Name: 알코올 중독에 대 한 Pharmacotherapies의 개발 모델을 마시는 murine: 어둡고 2 병 선택에 마시는 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: 학습하세요 알코올 사용 장애의 약물 치료법 개발을 위한 쥐 모델을 활용한 선임상 평가 방법을. 이 프로토콜은 잠재적 항알코올 약물의 효능과 안전성을 검증하는 데 활용됩니다.

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이 작업을 지원 했다, 부분적으로, 연구에 의해 부여 SC CTSI NIH/NCRR/NCATS-UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.), 그리고 약국의 USC 학교.

여기에서 설명한 모든 절차는 기관 동물 관리 및 남부 캘리포니아 대학 보건 과학 캠퍼스의 사용 위원회에 의해 승인 되었습니다.
1. 실험 설치 및 조립
<ol><li>다음 공급 및 화학 연구를 시작 하기 전에 모든 취득: 쥐, 새 장/금속 케이지 정상, 침구, 음식, 물, 에탄올, pipets, sipper 상판, 수축 포장, 유틸리티 나이프, 우편 넥타이, 테이프, 분 젠 버너, 규모, 전조 등.</li>
	<li>가져올 C57BL/6J 쥐, 상용 소스 또는 사내 식민지에서 쥐 그룹 테스트의 시간까지 보관 될 수 있음을 염두에서에 유지. 참고: 마우스 조달의 총 수는 실험 디자인의 복잡성에 따라 달라 집니다. 그룹, 파일럿 연구 그룹 당 5-7 마우스 보다 더 작은 당 대략 12-15 마우스에 맞게 계획 합니다. 아래 대표 결과에 우리는 약물 (MOX)의 단 하나의 복용량 (5 mg/kg)를 사용 하 여 원인-효과 관계를 평가 하기 위해 간단한 2-그룹 설정 활용.</li>
	<li>18병 조합 하려면 다음 단계를 따릅니다.<ol>
<li>열 분 젠 버너를 사용 하 여 유틸리티 나이프.</li>
		<li>이 칼을 사용 하 여, 대략 인치 플라스틱 18 mL 혈 청 학적인 피펫으로의 위쪽과 아래쪽 끝을 잘라.<ol>
<li>Note 작은 볼륨 pipets (즉, 10 mL)는 측정의 정밀도 증가 또한 사용할 수 있습니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>총 열 아래 피펫으로 따뜻한.</li>
		<li>피펫으로 (즉, 18 mL 대시 라인에 가장 가까운 개방)의 "바닥" 끝에 볼 베어링 sipper 튜브를 삽입 합니다.</li>
		<li>상업적으로 이용 가능한 수축 포장 총을 사용 하 여 수축 포장을 가진 장소에서 sipper 튜브 인감.</li>
		<li>모자는 다른 실리콘 스 토퍼와 함께 여.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 동물 요법이 니
<ol><li>실험적인 절차 그들은 (주위 온도 (21 ± 1 ° C) 및 12-h 포함 농업 조건에 적응 수 있도록 실시 하 방 쥐 전송 실험의 시작 날짜 이전에 적어도 1 주를 시작, 반대로 빛과 명암 주기에서 12 시에). 기관 지침 및 다른 한 위치에서 동물을 이동 하기 전에 적절 한 채널을 통보 해야 합니다.<ol>
<li>마우스는 표준 명암 주기에서 전송 되는 경우 추가 요법이 니 시간 2 주 소요 됩니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>테두리에 새로 만든된 병 물으로 채우십시오. 안전 하 고 어떤 기포 또는 주 둥이에서 누수가 없는 모자 닫혀 있는지 확인 합니다. 솔루션을 유출 하는 경우 다시 뚜껑을 보안 합니다. 단순히 공기 튜브를 피할 수 있도록 병을 도청 하 여 모든 기포를 제거 합니다.</li>
	<li>도착 시 단일 집 침구와 금속 그리드 케이지 상단; 표준 폴 리 카보 네이트/polysulfone 장에 각 마우스 그것은 더 이상 사용 될 때 케이지 뚜껑을 제거 합니다.<ol>
<li>음식과 water bottle(s) 광고 libitum에 대 한 액세스를 제공 합니다.</li>
		<li>장소에 그것을 잡아 각 병 주위 플라스틱 지퍼 넥타이 포장 하 여 각 병 케이지 상단에 보안. 감 금 소에 밀려 하지 않습니다 있도록 우편 넥타이에서 어떤 과잉 플라스틱 트림. 참고: 어두운 (DID) 절차에서 마시는 물 한 병만이 필요 합니다. 그러나 2 병 선택 (TBC) 패러다임에 habituation, 케이지 설정 물 두 병을 포함 해야 합니다. 금속 그리드 호퍼 제공 솔루션의 단일 병만를 보유 하도록 설계 하는 경우 부드럽게 구 부 떨어져 TBC에 대 한 두 번째 병에 맞게 추가 접시에 대 한 공간을 창조 하는 바.</li>
