있습니다. 이 관계. 그것은 분명 그 oncolytic 바이러스 치료를 강화 하도록 조작 될 수 있는 호스트 대상을 식별 하는 강력한 잠재력 하지 완전히 악용 되어.
Oncolytic 바이러스 플랫폼의 과다는 현재 단계의 임상 시험 될지도 성공 했다는 헤 르 페 스 단순 바이러스 reovirus, vaccinia 바이러스를 포함 하 여 전 임상 및 임상 연구에서 테스트 되 고 있습니다. 이러한 플랫폼의 대부분에 대 한 노력 강화 치료를 변경 바이러스 게놈 향해 감독 되었습니다. 예를 들어, 종양 특이성을 증가, 특정 바이러스 유전자가 되었습니다 삭제 하거나 크게 정상 세포, 종양 세포에만 바이러스의 복제를 제한 하려면 변경 합니다. 경우에 따라 transgenes 추가 되었습니다 GM-CSF (granulocyte 대 식 세포 콜로 니 자극 인자) 면역 응답 약효를 또는 NIS (나트륨 요오드 화물 symporter) 에서 생체 내 이미징 및 세포 radioiodide 통풍 관 같은 치료 용도입니다. 그러나, 아주 작은 작업 호스트/종양 유전자를 조작 하 고 호스트/종양 유전자 oncolytic 바이러스 복제에의 영향을 탐구에 집중 되었습니다. 높은 처리량 검열 기술의 도래와 함께 그것은 지금 게놈 규모에 주인 바이러스 상호 작용을 조사 하 고 호스트 게놈 oncolytic 바이러스 치료 향상을 조작 하는 기회를 해독 가능 (16, 에서 17,18).
우리는 첫 번째 연구 설명-의 증거-개념 높 처리량 유전자 oncolytic 바이러스 치료를 강화 하도록 조작 될 수 있는 대상 호스트를 식별 하기 위해 심사를 사용 하 여에 대 한 보고. 라바 바이러스 oncolysis, 현재 단계에서 테스트 중인 oncolytic rhabdovirus 변조 호스트 유전자를 I 및 II 시험, 우리 게놈 넓은 RNAi 스크린에 걸쳐 실시는 siRNA (짧은 방해 RNA)와 중복에서 3 다른 종양 세포 라인 18,120 유전자15를 대상으로 하는 라이브러리. 조회 화면에서 확인 된 경로 분석 응급실 (바인딩과 그물) 스트레스 응답 경로 구성원의 농축을 밝혔다. 우리는 그 기본 화면에서 다른 대상 시퀀스와 siRNA를 사용 하 여 보조 유효성 검사에 대 한 이러한 경로 내에서 10 안타를 선택. 3 차 유효성 검사의 일환으로, 우리는 IRE1α와 구조 실험을 실시 (inositol 필요한 효소 1 알파)를 대상에 적중 되었는지 확인. 생체 외에서 그리고 vivo에서 IRE1α의 작은 분자 억제 물을 사용 하 여 테스트 결과 극적으로 향상 된 oncolytic 효능.
Workenhe 외. 12 또한 실시 풀링된 lentiviral shRNA (짧은 헤어핀 RNA)를 사용 하 여 게놈 넓은 RNAi 스크린 인간 포진 심 플렉스 바이러스 제한 호스트 요소를 식별 하는 16,056 유전자를 대상으로 하는 라이브러리 타입 1 (HSV-1) 돌연변이 KM100 중재 oncolysis의 유 방 암 세포입니다. 기본 화면에서 그들은 343 유전자 모의 감염 세포; 이상 KM100 감염 세포의 향상 된 세포 독성 이어질의 최저 확인 그들은 선택 보조 유효성 검사에 대 한 이러한 유전자의 24. 24 유전자 중 8 유전자는 그들 중 하나는 보조 화면에서 확인 되었다 SRSF2 (2 요소 떠들고/아르기닌 풍부한 접합) 이후 3 차 유효성 검사 중 유전 구조 실험을 사용 하 여 확인 했다 되 고. 그룹의 식별을 DNA topoisomerase 억제제 화학요법 SRSF2의 인 산화를 감소를 보여주었다 TUBO 종양 방위 쥐의 확장된 생존에이 억제제 리드와 함께 HSV-1 KM100의 조합 치료에 갔다.
앞서 언급 한 연구에서 비슷한 워크플로 뒤를 이었다. 각 보조 화면 기본 화면에서 확인 하는 조회 수의 선택 수에 따라 기본 게놈 넓은 RNAi 스크린으로 시작 했다. 이 히트 대상에 했다는 포함 3 차 검증 연구에 의해 그 뒤를 이었다 유전 수행 하 여 대상 유전자 제품 비보를 조작 하 여 수행 하는 궁극적인 유효성 검사 실험 체 외에 구조. 이 문서에서는, 우리는 먼저 개발 및 최적의 transfection 조건, 바이러스, 및 감염의 길이 결정 하는 포함 한다 높은 처리량 siRNA 심사 분석 결과의 유효성 검사에 대 한 일반적인 프로토콜 제공. 높은 처리량 siRNA 화면으로 보조 화면 유효성 검사와 3 차 유효성 검사를 수행 하기 위한 방법에 대 한 전반적인 설명을 우리는 또한 주를 실시 하기 위한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>Consumables</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>siRNA library</td><td>GE Dharmacon</td><td>G-005005-02</td><td></td></tr><tr><td>Corning 384웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>3985</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 384웰 플레이트</td><td>Becton Dickinson</td><td>353962</td><td></td></tr><tr><td>Water</td><td>Sigma</td><td>W4502</td><td></td></tr><tr><td>siGenome