Name: 단일 셀 대사체학 라이브 개구리 (Xenopus laevis) 배아에 대 한 현미경 모 세관 전기 이동 법 질량 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-22T15:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 16 s
Description: 배우세요 단일 세포 대사체학을 위한 현미경 모세관 전기이동법 질량분석을 사용하여 Xenopus laevis 살아있는 배아의 개별 세포에서 대사물질을 특성화하는 방법을. 이 기술은 세포 및 발달생물학 연구에 필수적인 도구입니다.

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이 작품은 국립 연구소의 건강 보조금 GM114854 (P.N.)에 의해 지원 되었다 및 (P.N.)에 CA211635, 아놀드와 벨 베크만 재단 베크만 영 탐정 부여 (P.N.)는 듀 폰 영 교수 수상 (P.N.), 질량에 대 한 미국 사회 분석 연구 수상 (P.N.), 그리고 (R.M.O. E.P.P.)를 우주 클럽 재단 장학. 의견 및이 책에서 표현 하는 결론은 전적으로 그 저자 고 반드시 자금 출처의 공식 의견을 대표 하지는 않습니다.

저자는 공개 없다.

현미경 CE-ESI-MS 라이브, 자유롭게 개발 배아에 단일 세포에서 대사 산물의 직접 특성을 수 있습니다. 접근 방법의 핵심은 두 가지 기술 하위 구성 요소, 즉 제자리에서 모 세관 microsampling 및 높은 감도 CE-ESI-양 전체 셀 절 개에 비해, 모 세관 microsampling는 빠른 작업 (몇 초 5 분 대의 이점이 있다 / 해 부에 의해 셀), 배아, 그리고 개발의 나중 단계에서 형성 하는 작은 세포를 확장성의 복잡 한 3 차원 형태와의 호환성. 해 부, 달리 현미경 샘플링 그대로 유지 다른 세포는 배아에서 후속 분석을 위한 됩니다. 글, microsampled 셀 수 계속 분열, 세포 분화. 의 장기 연구에 대 한 가능성을 제기 현미경의 팁 크기를 제어 하는 능력은 또한 현미경을 CE-ESI-MS 셀 및 다른 모형 유기 체, 제 브라 등 마우스를 사용 하 여 개발 프로세스에서 신진 대사의 역할을 공부 하 고 다재 다능 한 툴으로 서 역할을 수 있습니다. 신뢰할 수 있는 결...

