허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 비보에 평가

이 절차의 전반적인 목표는 비보에 허 혈 성 뇌졸중의 쥐 모델에서 뇌혈관 장애의 평가 대 한 높은 재현 기법을 제공 하는입니다.

이 절차의 전반적인 목표는 허혈성 뇌졸중의 반응 모델에서 혈액-뇌 장벽 파괴에 대한 생체 내 평가의 재현성이 높은 방법을 제시하는 것입니다. 이는 뇌 좌측의 중대뇌동맥 폐색을 위해 내강내 필라멘트를 사용하여 허혈성 뇌졸중을 유도함으로써 이루어집니다. 절차의 다음 단계는 경정맥 외부 가지를 캐뉼레이션하고 중대뇌 동맥 폐색이 끝나고 재관류 기간이 시작될 때 Evans Blue 염료를 주입하는 것입니다.

24시간 후 깊은 마취 상태에서 동물의 순환계가 에반스 블루에서 씻겨 나가고 뇌가 제거됩니다. 그런 다음 두 개의 대뇌 반구를 분리, 균질화 및 원심분리한 다음 궁극적으로 조직의 상등액을 사용하여 분광 광도계로 Evans Blue 농도를 측정합니다. 마취 및 유속 측정.

4% 이소플루란을 사용하여 마취를 유도하고 수술 기간 동안 70% 아산화질소와 13% 산소의 혼합물에 1-1.5% 이소플루란으로 마취를 유지합니다. 마취된 동물을 피드백 제어 가열 담요에 엎드린 자세로 놓고 이 가열 장치에 연결된 직장 프로브를 사용하여 체온을 정상적인 생리적 범위로 유지합니다. 두개골 왼쪽의 수술 부위를 면도하고 거즈 패드를 사용하여 베타딘 용액을 도포하여 피부를 소독합니다.

70% 에탄올이 함유된 멸균 패드로 교체하고 두 단계를 3회 반복합니다. 왼쪽 눈의 안각에서 왼쪽 귀 기저부까지 뻗어 있는 두개골을 1cm 길이로 절개하고 왼쪽 측두근을 절개하여 두개골을 노출시킵니다. 그런 다음 브레그마의 측면 5mm와 후방 1mm에 작은 구멍을 뚫어 도플러 유량계 펜슬 프로브의 끝을 쉽게 배치할 수 있습니다.

쥐를 엎드린 자세에서 누운 자세로 바꾼 다음 레이저 연필 프로브를 이전에 뚫은 두개골 구멍에 넣어 국소 뇌 혈류를 모니터링합니다. 각 동물의 기준선 국소 뇌혈류를 기록하고 국소 뇌허혈의 100% 유도로 간주합니다. 목 부위를 면도하고 베타딘 용액과 70% 에탄올로 피부를 소독합니다.

진통을 위해 수술 부위에 0.2ml의 0.5%부피바카인을 피하주사합니다. 왼쪽 총경동맥에 접근하기 위해 목의 복부 표면을 2cm 길이의 외과적 절개를 만듭니다. 총경동맥을 인접한 근막과 미주신경으로부터 분리하여 외부 경동맥과 내부 경동맥의 분기점에 접근합니다.

5-0 낭 봉합사를 사용하여 왼쪽 총경동맥 또는 외부 경동맥을 영구적으로 결찰하고 내부 경동맥을 익상구개 동맥 수준까지 절개합니다. 총경동맥 주위에 5-0 낭 봉합사를 느슨하게 배치한 다음 혈관 마이크로 클립으로 내부 경동맥을 임시로 고정합니다. 느슨한 넥타이를 매기 전에 총경동맥을 작게 절개한 다음 4-0 실리콘 코팅된 나일론 봉합사를 내부 경동맥의 내강 공간에 삽입하고 총경동맥 주위의 봉합사를 조여 나일론 봉합사를 고정하고 혈액 누출을 방지합니다.

내부 경동맥에서 혈관 마이크로 클립을 제거합니다. 그런 다음 중대뇌동맥 기원의 폐색을 나타내는 국소 대뇌 혈류의 현저한 감소가 관찰될 때까지 실리콘으로 코팅된 루미날 내 필라멘트를 전진시킵니다. 특히 내측 대뇌동맥 폐색은 국소 뇌혈류의 80% 이상 감소가 감지되는 곳에서 시작됩니다.

이 모델에서는 필라멘트를 심방 경로로 올바르게 안내하기 위해 마이크로 클램프를 사용하여 익상구개 동맥을 일시적으로 차단합니다. 이 단계는 내측 대뇌동맥 폐색의 성공에 매우 중요합니다. 경정맥 캐뉼레이션 및 Evans Blue 주사.

