Name: 마우스 결 장 종양 모델에서 콜론 미생물 생물 다양성에 환경 농축의 효과 정의 하는 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: 배우세요 마우스 결장 종양 모델에서 환경 농축이 장 미생물 생물다양성에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 16S rDNA 시퀀싱을 통해 미생물 정규화와 풍부한 환경이 종양 보유 마우스의 미생물 다양성을 증가시키는 과정을 탐구합니다.

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B. 달리는 통계 조언과 국립 암 연구소 수상 P30 CA042014에 의해 지원 되는 이러한 기술 코어에 대 한 액세스에 대 한 유타 대학 생물 통계학 핵심 라이브러리 시퀀싱 및 K. 바우처에 대 한 유타 대학 게놈 코어에는 감사 합니다. 설명 하는 프로젝트는 국립 암 연구소 보조금 P01 CA073992 K01 CA128891와 사냥꾼 암 재단에 의해 지원 되었다.

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</ol>

저자는 그들은 충돌의 관심을가지고 선언.

이 절차는 microbiota의 자 정상 또는 종양 동물 베어링의 환경 풍부를 다음에서 분리 된의 분석에 대 한 수 있습니다. 다른 남녀의 genotypes 많은 동물을 얻기 위해 사육을 포함 하는 큰 실험 이기 때문에, 필수적 이다 동물 실험의 시작 전 사이 미생물 정상화 EE 비를 피하기 위해 관련 미생물에 대 한 효과 생물의 다양성입니다.
네브라스카 및 전자 상태 사이의 일관성을 위해 번 식 과정은 모든 마우스 처음 같은 미생물에 노출 해야 하 고, 따라서, 비슷한 미생물 내용 것으로 예상 된다 위해 수행 됩니다. 그것은 가능한, 그리고 그 마우스 유전자, 미생물 구성에 영향을 줍니다. 이러한 이유로, 유전자 형 당 마우스 숫자는 대변을 소비 하는 어떤 동물 든 지는 미생물의 유사한 다양성을 발생할 것입니다 특정 조건은 NE와 EE 사이 유지 됩니다.
실험 EE를 디자인할 때 몇 가지 어려움은 명백한 있습니다. 첫째, 동물 ...