	</ol>
</li>
	<li>3 마우스 무료 제어 케이지를 설정 합니다. 이것은 감 금 소는 켜고 케이지 랙 배치로 일이 단순히 자연 발생 되는 병에서 증발 또는 흘림으로 인 한 유체 손실의 모니터링에 대 한 수 (2.6.3, 3.6.1, 및 4.6.1 방정식에 대 한 단계를 참조 하십시오).</li>
	<li>주 1 주 하나의 주택 새 환경 순응의 4에 시작, 측정 하 고 기록 뿐만 아니라 기록의 가장 높은 지점에 거꾸로 병 함께 에칭을 사용 하 여 물 섭취 량 (그램)에서 규모를 사용 하 여 각 마우스의 매일 음식과 몸 무게는 (mL)에서 초승달 모양입니다.<ol>
<li>그것은 오목한 초승달의 가장 낮은 지점 읽을 표준 과학적인 연습은 병 측정 동안 거꾸로 위치에 남아 있기 때문에, 초승달 모양의 가장 높은 지점을 기록 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>아래의 방정식을 사용 하 여 2.5의 매개 변수를 평가:<ol>
<li>(G)의 몸 무게 변화를 측정: 현재 날짜 (g)-전날 (g)의 무게의 무게.</li>
		<li>음식 섭취 량 (g)를 측정: 전날 (g)-현재 날 (g) 식품의 무게에 음식의 무게.</li>
		<li>물 섭취 량 (mL)을 측정: 모든 제어 연습장 (mL)에서 [현재 하루 (mL)-전날 (mL)에 물이 볼륨에 볼륨]-평균 물 손실.</li>
	</ol>
</li>
	<li>에탄올의 도입 직전 3 일에 대 한 초기 계획의 결정에 대 한 허용 하도록 5-7 일에 연속적으로, 2.5 단계를 반복 합니다. 연속 기록 수집 수 없습니다, 경우 기준선 측정의 평가 대 한 허용 하도록 새 환경 순응 기간 연장.</li>
	<li>물 섭취 량은 지난 3 일의 평균에서 ± 10% 변동에 안정, 일단 TBC (무제한 액세스) 또는 (제한 된 액세스) DID 에탄올 액세스를 시작 합니다. 참고: 드문 경우에, 1 ~ 2 일 더 필요할 수 있습니다이 안정성을 달성 하는 과목 지난 3 일의 평균에서 ± 10% 변화를 표시 하는 값에 대 한 추가 시간이 필요한 경우 놀라지 않습니다.</li>
</ol>3. 24 시간 2 병 선택 (TBC)
참고: 회로도 그림 1에 준비가 되어 있습니다.
<ol><li>H2O; 447.35 mL 52.65 mL 190 증거 곡물 에탄올 (~ 95% 에탄올)을 추가 하 여 500 mL 볼륨에서 10% (v/v) 에탄올 용액 준비 철저 하 게 악수를 해야 합니다. 에탄올 증발 신속 하 게, 모든 3-4 일의 간격에서 솔루션을 교체 합니다. 참고: 다른 농도의 에탄올 뿐만 아니라, 사용할 수 있습니다 하지만 저자 추천이 모델에 대 한 10%의 농도.</li>
	<li>TBC의 첫번째 날에 (초기에 하루 8) 각 장에 2 물 병 1 빈 그리고 테두리에 갓된 에탄올 솔루션에 채워. 에탄올과 물은 어려운 고유 시각, 그에 주어진 명확 하 게 그들의 해당 내용으로 병 라벨. 단순히 병에 직접 병에 테이프를 마스킹 및 서 면으로 표시와 함께 또는 라벨의 조각 적용.</li>
	<li>필요에 따라 물 병을 더 많은 솔루션을 추가 합니다.</li>
	<li>다시 케이지, 모두 대문자 안전 하 게 폐쇄 확인 하 고 어떤 기포 또는 주 둥이에서 누수가 없는 병을 놓습니다. 솔루션을 유출 하는 경우 다시 뚜껑을 보안 합니다. 단순히 공기 병을 피할 수 있도록 병을 도청 하 여 모든 기포를 제거 합니다.</li>
	<li>대체 병으로 매일의 위치 조절된 장소 특혜 관련에 대 한 올바른 음주 활동에 영향 (대 한 자세한 내용 참조).</li>
	<li>2.5 및 2.6에서 일일 측정 이외에를 읽고 기록 뿐만 아니라 에탄올 섭취 수준 시작 진행 되었습니다. 다음과 같은 방정식을 사용 하 여 10% 에탄올 섭취와 선호 비율 분석:<ol>
<li>측정 10% 에탄올 섭취 량 (mL): [현재 하루 (mL)-이전 날 (mL) 에탄올의 볼륨에 에탄올의 볼륨)]-평균 모든 제어 연습장 (mL)에서 에탄올 손실.</li>
		<li>측정 10% 에탄올 섭취 량 (g/kg): [10% 에탄올 섭취 량 (mL) 0.07893 g/mL x] / 몸 무게 (kg).</li>
		<li>측정 기본 설정 %: [10% 에탄올 섭취 량 (mL) / 물 (mL)] x 100.</li>
	</ol>
</li>
	<li>최대한 빨리 에탄올 섭취는 안정 되 고, 매일 측정 루틴 동안 각 마우스를 단일 컨트롤 (염 분) 복 (i.p.) 주입 (체중의 0.01 mL/g)을 관리 합니다. 이 방법에서는, 주제 자체 주사에 익숙한 될.<ol>