SMARTpool PLK1</td><td>GE Dharmacon</td><td>M-003290-01</td><td></td></tr><tr><td>AllStars 음성 대조군 siRNA</td><td>Qiagen</td><td>SI03650318</td><td></td></tr><tr><td>siGenome 비표적 siRNA 풀 #2</td><td>GE Dharmacon</td><td>D-001206-14-20</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/HIGH 포도</td>당 <td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30022.01</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>시그마</td><td>F15051-500ML</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 용액(1M)</td><td>시그마</td><td>H3535-100ML</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신 100X 솔루션</td><td>GE 헬스케어 생명과학</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>트립신-EDTA (0.25%)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>2500056</td><td></td></tr><tr><td>DPBS/Modified</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30028.02</td><td></td></tr><tr><td>리포펙타민 RNAiMAX</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13778100</td><td></td></tr><tr><td>올리고펙타민</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1225011</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>22600-050</td><td></td></tr><tr><td>레사주린 나트륨 염</td><td>Sigma</td><td>R7017-5G</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H21492</td><td></td></tr><tr><td>포름알데히드(중량 37%)</td><td>Fisher Scientific</td><td>F79-4</td><td></td></tr><tr><td>500ml 병</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>430282 마이크로플레이트용 접착 밀봉 필름</td><td>Excel Scientific</td><td>361006007</td><td></td></tr><tr><td>박리 가능한 열 밀봉 호일</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AB-3720</td><td></td></tr><tr><td>BioTek MicroFlo Select 디스펜서 카세트</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-120-625</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Catalog 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>MicroFlo Select (liquid dispenser)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11120621</td><td></td></tr><tr><td>BioTek Synergy HT 플레이트 리더</td><td>Biotek</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Opera 이미징 및 분석 기기</td><td>PerkinElmer</td><td>HH10000115</td><td></td></tr><tr><td>KiNEDx 로봇 팔</td><td>피크 분석 및 자동화(이전 Peak Robotics)</td><td>KX-300-660</td><td></td></tr><tr><td>Cytomat 24C 시리즈 자동화 인큐베이터</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50080227</td><td></td></tr><tr><td>JANUS 자동화</td><td>워크스테이션 PerkinElmer</td><td>AJI4M01</td><td></td></tr><tr><td>플레이트 캐러셀</td><td>피크 분석 및 자동화(이전 Peak Robotics)</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Alps 3000 플레이트 씰러</td><td>써모 피셔 사이언티픽</td><td>AB-3000</td><td></td></tr></tbody></table>