배아 발달에 대 한 포괄적인 이해 특성화를 발전 유 기체의 모든 세포에 전개 된 모든 분자 변경 필요 합니다. 수 분자 확대와 차세대 시퀀싱 하는 동안 깊은 측정 개발 시스템2,3, 상당히 적은 단일 셀 transcriptomes1 의 작은 분자의 집합에 대 한 알려져 있다 단백질 및, 특히, 대사 산물을 포함 하 여 단일 배아 세포에서 생산 (분자 질량 &#60; ~ 1500 다). 내부 및 외부 이벤트에 신속 하 고 동적 응답,는 대사체 셀의 분자 상태의 강력한 설명자 역할을 합니다. 단일 셀 대사체 따라서 셀이 초기 배아에서의 공간 및 시간 개발을 추적 하 고 기능 연구에 대 한 새로운 분자 식별 가능성이 발생 합니다. 그러나,이 분자에 사용할 수 있는 분자 증폭, 없이 대사체의 뛰어난 감도 사용 하 여 질량 분석 (MS), 대사 산물 분석에 대 한 선택의 기술 요구.
단일 셀 MS (참조 리뷰 4,,56,7,8,9 단 세포 대사 산물을 측정 하기 위해 충분 한 감도와 기술의 모음입니다. ,10,11,12,13,,1415). 셀의 재현 샘플링 및 대사 산물의 효율적 추출 단일 세포에서 대사 산물의 성공적인 탐지에 필수적입니다. Xenopus 배아에서 식별 된 셀의 전체 셀 해 부는 작은 분자의 펩 티 드16특성을 활성화 하 고 있다. 다른 접근 탐지 분무 이온화 (ESI) MS 사용 하 여 다음 개별 라이브 셀 샘플을 micropipettes를 사용 합니다. 예를 들어 대사 산물 단일 셀 비디오 MS17, 압력 프로브18, 단일 프로브19, 및 유체 힘 현미경20, 다른 기술21, 중 식물이 나 포유류 세포에서 측정 했다 22,,2324. 또한, 단일 셀 MS 워크플로에 이온화 전에 화학 분리의 효율적으로 대사체, 따라서 검색 하기 전에 이온 생성 하는 동안 잠재적인 간섭 경감을 단순화 합니다. 중요 한 것은, 분리는 또한 분자 식별을 지원 하기 위해 화합물 관련 정보를 제공 합니다. 모 세관 전기 이동 법 (세 륨) 단일 해 부25,26 또는 microsampled27뉴런, 신경 고기 작은 분자 차이 캡처 metabolites를 감지에 사용 되었습니다. 우리는 최근 ESI 탠덤 Xenopus laevis16,28의 초기 배아에서 해 부 했다 개별 셀에 대사 산물의 수백의 추적 수준 검색 사용 하려면 MS에 CE를 적응. 이러한 연구 개발의 초기 단계에서 배아 세포 간의 놀라운 변화 차이 공개 하 고 알 수 없는 발달에 미치는 영향16와 대사 산물의 발견에 지도 했다.
여기 우리는 살아있는 척추 동물 배아 있지만 단일 셀 CE-ESI-MS29,30을 사용 하 여 직접 단일 셀에 대사 산물의 탐지를 사용 하는 프로토콜을 제공 합니다. 선택한 모델 유기 체는 8-하-32-셀 X. laevis 배아 접근 개발 및 모델 생물의 다른 종류의 나중의 단계에 적용 됩니다. 이 프로토콜 ~ 10 nL 부분 확인 된 셀에 제자리에 형태학 상으로 복잡 한 발전 태아에서의 발음을 고해상도 이미징 시스템으로 지도 다축 변환 제어 날카롭게 모세를 사용 합니다. 이 있지만 작은 셀에 확장 하 고는 태아에서 세포 계보를 추적 하기 위해 충분히 빨리 초 이내에, 작동 한다. 극 지 추출 또는 apolar 작은 분자 대사 산물 등 4 ~ 5에서 수집 된 샘플에서 펩 티 드 후 µ L 추출 솔루션, ~ 10 결과 추출의 nL ESI 질량 분석기에 하이픈이 맞춤식 CE 플랫폼에서 분석 된다. 건설 및 CE-ESI-MS 플랫폼의 다른 곳에서 설명 하는 프로토콜에 작성 합니다. 31 , 32 동축 CE ESI 인터페이스 설명 되어 있는 대로 구성 되어 있습니다. 31 이 플랫폼은 4-5 로그 순서 동적 범위 (상대28,29,30 추적 수준 감도 정량화에 대 한 기능을 달성 하기 위해 콘 제트 분사 정권 유지 또는 절대16). CE-ESI-MS 플랫폼 정량에 10의 테스트 범위는 60-박 한 8% 상대 표준 편차 (RSD)와 탐지의 제공 nM 1 µ m 작은 분자16, X에에서 내 인 성 대사 산물의 특성을 충분 한입니다. laevis 셀. Microprobed 셀 분할 개발30, 세포질 물질 대사의 해결된 일시적으로 그리고 공간 분석에 대 한 허용을 통해 배아 진행으로 계속. 실제로, 단일 셀 CE-ESI-MS 대사 차이 복 부 등16,29, 동물 식물16, 그리고 왼쪽 오른쪽28 개발 축으로 셀을 차지 하는 셀을 찾는 데 사용할 수 있습니다. 그 X. laevis30에서 일반적인 조상 세포에서 신경 조직 운명 등 계보를 형성 한다. 우리는 여기에 설명 된 프로토콜 생체의 광범위 한 배열에 적용 되는 예상 쿼리 X. laevis 배아30의 다른 발달 단계에서 개별 배아 세포의 대사 차이, 외 고 단일 셀 셀 및 모델 생물의 배아 발달의 다른 단계에서 microsampled. 또한, 다른 플랫폼 호환-조금만 샘플 분리 및 생체의 특성에 사용할 수 있습니다.는 있지만 microsampling에 사용 될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td><배아 배양 배지용 강력>시약</강></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>염화</td>칼륨 <td>Fisher Scientific</td><td>BP 366-1</td><td></td></tr><tr><td>황산마그네슘</td><td>Fisher Scientific</td><td>M 65-3</td><td></td></tr><tr><td>질산칼슘</td><td>시그마 Aldrich</td><td>C1396</td><td></td></tr><tr><td>시스테인</td><td>MP Biomedicals</td><td>101444</td><td></td></tr><tr><td>Trizma 염산염</td><td>시그마 알드리치</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>트리즈마 베이스</td><td>시그마 알드리치</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>피셔 사이언티픽</td><td>5641-212</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호<</td><td>strong>Comments</td></tr><tr><td>Metabolite/strongstrongMetabolite) 추출 용매</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile (LC-MS grade)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A955</td><td></td></tr><tr><td>메탄올 (LC-MS 등급)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A456</td><td></td></tr><tr><td>Water (LC-MS grade)</td><td>Fisher Scientific</td><td>W6</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>CE-ESI-MS에 대한 용매 및 표준</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Formic acid (LC-MS grade)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A11710X1-AMP</td><td></td></tr><tr><td>메탄올 (LC-MS 등급)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A456-4</td><td></td></tr><tr><td>Water (LC-MS grade)</td><td>Fisher Scientific</td><td>W6</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Fisher