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Isolation and Culture of Rodent Microglia to Promote a Dynamic Ramified Morphology in Serum-free Medium

절연 및 동적 홍보 설치류 Microglia의 문화 Ramified 혈 청 자유로운 매체에 있는 외관

Full Text
17,118 Views
12:00 min
March 9, 2018

DOI: 10.3791/57122-v

Hannah Y. Collins1, Christopher J. Bohlen1

1Department of Neurobiology,Stanford University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for isolating and culturing microglia from developing or adult rodents. The method allows for the maintenance of highly pure microglial cultures without serum exposure, which supports investigations into microglial morphology and their interactions with other CNS cell types.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Culture
  • Microglial Function

Background

  • The investigation of microglial function has been limited by a lack of effective culture models.
  • Mature in vivo microglia exhibit properties that are challenging to replicate in vitro.
  • Understanding microglial interactions is essential for insight into CNS functioning.
  • This protocol aims to overcome limitations by providing a defined-medium culture method.

Purpose of Study

  • To create a reliable method for isolating microglia.
  • To maintain the viability and functionality of cultured microglia in a defined medium.
  • To provide a foundation for studying microglial roles in neuroscience.

Methods Used

  • Cell culture protocol involving isolation and culture of microglia from rodent brains.
  • Utilized developing or adult rodents as biological models without serum exposure in culture.
  • The procedure includes careful brain removal, tissue dissociation, and cell isolation techniques.
  • Involves specific steps to preserve microglial viability during homogenization and filtration.
  • Adherence to panning dishes and careful trypsinization for subsequent cell recovery.

Main Results

  • Successfully isolated and cultured highly pure microglia from rodent tissue.
  • Maintained cellular morphology consistent with mature microglia.
  • Established methodology enables further study of microglial interactions and activation states.
  • Highlighted the protocol's potential to clarify microglial roles in health and disease.

Conclusions

  • This study demonstrates a novel approach for microglial isolation that enhances the understanding of their function.
  • The method's emphasis on serum-free culture supports the investigation of microglial biology more effectively.
  • Provides implications for future research in neuronal mechanisms and plasticity in the CNS.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of using this isolation method?
The method allows for the generation of highly pure microglial cultures that can be maintained in defined medium without serum, enhancing the study of microglia.
How are the microglia prepared for culture?
Microglia are isolated from brains through careful dissection, tissue homogenization, and a series of centrifugations to remove debris.
What types of data can be obtained from these cultured microglia?
Data can include insights into microglial morphology, interactions with other CNS cells, and potential functional assays relevant to neuroinflammation.
Can this method be adapted for different ages of rodents?
Yes, the protocol is designed for use with developing or adult rodents, making it versatile for various research applications.
What are key considerations when implementing this protocol?
Attention to detail during tissue dissociation and bacterial contamination prevention are critical to ensure cell viability and culture success.

세부 사항에 microglial 함수를 이해 하는 노력 microglia 성숙한 vivo에서 속성 정리 microglial 문화 모델의 부족에 의해 방해 되어 있다. 이 프로토콜 정의 매체 조건 하에서 높은 없는 성숙한 쥐 microglia의 강력한 생존을 유지 하기 위해 설계 된 절연과 문화 접근을 설명 합니다.

이 세포 배양 프로토콜의 전반적인 목표는 혈청에 노출되지 않고 유지될 수 있는 개발 중이거나 성체 설치류로부터 매우 순수한 미세아교세포 배양을 생성하는 것입니다. 이 절차는 미세아교세포의 형태학, 섬유성 케토시스 및 미세아교세포와 다른 CNS 세포 유형의 상호 작용과 관련된 신경 과학의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 미세아교세포가 모든 연령의 설치류 조직에서 빠르게 분리되고 혈청에 노출되지 않고 배양될 수 있다는 것입니다.

뇌를 제거하려면 뇌가 손상되지 않도록 주의하면서 박리 가위로 동물의 척수에서 후두과를 양쪽으로 잘라냅니다. 그런 다음 두개골 위쪽을 따라 피부를 자르고 두정골과 전두골을 따라 코뼈 쪽으로 한쪽 면을 자릅니다. 집게로 두개골 상단을 조심스럽게 뒤로 당기고 뇌를 빠르게 제거한 다음 얼음 위의 미리 식힌 DPBS에 넣습니다.

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