Name: 코 막 Transepithelial 잠재력 차이 (NPD)의 표준화 된 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: 배우세요 CFTR 및 ENaC 이온 채널 기능을 평가하는 표준화된 NPD 측정 프로토콜. 이 방법은 낭포성 섬유증 연구에서 이온 수송 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

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이 연구는 CFTR의 기능 (임상 시험 네트워크, 유럽 낭 성 섬유 증 협회) 표준화 위원회 및 국가 자원 센터 작업 그룹 (치료제 개발 네트워크, 낭 성 섬유 증에 대 한 작업 그룹에 의해 지원 되었다 재단)입니다. 추가 지원 CF 재단에 의해 제공 되었다 (GMS에 클랜 FY09)와 NIH (SMR과 GMS에 DK072482).

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저자 들은 아무 경쟁 금융 관심사 선언 합니다.

Vivo에서, NPD 경도 기준 반복적으로 수행할 수 있는 독특한 측정을 제공 하 고 반복 측정, 비슷한 경도 결과 group-wise이 고 개별 기준14에 관찰 된다 보여줍니다. 15. NPD 비 CF에서 CF를 구별을 위한 우수한 차별 타당성 있다는 강력한 증거가 있다. 25 학문 Cl- 에서 통계적으로 유의 한 차이 나+ 계수 CF 환자와 건강 한 컨트롤10사이 일관 되 게 설명 했다. 여러 이전 개발된 인덱스 설명이 용량, 하는 동안 우리는 새로운 업데이트는 필요한 방법론7,8의 최근 규격화를 주어진 예상.
수정 및 문제 해결
이 테스트는 정확한 측정을 보장 하기 위해 몇 가지 주요 단계가 필요 합니다. 시스템 권장된 기준에 수행 되도록 전극 및 카 테 터 폐쇄 루프 오프셋을 포함 됩니다. 환자 여전히 유지 하 고 아티팩트 및 카 테 터 dislodgement 최소화로 이야기 참 해야 합니다. 이것은 테스트 비 협력 환자에 어렵게 하 고 기술을 나이7의 6 세 미만 어린이에 대 한 연구에서 보고 되었습니다.
비 강 상피의 사전 검사는 쌓여 또는 측정에 영향을 미칠 수 있다 상피에 점액 인지 확인 해야 합니다.
매우 중요 한 것은, 그것은 해야 합니다 지적 테의 배치의 위치 논쟁의 주제 이다. 여기에 제시 된 SOP 활용 (그것) 비 열 등에서 측정 합니다. IT에서 카 테 테 르의 배치를 표준화 하 고 실시 하 되 재판에서 그리고, 따라서, 이것은 권장된 기술 이다. IT에서 측정 하기 어려울 수 있습니다 유지 비 강 점 막과 회사 접촉에서 솔루션 연락 되 고 하는 동안 사이드 홀 테 수행 됩니다. 다른 그룹은 기술적으로 쉽게 비 강 바닥에 PD 측정할 수 있습니다. 중요 한 것은, Vermeulen (2011) 2 방법 비교16는 보여주었다.
솔루션의 온난화 유럽과 미국 센터17,18사이 토론의 사정은 남아 있다. 그것은 되어 주 창 하고있다 그 관찰된 총 염화 응답 증가 22 ° C 대신 37 ° C에서 솔루션을 사용 하 여 약 25%, isoproterenol 종속 염화 응답 약 9518에서. 그러나, 온난 증가 가변성,17의 총 염화 반응 더 큰 표준 편차에 의해 평가 합니다. 따라서 온난화 솔루션 가변성의 추가적인 요소는, 연구 기초에 요구 되지 않는 한 솔루션 따뜻한 않기로 합시다.
우리는 이전 두 전극 기술을 비교 하 고 AgCl 및 Calomel 전극 시스템에서 정상적인 과목13기저 및 자극 전류에 유사 하 게 운영 발견.
기술의 한계
이 테스트는 중요 한 주제 내에서 변화. 득점의 가변성 불확정 경시 환자에서 특히 유행 이며이 진단 응용 프로그램19에서 설명 되어야 한다. 변화의 요인 포함 급성 상부 호흡기 감염, 광범위 한 비 강 폴립, 사전 부 비 동 수술 및 CF 관련 염증 그것의 특이성, 감도20,10감소 하 게 됩니다. 또한, 경시의 해석은 다를 수 있습니다 독자 사이 비록 전문가 독자 보여 양적 점수 및 CF에 비 CF 경시, 판독의 우수한 계약에 상당한 가변성 대조는 추적19의 자신감입니다.