<li>안정성 (섹션 2.8와 동일)는 지난 3 일의 평균에서 ± 10% 변동으로 정의 됩니다. 참고: 그것은 에탄올 안정화 수준에 대 한 최대 1 주를 걸릴 수 있습니다. 이것은 특히 사실 마우스 다시 이전 실험에서 사용 되 고 에탄올에 이전 노출 했다입니다. 컨트롤은 단순히 약물을 분해 하는 데 사용 용 매.</li>
	</ol>
</li>
	<li>낮은 가변성 에탄올 기준선 주입으로 쥐를 분할 다시 설정 되 면 모든 그룹이 대략 비슷한 에탄올 섭취 량 값을 사용 하 여 그룹 에탄올 섭취 값 평균.<ol>
<li>(식 염 수를 받을 계속) 제어 및 실험으로 다른 한 그룹 지정 (체중의 0.01 mL/g에서 조사 약물의 i.p. 주입). 매일 약물 주입, 급성 또는 기간 중 하나를 시작 합니다. 그 후, 컨트롤 후 약물 효과 (선택 사항) 테스트 다시 도입 될 수 있습니다. 참고: 24 h 장기간에 걸쳐 술을 모니터링 하기 때문에 복용량 관리의 시간 사용는 어두운 주기에 의존 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. (한) 어둠 속에서 마시는
참고: 회로도 그림 3에 준비가 되어 있습니다.
<ol><li>예약 된 에탄올 액세스의 매일에 (일 1-4) 물 볼륨, 음식 섭취 량, 및 몸 무게, 측정, 기록 하 고 약물 주입을 수행. 화합물에 약물의 약 동학에 따라 선택은 빛 주기 동안 미리 시간 동안 이렇게 / 또는 음주 기간 동안 최대 두뇌 농도 접근. 참고: 일 1-3는 간단히 적응 시간의 짧은 기간에 에탄올의 풍부한 레벨을 마시는 쥐 의미 기억. 반면 쥐 BEC 레벨 인간의 0.08; 비교에 도달 하지 않습니다 이러한 "훈련" 일을 하루에 4, 약간 이상 마시는 세션 동안 그들은 마실 것 이다 실제로 그 수준에 있는지 확인 합니다.<ol>
<li>하루에 4 모든 쥐 일 1-3, 그리고 제어 또는 마약에 컨트롤 (염 분)을 제공 합니다. DID 이렇게 약물 (주 2), 및 포스트 약물 (주 4) 마시는 세션 사전 마약 (주 1)을 포함 3 주간의 기간 동안 발생 합니다.</li>
		<li>참고: 약물 주입 주 동안 유의 3 일 에탄올 섭취 레벨은 두 그룹의 에탄올 섭취 수준을 최소 가변성에 있는 방법으로 컨트롤이 나 약물 그룹 중 하나에 쥐를 할당 하는 데 사용 됩니다. 이것은 달리 TBC, 3 일의 평균에 따라 그룹을 할당 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>500ml 볼륨에 H2O; 394.75 mL 105.25 mL 190 증거 곡물 에탄올 (~ 95% 에탄올)을 추가 하 여 준비 하는 20% (v/v) 에탄올 솔루션 (20E) 철저 하 게 악수를 해야 합니다.</li>
	<li>그렇게 물 병 단순히 알코올 병으로 대체 될 수 있다는 DID 시작 하자마자 마시는 세션의 시작 하기 전에 에탄올 병을 입력 합니다.</li>
	<li>전체 DID 세션 (4.5-4.8 단계) 동안 동물을 방해 하지로 레드-라이트 전조 등을 사용 합니다.</li>
	<li>마시는 세션, 어두운 사이클에 3 시간을 시작 하는 DID의 시작에서 각 마우스에 대 한 물의 양을 기록 합니다. 다음, 20E 솔루션의 병 각 물 병을 대체 하 고 시작 에탄올 볼륨 기록 합니다.</li>
	<li>읽기 하 고 일 1-3에 마시는 세션 및 나중에 4 일 4 시간의 끝에 2 시간 후, 최종 에탄올 볼륨을 기록 합니다. 다음과 같은 방정식을 사용 하 여 20% 에탄올 섭취 량을 분석 합니다.<ol>
<li>측정 20% 에탄올 섭취 량 (mL): 모든 제어 연습장 (mL)에서 술 마시는 세션 (mL)의 시작에서 에탄올의 부피 (mL)-세션의 끝에 에탄올의 [볼륨]-평균 에탄올 손실.</li>
		<li>측정 20% 에탄올 섭취 량 (g/kg): [20% 에탄올 섭취 량 (mL) 0.15786 g/mL x] / 몸 무게 (kg).</li>
	</ol>
</li>
	<li>일에 4만, 에탄올 볼륨, 기록한 후 즉시 다시 액세스를 도입 하기 전에 물에, 각 마우스 (옵션)의 혈액 에탄올 농도 평가 하기 위해 혈액을 수집 합니다. 참고: 모든 비 터미널 혈액 수집 방법 사용할 수 있습니다, 레트로 궤도 공동 혈, 또는 saphenous 정 맥 혈 등. 유용한 프로토콜 참조 Parasuraman 외 에 대 한 참조 21 , Yardley 외. 20.<ol>
<li>LCMS, 또는 상업적으로 사용할 수 있는 기계를 포함 하 여 다양 한 방법을 사용 하 여 분석 수행 ( 재료의 표참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>모든 에탄올 병을 물 병 및 기록 물 볼륨으로 바꿉니다.</li>
</ol>