Scientific</td><td>5641-212</td><td></td></tr><tr><td>아세틸콜린 클로라이드</td><td>Acros Organics</td><td>159170050</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</strong</td><td>>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Microprobe Fabrication Setup</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 풀러</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-1000</td><td></td></tr><tr><td>붕규산 모세관</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>B100-50-10</td><td></td></tr><tr><td>미세한 날카로운 집게: Dumont #5, Biologie/Dumoxel</td><td>Fine Science Tools (USA) Inc</td><td>11252-30</td><td>부식 저항성 및 오토클레이브 가능.</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Microprobe Sampling Setup</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Eppendorf, Hauppauge, NY</td><td>TransferMan 4r</td><td></td></tr><tr><td>실체현미경</td><td>Nikon</td><td>SMZ18</td><td>진동으로 절연되어야 합니다.</td></tr><tr><td>조명기(예: 구즈넥)</td><td>Nikon</td><td>C-FLED2</td><td></td></tr><tr><td>마이크로인젝터</td><td>Warner Instrument, Handem, CT</td><td>PLI-100A</td><td></td></tr><tr><td>전사 피펫(플라스틱, 일회용)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-7M</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 60mm 및 80mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>S08184</td><td></td></tr><tr><td>유리 파스퇴르 피펫(일회용)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Thermo Scientific</td><td>Sorvall Legend X1R</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>CE-ESI-MS Setup</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>High voltage power supply</td><td>Spellman</td><td>CZE1000R</td><td>HVPS는 개인용 컴퓨터에서 생성된 저전압 프로그램을 사용하여 원격으로 제어할 수 있습니다. 주의: 높은 볼륨tage는 감전 위험이 있습니다. 모든 연결 부품은 사용자가 우발적으로 노출되지 않도록 접지하거나 조심스럽게 차폐해야 합니다.</td></tr><tr><td>주사기 펌프 (2)</td><td>Harvard Apparatus</td><td>704506</td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Amscope</td><td>SM-3BZZ</td><td>실체현미경은 4.5배; 배율이 가능하며, CE-ESI 인터페이스의 분사 모드를 모니터링하는 조명기가 장착되어 있습니다.</td></tr><tr><td>XYZ translation stage</td><td>Thorlabs</td><td>PT3</td><td></td></tr><tr><td>XYZ translation stage</td><td>Custom-built</td><td></td><td>이 플랫폼은 유체역학적 주입을 통해 나노리터 크기의 시료를 분리 모세관에 로드하고 CE용 BGE를 공급할 수 있습니다. 이 작업에서 설명한 두 인터페이스 모두 6&ndash를 주입할 수 있었습니다. 1m 분리 모세관에 1분 이내에 10nL의 시료</td></tr> 스테인리스 <tr><td>스틸 시료 바이알</td><td>,</td><td></td><td></td>맞춤형</tr><tr><td>스테인리스강 BGE 바이알</td>, <td>맞춤형</td><td></td><td></td></tr><tr><td>용융 실리카 모세관(40 &마이크로; m/105 &마이크로; m 아이디/OD; 100 cm)</td><td>Polymicro 기술</td><td>TSP040105</td><td></td></tr><tr><td>용융 실리카 모세관(75 &micro; M/360 &마이크로; m 아이디/OD; 100 cm)</td><td>Polymicro Technologies</td><td>TSP075375</td><td></td></tr><tr><td>뭉툭한 팁이 있는 스테인리스강 이미터(130/260 &마이크로; m ID/OD)</td><td>해밀턴 Co.</td><td>21031A</td><td>더 나은 성능을 위해 이미터 팁을 레이저로 절단하고 미세 연마하십시오.</td></tr><tr><td>주사기 (기밀 ): 500 - 1000 &micro; L</td><td>해밀턴 Co.</td><td>1750TTL</td><td></td></tr><tr><td>디지털 멀티미터</td><td>Fluke</td><td>117</td><td></td></tr><tr><td>고해상도 질량 분석기</td><td>Bruker Daltonics</td><td>Maxis Impact HD</td> 고<td>분해능 탠덤 질량 분석기, 대기압 인터페이스가 장착된 ESI용으로 구성</td></tr>됨, <tr><td>질량 분석기 교정을 위한 튜닝 혼합물</td><td>, Agilent Technologies</td><td>ESI-L G1969-85000</td><td></td></tr><tr><td>데이터 분석 버전 4.3 소프트웨어</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Ancillary Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vacuum concentrator at 4&ndash에서 작동 가능; 10&deg; C</td><td>Labconco</td><td>7310022</td><td></td></tr><tr><td>분석 마이크로 저울 (XSE105DU)</td><td>Fisher Scientific</td><td>01911005</td><td></td></tr><tr><td>냉동고 (-20 &deg; C)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>97-926-1</td><td></td></tr><tr><td>냉동고 (-80 &deg; C)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>88300ASP</td><td></td></tr><tr><td>냉장 인큐베이터</td><td>Fisher Scientific</td><td>11475126</td><td></td></tr><tr><td>Vortex-mixer</td><td>벤치 마크</td><td>BS-VM-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