중요 한 임계값 대 본질적인 가변성
매우 중요 한 것은, 측정의 생리 적인 다양성은 다른 연구10, 염화 총 전송에서 변화에 있는 상당한 가변성을 시연 CFTR 유전자 치료 실험 등에서 볼 수 있듯이 상당한, 그리고 amiloride21,22범위. 횡단면 평가 나왔다는 Cl- -7-5의 임계값 isoproterenol 응답 플러스 0 mV는 CF와 CF 비 과목10사이 커트 오프.
우리는 그럼에도 불구 하 고 단계 II 평가판에서 효과적인 CFTR 보정을 대표 하는 질병 치료 수정으로이 매개 변수는 변경의 크기에 대 한 명확한 지식이 부족 합니다. 개별 응답을 평가 하는 개입에 대 한 응답을 모니터링 하는 반복된 테스트 본질적인 가변성에서 중요 한 변화를 구별 하 필요할 수 있습니다. 매우 중요 한 것은, 수정 약 병 미래 장기 연구 CFTR 기능 개선 CF의 임상 관련성이 높은 결과 또는 (FEV1개선) 같은 대리 결과 개선 연결 설명 필요 질병입니다. 실제로, 최근 단계 II Ivacaftor 연구 시연 염화 분 비23에 작은 개선에도 불구 하 고 임상 혜택 표시.
이러한 연구는 트랜스 상피 Cl-전도도 개선의 컷오프 값 임상 혜택을 위한 대리 매개 변수 있을 경우 설정 하는 데 도움이 됩니다. CFTR 수정 치료의 개발 지침에 대 한 중요 한 매개 변수 것입니다.
기존의 방법에 관하여 의미: 땀 테스트 및 장 전류 측정 (ICM)
' 의심 ' 낭 성 섬유 증 환자에서로 의해 평가 중간 땀 30 그리고 60 m m, NPD 합성 점수 ' CF-가능성이 ' 환자를 진단 하는 매우 중요 한 도구를 제공 하 고 ' CF-가능성 '10 사이 농도 Cl- . 장 전류 측정 (ICM), net Cl- 직장 상피에 걸쳐 용의 비보 전 측정을 제공 하 또한 수 잔여 CFTR 함수의 높은 감도와 CFTR 높은 표현 때문에 이 상피.
CFTR 변조기에 의해 CFTR 기능, 이러한 CFTR biomarker 변화 사이 관계의 수정 고려는 현재 불분명. 하지만 최근 작품에 따라 Ivacaftor 결정 NPD와 땀 테스트는 상관된4, 그것은 아직 설립 되지 경우 호흡기에서 측정 보다, 예를 들어 호흡 결과의 더 나은 예언자, 땀 테스트24 , 25 또는 ICM에서 변경입니다. 또한, 한정자 약물 또한 그들의 기관 특정 신진대사에 달라질 수 있습니다. NPD에 관해서는 그것은 기저 PD 및 amiloride 응답에 변화에 나+ 전송, 표현 변경 0 Cl- 및 isoproterenol 응답 익스프레스 Cl- 전송 하는 동안 주의 하는 것이 중요. 그것은 아직이 더 중요 하다 질병 개량에 대 한 설정 이다.
이 기술의 미래 응용 프로그램
이 기술 사용 하 여 CF 필드 밖으로 예상 된다. 천식26, 만성 기관지염27, 아닌 CF 기관지 확장 증28 포함 하 여 항공 질병 장애를 설명 하기 위해 적용할 수 있습니다 때문에이 기술은 고유 나+ 및 Cl- 이온 채널에 적합 한 및 재발 성 췌 장 염29. 또한,이 기술의 수정30만성 기관지염 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD) 환자에서 더 낮은 항공 집중 CFTR 부전을 보여 주기 위해 낮은 항공 (LAPD)에 사용 되었습니다.
NPD는 CFTR 함수는 모두 진단에 사용할 수 있습니다, 또한, CFTR 및 ENaC 수정 하는 것을 목표로 하는 증거의 개념 연구에 대 한 채널 변환 연구에서 활동의 biomarker를 민감한 vivo에서 제공 합니다. 이 트랜스 상피 함수의 경도 평가 허용 하 고 CF 각 환자에 대 한 가장 효율적인 교정기에 맞게 맞춤된 의학에 대 한 전략으로 약속을 보유 하고있다.