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</ol>

DLD와 라는 기 생선 충 약의 재사용에 대 한 특허와 관련된 avermectins 알코올 사용 장애의 치료에 대 한 발명가. 저자 다른 충돌의 관심을가지고 있으며 전적으로 종이의 과학적 내용에 대 한 책임.

전세계 추정으로 76 백만 명 영장 진단 알코올 사용 장애 (AUD)에 대 한 기준을 충족 나타냅니다. 불행히도, 현재 사용할 수 있는 제약 치료는 크게 효과적 이며 추가 개발이 임상 인구20의 요구를 오프셋 하는 데 필요한. 이 위해 다음 두 패러다임을 마시는 가장 기본적인 설치류의 예증으로이 노력을 촉진을 목표로 프로토콜: 2 병 선택 (TBC)과 어둠 (DID)에 마시는. 두 모델 모두 에탄올, 그것에 의하여 쥐 구두 에탄올 섭취의 비 조작 자체 관리 측정. TBC 패러다임, 에탄올 (10 %v / v) 및 물에 모두 사용할 수, 에피소드 및 점진적 에탄올 소비 패턴의 결과 대 등 하 게 낮은 혈액 에탄올 수준에서 결과. 이 모델 tastant 기본 설정으로 에탄올 섭취의 낮은 수준 평가 대 한 최고의 이며 따라서 인간의 "적당 한" 음주와 비슷한 수 있다. 위의 그림 2 TBC 패러다임에 대 한 대표적인 결과 보여줍니다.</p...