단일 셀 대사체학 라이브 개구리 (xenopus laevis) 배아에 대 한 현미경 모 세관 전기 이동 법 질량 분석

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog (Xenopus laevis) Embryos

단일 셀에 작은 분자의 정량화 더 나은 이해 배아 개발의 기반이 되는 기본 프로세스에 대 한 새로운 전위를 발생 시킵니다. 사용 단일 셀 조사에 직접 라이브 배아, 새로운 분석 접근 필요, 특히 그 민감한, 선택적, 양적, 강력 하며 확장 가능한 다른 셀 크기를. 여기, 선물이 자유롭게 개발 남쪽 아프리카 발톱된 개구리 (Xenopus laevis), 세포 및 개발 생물학에서 강력한 모델의 배아에 단일 셀에 대사의 분석 제자리에 있도록 하는 프로토콜. 이 방법은 모 세관 현미경을 사용 하 여 후속 분석을 위해 인접 셀 그대로 태아에 단일 식별 된 셀에서 정의 된 부분을 발음. 수집 된 셀 내용은 고해상도 탠덤 질량 분석기를 결합 하는 미 모 세관 전기 이동 법 분무 이온화 (CE-ESI) 인터페이스에 의해 분석 된다. 이 방식은 다양 한 셀 크기를 확장 하 고 발전 태아의 복잡 한 3 차원 구조와 호환 합니다. 예를 들어, 단일 셀 CE-ESI-MS 조상 세포 생겨나게 자손에 게 태아의 개발로 펼쳐져 대사 셀이 해명 수는 있지만을 설명 합니다. 세포 및 발생 생물학, 게다가 여기에 설명 된 단일 세포 분석 프로토콜은 의무가 다른 세포 크기, 세포 유형, 또는 동물 모델입니다.

우리는 최근 있지만 단일 셀 고용 CE-ESI-MS 자유롭게 Xenopus laevis 배아29,30개발에 개별 확인 된 셀에 대사 산물의 특성. 있지만 빨리 가능 (~ 5 초/셀), 제자리에 ~ 10의 포부 nL 개별 셀, 같은 셀의 여러 포부 또는 라이브 배아 (그림 1b)의 개발의 동일한 이상 단계 내의 여러 다른 셀에서. Aspirated 셀룰러 콘텐츠를 적당 한 용 매를 사용 하 여 추출 되 고 대사 산물 다음 구분 및 맞춤식 CE ESI 인터페이스를 사용 하 여 이온화와 양 Typically 접근 수익률 (제거 후 ~ 300 비중복 대사 산물 신호 감지 동위 원소 봉우리 클러스터) 각 셀에서. 분리는 그림 2a에서선택 ...