rnai 게놈 넓은 검사 oncolytic 바이러스 치료 변조 호스트 요소를 식별 하

Genome-wide RNAi Screening to Identify Host Factors That Modulate Oncolytic Virus Therapy

높은 처리량 게놈 넓은 RNAi (RNA 간섭) 심사 기술 바이러스 복제에 영향을 주는 호스트 요소를 발견 하기 위해 널리 사용 되었습니다. 여기 우리는 특별히 치료를 향상의 목표와 라바 바이러스는 oncolytic rhabdovirus, vaccinia 바이러스의 복제를 조절 하는 잠복 호스트 대상에이 기술의 응용 프로그램을 제시. 이 방법은 다른 oncolytic 바이러스에 적용 이며 또한 포유류 세포에 있는 바이러스 복제를 조절 하는 호스트 대상 식별 하는 데 이용 될 수 있다 사용 oncolytic 라바 바이러스와 oncolytic vaccinia 바이러스에 대 한 프로토콜 테스트 하는 동안 일반. 이 프로토콜 개발 및 포유류 세포, 주요 고려 사항 및 기본 높은 처리량 RNAi 스크린, 그리고에 대 한 단계별 가이드를 실시 하기 위한 중요 한 준비 단계에서 높은 처리량 RNAi 심사에 대 한 분석 결과의 유효성 검사에 설명 합니다. 실시 하는 주 높은 처리량 RNAi 스크린; 또한, 그것은 광범위 하 게 보조 화면 유효성 검사와 3 차 검증 연구를 수행 하기 위한 방법을 설명 합니다. 검사는 광범위 하 고 편견 패션, 바이러스 복제를 하나 infectivity, 등 생체 외에서 시험을 개발할 수 있습니다의 모든 측면을 변조 호스트 요소에에서 카탈로그를 하나 수 있다는 높은 처리량 RNAi의 혜택 버스트 크기, 그리고 세포 독성입니다. 그것은 biotherapeutic 대상 외 현재 지식 기반을 밝히기 힘이 있다.

워크플로 호스트 oncolytic 바이러스 치료를 향상 시키기 위해 목표를 식별 하는 데에 대 한 개요는 그림 1에 표시 됩니다.
그림 1에서 볼 수 있듯이 중요 한 첫 번째 단계는 높은 처리량 RNAi 스크린 실시 분석 결과 개발입니다. 그림 2A transfection 최적화 분석 결과 대 한 샘플 접시 레이아웃을 제공합니다. 그림 2B 예상된 결과의 대표 이미지의 구성 이며 그림 2C 예상된 결과의 대표 작. PLK-1, 유전자는 세포 죽음을 유도 하 고 siRNA 때 려 눕 힘 효율성을 모니터...

여기 우리는 프로토콜 설명 높은 처리량 RNAi 심사 oncolytic 바이러스 치료를 강화 하도록 조작 될 수 있는 호스트 대상을 폭로를 위한, 특히 rhabodvirus 및 vaccinia 바이러스 치료, 하지만 그것은 다른 oncolytic 쉽게 적용할 수 있습니다 바이러스 플랫폼 또는 변조 바이러스 복제를 일반적으로 호스트 유전자 발견.