지난 25 년 동안, 플러스 상당한 노력 알코올 사용 장애 (AUD)1의 치료를 위해 약물을 개발 하는 쪽으로 넣어 왔다. 비록 많은 발전 한 AUD 여전히 남아 중요 한 공중 위생 문제 이상의 18 백만 미국인에 영향을 미치는 220 십억 달러 이상 비용이 매년2,3. 현재 3 FDA 승인 약품, disulfiram, naltrexone, 그리고 acamprosate, 임상 시험 및 한정 된 성공 조차 병원 설정에서 사회 심리적인 내정간섭과 결합 될 때 일관성 없는 결과 굴복 했다 모두는 있다 4 , 5 , 6 , 7.
현재 AUD 치료의 실패에 대 한 주요 이유는 AUD8의 이기종 특성에 연결 된다. 환경 및 유전적 요인 AUD의 발전에 기여, 동안 상속 가능성 발병9의 위험의 약된 50-60%를 차지 한다. 우울증의 치료와 마찬가지로, 그것은 널리 허용 AUD 고통 받아 환자 환자 각10의 요구에 맞게 맞춤형 약물의 다양 한 필요 합니다.
명확 하 게, 보다 효과적인 치료 약물 발견의 이미 힘든 시간이 걸리는 과정 간소화3경우 촉진 될 것 이라고 위한 긴급 한 필요가 있다. 이 위해 다음 프로토콜 두 설치류 마시는 모델 널리 AUD11의 neurobiological 기초를 검사 하는 데 사용의 임상 적용을 보여줍니다. 여기 소개 하는 방법 알콜을 감소에서 후보 화합물의 효능을 평가할 수 있습니다 좀 더 구체적으로, "중간"와 "마시는 파티" 시나리오 2 병 선택 (TBC)을 활용 하 고 어두운 (DID) 패러다임에서 마시는 소비 각각. 두 패러다임 검사 비 조작 에탄올 자기 관리, 그것에 의하여 쥐 구두로 고 지에서 에탄올을 섭취 및 따라서 높은 얼굴을 설명 및 유효 인간의 알코올 중독11의 모델을 구성 합니다.
TBC 음주, 일컬어 자유 선택 음주, 음주, 환경 설정 또는 사회적 음주, 솔루션의 두 병 홈 장에 지속적으로 사용할 수 있습니다. 한 병 들어 물, 그리고 에탄올, 에탄올의 농도 변화 될 수 있다 그것에 의하여의 희석된 솔루션을 포함 (예., 5-30 %v / v)11,12. 쥐 두 병 계속 액세스할 수 있고 따라서 얼마나 마시는 각 병에서 선택할 수 있습니다.
이 모델은 에탄올 선호 비율 (에탄올 소비 ÷ 총 볼륨 액체 소모의 볼륨) 뿐만 아니라 각 마우스 (g/kg)의 에탄올 소비를 평가 합니다. 그것은 정기적으로 또는 특정 유전자 조작 후 쥐의 다른 긴장에서 음주 레벨을 비교 하는 (예., 유전자 녹아웃 또는 최저) 및 혈액 에탄올 농도 (BECs) 인간에서 무엇을 발견 비슷한 결과 때 적당히13,14에서 음주.
DID 절차, 어두운 주기의 시작 후 3 h 물 홈 케이지 병 마시는 세션 제한 된 액세스에 대 한 20% (v/v) 에탄올 솔루션의 병으로 교환 됩니다. 마시는 세션 하루에 4 연속 4 일 주기, 1-3 일 지속 2 h 4 h로 발생합니다. 일 1-3 주 4에 테스트 하기 전에 알코올 요법이 니 기간 역할을 합니다. 따라서, 마우스 안정적으로 BECs 달성 하기 위해 충분 한 에탄올 소비 > 100 mg/dL와 그 결과,13,,1415마시는 binge는 인간에서 발견 하는 중독의 행동 효과 전시. 물 접근은 항상 마시는 세션 이외에 사용할 수 있습니다.
제한 된 액세스 술의 몇몇 변이가 있다. 예를 들어 간헐적으로 액세스 모델에서 마우스 받을 두 병 (1 개의 포함 물과 다른 포함 20% (v/v) 에탄올) 월요일, 수요일, 그리고 금요일에만 평일 및 주말, 각각1624 시간 및 48 h 철수 기간. 간헐적인 액세스의 몇 주 후 쥐 조금씩 하 고 자발적으로 결국 달성 BECS 무엇 DID 모델에서 관찰은 비슷한 수준의 음주를 확대 시킨다. 그러나 DID,, 파티 같은 마시는 행동을 평가 하기 위해 가장 일반적으로 사용 모델에 나타납니다. 간헐적으로 마시는 다른 모델 존재 하지만 그들은 음식에 대 한 액세스를 제한에 의존 하거나 증기 챔버 유발 증가 그들에 게 자발적인 인간의 알코올 소비16의 더 적은 대표를 시키는 자발적인 자기 관리.

