Name: 마우스 지방 조직 수집 및 RNA 분석에 대 한 처리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 13 s
Description: 배우세요 마우스 백색 지방 조직 수집 및 고품질 RNA 추출 방법을. 이 기술은 대사 및 분자생물학 연구에서 유전자 발현 분석에 필수적이며, 특히 유전자 변형 마우스 연구에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

이 작품은 당뇨병 캐나다에 의해 지원 되었다.

<ol><li>Guh, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+incidence+of+co-morbidities+related+to+obesity+and+overweight%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC.+Public+Health%22%5BJournal%5D)">The incidence of co-morbidities related to obesity and overweight: a systematic review and meta-analysis.</a> BMC. Public Health. 9, 88(2009).</li>
<li>Wronska, A., Kmiec, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+biochemical+characteristics+of+various+white+adipose+tissue+depots%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Structural and biochemical characteristics of various white adipose tissue depots.</a> Acta Physiol (Oxf). 205 (2), 194-208 (2012).</li>
<li>Cannon, B., Nedergaard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brown+adipose+tissue%3A+function+and+physiological+significance%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Brown adipose tissue: function and physiological significance.</a> Physiol Rev. 84 (1), 277-359 (2004).</li>
<li>Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+sample+collection+and+processing+for+molecular+epidemiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat+Res%22%5BJournal%5D)">Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies.</a> Mutat Res. 543 (3), 217-234 (2003).</li>
<li>Ibrahim, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+and+visceral+adipose+tissue%3A+structural+and+functional+differences%5BTitle%5D)+AND+%22Obes+Rev%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous and visceral adipose tissue: structural and functional differences.</a> Obes Rev. 11 (1), 11-18 (2010).</li>
<li>Mann, A., Thompson, A., Robbins, N., Blomkalns, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization%2C+identification%2C+and+excision+of+murine+adipose+depots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Localization, identification, and excision of murine adipose depots.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Hemmrich, K., Denecke, B., Paul, N. E., Hoffmeister, D., Pallua, N. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/246759856_RNA_Isolation_from_Adipose_Tissue_An_Optimized_Procedure_for_High_RNA_Yield_and_Integrity">RNA Isolation from Adipose Tissue: An Optimized Procedure for High RNA Yield and Integrity.</a> Laboratory Medicine. 41 (2), 104-106 (2010).</li>
<li>Cirera, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+method+for+isolation+of+total+RNA+from+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Highly efficient method for isolation of total RNA from adipose tissue.</a> BMC Res Notes. 6, 472(2013).</li>
<li>Tan, S. C., Yiap, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA%2C+RNA%2C+and+protein+extraction%3A+the+past+and+the+present%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">DNA, RNA, and protein extraction: the past and the present.</a> J Biomed Biotechnol. 2009, 574398(2009).</li>
<li>Sellin Jeffries, M. K., Kiss, A. J., Smith, A. W., Oris, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+commercially-available+automated+and+manual+extraction+kits+for+the+isolation+of+total+RNA+from+small+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A comparison of commercially-available automated and manual extraction kits for the isolation of total RNA from small tissue samples.</a> BMC Biotechnol. 14, 94(2014).</li>
<li>Tan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+prorenin%2Frenin+receptor+on+the+development+of+obesity+and+associated+cardiometabolic+risk+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Obesity+%28Silver.+Spring%29%22%5BJournal%5D)">Impact of the prorenin/renin receptor on the development of obesity and associated cardiometabolic risk factors.</a> Obesity (Silver. Spring). 22 (10), 2201-2209 (2014).</li>
<li>Taylor, S., Wakem, M., Dijkman, G., Alsarraj, M., Nguyen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+approach+to+RT-qPCR-Publishing+data+that+conform+to+the+MIQE+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">A practical approach to RT-qPCR-Publishing data that conform to the MIQE guidelines.</a> Methods. 50 (4), 1-5 (2010).</li>
<li>Aranda, P. S., LaJoie, D. M., Jorcyk, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bleach+gel%3A+a+simple+agarose+gel+for+analyzing+RNA+quality%5BTitle%5D)+AND+%22Electrophoresis%22%5BJournal%5D)">Bleach gel: a simple agarose gel for analyzing RNA quality.</a> Electrophoresis. 33 (2), 366-369 (2012).</li>
<li>Mercure, C., Prescott, G., Lacombe, M. J., Silversides, D. W., Reudelhuber, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+increases+in+circulating+prorenin+are+not+associated+with+renal+or+cardiac+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Chronic increases in circulating prorenin are not associated with renal or cardiac pathologies.</a> Hypertension. 53 (6), 1062-1069 (2009).</li>
<li>Dusaulcy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-specific+disruption+of+autotaxin+enhances+nutritional+fattening+and+reduces+plasma+lysophosphatidic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Adipose-specific disruption of autotaxin enhances nutritional fattening and reduces plasma lysophosphatidic acid.</a> J. Lipid Res. 52 (6), 1247-1255 (2011).</li>
<li>Nakamura, K., Fuster, J. J., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipokines%3A+a+link+between+obesity+and+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Adipokines: a link between obesity and cardiovascular disease.</a> J Cardiol. 63 (4), 250-259 (2014).</li>
<li>Taylor, S. C., Mrkusich, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+state+of+RT-quantitative+PCR%3A+firsthand+observations+of+implementation+of+minimum+information+for+the+publication+of+quantitative+real-time+PCR+experiments+%28MIQE%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">The state of RT-quantitative PCR: firsthand observations of implementation of minimum information for the publication of quantitative real-time PCR experiments (MIQE).</a> J Mol Microbiol Biotechnol. 24 (1), 46-52 (2014).</li>
<li>Hummon, A. B., Lim, S. R., Difilippantonio, M. J., Ried, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+solubilization+of+proteins+after+TRIzol+extraction+of+RNA+and+DNA+from+patient+material+following+prolonged+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Isolation and solubilization of proteins after TRIzol extraction of RNA and DNA from patient material following prolonged storage.</a> Biotechniques. 42 (4), 467-470 (2007).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