RNAi 게놈 넓은 검사 Oncolytic 바이러스 치료 변조 호스트 요소를 식별 하

High-throughput genome-wide RNAi (RNA interference) screening technology has been widely used for discovering host factors that impact&#160;virus ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 종양 용해성 바이러스 요법을 향상시키기 위해 조작할 수 있는 숙주 표적을 식별하는 것입니다. 이 방법은 종양 용해성 바이러스 치료 분야의 주요 질문, 예를 들어 어떤 특정 숙주 인자 및 세포 경로가 종양 용해성 바이러스 복제를 조절하는지와 같은 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 포괄적이고 편향되지 않은 방식으로 종양 용해성 바이러스 요법을 향상시키기 위해 조작할 수 있는 숙주 표적을 식별할 수 있다는 것입니다.이 프로토콜은 일반적으로 바이러스 복제를 조절하는 숙주 요인을 식별하는 데에도 사용할 수 있습니다. 텍스트 프로토콜에 따라 고처리량 스크리닝 분석을 개발한 후 냉동고에서 마이크로타이터 플레이트 배치를 제거하고 20-30분 동안 해동합니다. 그 동안 두 병에 70% 에탄올을 채운 다음 50mL 원뿔형 튜브 2개에 PBS를, 1병에 증류수를 채웁니다.액체 디스펜서 튜브를 70% 에탄올 병에 담근 다음 튜브 주위에 마스킹 테이프를 붙여 튜브가 멸균된 것으로 간주될 수 있는 지점을 표시합니다. 약 25mL의 70% 에탄올을 사용하여 튜브를 프라이밍합니다. 손실된 부피를 대체하기 위해 병에 추가 에탄올을 붓고 튜브를 최소 5분 동안 에탄올에 그대로 두십시오.세포 배양 후드를 준비한 후 밀봉된 플레이트를 원심분리하고 실온에서 2분 동안 1026배 G로 설정합니다. 그런 다음 플레이트에서 씰을 제거합니다. 그런 다음 필요한 양의 transfection 시약을 pre-warmed transfection 시약 희석제가 들어 있는 원뿔형 튜브에 피펫으로 넣습니다.각 플레이트에서 배지를 흡인하여 세포를 트립신화하기 시작합니다. PBS 9mL를 사용하여 세포를 헹구고 플레이트당 트립신 3mL를 피펫팅합니다. 세포를 섭씨 37도에서 약 5분 동안 배양합니다.그런 다음 22mL의 배지를 사용하여 세포를 위아래로 10회 재현탁합니다. 각 조직 배양 플레이트의 세포 현탁액을 멸균 병에 결합하고 병을 반전시켜 세포 현탁액을 혼합합니다. 그런 다음 세포 현탁액의 1mL 분취물을 두 개의 별도 마이크로분리 튜브로 피펫팅합니다.각 마이크로분리관에서 샘플을 제거하고 세포를 계수합니다. 그런 다음 필요한 밀도에 필요한 세포 현탁액의 부피를 계산하고 한 배치의 플레이트에 걸쳐 분배할 수 있을 만큼 충분히 희석된 세포 현탁액을 준비합니다. 세포가 준비되는 동안 에탄올의 액체 디스펜서 튜브를 비우십시오.약 25mL의 PBS를 사용하여 튜브를 프라이밍한 다음 튜브를 비웁니다. transfection 시약에 담그고 나중에 세포 현탁액에 담글 튜브 부분이 멸균 상태로 유지되도록 합니다. 하나의 원뿔형 tube of transfection 시약 용액으로 안전하게 수행할 수 있는 플레이트를 분리하십시오.transfection 시약 용액을 위아래로 10회 피펫팅합니다. 그런 다음 웰당 5마이크로리터를 분배하기 전에 용액을 사용하여 튜브를 프라이밍합니다. 1026회 G로 실온에서 1분 동안 플레이트를 원심분리합니다.그런 다음 사용 중인 transfection 시약에 대해 규정된 시간 동안 실온에서 플레이트를 배양합니다. 배양하는 동안 transfection 시약 용액의 튜브를 비우고 PBS가 들어 있는 전체 50mL 원뿔형 튜브에 넣습니다. 그런 다음 약 25mL의 PBS를 사용하여 프라이밍한 다음 비워 튜브를 헹굽니다.셀 현탁액이 들어 있는 병을 혼합한 다음 튜브를 현탁액에 놓고 각 팁이 제대로 분배되는지 확인할 수 있도록 튜브를 충분히 프라이밍합니다. 