환경 농축 (EE) 연구 활용 사회적 자극 (대형 주택 새 장, 동물의 더 큰 그룹), 인지 자극 (오두막, 터널, 중첩 물자, 플랫폼) 및 신체 활동 (실행에 영향을 미칠 복잡 한 주택 매개 변수 바퀴)입니다. EE은 질병 개시 및 barbering 유도 탈모 증, 알 츠 하이 머 병을 포함 한 마우스 모델의 다양 한 배열을 사용 하 여 진행에 증가 한 활동 및 사회 및 인지 향상 된 상호 작용의 효과 이해 하는 많은 실험실에 의해 이용 되어 레트 증후군, 그리고 여러 종양 및 소화기 질병 모델1,2,,34,,56.
여러 마우스 모델 콜론 tumorigenesis 쥐에 연구 개발 되었습니다. 아마도 가장 잘 정의 된 모델은 Apc분 마우스. Apc분 마우스 19907, 윌리엄 비둘기의 실험실에서 개발 되었다 그리고 일반적으로 인간 대 장 암 연관 된 APC 유전자에 돌연변이의 마우스 모델 사용 되었습니다. APC 돌연변이 은닉 하는 인간, 달리 Apc분 마우스는 주로 결 장 종양의 아주 드문와 작은 창 자 종양을 개발 합니다. 그러나, Tcf4에 단일 쫓 고 녹아웃 heterozygous 돌연변이와 Tcf4Het 대립 유전자는 훨씬 콜론 tumorigenesis Apc분 대립 유전자8과 결합 될 때 증가 합니다. 최근, 콜론 tumorigenesis의이 마우스 모델 콜론 tumorigenesis6EE의 효과 결정 하기 위해 사용 되었습니다. 바이스 외에 공부, 남성 및 여성 4 개의 다른 마우스 라인에 EE의 생리 및 phenotypic 효과 (야생-타입 (WT), Tcf4Het / + Apc+ +, Tcf4+ + Apc분 / +, 및 Tcf4 Het / + Apc분 / +)) 정의 된. 아마도 가장 흥미로운 발견 EE 크게 둘 다 남성과 여성 결 장 종양 베어링 동물의 수명을 증가 했다. 이 시연 EE 적어도 줄일 수 있습니다 일부 증상의 콜론 tumorigenesis, 연관 및 동물 건강을 개선. 놀랍게도, 남성에서이 향상 된 수명 감소 tumorigenesis의 직접적인 결과 이며 대신 종양 상처 치유 향상 된 미생물 생물 다양성6을 포함 하는 응답의 개시에 연결 했다.
재미 있는 결과 함께 몇 가지 EE 특정 연구 출판 되었습니다. 그러나, 기술적인 관점에서 중요 한 결과 종종 없습니다 다른 실험실에 번역. 매우 복잡 한 문제, 아니라 농축 장치 및 주택 사용, 하지만 또한 침구, 음식, 환기, 번 식, 유전학, 방, 그리고 동물 프로토콜에서 활동은 다른 실험실 간의 동일한 EE 방법론을 유지 요구 사항, 다른 사람의 사이에서9,,1011. 한 예로 어디 동물 안정적으로 통합 마우스 식민지 따라서 유전 배경 및 식단 구성, 비 처리 관련된 효과 피하기 위해 정규화 동물의 통합 이다. 추가로, 많은 전자 연구 질병, 그리고 일반적인 마우스 농업 관행 본질적인 미생물10,12의 구성에 영향을 수 있습니다 방법에 미생물의 중요성의 실현 하기 전에 완료 되었습니다.
제대로 수행 하지 경우 전자에서 번 식 전략 및 동물 배치 스트레스를 증가 시킬 수 있습니다. 이후 EE 연구 다 수의 남성과 여성의 동물과 여러 genotypes 활용, 실험적인 체제 어려울 수 있습니다 결합 될 여러 새끼에서 동물에 대 한 요구를 주어진. 따라서, 한 번 식 및 전략 이유 다른 담가에서 올바른 유전자의 이유 동물의 결합을 위한 허용 하도록 개발 되었다. 이 대 한 기본 근거 새끼 중 microbiota를 정상화 하 고 스트레스를 줄이기 위해 동물 실험 환경으로 이동 하는 때 이었다. 미생물 댐10에서 전달 되었다. 식민지에 미생물 다양성을 제공 하려면 여성 잭슨 실험실에서 구입 하 고 실험9,,1012시작 하기 전에 한 달 동안 식민지에 통합 했다. 더 정상화 미생물 생물 다양성 동물 사이, 여성 공동 사육 이전 지 내게 했다. 번 식, 양육 하는 동안 공동 주택 및 탈출 하는 능력에 따라 간호 새끼 모성 배려13,14, 미생물 정규화를 가능 하 게 발전의 스트레스 수준을 향상. 비-전자를 방지 하기 위해 관련은 미생물에 대 한 효과, 모든 실험 동물의이 공동 주택 방지 한 실험으로 다른 담가에서 여러 남성을 결합할 때 발생 한 전투 및 추가적인 스트레스. 마지막으로, 모든 genotypes의 동물의 동등한 숫자는 연습장에 포함 됐다. 이 genotypes, 전반에 걸쳐 향상 된 microbiota 생물 다양성에 대 한 기회를 제공 하 고 제거 coprophagia (동물의 경향이 자 소비) 또는 전체 연구. 에 가능한 유전자 형 관련 행동 차이의 기여
이 프로토콜은 이전 EE 연구 미생물 연구, 더 균일 한 미생물 인구 수 있도록 microbiota 정규화 microbiota 전송 및 동물 식민지 통합의 알려진된 측면을 포함 하도록 확장 하는 전략을 제공 합니다. 사이 실험 동물. 이러한 예방 조치를 주의 하는 것은 수 비 처리 관련된 microbiota 차이의 연구 결과 혼동 때문 필수적 이다. 제거 하는 비-전자 관련 microbiota 변화 특히 질병 개발 및 진행 하는 동안 microbiota 구성에 EE의 역할을 정의 하는 연구자 수 있게 된다.