우리는 빠른 시내 현장 샘플링의 높은 정밀도와 최소한의 침공에 신진 대사 활동의 스냅샷의 화학 특성을 촉진 하기 위하여 모 세관 기반 마이크로-샘플링를 사용 하 여 개별 셀의 작은 부분을 사용할 수 있는 단계를 설명 배아를 사용자 단일 셀 모 세관 전기 이동 법 질량 분석 플랫폼을 사용 하 여 라이브.

단일 셀 대사체학 라이브 개구리 (Xenopus laevis) 배아에 대 한 현미경 모 세관 전기 이동 법 질량 분석

The quantification of small molecules in single cells raises new potentials for better understanding the basic processes that underlie embryonic ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 현장 마이크로샘플링 모세관 전기영동 질량 분석법을 통해 발달 중인 배아의 살아있는 세포에서 대사 산물을 특성화하는 것입니다. 이 방법은 살아있는 발달 중인 배아에서 직접 단일 세포의 대사를 분석할 수 있기 때문에 세포 및 발달 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 빠르고 다양한 세포 크기로 확장할 수 있으며 살아있는 배아에서 개별 세포의 최소 침습적 샘플링이 가능하다는 것입니다.배아가 상대적으로 빠르게 발달하고 맞춤형 모세관 전기영동 전기분무 이온화 기기가 사용되기 때문에 일부 단계를 배우기 어렵기 때문에 이 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다. 하나의 1X Steinberg 용액에 2%아가로스를 준비하여 이 절차를 시작합니다. 여전히 액체인 상태에서 60mm 페트리 접시의 바닥에 용액을 코팅합니다.아가로스 젤이 냉각되고 응고되면 공 모양이 될 때까지 6인치 파스퇴르 피펫의 끝 부분을 불태웁니다. 그런 다음 가열된 끝을 가볍게 터치하여 아가로스에 약 1mm 깊이의 5-10개의 웰을 각인합니다. 테이퍼 팁 마이크로피펫을 제작하려면 먼저 텍스트 프로토콜에 있는 설정을 사용하여 Flaming/Brown 유형 모세관 풀러에서 붕규산 모세관을 당깁니다.다음으로, 한 쌍의 미세하고 날카로운 집게를 사용하여 당겨진 마이크로피펫의 끝을 끊어 약 20미크론의 모세관 팁 외경을 얻습니다. 정밀도와 재현성을 돕기 위해 실체 현미경에서 이 단계를 수행하십시오. 성체 xenopus laevis의 성선 자극 호르몬 유도 자연 교미를 통해 또는 텍스트 프로토콜에 언급된 체외 수정을 통해 배아를 얻습니다.배아가 2세포 단계로 쪼개지기 시작할 때 먼저 배아를 젤리 제거 용액에 2분 동안 그대로 두어 배아를 둘러싼 젤리 코트를 제거합니다. 그런 다음 배아가 채취 접시 표면에 달라붙지 않도록 2분 더 부드럽게 휘젓습니다. 접시 내용물을 깨끗한 비커에 부드럽게 붓고 비커에서 젤리 제거 용액을 빠르게 디캔팅합니다.즉시 계란을 0.1X Steinberg의 용액으로 덮고 남은 젤리 제거 용액을 헹굽니다. 부드럽게 소용돌이친 다음 용액을 디캔팅합니다. 이 단계를 4회 반복하여 배아를 철저히 씻습니다.젤리가 제거된 배아를 페트리 접시에 담긴 1X Steinberg의 용액으로 옮깁니다. 접시 안의 혼잡을 최소화하려면 100mm 접시당 약 100개의 배아를 놓습니다. 2세포

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Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

Xenopus 배아 상피 조직은 상피 morphogenesis 동안 극성 개발 및 형태의 변화와 같은 세포 행위를 연구하는 이상적인 모델 시스템입니다. 고정 샘플 전통 조직학 점점 라이브 셀 이미징 공촛점에 의해 보완되고있다. 여기 개구리 조직을 분리 및 라이브 세포 공촛점 현미경을 사용하여 라이브 상피 세포 및 cytoskeleton을 시각화하는 방법을 보여줍니다.