<table><tbody><tr><td>1 L&nbsp; 눈금이 매겨진 실린더</td><td>VWR</td><td>https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co</td><td>에탄올 용액을 제조합니다.</td></tr><tr><td>1L 유리병</td><td>Pyrex(Fisher Scientific)</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752</td><td>에탄올 용액을 제조합니다.</td></tr><tr><td>100mL 눈금 실린더</td><td>Fisher Scientific</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311</td><td>에탄올 용액을 준비합니다.</td></tr><tr><td>Analox</td><td></td><td></td><td>DID 혈액 샘플을 분석하는 한 가지 잠재적인 방법은 analox 기계</td></tr><tr><td>볼 베어링 시퍼 튜브</td><td>Ancare Corp</td>.를 사용하는 것입니다.<td>http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point</td><td>길이 : 2.5 인치, 직경 : 5/16 인치, 모델 : TD100</td></tr><tr><td>C57BL / 6J 마우스</td><td>잭슨 연구소</td><td>https://www.jax.org/strain/000664</td><td>내부 번식 식민지</td></tr><tr><td>일회용 혈청 학적 피펫</td><td>VWR International (VWR)</td>에서도 나올 수 있습니다.<td>https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged</td><td>10 mL, 18 mL 또는 25 mL&nbsp;</td></tr><tr><td>에탄올, 순수, 190 프루프 (95%), USP, KOPTEC</td><td>Decon Labs (VWR)</td><td>https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec</td><td>---</td></tr><tr><td>히트 건&nbsp;</td><td>마스터 어플라이언스 공사</td><td>http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/</td><td></td></tr> <tr><td>열 수축 튜브</td><td>---</td><td>---</td><td>직경: 3/8인치</td></tr><tr><td>산업용 나이프/블레이드</td><td>---</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>금속 케이지 플레이트</td><td>------</td><td></td><td>대학/기관 사육장 마우스 RO 물을 통해 구할 수 있어야 합니다</td></tr><tr><td></td><td>---</td><td>---</td><td>대학을 통해 구할 수 있어야 합니다. 기관 사육</td></tr>장 <tr><td>휴대용 전자 저울</td><td>Ohaus (VWR)</td><td>https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus</td><td>---</td></tr><tr><td>빨간불 전조등</td><td>nyteBright (Amazon)</td><td>https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&qid=1499591137&sr=8-1-spons&keywords=red+lamp+headlamp&psc=1</td><td>--- </td></tr><tr><td>실리콘 스토퍼</td><td>Fisher</td><td>---</td><td>---</td></tr><tr><td>온도계</td><td>Fisher Scientific</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232</td><td>---</td></tr><tr><td>중량 보트</td><td>VWR International(VWR)</td><td>https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes</td><td>피펫 팁 상자의 뚜껑이 적절한 대안입니다.</td></tr></tbody></table>

알코올 중독에 대 한 pharmacotherapies의 개발 모델을 마시는 murine: 어둡고 2 병 선택에 마시는

Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

알코올 사용 장애 (AUD)와 주요 문제는 보다 더 약된 76 백만 사람들 전세계 진단 기준에 부합. 현재의 치료는 크게 효과가 정신 결합 하는 경우에 개입, 높은에 의해 분명 것으로 재발 율 3 FDA 승인 약품에 제한 됩니다. 따라서, 더 새로운 치료에 대 한 검색 중요 한 공중 보건 목표를 나타냅니다. 이 위해 다음 프로토콜 리드 안티 알코올 화합물의 임상 효능을 평가 하기 위해 두 가지 간단한 설치류 마시는 모델 활용: 2 병 선택 (TBC)과 어둠 (DID)에 마시는. 전 적당히 자발적인에 쥐를 유도 하는 동안 자발적인 음료를 쥐 술자리를 모방 하는 짧은 기간에 많은 양의 알코올 소비 수 있습니다. 이러한 패러다임의 둘 다의 간단 하 고 높은 처리량 특성 약리 에이전트의 신속한 심사에 대 한 또는 식별 특정 자발적인 마시는 행동 하는 쥐의 긴장에 대 한 허용.