모든 플레이트에 걸쳐 cell suspension의 웰당 30마이크로리터를 분주합니다. 튜브에서 세포 현탁액을 비운 다음 약 25mL의 PBS로 튜브를 헹구고 약 50mL의 증류수를 헹굽니다.세포 파종 시점부터 45-60분 동안 플레이트를 실온에 두십시오. 그런 다음 방해받지 않는 인큐베이터에서 원하는 길이의 유전자 침묵 동안 플레이트를 배양합니다. 시간을 절약하기 위해 세포를 감염시키기 전날 감염되지 않은 웰용 배지를 포함하여 각 플레이트 배치를 감염시키는 데 필요한 정확한 양의 배지를 멸균 병에 피펫으로 주입합니다.매체를 섭씨 37도에서 데운 다음 2 병에 70 % 에탄올, 2 개의 50mL 원뿔형 튜브에 PBS, 1 병에 증류수를 채 웁니다. 앞에서 설명한 대로 70% 에탄올로 튜브를 살균합니다. 튜브가 에탄올에 있는 동안 먼저 바이러스를 소용돌이치게 한 다음 필요한 정확한 양의 바이러스를 감염 배지 병에 피펫으로 넣습니다.그런 다음 25mL의 PBS를 사용하여 튜브를 헹구어 프라이밍한 다음 비웁니다. 인큐베이터에서 플레이트를 제거한 후 조직 배양 후드에 넣습니다. 매체를 사용하여 튜브를 프라이밍한 다음 40마이크로리터의 배지를 감염되지 않은 컨트롤 웰에 분배합니다.매체 튜브를 비우고 PBS 25mL를 사용하여 헹굽니다. 바이러스를 혼합한 후 바이러스가 들어 있는 병에 튜브를 넣고 플레이트에 40마이크로리터의 바이러스를 분배합니다. 플레이트를 400배 G의 실온에서 30분 동안 원심분리합니다.미리 결정된 시간 동안 플레이트를 배양합니다. 고정하기 전날, 각 플레이트 배치에 대해 4%의 포름알데히드와 PBS가 포함된 고정 및 스탠딩 용액 한 병을 준비하되 Hoechst 얼룩은 생략합니다. 용액을 빛을 피하는 가연성 캐비닛에 보관하십시오.다음 날, 70% 에탄올과 PBS를 사용하여 앞에서 설명한 대로 튜브를 헹굽니다. 모든 플레이트에 30마이크로리터의 용액을 분배한 다음 플레이트를 인큐베이터에 30분 동안 넣습니다. 배양 후 씰을 플레이트에 적용하고 빛으로부터 보호된 섭씨 4도에서 보관하십시오.텍스트 프로토콜에 따라 이미징 및 분석을 수행합니다. 여기에 표시된 것은 transfection 시약 희석제만으로 72시간 배양 후 Hoechst 33342로 염색된 786개의 O-세포입니다. 트랜스펙션(Transfection) 시약 및 희석제, 비표적 siRNA, PLK1을 표적으로 하는 siRNA가 포함되어 있습니다.여기에서 볼 수 있는 생존 그래프는 PLK1 siRNA로 transfection된 세포의 22%가 생존했고, non-targeting siRNA로 transfection된 세포의 94%가 생존했음을 나타냅니다. 이 그래프는 다양한 MOI에서 향상된 GFP를 발현하는 종양 용해성 백시니아 바이러스에 감염된 786개의 O-세포의 실시간 경과 결과를 보여줍니다. 라이브 시간 경과에 걸쳐 0.05의 MOI에서 감염된 세포의 대표적인 이미지가 여기에 나와 있습니다.21시간의 잠복기는 시점이 선형 범위 내에 있을 때 확산의 증가 및 감소를 감지할 수 있습니다. 3개의 종양 세포주에 걸친 게놈 전체 RNAi 스크리닝에 이어, MAD 방법을 사용하여 3개의 암 세포주 중 최소 2개에 공통적인 1008개의 히트가 확인되었습니다. UPR 및 ERAD 경로 내에서 10개의 히트가 서로 다른 표적 염기서열을 가진 siRNA를 통한 2차 검증을 위해 선택되었습니다.시약을 분주할 때는 올바른 플레이트 배치가 있는지, 분주를 위한 올바른 부피를 선택했는지, 튜브가 올바른 시약으로 채워졌는지, 항상 시약에 완전히 잠겨 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 종양 용해성 바이러스 요법을 강화하기 위해 조작할 수 있는 숙주 표적을 식별하거나 일반적으로 바이러스 복제를 조절하는 숙주 인자를 식별하기 위해 고처리량 RNAi 스크리닝을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

