알코올 중독에 대 한 Pharmacotherapies의 개발 모델을 마시는 murine: 어둡고 2 병 선택에 마시는

이 패러다임의 전반적인 목표는 알코올 사용 장애의 설치류 모델을 사용 하 여 잠재적인 안티 알코올 약물의 효과 평가 하는. 알코올 사용 장애는 주요 공중 보건 위기를 나타냅니다. 현재 치료는 효과가 없으며 지속적인 전임상 연구가 필요합니다.

우리의 프로토콜은 우리가 잠재적 인 치료의 안전성과 유용성을 평가하고 장애 자체의 기본 신경 생물학을 살펴 볼 수 있습니다. 분젠 버너에 유틸리티 나이프를 가열하여 절차를 시작합니다. 이 칼을 사용하여 플라스틱 18 밀리리터 세리컬 피펫의 상단과 하단 끝에서 약 1 인치를 잘라냅니다.

다음으로 파이펫을 열총 으로 데우십시오. 파이펫의 하단 끝에 볼 베어링 시퍼 튜브를 삽입합니다. 그런 다음 시판되는 수축 랩 건을 사용하여 수축 랩으로 시퍼 튜브를 제자리에 밀봉하십시오.

실리콘 스토퍼로 다른 개구부를 캡. 동물 습관의 경우, 도착 시, 침대, 음식 및 물과 금속 그리드 케이지 상단표준 폴리 카보네이트 폴리 설폰 케이지에 단일 집 각 마우스. 1 주일 단일 하우징 의 4 일째에 시작, 측정 하고 마우스의 매일 몸과 음식 무게를 기록.

반월 상 연골의 가장 높은 지점을 기록하기 위해, 반전 된 병과 함께 에칭을 사용하여 물 섭취를 측정합니다. 지난 3일 동안의 평균에서 물 섭취량이 플러스 또는 마이너스 10%로 안정화되면 TBC 또는 DID로 에탄올 접근을 시작합니다. TBS를 수행하기 위해 1, 000 밀리리터에 10%에탄올 용액을 194.7 밀리리터의 105.3 밀리리터를 894.7 밀리리터의 물에 추가하여 철저히 흔들어 줍니다.

에탄올이 빠르게 증발한다는 점을 감안할 때, 일주일에 두 번 솔루션을 교체하십시오. TBC 의 첫날, 각 케이지에, 두 개의 물 병 중 하나를 비우고 갓 준비 에탄올 용액으로 가장자리에 채우기. 에탄올과 물은 시각적으로 구별되기 어렵다는 점을 감안할 때 해당 내용물로 병에 명확하게 라벨을 붙입니다.

필요에 따라 물병에 더 많은 솔루션을 추가하십시오. 그런 다음 병을 케이지에 다시 배치하여 캡이 단단히 닫혀 있고 주화에서 기포 또는 누출이 없는지 확인합니다. 공기가 병을 탈출 할 수 있도록 병에 도청하여 기포를 제거합니다.

사용 이력있는 장소 선호도 관련 음주 활동에 미치는 영향을 보정하기 위해 매일 병의 위치를 번갈아 가며. 에탄올 섭취량 수준을 기록하고 10%에탄올 섭취량과 선호도 비율을 분석합니다. 에탄올 섭취량이 안정됨에 따라, 매일 측정 루틴 동안 각 마우스에 단일 제어 인회간 주사를 투여하여 마우스를 주입하는 데 익숙해집니다.

가변성이 낮은 에탄올 기준선이 다시 설정되면, 모든 그룹이 대략 유사한 평균 에탄올 섭취 값을 갖도록 에탄올 섭취 값을 사용하여 마우스를 제어 및 실험 그룹으로 나눕니다. 매일 약물 을 치료 시작, 급성 또는 멀티 데이 기간 동안. DID를 수행하기 위해, 예약 된 에탄올 액세스의 매일, 물 볼륨, 음식 섭취및 체중에 대한 측정을 기록하고 약물 복용을 수행합니다.

화합물이 음주 기간 동안 최대 뇌 농도에 접근되도록 약물의 약동학에 따라 선택되는 광 주기 동안 미리 선택된 시간 동안 이를 수행한다. 다음으로, 1, 000 밀리리터에 20%에탄올 용액을 190개의 교정 곡물 에탄올210.5밀리리터를 789.5 밀리리터의 물에 추가하여 준비합니다. 그런 다음 철저히 흔들어 주세요.

음주 세션이 시작되기 전에 에탄올 병을 채우면 DID가 시작되자마자 물병을 알코올 병으로 교체할 수 있습니다. 전체 DID 세션 동안, 동물을 방해하지 않는 빨간색 조명 헤드 램프를 사용합니다. 빛 주기 전에 어두운 주기로 3 시간 시작 될 예정 이다 DID 음주 세션의 시작, 각 마우스에 대 한 물의 볼륨을 기록.

그런 다음 각 물병을 20% 에탄올 용액병으로 교체하고 시작 에탄올 볼륨을 기록합니다. 마지막 에탄올 볼륨을 읽고 4 일째에 1~3시간, 4시간 후에 음주 세션이 끝날 때 최종 에탄올 볼륨을 기록합니다. 그런 다음 20%에탄올 섭취량을 분석합니다.

그 후 에탄올 병을 물병으로 교체하고 물량을 기록합니다. 이 수치는 에탄올 섭취 및 선호도에 킬로그램당 5 밀리그램에서 Moxidectin의 급성 투여량의 효과에 대한 평가를 보여줍니다. 1회 용량의 Moxidectin은 전 산화탄소 주사와 비교하여 45%를 초과하는 알코올 섭취량을 현저히 감소시켰으며, 30%10%에탄올 섭취와 선호도를 초과하는 선호도는 MOX 치료 직후 에탄올 섭취량과 선호도가 현저히 낮게 유지된다.

여기서, 음주는 DID 절차를 사용하여 모델링되었다. 마우스는 4일째에 확립된 기준선 20%에탄올로 1일부터 4일까지 식염수 투여되었다. 두 번째 주간 주기의 1~3일에, 모든 마우스는 또 다른 매일 식염수 주입을 수신했습니다.

3일째부터 에탄올 섭취 값은 마우스를 킬로그램당 5밀리그램또는 식염수로 1회 주사를 받은 두 그룹으로 분할하는 데 사용하였다. 다음 주, 모든 마우스는 1일부터 4일까지 매일 식염수 주사를 받았고, 에탄올 섭취량은 4일째에 다시 측정되었다. MOX의 급성 투여는 분석되었고, 약물 전 주사에 비해 54%를 초과하는 알코올 섭취량을 현저히 감소시키고 있는 것으로 나타났다.

이 프로토콜을 사용하는 미래의 실험은 잠재적 인 약물의 메커니즘, 주입 및 독성을 평가하고 현재 치료 옵션과 관련하여 그 효과를 평가하기 위해 수행해야합니다.