다음 대표 조사에서 사회 음주는 모델링 2 병 선택 (TBC) 패러다임을 사용 하 여. 간단히, 마우스 중 하나는 물, 그리고 다른 10% (v/v) 에탄올 솔루션을 포함 하는 솔루션의 2 개의 병에 접근을 했다. 과목 이후 분할 되었고 균등 하 게 할당 약물 치료 그룹, moxidectin (MOX) 염 분 제어 대에 각 그룹 에탄올 섭취 수준을 최소한 변이의 평균 것입니다.
24 시간 기간 동안 초기 기준선 10E 섭취 14.46 ±에 안정 1.85 g/kg (n = 8) 주사, 시작 하 고 이후 다시 14.14 g/kg에서 안정화 하기 전에 식 염 수 주사를 게시. 급성 (5 mg/kg)의 복용량 MOX 에탄올 섭취와 기본 설정의 효과 평가 하기 위해 마시는 활동 평가 사전 MOX, MOX, 및 사후 MOX 이었다. 우리는 MOX의 단 하나의 복용량 크게 사...

알코올 사용 장애 (AUD) 주요 국가 건강 문제가 고 더 효과적인 치료법의 개발이 환자 인구의 요구를 오프셋 하는 데 필요한. 이 위해 다음 프로토콜 리드 안티 알코올 화합물의 임상 효능을 평가 하기 위해 두 가지 간단한 설치류 마시는 모델을 활용 합니다.