다음 먹이 HF-다이어트, 비만 쥐 몸 및 백색 지방 조직 가중치 N 규정식 먹인 쥐에 비해 증가을 발견 했다. 페 놀 솔루션을 사용 하 여 추출 하는 RNA 좋은 순도와 샘플을 굴복. Leptin은 주로 지방 조직에 의해 생산 하는 adipokine 및 지방 대량16와 긍정적으로 상관 관계 알려져 있다. 예상 했던 대로, leptin mRNA 식 그들의 뚱뚱한 질량을 가진 concomitance에서 비만 생쥐에서 증가 했다.
이 메서드는 몇 가지 중요 한 단계가 있습니다. 다른 지방 조직 창 고 다른 기능2,5는 알려진 대로 중요 한 다른 한 백색 지방 조직 창 고의 오염입니다. 오염 다운스트림 응용 프로그램에서 잘못 된 결과 가져올 수 있다. 또한, 지방 쥐 사이 일정 하 고 일관 된 속도로 백색 지방이 많은 직물 수집 공기와 접...

비만 타입-2 당뇨병1등 합병증으로 이어질 수 있는 전 세계적으로 유행 하는. 다이어트 유발 된 비만 유전자 변형 동물 모델에 비만 관련 된 합병증의 연구 자주 사용 됩니다. 전통적으로, 백색 지방 조직 초과 에너지를 위한 저장 격실으로 알려져 있다 이며 주로 지질 구성 된 갈색 지방 조직 열2,3로 에너지를 변환 하는 동안. 지방 조직 동적 확장 하 고 음식 섭취 량과 신체 활동 등 많은 요인에 따라 축소 됩니다. 따라서, 이러한 변화에 기여 요인 결정, 적절 한 지방 조직 수집 및 처리는 필요4.
가운데 흰색 adipose 조직, 그것 일반적으로 피하와 내장 지방 저장소 해부학 지역화 등 다른 속성 있고,2,5기능 허용 됩니다. 따라서, 충돌 하는 결과 또는 큰 변화를 방지 하려면 주의 지방 패드를 수집 하는 때이 다른 지방 저장소 간의 교차 오염을 방지로 이동 해야 합니다.
또한, RNA 또는 단백질 흰 쥐의 지방 조직에서 분리 하는 경우 세 가지 주요 과제 있다. 첫째, 비만 쥐에서 지방 패드를 수집 하지 않습니다 쉬운 일 다른 백색 지방 창 고를 분리 하는 테두리는 항상 명확 하 고, 신장과 심장6등 다른 장기와 달리. 둘째, 지방 조직, RNA 또는 단백질 격리 중의 높은 지질 내용 때문에 지질 층 위에 수레 하 고 샘플에 대 한 직접 액세스를 방지. 셋째, 갈색 지방이 많은 직물, 또는 다른 조직, 반대로 백색 지방 조직 내용이 상당히 낮은 RNA와 단백질 및이 젊은 마우스를 사용할 때 주요 관심사의, 쥐 먹이 정상 (N) 다이어트 이며 쥐 것으로 예상 된다 낮은 뚱뚱한 질량 (즉 코 모델, 치료 약물, 운동 훈련, 등.) 7 , 8.
따라서, 지방 조직에서 RNA를 분리 하는 적절 한 방법을 선택이 중요 합니다. 페 놀/클로 프롬 추출 대체 방법을 상용 키트 있습니다. 그들은 일반적으로 RNA 정화 열9에 따라 초기 페 놀 추출 단계를 기반으로 합니다. 그러나, 그 키트는 일반적으로 더 비싼 및 샘플 낮은 수율의 RNA 품질 변수 수도 주지만 적은 시간이 소요 됩니다. 그러나, 여기에 설명 된 페 놀 솔루션/클로 프롬 추출에 가장 큰 장점 중 하나는 RNA, DNA, 그리고 단일 샘플10에서 단백질 분리의 가능성입니다. 쥐 지방 패드는 일반적으로 작은 있기 때문에 (특히 상체 마우스 모델)에서 RNA와 단백질의 소량을 주고, 이러한 프로토콜 작은 샘플에서 얻을 수 있는 데이터를 극대화 합니다.
이 문서의 목적은 3 쥐 백색 지방 조직 창 고 수량 및 RNA 격리의 품질에서 적절 한 샘플 컬렉션을 확인 하는 방법을 자세히 설명 하기 위해. 이 프로토콜에 따라 얻은 RNA 실시간 PCR 분석 실험을 수행 하기 위해 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜 교양된 기본 adipocytes에서 RNA 격리에 대 한 것이 아닙니다.

<table><tbody><tr><td>1mL seringes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1X TE 용액(10mM Tris-HCl 및 1mM EDTA&bull; Na2입니다. pH 8.0)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>22 G 바늘</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>26 G 바늘</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>75% 에탄올</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>블록 히터 (건조 목욕)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>시그마</td><td>C2432-500mL</td><td></td></tr><tr><td>dATP&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>써모 사이언티픽</td><td>R0141</td><td></td></tr><tr><td>dCTP&nbsp; &nbsp;</td><td>써모 사이언티픽</td><td>R0151</td><td></td></tr><tr><td>dGTP&nbsp; &nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>R0161</td><td></td></tr><tr><td>DNase I(1 U/&마이크로; 엘)&nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>EN0521</td><td></td></tr><tr><td>dTTP&nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>R0171</td><td></td></tr><tr><td>Faststart Universal SYBR green Master (Rox)</td><td>Roche</td><td>4913922001</td><td></td></tr><tr><td>Faststart universal SYBR green master (Rox) 형광 염료&nbsp;</td><td>Roche</td><td>4913914001</td><td></td></tr><tr><td>필터 팁</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>펜치&nbsp;</td><td>Instrumentarium</td><td>HB275</td><td></td></tr><tr><td>Gauze</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hammer</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>고지방 