정중선 왼쪽의 목을 1cm 길이로 절개한 다음 표재성 근막을 퉁명스럽게 절개하여 왼쪽 경정맥의 외부 가지에 접근합니다. 그런 다음 경정맥의 각막 끝을 5-0 봉합사로 영구적으로 결찰합니다. 정맥 주위에 두 개의 넥타이를 느슨하게 놓은 다음 혈관 마이크로 클램프로 경정맥의 심장 끝을 임시로 고정합니다.

두 개의 봉합사로 경정맥을 작게 절개한 다음 헤파린화된 혈청으로 채워진 카테터를 정맥의 내강 공간에 삽입하고 약 10mm 전진시킵니다. 그 후, 정맥 주위의 결찰을 조여 카테터를 고정하고 출혈을 방지합니다. 정맥이 무너지지 않도록 소량의 혈청을 주입하십시오.

허혈 기간, 즉 90분이 끝나면 내강내 봉합사를 빼내어 재관류를 시작합니다. 재관류 기간이 시작될 때 Evans Blue 염료를 5 분 동안 식염수에 2 % 용액 1kg 당 1 밀리리터를 천천히 주입합니다. 그 후, 0.5 밀리리터의 생리식염수를 주입하여 캐뉼라를 세척하고 정맥에서 주입 캐뉼라를 빼냅니다.

Evans Blue 주사 후 조직의 색 변화에 주목하십시오. 마지막으로 절개 부위인 목과 머리를 봉합하고 동물을 회복 케이지에 넣습니다. 혈액-뇌 장벽 투과성 평가.

재관류의 24 시간 후에, 나트륨 티오펜탈을 가진 동물을 깊이 마취하십시오. 그런 다음 흉골 아래에 작은 구멍을 만들어 흉강을 엽니다. 우심방에 작은 구멍을 만들고 예열된 식염수 250ml를 좌심실을 통해 15분 동안 주입하여 심방에서 제외된 일반 식염수가 무색이 될 때까지 Evans Blue를 순환에서 씻어냅니다.

즉시 두개골에서 뇌를 제거하고 뇌 매트릭스에 넣습니다. 후각구와 소뇌를 절개한 다음 깨끗한 면도날을 사용하여 정중선을 따라 뇌의 오른쪽 반구와 왼쪽을 분리합니다. 각 반구의 무게를 측정하고 2.5 밀리리터의 인산염 완충 식염수로 개별적으로 균질화 한 다음 와류 기계를 사용하여 2 분 동안 2.5 밀리리터의 16 % 트리클로로 아세트산과 혼합합니다.

원심분리기의 뇌 샘플을 30분 동안 채취한 후 냉장고에서 10분 동안 식힙니다. 상층액을 사용하여 610나노미터의 분광 광도계로 Evans Blue 흡광도를 추정합니다. 대표적인 결과.

가짜 수술 동물에서 뇌의 양쪽 반구를 위해 준비된 조직의 에반스 블루 농도는 매우 작으며 서로 비교할 때 큰 차이가 없습니다. 90분 이상 허혈 유도 후 24회 재관류를 실시한 결과 허혈성 쥐에서 뇌의 병변 반구에서 Evans Blue 수치가 크게 증가했습니다. 총체적으로, 이러한 발견은 정상적인 조건에서 Evans Blue가 혈액-뇌 장벽을 쉽게 통과하여 대뇌 실질로 들어갈 수 없으며 대뇌 허혈성 모욕이 혈액-뇌 장벽의 사내 투과성을 통해 Evans Blue의 유출을 유도했음을 나타냅니다.

사진은 허혈성 가짜 동물의 뇌를 보여준다. 파란색인 뇌 조직에서 Evans Blue의 유출 강도는 병변 반구의 혈액-뇌 장벽 파괴 정도에서 발생합니다. 결론. 혈액-뇌장벽의 생체 내 평가를 통해 연구자는 허혈성 혈관형성 뇌부종의 가능한 병태생리학적 메커니즘을 연구하고 새로운 치료 개입을 찾을 수 있습니다.

이 기술은 간단하고 신뢰할 수 있습니다. 연구자는 기술의 성능을 더욱 향상시키고 정확성을 보장하기 위해 몇 가지 기술적 사항을 고려해야 합니다. 레이저 도플러 유량계를 사용하여 국소 대뇌 혈류를 지속적으로 기록하고 실리콘 코팅된 필라멘트를 사용하면 MCAO 성공률을 높이고 사망률을 줄일 수 있습니다.

주사의 복용량과 시점은 허혈성 모욕 후 혈액 뇌 장벽의 동적 특성으로 인해 신뢰할 수 있는 결과를 얻기 위한 두 가지 필수 매개변수입니다.