이 방법의 전반적인 목표 측정 코 전위차 (NPD) 트랜스 상피 이온 수송 vivo에서1을 조사 하는 것을 목표로 하는 것입니다. 이 기술은 나트륨 (Na+) 및 염화 물 (Cl-)의 측정을 허용 한다. NPD는 1980 년대 후반 이후 연구 도구로 사용 되었습니다과 낭 성 섬유 증 기초 (CFF) 합의 문을2 , 낭 성 섬유 증 기초 (CFF) 합의 진단 가이드라인에 2017 진단 절차로 1998 년에 허용 했다 3. 실제로, CF의 원인에는 생물학적 CFTR 부전 Cl- 분 비에서 꼭대기 막 및 결함에는 증가 나+ 흡수에 의해 입증 됩니다. 이 기능 테스트 유전학 비 결정적인 불확정 중간 땀 테스트 결과3환자의 경우는 추가 진단 도구 활용을 제공 합니다. 그러나이 정보는 또한 장 전류 측정 biopsies (ICM)에 의해 얻을 수 있습니다, 비록 ICM은,, 몇 가지에 사용할 수 있는 센터를 세계적으로 하 고 표준화를 더 요구. NPD 더 사용할 수 약 60 글로벌 센터에서 이며, 또한, 대상 질병의 주요 위치는 호흡기 상피.
CFTR 활동에 제공 하는 정보를 감안할 때, 그것은 또한 CFTR 단백질의 기능 복원 평가를 목표로 개념 증명 연구에 의해 사용 변조기 요법4,,56,7, 8. 실제로, CFTR 유전자를 mRNA/편집, CFTR potentiator, 및 교정기 치료 연구에서 데이터 Cl- 에 상당한 변화를 강조 하 고 나+ 치료6,9 수송 NPD 수 확인 한 임상 시험에 응답 끝점입니다. 우리는 중요 한 임상 끝점 짧은 기간에 환자의 임상 상태에 미묘한 변화를 감지할 수 부족,으로이 전 임상 바이오 마커 매우 유익한 수 있습니다. CFTR 변조기 치료 분야를 넓혀 신속 하 게 그리고 우리는 급히 테스트에서 비보에 큰 단계 3 재판10에 가기 전에 활성 화합물을 신속 하 게 해독 수 있는 필요.
기술은의 생리 적인 근거는 콧구멍에서 기도 상피와 피하 실 사이의 전위차의 측정을 기반으로 합니다. 이온 채널 활동의 변화 나+ 흡수 관련는 ENaC 차단 후 안정적인 최대한 기준선 잠재적인 차이 (PD), 측정 하 고 다른 꼭대기 Cl- 전송기를 통해 Cl- 분 비를 운전 하 여 탐험 하 CFTR 포함 하 여. CFTR 부전 캠프 종속 통로 통해 Cl- 분 비의 자극에 따라 전위차에 최소한의 변화에 의해 표시 되 고 증가 ENaC 중재 나+ 흡수 더 부정적인 baseline 전위차에 의해 감지 그리고 amiloride에 대 한 향상 된 응답입니다. 일반 경찰 대 CF에 대 한 기계적으로 그림 1에 요약 됩니다.
<img alt="전기화학적 구배도, CFTR/ENaC 활성, 상피 수송, CF 병리 분석." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1: 이온 채널 활동의 요약 그림. 호흡 상피 시연에서 활동 균형 CFTR 활동 결과 ENaC CFTR 정상적인 과목에서의 활동 및 (B) (A) 이온 ENaC 중재 나트륨 수송 증가 하 고 감소 CFTR 종속 염화 교통입니다. ENaC: 상피 나트륨 채널, 나+: 나트륨, CFTR: 낭 성 섬유 증 막 횡단 레 귤 레이 터, CL-: 염화, mV: 밀리, PD: 전위차, 분: 분/s <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57006/57006fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
그러나,이 테스트는 변화 모두 동일한 유전자 형을 가진 환자 중 동일한 환자에서 반복된 측정에서의 어느 정도 보여 줍니다. 이것은 변조기 치료 후 변화의 해석을 촉진 하기 위하여 매우 중요 하다. 또한, 우리는 여전히 유효한 임계값 CF와 건강 한 주제 사이 차별 부족 합니다. 이 고용 기술과 임상 시설의 가용성 사이의 차이 부분적으로 있을 수 있습니다. 따라서, 상당한 국제적인 노력을 시험의 표준화를 목표로 진행 중 이다. 미국 CFF TDN (낭 성 섬유 증 재단 치료제 개발 네트워크)와 ECFS CTN (유럽 낭 성 섬유 증 협회 임상 실험 네트워크) multicenter 및 연구 실험에 있는 NPD 표준 운영 절차 (SOP) 사용에 대 한 만들었습니다. CTN TDN의 전문성을 결합, 결합, 국제 SOP CTN TDN에 의해이 최근 공동 작업 결과 (2014)11. 이 종이 CF 진단 또는 개념 증명 시험 조사 시작 NPD를 고용 프로토콜 및 테스트 기술을 제공 합니다. 기술을 구현 하는 각 센터는 그것의 기관 인간 연구 윤리 위원회의 승인을 위해 응용 프로그램에 대 한 책임.
<img alt="신경과학 다이어그램; 주사기 펌프, 전극, 컴퓨터 인터페이스; 신경 전위 측정." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2: 전체 회로도 NPD 설치 권장. Note 순차적 관류 펌프, 등 4-정지-거 시기 시리즈 설치 권장된 설치 표시 되는. 특정 연결 및 구성의 예는 SOP에 표시 됩니다. (솔로몬, G.M. 가슴, 201013허가 수정 다이어그램) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57006/57006fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
그림 2, 전극 및 높은 임피던스에 연결 된 둘 다 피하 공간에 배치 상피 표면 및 참조 다리에 탐험 다리 사이 NPD를 측정 하는 면에서 일반 실험 흐름을 설명 하는 전압계입니다.
이것은 2 다른 시스템에 의해 지켜진다: 2 허용 기준 전극 셋업이 있다: (i) 균형 Ag/AgCl 전극과 심전도 (ECG) 크림 가득 다리 피하 공간에 약간의 마모에 의해 연결 된 또는 (ii) 포화 calomel half-cells는 agar 22-24 게이지 바늘 피하 소개 가득. 비 강 점 막에 접촉 더블 루멘 카 테 터에 의해 사용 됩니다. 1 루멘 agar 또는 ECG 크림으로 채워지고 측정 전극에 연결, 다른 관류 비 강 점 막에 다양 한 솔루션의 수 있습니다.
탐험 튜브의 끝에는 열 등 한 비 강 비 (그림 3) 호흡기 점 막에 배치 됩니다.
<img alt="카테터 배치 과정; 하비갑개 및 중비갑개 설정을 보여주는 비강 내시경 다이어그램." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 그림 3: 호흡기 점 막에 튜브를 탐구의. (A) 외부 보기 표시 배치. (B) Rhinoscopic 보기 배치를 보여주는. (C) 다이어그램 카 테 테 르 배치에 대 한 해 부 위치를 나타내는. PD: 잠재적인 차이
공부 하 고 여러 가지 약물에 대 한 PD의 응답, superfusion 솔루션은 테의 두 번째 루멘을 통해 적용 됩니다. 준비 및 데이터 분석을 통해 초기 준비에서 프로토콜 아래 상세 NPD 측정의 행위에 관한 몇 가지 주요 단계가 있습니다.
솔루션 및 전극의 준비, 후 전극 카 테 터의 적절 한 품질 테스트는 테스트의 기본 행위에 대 한 수 있습니다. 기저 측정 등 비, 다양 한 측정을 위한 최고의 장소를 수 있는 따라 만들어집니다 가장 부정적인 측정으로 일반적으로 하는. 다음 순차 perfusions Na+ (ENaC) 및 Cl- 비 강 상피에서 전압에서 변화를 통해 (CFTR 종속) 이온 플럭스를 결정합니다.