알코올 중독에 대 한 Pharmacotherapies의 개발 모델을 마시는 murine: 어둡고 2 병 선택에 마시는

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

이 패러다임의 전반적인 목표는 알코올 사용 장애의 설치류 모델을 사용 하 여 잠재적인 안티 알코올 약물의 효과 평가 하는. 알코올 사용 장애는 주요 공중 보건 위기를 나타냅니다. 현재 치료는 효과가 없으며 지속적인 전임상 연구가 필요합니다.우리의 프로토콜은 우리가 잠재적 인 치료의 안전성과 유용성을 평가하고 장애 자체의 기본 신경 생물학을 살펴 볼 수 있습니다. 분젠 버너에 유틸리티 나이프를 가열하여 절차를 시작합니다. 이 칼을 사용하여 플라스틱 18 밀리리터 세리컬 피펫의 상단과 하단 끝에서 약 1 인치를 잘라냅니다.다음으로 파이펫을 열총 으로 데우십시오. 파이펫의 하단 끝에 볼 베어링 시퍼 튜브를 삽입합니다. 그런 다음 시판되는 수축 랩 건을 사용하여 수축 랩으로 시퍼 튜브를 제자리에 밀봉하십시오.실리콘 스토퍼로 다른 개구부를 캡. 동물 습관의 경우, 도착 시, 침대, 음식 및 물과 금속 그리드 케이지 상단표준 폴리 카보네이트 폴리 설폰 케이지에 단일 집 각 마우스. 1 주일 단일 하우징 의 4 일째에 시작, 측정 하고 마우스의 매일 몸과 음식 무게를 기록.반월 상 연골의 가장 높은 지점을 기록하기 위해, 반전 된 병과 함께 에칭을 사용하여 물 섭취를 측정합니다. 지난 3일 동안의 평균에서 물 섭취량이 플러스 또는 마이너스 10%로 안정화되면 TBC 또는 DID로 에탄올 접근을 시작합니다. TBS를 수행하기 위해 1, 000 밀리리터에 10%에탄올 용액을 194.7 밀리리터의 105.3 밀리리터를 894.7 밀리리터의 물에 추가하여 철저히 흔들어 줍니다.에탄올이 빠르게 증발한다는 점을 감안할 때, 일주일에 두 번 솔루션을 교체하십시오. TBC 의 첫날, 각 케이지에, 두 개의 물 병 중 하나를 비우고 갓 준비 에탄올 용액으로 가장자리에 채우기. 에탄올과 물은 시각적으로 구별되기 어렵다는 점을 감안할 때 해당 내용물로 병에 명확하게 라벨을 붙입니다.필요에 따라 물병에 더 많은 솔루션을 추가하십시오. 그런 다음 병을 케이지에 다시 배치하여 캡이 단단히 닫혀 있고 주화에서 기포 또는 누출이 없는지 확인합니다. 공기가 병을 탈출 할 수 있도록 병에 도청하여 기포를 제거합니다.사용 이력있는 장소 선호도 관련 음주 활동에 미치는 영향을 보정하기 위해 매일 병의 위치를 번갈아 가며. 에탄올 섭취량 수준을 기록하고 10%에탄올 섭취량과 선호도 비율을 분석합니다. 에탄올 섭취량이 안정됨에 따라, 매일 측정 루틴 동안 각 마우스에 단일 제어 인회간 주사를 투여하여 마우스를 주입하는 데 익숙해집니다.가변성이 낮은 에탄올 기준선이 다시 설정되면, 모든 그룹이 대략 유사한 평균 에탄올 섭취 값을 갖도록 에탄올 섭취 값을 사용하여 마우스를 제어 및 실험 그룹으로 나눕니다. 매일 약물 을 치료 시작, 급성 또는 멀티 데이 기간 동안. DID를 수행하기 위해, 예약 된 에탄올 액세스의 매일, 물 볼륨, 음식 섭취및 체중에 대한 측정을 기록하고 약물 복용을 수행합니다.화합물이 음주 기간 동안 최대 뇌 농도에 접근되도록 약물의 약동학에 따라 선택되는 광 주기 동안 미리 선택된 시간 동안 이를 수행한다. 다음으로, 1, 000 밀리리터에 20%에탄올 용액을 190개의 교정 곡물 에탄올210.5밀리리터를 789.5 밀리리터의 물에 추가하여 준비합니다. 그런 다음 철저히 흔들어 주세요.음주 세션이 시작되기 전에 에탄올 병을 채우면 DID가 시작되자마자 물병을 알코올 병으로 교체할 수 있습니다. 전체 DID 세션 동안, 동물을 방해하지 않는 빨간색 조명 헤드 램프를 사용합니다. 빛 주기 전에 어두운 주기로 3 시간 시작 될 예정 이다 DID 음주 세션의 시작, 각 마우스에 대 한 물의 볼륨을 기록.그런 다음 각 물병을 20% 에탄올 용액병으로 교체하고 시작 에탄올 볼륨을 기록합니다. 마지막 에탄올 볼륨을 읽고 4 일째에 1~3시간, 4시간 후에 음주 세션이 끝날 때 최종 에탄올 볼륨을 기록합니다. 그런 다음 20%에탄올 섭취량을 분석합니다.그 후 에탄올 병을 물병으로 교체하고 물량을 기록합니다. 이 수치는 에탄올 섭취 및 선호도에 킬로그램당 5 밀리그램에서 Moxidectin의 급성 투여량의 효과에 대한 평가를 보여줍니다. 1회 용량의 Moxidectin은 전 산화탄소 주사와 비교하여 45%를 초과하는 알코올 섭취량을 현저히 감소시켰으며, 30%10%에탄올 섭취와 선호도를 초과하는 선호도는 MOX 치료 직후 에탄올 섭취량과 선호도가 현저히 낮게 유지된다.여기서, 음주는 DID 절차를 사용하여 모델링되었다. 마우스는 4일째에 확립된 기준선 20%에탄올로 1일부터 4일까지 식염수 투여되었다. 두 번째 주간 주기의 1~3일에, 모든 마우스는 또 다른 매일 식염수 주입을 수신했습니다.3일째부터 에탄올 섭취 값은 마우스를 킬로그램당 5밀리그램또는 식염수로 1회 주사를 받은 두 그룹으로 분할하는 데 사용하였다. 다음 주, 모든 마우스는 1일부터 4일까지 매일 식염수 주사를 받았고, 에탄올 섭취량은 4일째에 다시 측정되었다. MOX의 급성 투여는 분석되었고, 약물 전 주사에 비해 54%를 초과하는 알코올 섭취량을 현저히 감소시키고 있는 것으로 나타났다.이 프로토콜을 사용하는 미래의 실험은 잠재적 인 약물의 메커니즘, 주입 및 독성을 평가하고 현재 치료 옵션과 관련하여 그 효과를 평가하기 위해 수행해야합니다.

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