라이브 셀 이미징 및 배아 상피 세포의 정량 분석 Xenopus laevis</em

원고는 여기 Xenopus의에서 찬란 태그 리간드의 분비 및 확산을 분석하는 방법의 간단한 세트를 제공합니다. 이는 리간드 분포를 수정하는 다른 단백질의 능력을 시험하고 morphogen 기울기 조절 메커니즘에 대한 통찰력을 제공 할 수 있도록 실험을위한 컨텍스트를 제공한다.

공 촛점 분석을 사용하여<em&gt; 아프리카 발톱 개구리 laevis의</em&gt;의 Wnt 및 쉬 Morphogen 그라디언트의 변조기를 조사하기 위해

여기에서는 MS 분석을 위한 소형 다기능 장치인 단일 프로브를 사용하여 조직의 주변 질량 분석 이미징(MSI)과 현장 라이브 단일 세포 MS(SCMS) 분석을 모두 수행하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

단일 프로브의 응용 프로그램 : 주변 조건에서 질량 분석 이미징 및 단일 세포 분석

통합 셀 조작 플랫폼은 주변 조건하에서 개별 현탁액 셀의 온라인 분석을 위한 단일 프로브 질량 분석 설정과 함께 사용하기 위해 개발되었습니다.

단일 현탁액 세포에서 약물 및 대사 산물의 질량 분석 분석을 위한 단일 프로브와 결합된 통합 셀 조작 플랫폼

여기에서 우리는 마우스 배아 조직에서 유전자 발현을 프로파일링하는 다중단일 세포 mRNA 염기서열 분석방법을 제시했다. 멀티플렉싱 전략과 결합된 액적 기반 단일 세포 mRNA 염기서열 분석(scRNA-Seq) 방법은 여러 샘플에서 단일 세포를 동시에 프로파일링할 수 있어 시약 비용을 크게 줄이고 실험 배치 효과를 최소화합니다.

마우스 배아 세포의 다중화 단세포 mRNA 염기서열 분석

우리는 형광 칼슘 화상 진찰을 계면 혼성화에서 결합하는 2개의 부분 프로토콜을 제시합니다, 실험자가 단하나 세포 수준에 유전자 발현 단면도와 칼슘 활동의 패턴을 상호 연관시키는 것을 허용하.

제노푸스 라에비스의 신경 전구체 특성화를 위한 형광 칼슘 이미징 및 후속 시토 혼성화

여기에서 우리는 척추동물 Xenopus laevis 배아에서 알려진 조직 운명을 가진 세포 계통의 질량 분석 기반 단백질체 특성 분석을 설명합니다.

발달 중인 (개구리) 배아의 세포 계통 유도 질량 분석법 단백질체학

이 프로토콜은 휘발성 염 용액 세척, 급속 액체 질소 담금질, 동결 건조 및 -8°C 저장을 결합하여 단일 세포 질량 분석법(SCMS)을 위한 세포 대사 산물을 보존하는 것을 목표로 합니다. 이는 액체 질소 담금질이 대사 산물 프로필을 유지하는 데 필수적이며, 대사 변화를 방지하기 위해 장기간 냉장 보관을 최소화해야 함을 보여줍니다.

단일 세포 질량 분석법 대사체학 연구를 위한 시료 전처리: 결합된 세포 세척, 담금질, 건조 및 보관

우리는 5-에티닐-우리딘(5-EU)을 사용하여 Xenopus 초기 배아에서 전사체 분석을 위해 신생 전사체를 대사적으로 표지하고 정제하는 상세한 방법을 제공합니다.

백발유 초기 배아 발생에서 신생 전사체의 대사 표지

질량분석법(UPLC-MS)과 결합된 초고성능 액체 크로마토그래피에 의한 비표적 대사 산물 프로파일링은 대사를 조사하는 강력한 기술입니다.  이 문서에서는 시료 조직 및 준비, 데이터 수집, 데이터 분석, 품질 관리 및 대사 산물 식별을 포함하여 혈청의 비표적 대사 산물 프로파일링에 사용되는 일반적인 워크플로우를 간략하게 설명합니다.

울트라 성능 액체 크로마토 그래피 - 질량 분석법 (UPLC-MS)에 의해 혈청 대규모 비 타겟 Metabolomic 프로파일

배우세요 단일 세포 대사체학을 위한 현미경 모세관 전기이동법 질량분석을 사용하여 Xenopus laevis 살아있는 배아의 개별 세포에서 대사물질을 특성화하는 방법을. 이 기술은 세포 및 발달생물학 연구에 필수적인 도구입니다.

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