<table><tbody><tr><td>KD Scientific 주입 펌프(또는 이에 상응하는 &ndash; 예: 기관/병원에서 제공하는 프로그래밍 가능한 주입 펌프)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Powerlab 4/30</td><td>AD Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BMA-200 AC/DC 휴대용 생체 증폭기</td><td>AD Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IS0-Z 절연 헤드스테이지 BMA-200</td><td>AD 기기</td><td></td><td></td></tr><tr><td>용Windows 호환 PC - Windows XP 이상의 최소 요구 사항</td><td>다양한</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AD Instruments 소프트웨어: GLP Client V6(Windows) 이상</td><td>AD Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECG 전극(연구 대상용 접지)</td><td>병원 표준</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 미니 칼로멜 참조 전극</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-620-79</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨 KCl, 과립 &ndash; USP, 포뮬러 중량 76, 수량 : 500gm</td><td>스펙트럼</td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 용기 (예 : 표본 수집 용기 또는 이와 유사한 것)는 KCl calomel bath에 사용되며 전극을 제자리에 고정하기 위해 뚜껑에 구멍이 뚫려 있습니다. (전극 제조업체에서 제공하지 않은 경우)</td><td>병원 표준</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 전극: Ag/AgCl 8 mm TP 전극</td><td>BIOPAC 시스템</td><td>UNSHLD-EL258</td><td></td></tr><tr><td>2 Ag/AgCl 전극, B0194, 플러그 4 mm</td><td>SLE Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Signacreme&reg; 전도성 전극 크림</td><td>Fisher Scientific</td><td>Parker Labs ref # 17-05</td><td></td></tr><tr><td>피부 마모 장치</td><td>PROMED Feeling</td><td>Ref 374901</td><td></td></tr><tr><td>Hi Di 541 M, 다이아몬드 팁 치과 버</td><td>Ash Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson PE 50 튜빙</td><td>Fisher Scientific</td><td>427411</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson PE 90 튜빙</td><td>Fisher Scientific</td><td>427421</td><td></td></tr><tr><td>실라스틱 튜브, 0.062" 아이디, 0.095" OD</td><td>Fisher Scientific</td><td>508-007</td><td></td></tr><tr><td>미세공 수술 테이프 종이(25mm x 9.1m)</td><td>3M</td><td>1530-1</td><td></td></tr><tr><td>마콰트 이중 루멘 카테터 길이: 80cm; 외경 : 2.5 mm; 채널의 내경 : 0.8 mm; 측면 구멍에서 팁까지의 거리: 2mm. EU 라벨 NPD 계약: I0202US</td><td>Marquat</td><td>I0202US</td><td></td></tr><tr><td>1" X 10 yards 실크 테이프</td><td>3M Durapore</td><td>1538-1</td><td></td></tr><tr><td>IV 확장 튜빙 (30", 50/box)</td><td>International Limited</td><td>IMN30</td><td></td></tr><tr><td>3방향 스톱콕 (50/box)</td><td>Medex</td><td>MX5311L</td><td></td></tr><tr><td>멸균 주사기 필터(ANOTOP 25 멸균 50pk; 0.22-&mu; m 이하 필터; </td><td>Fisher Scientific</td><td>09-926-7</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson Intramedic Luer 스텁 어댑터(20G, 연구 현장에서 생산된 비강 카테터를 사용하는 경우 PE90 연결용)</td><td>Fisher Scientific</td><td>427564</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson 23 G, 0.75" Vacutainer (" 나비") 바늘(0.6mm x 19mm, 50U/상자)(연구 현장에서 생산된 비강 카테터를 사용하는 경우 PE50 연결용)</td><td>Fisher Scientific</td><td>367283</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson 주사기 60mL, 바늘 미포함 Luer-Lok 팁(40/Box)</td><td>Fisher Scientific</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson 주사기 10mL, 바늘 미포함 Luer-Lok 팁(100/Box)</td><td>Fisher Scientific</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 물티슈 (기관 가용성에 따라)</td><td>병원 표준</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% EtOH (1 파인트), Aaper Alcohol and Chemical Co. 