쥐 다이어트</td><td>Bio-Serv, Frenchtown, NJ</td><td>F3282</td><td></td></tr><tr><td>이소프로판올&nbsp;</td><td>Laboratoire MAT</td><td>IH-0101</td><td></td></tr><tr><td>렙틴 순방향 PCR 프라이머(5'-GGGCTTCACCCCATTCTGA-3') 10uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>렙틴 역방향 PCR 프라이머(5'-GGCTATCTGCAGCACATTTTG-3') 10uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>액체 질소</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Maxima 역전사효소(효소 및 5x 완충액)</td><td>Thermo scientific</td><td>EP0742</td><td></td></tr><tr><td>나노 순수 (초순수라고 함)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>니트릴 검사 장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>니트릴 장갑</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>일반 설치류 다이어트</td><td>Harlan Laboratories, Madison, WI</td><td>Harlan 2018</td><td></td></tr><tr><td>P1000 피펫맨</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2 피펫맨</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P20 피펫맨</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P200 피펫맨</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>페놀 용액(TRIzol)&nbsp;</td><td>Ambion Life Technologies</td><td>15598018</td><td></td></tr><tr><td>사전 식별된 알루미늄 호일</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>석영 분광광도계 큐벳</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>랙 PCR 튜브 스트립</td><td></td><td></td><td></td>용</tr><tr><td>랙 RT-PCR 튜브 스트립</td><td></td><td></td><td></td>용 랙</tr><tr><td>랜덤 헥사머&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>58875</td><td></td></tr><tr><td>Real-time PCR Rotor Gene 시스템&nbsp;</td><td>Corbett 연구</td><td>RG-3000 Rotor-Gene 열 순환기</td><td></td></tr><tr><td>냉장 벤치탑 원심분리기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RiboLock RNase 억제제&nbsp;</td><td>Thermo scientific</td><td>EO0381</td><td></td></tr><tr><td>RNase-free 1.5 mL eppendorf tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNase-free 1.5 mL screw cap tubes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNase-free PCR 튜브 스트립 (0.2 mL) 및 캡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>RNase-free 물&nbsp;</td><td>Hyclone</td><td>SH30538.02</td><td></td></tr><tr><td>RT-PCR 기계</td><td>, Qiagen</td><td>Rotor-Gene Corbett 3000</td><td></td></tr><tr><td>RT-PCR 튜브 스트립(0.1mL) 및 캡</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>S16 정방향 PCR 프라이머(5'-ATCTCAAAGGCCCTGGTAGC-3'), 10uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>S16 역방향 PCR 프라이머(5' ACAAAGGTAAACCCCGATCG-3') 10 uM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>분광광도계</td><td>Biochrom</td><td>Ultrospec 3100 pro</td><td></td></tr><tr><td>스테인리스 스틸 모르타르와 유봉</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>수술 패드</td><td>집에서 만든 폼 보드는 일회용 흡수성 언더패드</td><td></td><td></td>에 싸여</tr><tr><td>있습니다. 수술용 가위&nbsp;</td><td>Intrumentarium</td><td>130.450.11</td><td></td></tr><tr><td>열 순환기</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>열 순환기&nbsp;</td><td>Biometra</td><td>Thermocycler</td><td></td></tr><tr><td>Vortex 믹서</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>계량 주걱</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 지방 조직 수집 및 rna 분석에 대 한 처리

