준비 번데기 기간 및 초파리 guttifera 의 날개 색소 측정 방법

이 실험의 전반적인 목표는 번데기 기간을 단계화하고 Drosophila guttifera의 날개 색소 침착을 측정하는 것입니다. 이 방법은 초파리에서 색소 패턴이 어떻게 발달하는지와 같은 진화 발달 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 형태 학적 발달 및 색소 형성 과정에 대한 자세한 정보를 얻을 수 있다는 것입니다.

이 방법은 Drosophila guttifera의 형태학적 발달 및 색소 형성 과정에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 다른 초파리 종에도 적용할 수 있습니다. 번데기 제거를 시작하려면 종이 타월 조각에 양면 테이프 조각을 부착하십시오. 양면 테이프에 번데기를 배

번데기의 앞쪽과 내부 번데기 사이의 공간을 찾습니다. 집게를 사용하여 이 틈 주위의 번데기를 잡고 제거합니다. 그리고 번데기 머리의 앞쪽을 노출시킵니다.

집게의 끝을 전후 축과 평행하게 움직여 삽입합니다. 집게 끝을 들어 올려 번데기를 국부적으로 부수십시오. 파손이 번데기의 뒤쪽 부분에 도달 할 때까지이 작업을 반복하십시오.

번데기와 번데기 다리 사이에 틈이 생기는지 확인하십시오. 그리고 번데기의 복부 쪽을 부러뜨리면서 내부 번데기의 손상을 최소화합니다. 번데기를 최대한 부순 후 고운 페인트 브러시를 사용하여 번데기를 꺼냅니다.

ddH2O를 적신 티슈 조각에 번데기를 놓고 플라스틱 페트리 접시에 담습니다. 노출된 번데기는 취약하고 쉽게 건조하므로 즉시 사진을 찍으십시오. 이미지 준비를 진행하고 집게로 번데기의 앞부분을 제거합니다.

번데기를 꺼내 플라스틱 페트리 접시에 인산염 완충 식염수(PBS)에 넣습니다. 다음으로 날개의 기저 관절을 자릅니다. 날개가 접히면 ddH2O로 채워진 플라스틱 페트리 접시에 넣어 삼투압으로 확장합니다.

스톡 파일에서 10분마다 한 번씩 새로 닫힌 성체를 수집합니다. CO2 마취 패드를 사용하여 파리를 마취합니다. 부동성에 의한 마취를 확인하고 날개의 기저관절을 절단합니다.

유리 슬라이드에 10마이크로리터의 PBS를 떨어뜨립니다. 드롭에 날개를 놓습니다. 그리고 커버 슬립으로 드롭을 덮으십시오.

그런 다음 실체 현미경의 조명을 켜고 최대로 설정합니다. 대물 렌즈를 11.5x로 설정하고 조리개를 가장 열린 상태로 설정합니다. 그런 다음 카메라를 켜고 카메라를 설정합니다.

샘플에 초점을 맞춥니다.amp현미경의 초점 손잡이를 움직여 le. 리모콘의 셔터 버튼을 눌러 이미지를 촬영합니다. 날개의 이미지를 촬영하고, 캄파니폼 센실럼의 중앙에 위치시키고, 날개의 원위 부분을 왼쪽에 배치하고 날개의 내부 부분을 위쪽에 배치합니다.

중앙에 캄파니폼 센실럼 반점이 있는 이미지를 엽니다. 이미지, 유형 1, 8비트를 클릭하여 이미지를 8비트 이미지로 변환합니다. 영역 선택 도구에서 사각형을 클릭하고 사각형을 그립니다.

사각형의 오른쪽을 설정하여 캄파니폼 센실럼 스폿의 오른쪽에 위치하도록 합니다. Edit(편집), Selection(선택), Add to Manager(관리자에 추가)를 클릭한 다음 Show All(모두 표시) 열을 선택합니다. 그런 다음 선 선택 도구에서 각도 도구를 클릭합니다.

세 번째 세로 정맥의 후방에 첫 번째 선을 그립니다. 선의 왼쪽 끝점을 이전에 그린 사각형의 정점에 설정합니다. 사각형의 위쪽에 두 번째 선을 그립니다.

M 키를 눌러 이 단계에서 그린 두 선 사이의 각도를 측정합니다. 컴퓨터 화면에서 이미지 창을 클릭합니다. 편집, 선택, 관리자에 추가를 클릭합니다.

영역 선택 도구에서 사각형을 클릭하고 이미지 창 크기의 약 1/9 크기의 사각형을 그립니다. 편집(Edit), 선택(Selection), 회전(Rotate)을 클릭합니다. Angle(각도) 열에 이전에 측정된 각도의 마이너스 각도를 쓰고 OK(확인)를 클릭하여 이 단계에서 그린 사각형을 회전합니다.

화살표 키를 사용하여 그린 사각형을 이동하고 사각형의 왼쪽에 있는 두 번째 세로 정맥의 후선의 끝점을 설정합니다. 그리고 직사각형의 아래쪽은 세 번째 세로 정맥의 후방에 부착됩니다. 두 번째 세로 정맥의 끝점에서 세 번째 세로 정맥의 후방선까지 수직선이 그려졌는지 확인합니다.

수직선의 발을 점 A로 정의합니다. 점 A에 커서를 놓을 때 아래 영역 선택 도구에 표시된 점 A의 X 좌표와 Y 좌표를 기록합니다.점 A를 중심에 두고 이미지를 엽니다. 이미지, 유형, 8비트를 클릭하여 이미지를 8비트 이미지로 변환합니다. 영역 선택 도구에서 사각형을 클릭하고 이미지 창 크기의 약 1/9 크기의 사각형을 그립니다.

Edit(편집), Selection(선택), Specify (지정)을 클릭합니다. Oval 및 Centered column을 선택합니다. 너비 및 높이 열에 100픽셀을 씁니다.

X 좌표 열에 점 A의 X 좌표를 쓰고 Y 좌표 열에 점 A의 Y 좌표를 쓴 다음 OK. 그런 다음 분석 및 측정을 클릭합니다. 교정이 이미 완료된 경우 OD가 평균 열에 표시됩니다. 여러 단계의 데이터를 비교한 결과, P12기는 색소 침착이 시작되는 시기이며, 색소 침착 후 12시간 이내에 색소 침착이 완료되는 것으로 나타났습니다.

개발 후 이 기술은 진화 발달 생물학 분야의 연구자들이 초파리 종 간의 번데기 발달 및 색소 형성 과정의 차이를 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.