바이러스 감염에 관련된 소설 호스트 요소는 기능 RNAi 심사의 셀 기반의 게놈 전체의 손실을 통해 확인할 수 있습니다.

에 관련된 호스트 요인에 대한 RNAi 심사 우두</em사용하기> 바이러스 감염 Drosophila 전지

대상 아이디 라이브러리 miRNA 목표를 식별하는 데 사용 복제된 cDNA의 플라스미드 기반의 게놈 전체 모음입니다. 여기는 이용 및 응용 프로그램을 보여줍니다.

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유전자 또는 약물 치료에 사용하기 위해 HIV-1 생산을 표적 RNA를의 효능 및 독성 평가

선물이 RIP-태그;를 활용 하 여 소설 체세포 유전자 전달 시스템을 설명 하는 프로토콜 RIP-tva 마우스 모델 전이에서 유전자의 기능 연구. 조류 레트로 바이러스 intracardiacally 성인 쥐에서 췌 장 β 세포의 사전 악성, 비 침 투 적인 병 변으로 유전자 전송을 보장 하기 위해 전달 됩니다.

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여기, 선물이 arbovirus 복제 및 arbovirus 복제를 제한 하는 2) 진 핵 호스트 요인 1) 바이러스 인코딩된 immunomodulators 식별 프로토콜. 이러한 형광 및 발광 기반 방법을 빠르게 낮은 신호 대 잡음 비율 단순한 분석에 arbovirus 복제의 양적 정보를 연구 수 있습니다.

Arbovirus 감염 바이러스 Immunomodulators 및 호스트 항 바이러스 요인의 식별을 위한 도구를 심사로

이 프로토콜 설명 합니다 자세한 워크플로 생성에 대 한 immunomodulators, 예를 들어 bispecific T 세포 engagers를 인코딩 하는 홍 역 바이러스를 사용 하 여 표현 위한 oncolytic 바이러스의 비보 특성화 전. 응용 프로그램 및 다른 벡터 플랫폼 및 transgenes 적응 임상 번역 소설 immunovirotherapeutics의 개발을 가속화할 것 이다.

종양 대상 Immunomodulation에 대 한 paramyxoviruses: 설계 및 평가 전 비보

렌티바이러스 shRNA의 풀을 이용한 고처리량 RNA 간섭(RNAi) 스크리닝은 악성종양에서 치료적으로 관련된 합성 치사적 표적을 검출하는 도구가 될 수 있다. 우리는 급성 골수성 백혈병 (AML)에서 후성 유전 학적 이펙터를 조사하기 위해 풀링 된 shRNA 스크리닝 접근법을 제공합니다.

약물 내성 표현형을 조절하는 인자를 식별하기 위한 풀링된 shRNA 라이브러리 스크리닝

우리는 유전자 조작 마우스 모델에서 발생하는 종양과 해당 인간 종양 유형에서 발생하는 종양의 치료 표적을 식별하고 비교하기 위해 게놈 분석 및 기능적 게놈 스크리닝을 활용하는 종간 비교 종양유전체학 접근 방식을 개발했습니다.

악성 말초 신경초 종양의 마우스 모델에서 치료 표적을 식별하기 위한 유전자 프로파일링 및 게놈 규모 드롭아웃 스크리닝

삽입 돌연변이 유발은 기능적 게놈 요소를 식별하기 위한 순 유전학의 필수 도구입니다. 여기에서는 렌티바이러스 기반 삽입 돌연변이 유발 세포 라이브러리 내에서 렌티바이러스 통합 부위를 검출하는 방법인 InSET(Insertion-based Screen for functional Elements and Transcripts)에 대해 설명합니다.

Identification of Functionally-Relevant Lentivirus Integration Sites in an Insertional mutagenesis cell library(삽입 돌연변이 유발 세포 라이브러리에서 기능적으로 관련된 렌티바이러스 통합 부위 식별)

학습하세요 고처리량 RNAi 스크리닝을 통해 온코라이틱 바이러스 치료를 강화하는 숙주 표적을 식별하는 방법을. 이 기법은 바이러스 복제를 조절하는 숙주 유전자와 세포 경로를 포괄적으로 분석하여 암 치료 전략 개선에 활용됩니다.

RNAi 게놈 넓은 검사 Oncolytic 바이러스 치료 변조 호스트 요소를 식별 하

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