Mouse Adipose Tissue Collection and Processing for RNA Analysis

다른 조직에 비해, 백색 지방 조직 있으므로 주로 지질 상당히 적은 RNA와 단백질 콘텐츠를 실시간 PCR 및 서쪽 오 점, 같은 다운스트림 응용 프로그램에 대 한 있다. 추가 단계는이 지질을 방지 하는 데 필요한 지방 조직 샘플에서 RNA 절연은 또한 도전 이다. 여기, 우리 3 해부학 다른 흰색 adipose 조직 생쥐, 이러한 샘플을 처리 하 고 RNA 격리 수행에서 수집 하는 절차를 제시. 우리는 더 실시간 PCR를 사용 하 여 cDNA 그리고 유전자 식 실험의 합성을 설명 합니다. 이로써 설명된 프로토콜에서 동물의 머리와 지방 패드 교차 오염을 조직 수집 하는 동안 다른 지방 패드 사이 혈액 오염의 감소 수 있습니다. 그것은 또한 적절 한 수량 및 RNA 추출의 품질을 보장 하기 위해 최적화 되었습니다. 이 프로토콜 지방 조직 샘플은 실시간 PCR 등 일상적인 실험에 필요한 모든 마우스 모델에 널리 적용 될 수 있지만 기본 adipocytes 세포 배양에서 격리에 적합 하지 않습니다.

검 시 절차에 따라 3 개의 흰색 adipose 조직 수집 되었고 쥐 (N와 HF 다이어트 먹이 쥐)의 두 그룹에서가 중. 예상 했던 대로, 쥐 HF 다이어트 최종 몸 무게와 체중 증가 littermates N 다이어트 (표 1)에 비해 증가 했다. 이러한 관측 함께 했다 이상 2-fold 증가 비만 생쥐에서 PGF, PRF, SCF의 무게에 그에 비해 N 다이어트에.
격리 된 RNA와 어떤 실험을 수행 하기 전에 단계 4.9에에서 설명 된 대로 그것의 순수성 평가 되었습니다. 각 백색 지방 조직에 대 한 페 놀 솔루션 RNA 격리 RNA (표 2)에 대 한 순수한 것으로 간주 되는 비율 OD260/OD280은 약 2.0 샘플 적절 한 품질을 생산. 실시간 PCR 데이터 보여주었다 leptin mRNA ...