카탈로그 번호 NC9274019 (또는 동급)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corning 일회용 멸균 병탑 필터, 0.22 &mu; m 기공 크기(0.15 &ndash; 1.0L 용량 허용)</td><td>Fisher Scientific</td><td>430624</td><td></td></tr><tr><td>Buffer Cert Ph 10.00 (1 L Sn04332) &ndash; pH 측정기 교정용</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer Cert Ph 4.00 (1 L Sn04327) &ndash; pH 측정기 교정용</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer Cert Ph 7.00 (500 mL Sn04328) &ndash; pH 측정기 교정용</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>일회용 언더패드(파란색 패드, 23" x 36" 150/Box; 또는 병원 표준에 따라 동급)</td> <td>SureCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>23 G, 0.75" 진공 테이너 " 나비" 바늘 (0.6 mm x 19 mm, 50 U/box)</td><td>Becton Dickinson</td><td>367283</td><td></td></tr><tr><td>Difco Laboratories 한천 (Noble 100 g 0142-15-2; 또는 동급)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Welch Allyn Rhinoscope 71000-C (또는 동급)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Welch Allyn 컨버터블 핸들 배터리 72300 (또는 동급) 또는 배터리 포함 검이경</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>머리 및 턱 받침대 (또는 이에 상응하는 것; 선택 사항)</td><td>Richmond Products, Inc</td><td>629R</td><td></td></tr><tr><td>정전기 분산 피로 완화 매트&nbsp; (또는 이에 상응하는 것)</td><td>Fisher Scientific</td><td>No. 791</td><td></td></tr><tr><td>현장에서 혼합된 용액용 시약</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodium Chloride, Granular &ndash; USP NaCl</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>포뮬러 무게 : 58; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>칼슘 염화 CaCl2 &bull; 2H2O &ndash; USP</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>포뮬러 무게 : 147; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>마그네슘 클로라이드 헥사하이드레이트 크리스탈, MgCl2&bull; 6H2O &ndash; USP</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>포뮬러 무게 : 203; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>Potassium Phosphate Dibasic, Anhydrous, Granular, KH2PO4 &ndash; USP</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>포뮬러 무게 : 174; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>Potassium Phosphate Monobasic Crystals &ndash; NF (KH2PO4)</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>공식 무게: 136; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>글루콘산나트륨- USP (모노소듐 소금)</td> <td>스펙트럼</td><td></td><td>공식 무게: 218; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>칼슘 글루코네이트 &ndash; USP (무수 분말)</td> <td>스펙트럼</td><td></td><td>공식 무게 : 430; 크기 : 500 gm</td></tr><tr><td>칼륨 글루 코네이트 - USP (무수)</td> <td>스펙트럼</td><td></td><td>공식 무게 : 234; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>마그네슘 황산염 헵타하이드레이트 &ndash; USP MgSO4&bull; 7H2O</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>공식 무게: 246; 크기: 500 gm</td></tr><tr><td>Amiloride HCl &ndash; USP</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>포뮬러 무게 : 302; 크기 : 5gm</td></tr><tr><td>아데노신 5'- 삼인산 (ATP) (디 소듐 염)</td> <td>스펙트럼</td><td></td><td>공식 무게 : 551; 크기: 5 gm</td></tr><tr><td>염화마그네슘, 헥사하이드레이트, 크리스탈 &ndash; USP MgCl2&bull; 6H2O</td><td>스펙트럼</td><td></td><td>공식 무게: 203; 크기: 500g</td></tr><tr><td>이중 증류수(ddH2O)</td><td>병원 약국</td><td></td><td>공식 무게: NA; 크기 : 1 L</td></tr><tr><td>이소 프로테 레놀 HCL 주사 - USP 1 mg / 5 mL 앰플</td><td>병원 약국</td><td></td><td>공식 무게 : 248; 크기: 일회용</td></tr><tr><td>Ringers Injection, USP 또는 Ringers Irrigation</td><td>Hospital Pharmacy</td><td></td><td>Formula 무게: NA; 크기: 5L</td></tr></tbody></table>