<table><tbody><tr><td>Teklad Diets/Harlan Labs Chow</td><td>Harlan Labs</td><td>3980X</td><td>표준 방사선 조사 차우는 Mario Capecchi 박사와 Harlan Labs가 공동으로 제조했습니다.</td></tr><tr><td>Cell-Sorb Plus 침구</td><td>Fangman Specialties</td><td>82010</td><td>사용 전 오토클레이브.</td></tr><tr><td>신생아를 위한 AIMS 문신 시스템</td><td>AIMS</td><td>NEO-9</td><td>https://animalid.com/neonate-rodent-tattoo-identification/32. Aramis Micro Tattoo Kit를 포함하여 다른 동물 등급 문신 시스템 및 잉크를 사용하여 유사한 결과를 얻을 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 AllerZone 마우스 마이크로 아이솔레이터 시스템 케이지, AllerZone 필터 탑 및 모듈식 다이어트 전달 시스템이 완비된</td><td>Lab Products</td><td>82120ZF</td><td>각 EE 케이지는 각 카탈로그 # 82120ZF, 82100ZF 및 82101ZF 중 하나와 82109ZF 중 두 개가 필요합니다. 음식은 한쪽에만 있습니다.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 수명 강화 장치</td><td>실험실 제품</td><td>82109ZF</td><td>각 EE 케이지에는 각 카탈로그 # 82120ZF, 82100ZF 및 82101ZF 중 하나와 82109ZF 중 두 개가 필요합니다. 음식은 한쪽에만 있습니다.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 Cage 13-7/8" 길이 X 19-1/16" 너비 X 7-3/4" 깊이</td><td>실험실 제품</td><td>82100ZF</td><td>각 EE 케이지는 각 카탈로그 # 82120ZF, 82100ZF, 82101ZF 중 하나와 82109ZF 중 두 개가 필요합니다. 음식은 한쪽에만 있습니다.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 AllerZone Micro-Isolator 필터 탑</td><td>Lab Products</td><td>82101ZF</td><td>각 EE 케이지는 카탈로그 # 82120ZF, 82100ZF 및 82101ZF 중 하나와 82109ZF 중 두 개가 필요합니다. 음식은 한쪽에만 있습니다.</td></tr><tr><td>Tunnel</td><td>Bio-Serv</td><td>K3323 또는 K3332</td><td>케이지를 함께 연결하고 농축</td></tr><tr><td>그로밋에 사용 터널을 케이지에 연결</td> 유<td>타 대학교 기계 공장에서 제작</td><td>해당</td><td>없음 재료가 씹는 및 오토클레이브에 내성이 있는지 확인하십시오</td></tr><tr><td>패스트 트랙 휠</td><td>Bio-Serv</td><td>K3250 또는 K3251</td><td>마우스 이글루 및 바닥용</td></tr><tr><td>마우스 이글루</td><td>Bio-Serv</td><td>K3328, K3570 또는 K3327</td><td>패스트 트랙 휠 및 바닥용</td></tr><tr><td>마우스 이글루 바닥</td><td>Bio-Serv</td><td>K3244</td><td>마우스 이글루 및 패스트 트랙</td></tr><tr><td>마우스 오두막</td>용 <td>Bio-Serv</td><td>K3272, K3102 또는 K3271</td><td></td></tr><tr><td>크롤 볼</td><td>Bio-Serv</td><td>K3330 또는 K3329</td><td></td></tr><tr><td>Bio-hut</td><td>Bio-Serv</td><td>K3352</td><td>목재 펄프 오두막 보호 및 중첩에 사용</td></tr><tr><td>접착 필름&nbsp;</td><td>VWR</td><td>60941-072</td><td>마우스가 탈출하는 것을 방지하기 위해 대형 케이지의 드릴 구멍을 임시로 덮는 데 사용</td></tr><tr><td>Laminar Flow Ventilated Rack</td><td>Techniplast</td><td>Bio-C36</td><td>본 연구에서 사용한 캐비닛은 현재 공급되지 않습니다. Bio-C36은 매우 유사합니다.</td></tr><tr><td>1.5 mL 마이크로분리 튜브- RNAse 및 DNAse 무함유</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA Stool MiniKit</td><td>Qiagen</td><td>51504</td><td>이 키트는 50개의 DNA 전처리를 위한 시약을 공급합니다. 