이 문서의 목적은 마우스에서 다른 흰색 adipose 조직 수집, 지방 샘플 처리 RNA를 추출 하는 단계별 절차를 제시 하는 것입니다.

마우스 지방 조직 수집 및 RNA 분석에 대 한 처리

Compared to other tissues, white adipose tissue has a considerably less RNA and protein content for downstream applications such as real-time PCR and ...

이 절차의 전반적인 목표는 서로 다른 마우스의 백색 지방 조직 저장소의 적절한 샘플 수집을 보장하고 조직에서 양질의 RNA를 다량 분리하는 것입니다. 이 방법은 신진대사, 생화학 및 분자 생물학 분야의 주요 질문에 답할 수 있으며, 예를 들어 처리되거나 유전자 변형된 마우스의 지방 조직에서 유전자 발현과 관련이 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 일반적으로 RNA 함량이 낮은 지방 조직에서 양질의 RNA를 다량 분리할 수 있다는 것입니다.이 절차를 시연할 사람은 제 연구실의 연구 조교인 에밀리 페핀(Emilie Pepin)입니다. 쥐를 안락사시킨 후 텍스트 프로토콜에 따라 알바 선(linea alba) 위의 피부를 자른 다음 흉곽 중앙에서 오른팔 방향으로 약 2cm, 오른쪽 뒷다리 위의 생식기 가까이에서 두 개의 절개를 만듭니다. 열린 피부의 한쪽 모서리를 펴고 22게이지 바늘을 사용하여 패드에 고정합니다.그런 다음 다른 모서리를 고정합니다. 수술용 가위를 사용하여 피부에 최대한 평평하게 놓고 복부 피하 지방(SCF)을 둔기로 절제한 다음 미리 자른 알루미늄 호일 조각으로 옮깁니다. 동물의 왼쪽에 대해 해부를 반복합니다.그런 다음 알루미늄 호일에 왼쪽과 오른쪽으로 수집된 지방 패드를 모두 당기고 액체 질소를 사용하여 샘플을 동결합니다. 내장 지방 조직에 접근하려면 알바 선(linea alba)을 따라 복부 근육을 자릅니다. 그런 다음 생식기에서 양쪽 마우스 뒤쪽으로 복부 근육을 절개합니다.생식 기관 주변의 지방은 성선주위 지방(perigonadal fat) 또는 PGF입니다. 부고환, 고환 및 유관에서 왼쪽 및 오른쪽 지방 패드를 분리하고 미리 라벨링된 알루미늄 호일로 옮깁니다. 그런 다음 샘플을 액체 질소로 동결합니다.왼쪽부터 시작하여 장을 복강에서 오른쪽으로 이동하여 신장을 노출시킵니다. 여기에서 신장과 부신을 둘러싸고 있는 지방 조직은 신장 주위 지방 또는 PRF입니다. PRF를 수집하기 전에 부신을 분리하고 제거하십시오.이것은 지방 조직보다 약간 더 분홍색이기 때문에 지루할 수 있습니다. 이제 PRF를 뒤쪽 근육 벽에서 분리하고 PRF와 신장을 신체의 나머지 부분과 분리하는 요관, 신장 동맥 및 정맥을 절단하십시오. 그런 다음 신장 캡슐을 절단하고 제거하여 PRF를 신장에서 분리합니다.오른쪽 PRF를 분리한 후 왼쪽의 조직과 함께 샘플을 알루미늄 호일로 옮기고 액체 질소를 사용하여 샘플을 동결합니다. 1.

mouse-adipose-tissue-collection-and-processing-for-rna-analysis

Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

마우스 뇌의 특정 영역별 RNA 발현 프로파일링을 위해서는 정밀하고 재현 가능한 조직 수집 전략이 필요합니다. 본 문서에서는 관상면 뇌 절단과 조직 코어러(corer) 보조 미세 절제술을 모두 사용하는 프로토콜을 설명합니다. 결과 샘플에서 얻은 총 RNA의 수율과 품질은 상술한 방법의 유용성을 입증합니다.