코 막 transepithelial 잠재력 차이 (npd)의 표준화 된 측정

Standardized Measurement of Nasal Membrane Transepithelial Potential Difference (NPD)

우리는 비 강 전위차 (NPD)의 표준화 된 측정을 설명합니다. 이 기법에서 낭 성 섬유 증 막 횡단 전도성 레 귤 레이 터 (CFTR) 및 상피 나트륨 채널 (ENaC) 함수는 모니터링 전압에서 변화에 의해 비 강 상피에서 이온 채널을 수정 하는 솔루션의 superfusion 후 활동입니다. 이 열 등 한 코 비 접촉 카 테 터를 이용 하 여 콧구멍에 피하 구획과 기도 상피의 잠재적인 차이의 측정으로 사용 됩니다.
테스트 수 100 µ M amiloride, 벨의 솔루션;+ Na 재흡수의 억제제의 재 관류 후에 안정적인 기준 전압 및 연속 순 전압 변화를 측정 드라이브 염화 물 분 비를 amiloride 및 10 µ M isoproterenol amiloride 순환 아데노신 monophosphate (캠프)를 자극 하는 염화 무료 솔루션에 포함 된 염화 무료 솔루션-종속 염화 전도도 CFTR 관련.
이 기술은 두 가지 주요 구성 요소 호흡 상피, ENaC, CFTR의 기도 표면 액체의 수 분을 수립의 electrophysiological 속성을 보여주는 장점이 있습니다. 따라서, 단계 2 및 낭 성 섬유 증 (CF) 폐 질환의 치료를 위한 CFTR과 ENaC 활동 대상 에이전트의 개념 재판의 증거에 대 한 유용한 연구 도구입니다. 그것은 또한 유전자 검사와 땀을 테스트는 모호 CFTR 역 기능을 설정 하는 것 키 후속 절차입니다. 땀 염화, 테스트는 달리 상대적으로 더 많은 시간이 소모 하 고 비용이 많이 드는. 또한 통신 수 훈련 및 전문 지식을 효과적으로 테스트를 수행이 필요 합니다. 인테르-와 intra-subject 가변성 특히 젊은이 나 비협조적인 주제에에서이 기술에 보고 되었습니다. 이 우려와 함께 돕기 위해, 해석은 최근에 유효성이 검사 된 알고리즘을 통해 개선 되었습니다.