대변 용해 완충액=ASL; 구아니디늄 클로라이드 용해 완충액= AL; 구아니디늄 클로라이드를 사용한 세척 버퍼 1 = AW1; 세척 버퍼 2= AW2; EDTA=AE Waterbath를 사용한 용리 완충</td></tr><tr><td>액(95도까지 가열 가능)</td><td>모든 공급업체</td><td></td>: <td>대변 샘플을 세포로 94도 배양합니다.</td></tr><tr><td>수조 (70도까지 가열 가능)</td> <td>어떤 공급업체</td><td></td>든 <td>대변 샘플의 70도 인큐베이션을 위해&nbsp;</td></tr><tr><td>에탄올(200 proof)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>형광측정기: Qubit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA 광범위 어세이 키트</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Q32850</td><td></td></tr><tr><td>EB 버퍼 또는 10mM Tris pH 8.5</td><td>Qiagen</td><td>19086</td><td></td></tr><tr><td>실험 특이적 프라이머</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCR 등급 물</td><td>어떤 공급 업체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2X KAPA HiFi HotStart 준비 믹스&nbsp;</td>앰플리콘 증폭을 위한 <td>Kapa Biosystems</td><td>KK2601</td><td>(1.25mL는 100rxns 허용).</td></tr><tr><td>진단 젤 실행을 위한 Agarose</td><td>모든 공급업체</td><td></td><td></td></tr>: <tr><td>TapeStation, 고감도, D1000, 스크린 테이프, 트레이스</td>, <td>애질런트</td><td>5067-5583</td>, <td>TapeStation 또는 Bioanalyzer 기기는 라이브러리 품질을 분석하기 위해 기관 유전체학 코어에서 일반적입니다. 또는 Bioanalyzer DNA1000 Chip(Agilent, 5067-1504)을 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Agencourt AMPure XP 마그네틱 비드</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63880</td><td>마젠틱 비드 PCR 세척 - 5mL는 250개의 PCR 반응을 세척합니다.</td></tr><tr><td>마그네틱 스탠드</td><td>Life Technologies</td><td>AM10027</td><td></td></tr><tr><td>라이브러리 준비 가이드</td><td>Illumina</td><td></td><td>Illumina. 16S 메타게놈 시퀀싱 라이브러리 준비: Illumina MiSeq 시스템을 위한 16S 리보솜 RNA 유전자 앰플리콘 준비. https://support.illumina.com/content/dam/illumina-support/documents/documentation/chemistry_documentation/16s/16s-metagenomic-library-prep-guide-15044223-b.pdf.</td></tr><tr><td>Unique Dual Indexing</td><td>Illumina</td><td>Illumina Experiment Manager 소프트웨어</td><td>무료 제공:</td></tr><tr><td>https://support.illumina.com/sequencing/sequencing_software/experiment_manager/downloads.html Nextera XT 96 Index Kit</td><td>Illumina</td><td>FC-131-1002</td><td>앰플리콘에 바코드를 추가하는 데 사용</td></tr><tr><td>MicroAmp Optical 96-well 반응 플레이트</td><td>Applied Biosystems/ThermoFisher</td><td>N8010560</td><td></td></tr><tr><td>TruSeq 인덱스 플레이트 고정 장치</td><td>Illumina</td><td>FC-130-1005</td><td></td></tr><tr><td>접착식 투명 플레이트 씰</td><td>Applied Biosystems /ThermoFisher</td><td>4360954</td><td>Applied Biosystems/ThermoFisher Microamp 접착 필름</td></tr><tr><td>v3 시약 및 이중 300 bp 판독을 사용한 MiSeq에 의한 시퀀싱</td><td>Illumina</td><td>MS-102-3003</td><td></td></tr><tr><td>PhiX Control Kit</td><td>Illumina</td><td>FC-110-3001</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K (600 mAU/ml)</td><td>Qiagen</td><td>19131</td><td>단백질 분해 효소 K의 20mg/ml에 해당. QiaAmp 키트와 함께 제공</td></tr><tr><td>데이터 분석 도구</td><td>Qiime QIIME</td><td>소프트웨어 도구</td><td>설치 시스템에 따라 다를 수 있으며 QIIME 웹 사이트에는 몇 가지 옵션(http://qiime.org/install/install.html)이 설명되어 있습니다. 