총 RNA의 분리 및 다운 스트림 차세대 시퀀싱 및 유전자 발현 프로 파일링에 대한 개별 마우스 뇌 영역의 Microdissection 아닌 레이저 캡처 현미경 접근법

우리는 리보뉴클레아제가 풍부한 쥐 췌장에서 높은 무결성을 가진 RNA를 분리하는 절차를 보고합니다.

마우스 췌장에서 RNA 격리 : 리보 뉴 클레아 풍부한 조직

연속 크라이 섹션은 단일 마우스 골격근에서 인접 영역을 이용한 유전자 발현 측정 학적 어플리케이션 및 RNA의 농축을 가능하게 수집된다. 직접 애플리케이션에서 비교 풀링 저온부 및 측정 30mg을 - 고품질 RNA를 (20)로부터 얻어진다.

유전자 발현 및 조직 학적 분석을위한 단일 마우스 골격근의 연속 지역의 냉동 절편

여기, 우리 다운스트림 RNA 분석에 대 한 배수 채널 (TM)를 격리 하기 위한 재현성 레이저 캡처 기정 (LCM)에 대 한 프로토콜을 설명 합니다. TM에 유전자 발현에 변화를 분석 하는 능력은 TM 관련 눈 질병의 근본적인 분자 메커니즘을 이해에 도움이 됩니다.

레이저 캡처 서 유전자 표정 분석에 대 한 마우스 눈에서 높은 순수 배수 채널의

액체 질소 냉동고 밀을 사용하여 뮤린 발을 처리하는 극저온 분쇄 방법은 조직에서 추출 된 RNA 또는 단백질의 수율과 품질을 개선하고 염증과 관련된 분자 프로파일의 분석을 가능하게하기 위해 개발되었습니다. 응답.

콜라겐 유도 관절염 모델에서 조직 염증의 분자 경로를 평가하기 위한 마우스 발 처리를 위한 저온 분쇄 프로토콜

본 간행물은 성숙한 지방세포로부터 핵의 분리, 형광 활성화 선별에 의한 정제, 및 단세포 수준 전사학에 대한 프로토콜을 설명합니다.

단세포 게놈 응용을 위한 지방 조직 핵의 격리

이 프로토콜은 유세포 분석을 위한 여러 막 결합 마커의 염색을 통해 지방 세포에서 고품질 RNA를 얻는 방법론과 SVF-대식세포의 표현형을 포함하여 단일 공정에서 인간 내장 지방에서 생존 가능한 지방 세포 및 기질 혈관 분획-SVF 세포를 분리하기 위한 효율적인 콜라겐분해효소 분해 방법을 제공합니다.

RNA 분석 및 대식세포 표현형에 적합한 인간 내장 지방 조직에서 생존 가능한 지방 세포 및 기질 혈관 분획 분리

여기에서는 쥐 쇄골 상부 갈색 지방 조직의 조직학적 및 유전자 발현 분석을 해부하고 수행하기 위한 실용적인 절차를 제공합니다.

쥐 쇄골 상갈색 지방 조직의 해부, 조직학적 처리 및 유전자 발현 분석

이 프로토콜은 마우스 안구 수정체 상피와 섬유 세포 벌크 질량의 분리에 이어 RNA 분리 및 qPCR 분석을 자세히 설명합니다. 이 방법을 사용하면 상피 세포와 분화된 섬유 세포의 전사체 및 생물학적 과정을 보다 자세히 분석하기 위해 수정체 세포 구획을 분리할 수 있습니다.

마우스 안구 수정체 상피 및 섬유 세포 벌크 덩어리에서 RNA 분리

이 프로토콜은 레이저 캡처 미세해부를 사용하여 파라포름알데히드 고정 및 최적 절단 온도 화합물이 포함된 마우스 간 조직의 조직학적 영역에서 RNA를 분리하는 방법을 설명하며, 이를 통해 표적 하류 유전자 발현 분석을 가능하게 합니다.

RNA 분석을 위한 파라포름알데히드 고정 마우스 간 조직의 레이저 캡처 미세 해부

배우세요 마우스 백색 지방 조직 수집 및 고품질 RNA 추출 방법을. 이 기술은 대사 및 분자생물학 연구에서 유전자 발현 분석에 필수적이며, 특히 유전자 변형 마우스 연구에 활용됩니다.

마우스 지방 조직 수집 및 RNA 분석에 대 한 처리

더 많은 동영상 탐색