일반 기도 epithelia, 나+ 흡수는 기본 이온 전송 활동. 이 결과 interstitium에 관해서는 부정적인 기도 표면 전위 차이. 관류 ENaC 채널 차단제 amiloride의 덜 부정적인 잠재적인 차이 이끌어 낸다. Cl-의 다음, superfusion-무료 솔루션 Cl-, 더 많은 부정적인 전위차는 CFTR 등 모든 Cl- 전송기를 활성화에 대 한 화학 그라디언트를 만듭니다. 세포내 cAMP를 증가, Isoproterenol 더 특별히 CFTR 활성화 하 여 Cl- 분 비를 증가 하 고 잠재적인 차이 증가.
대조적으로, CF 과목에서 결 석 또는 역 기능 증가 ENaC에 CFTR 결과 중재 나+ 흡수12. 그 결과, 초기 잠재적인 차이점은 더 많은 부정적인. 반면에 최소한의 도발은 amiloride의 응용 프로그램과 함께 관찰은 더 큰, 또는 CFTR 종속 경로 통해 Cl- 분 비의 자극에 따라 전위차에 아무런 변화가 없습니다. 이 그림 8, '건강 한' vs 'CF' 경시를 보여주는 대표적인 경시에서 볼 수 있습니다.
<img alt="전기생리학 차트, 건강한 PD 변화, F508del; 아밀로라이드, Cl/Iso 단계, 연구 분석." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig8.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> 그림 8: '건강 한' 주제 및 참조와 제목의 대표적인 경시 PD: 전위차, ΔAmiloride: 델타 amiloride, /Iso 0 Cl--: 낮은 염화: 솔루션 #2 및 #4 솔루션 관류, s 1-s 4 사이 경찰에 변화: 단계 1-4, 녹색 라인 그래프 A와 B에 NPD 추적 및 검정 나타냅니다 화살표는 잠재적인 차이에 차이 나타냅니다.

여기, 우리 코 전위차 (NPD)를 측정 하는 표준화 된 프로토콜을 제시. 낭 성 섬유 증 막 횡단 전도성 레 귤 레이 터 (CFTR)과 상피 나트륨 채널 (ENaC) 기능 평가 전압에서 변화에 의해 비 강 상피에서 이온 채널 활동을 수정 하는 솔루션의 superfusion 후 제공 하는 결과 측정입니다.

코 막 Transepithelial 잠재력 차이 (NPD)의 표준화 된 측정

We describe a standardized measurement of nasal potential difference (NPD). In this technique, cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) ...

이 방법은 CF 환자가 CFTR 기능의 활성화 또는 회복에 의미 있는 반응을 보일 수 있는지에 대한 CF 및 이온 수송 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 기도 상피에서 CFTR과 상피 나트륨 채널의 협조 활동을 측정한다는 것입니다. 이 방법은 낭포성 섬유증에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 과민성 상피 나트륨 채널 기능의 유전 질환과 같은 다른 질병 시스템에도 적용할 수 있습니다. 이 절차를 시연하는 사람은 생물학자인 Thao Nguyen과 Aur입니다

standardized-measurement-nasal-membrane-transepithelial-potential

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

외부 전기장은 세포의 막에 전압을 유도, 유도 멤브레인 전압 (ΔΦ) 칭했다. potentiometric 염색 DI - 8 - ANEPPS을 사용하여, 그것은 noninvasively ΔΦ를 측정할 수 있습니다. 이 비디오는 측정을위한 프로토콜을 보여줍니다 ΔΦ DI - 8 - ANEPPS를 사용합니다.

디 - 8 - ANEPPS으로 유도된 막 전압 측정

이 원고는 위와 더 낮은 기도의 점 막 내벽 액체 (MLF)을 합성 흡수 성 행렬 (SAM)를 사용 하 여 특히 비 강 및 기관지 흡수 기술의 사용을 설명 합니다. 이 메서드는 더 나은 표준화 및 기존 호흡기 샘플링 기법 보다 내성 제공합니다.

비 강 및 기관지 체액의 흡수: 인간의 호흡기 점 막 및 실험실 처리 샘플의 정밀 샘플링

여기, 선물이 쥐에서 코 전위차를 측정 하는 프로토콜. 테스트는 낭 성 섬유 증 막 횡단 전도성 레 귤 레이 터 및 상피 나트륨 채널 같은 막 횡단 이온 전송기의 기능을 단정. 그것은 낭 성 섬유 증에 대 한 새로운 치료의 효능을 평가 하기 위해 중요 합니다.