본 연구를 위해 MacQIIME 소프트웨어 패키지 1.9.1(Werner Lab, SUNY, http://www.wernerlab.org/software/macqiime</td></tr><tr><td>13.2</td>단계를 활용하였다.<td>Qiime</td><td>FastQ 조인 방법</td><td>&nbsp;( http://code.google.com/p/ea-utils &nbsp;). &nbsp; 이 연구를 위해 다중 조인 쌍 끝이 http://qiime.org/scripts/multiple_join_paired_ends.html 사용되었습니다. Aronesty, E. ea-utils: 생물학적 염기서열 분석 데이터를 처리하기 위한 명령줄 도구. 표현 분석, 더럼, 노스캐롤라이나. (2011).</td></tr><tr><td>단계 13.3.</td><td>Qiime</td><td>De-Novo OTU 피킹 프로토콜</td><td>http://qiime.org/scripts/pick_de_novo_otus.html.</td></tr><tr><td>단계 13.3.1.</td><td></td> Uclust Edgar, R.C. 검색 및 BLAST보다 빠른 클러스터링 순서를 <td>사용하는 OTU(Open Taxonomic Unit).</td><td> 생물정보학. 26 (19), 2460-2461, doi:10.1093/bioinformatics/btq461 (2010).</td></tr><tr><td>단계 13.3.1.</td><td>Pynast</td><td>Pynast</td><td>Caporaso, J.G. et al. PyNAST: 시퀀스를 템플릿 정렬에 정렬하기 위한 유연한 도구. 생물정보학. 26 (2), 266-267, doi:10.1093/bioinformatics/btp636 (2010).&nbsp;</td></tr><tr><td>단계 13.3.1.</td><td>Pynast</td><td>Pynast_Greengenes</td><td>DeSantis, T.Z. et al. Greengenes, ARB와 호환되는 키메라 검사 16S rRNA 유전자 데이터베이스 및 워크벤치. Appl Environ 미생물. 72 (7), 5069-5072, doi:10.1128/AEM.03006-05 (2006). 본 연구에서는 Greengenes 버전 13_8</td></tr><tr><td>13.3.1이 사용되었다. 참고:&nbsp;</td><td>Qiime</td><td>다중 분할 라이브러리</td><td>http://qiime.org/scripts/multiple_split_libraries_fastq.html.</td></tr><tr><td>13.3.1. 참고:&nbsp;</td><td>Qiime</td><td>Pick de novo OTUs script</td><td>http://qiime.org/scripts/pick_de_novo_otus.html&nbsp;</td></tr><tr><td>단계 13.2.2.</td><td>Qiime</td><td>매핑 파일 http://qiime.org/documentation/file_formats.html 만듭니다</td><td>.</td></tr><tr><td>단계 13.2.2.</td><td>Qiime</td><td>매핑 파일의</td><td>유효성을 http://qiime.org/scripts/validate_mapping_file.html</td></tr>.<tr><td>단계 13.3.3.</td><td>Qiime</td><td>OTU를 매핑 파일 http://qiime.org/scripts/make_otu_network.html 에 대한 샘플 설명에 연결합니다</td><td>.</td></tr><tr><td>단계 13.3.4.</td><td>Qiime</td><td>플롯 http://qiime.org/scripts/summarize_taxa_through_plots.html 통해 분류군을 요약합니다</td><td>.</td></tr><tr><td>단계 13.3.5.</td><td>Qiime</td><td>Biome 요약 표</td><td>http://biom-format.org/documentation/summarizing_biom_tables.html&nbsp; 이 연구에서는 모든 샘플을 20,000 OTU로 희소화한 후 QIIME에서 알파 희박 스크립트를 사용하여 분석했습니다.</td></tr></tbody></table>