마우스에 트랜스 상피 이온 수송 계량 비 전위차

이 프로토콜은 세포 환경에서 실시간으로 수용체에 대한 아데닌 뉴클레오티드 결합을 측정하는 방법을 제시합니다. 결합은 트리니트로페닐 뉴클레오티드 유도체와 비표준 형광 아미노산으로 표지된 단백질 사이의 Förster 공명 에너지 전달(FRET)로 측정됩니다.

온전한 기능성 막 단백질에 대한 뉴클레오티드 결합을 실시간으로 측정

장 상피는 영양 흡수뿐만 아니라 유해 물질에 대한 보호를 제공합니다. 정점-대부분의 상피 세포간 접합, 즉 타이트한 접합은 부세포 용질 및 이온 투과성을 조절한다. 여기에서, 점막 시트의 제조 및 어싱 챔버 기술을 사용하여 타이트한 접합부의 이온 선택성의 평가를 위한 프로토콜이 기재되어 있다.

챔버 기술을 사용하여 기본 조직의 장 타이트 접합 장벽 및 이온 투과성의 기능 평가

이 프로토콜은 세포 엑소사이토시스(exocytosis) 및 세포내이입(endocytosis) 주기 동안 지질 막 이동을 모니터링하기 위해 pH에 민감한 지질 형광단 클래스를 사용하는 형광 이미징 방법을 제시합니다.

pH에 민감한 형광 지질 아날로그 ND6를 사용한 막 지질 회전율 측정

여기서 우리는 공기-액체 계면에서 일차 인간 비강 상피 (HNE) 세포의 단리, 증폭 및 분화 및 증폭 된 HNE를 성공적으로 동결 및 해동 할 수있게 해주는 바이오 뱅킹 프로토콜에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 상이한 조절제 처리시 분화된 HNE 세포의 전기생리학적 특성 및 CFTR 관련 염화물 분비 보정을 분석한다.

일차 인간 비강 상피 세포 : 정밀 의학의 맥락에서 바이오 뱅킹

비강 상피는 모든 호흡기 병원체가 만나는 주요 장벽 부위입니다. 여기에서는 생리학적으로 관련된 시스템에서 인간 코로나바이러스-숙주 상호 작용을 특성화하기 위해 공기-액체 인터페이스(ALI) 배양으로 성장한 일차 비강 상피 세포를 사용하는 방법을 간략하게 설명합니다.

인간 코로나바이러스-숙주 상호작용을 특성화하기 위해 공기-액체 계면에서 성장한 일차 비강 상피 세포의 감염

다공성 기판 전기천공법(PSEP)은 높은 세포 생존율과 일관되고 높은 처리량 전달을 결합합니다. 경상피 전기 임피던스(TEEI) 측정의 도입은 PSEP의 중간 프로세스에 대한 통찰력을 제공하고 무표지 전달을 가능하게 합니다. 이 기사에서는 PSEP 전달 실험과 TEEI 측정 분석을 동시에 수행하는 방법에 대해 설명합니다.

Transepithelial Electrical Impedance Monitoring을 사용한 다공성 기판 기반 전기천공법

공기-액체 계면 배양은 일반적으로 폐기도의 정점 쪽을 모방하는 1차 정상 인간 기관지 상피 세포를 분화하여 가성층화 기도 상피를 개발하는 데 사용됩니다. 여기에서는 섬모 기능 및 막 무결성과 같은 생물물리학적 특성을 모니터링하여 품질을 결정하기 위한 쉬운 프로토콜에 대해 설명합니다.

Determining Ciliary Function and Membrane Impermeability of the Pseudostratified Lung Airway epithelium(가성층화된 폐 기도 상피의 섬모 기능 및 막 불투과성 측정)

그라마시딘 A-도핑된 액상 계면 이중층을 조립, 전기자극, 분석하는 실험 프로토콜이 제시됩니다. 지질-단백질 구조-기능 관계는 막 면적, 이온 플럭스, 단일 채널 전도도 변화를 측정하고, 이러한 반응을 전기 시냅스에서 영감을 받은 막 모델에서 이온 전도의 가소성 유사 변화와 연관하여 정량화합니다.

액상 인터페이스 이중층을 이용한 지질-단백질 막 구조-기능 특성 분석

배우세요 CFTR 및 ENaC 이온 채널 기능을 평가하는 표준화된 NPD 측정 프로토콜. 이 방법은 낭포성 섬유증 연구에서 이온 수송 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

코 막 Transepithelial 잠재력 차이 (NPD)의 표준화 된 측정

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