마우스 결 장 종양 모델에서 콜론 미생물 생물 다양성에 환경 농축의 효과 정의 하는 방법

A Method to Define the Effects of Environmental Enrichment on Colon Microbiome Biodiversity in a Mouse Colon Tumor Model

여러 최근 연구 인간의 질병 개선에 풍부한 환경에서 생활의 유익한 효과 설명 했습니다. 마우스에서 환경 농축 (EE) tumorigenesis 마우스 면역 시스템을 활성화 하는 것을 줄여 또는 종양 microenvironment에서 향상 된 미생물 다양성을 포함 하 여 상처 복구 응답을 자극 하 여 종양 베어링 동물 생존에 영향을 줍니다. 여기에 마우스 대 장 종양 모델에서 미생물의 생물 다양성에 환경 농축의 효과 평가 하기 위해 자세한 절차입니다 제공. 동물 사육 및 동물 유전자 형 및 마우스 식민지 통합을 위한 고려 사항에 관한 주의 사항 설명, 모두는 궁극적으로 미생물 생물 다양성에 영향을. 이러한 예방 조치를 주의 더 균일 한 미생물 전송, 수 하 고 따라서 연구 결과 혼동 수 비 처리 종속 효과 완화할 것 이다. 또한,이 절차에서는 microbiota 변경 다음 장기 환경 농축 원심 결에서 수집 하는 자에서 분리 된 DNA의 16S rDNA 시퀀싱을 사용 하 여 특징입니다. 본질적인 microbiota 불균형은 염증 성 장 질환과 결 장 암, 뿐만 아니라 비만 및 다른 사람의 사이에서 당뇨병의 병 인에 연관 된다. 중요 한 것은, 다양 한 인간 질병을 정리 할 수 있는 존재 하는 강력한 마우스 모델 질병에서 미생물 병 인의 역할을 연구 하기 EE 및 미생물 분석을 위한이 프로토콜을 활용할 수 있습니다.

여러 연구 결과 정신 신체 의학의 실천 건강 결과 개량 한다 설명 했다. 마찬가지로, 마우스, 환경 농축 향상 된 수명 등 종양 상처 복구6결과 향상 시킵니다. 따라서, 전자 절차는 첫 번째 실험 (그림 1)의 개시 전에 미생물을 정상화 하는 동안이 표현 형에 microbiota의 역할을 정의 하는 것을 목적으로 개발 되었다. 중요 한 것은, 모든 사육 동물의 번 식, 시작 전 적어도 한 달 동안 마우스 식민지에 통합 되어 있으며 신생아 강아지 공동 실험 전에 microbiota 전송 정상화를 하나의 큰 감 금 소에 어머니와 함께 지 내게. 동물 21, 28 일 사이, 각 유전자 형의 동등한 숫자는 투약를 중단 시킨 그들의 각각 주택, EE 또는 북동 환경 (그림 2A)으로. 16 주에 수집 ...

환경 농축 (EE) 생활, 스트레스, 질병 사이 연결의 기반이 되는 메커니즘을 공개 하는 데 사용 되는 동물 주택 환경입니다. 이 프로토콜에서는 콜론 tumorigenesis EE의 마우스 모델을 사용 하 여 특별히 microbiota 생물 다양성 동물 사망률에 영향을 줄 수 있는 변경을 정의 하는 프로시저를 설명 합니다.

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental ...

이 간행물의 주요 목표는 설치류의 마이크로바이옴을 정상화하는 방법을 제시하는 것입니다. 이 시연에서는 대장 종양 발생 중에 마이크로바이옴에 대한 환경 풍부화의 영향을 분석합니다. 이 프로토콜은 환경 농축 개입 전에 마이크로바이옴을 정규화하면 실험 재현성이 어떻게 향상되는지 보여줍니다.또한 풍부한 환경을 사용하여 동물의 스트레스를 줄이고 상호 작용을 개선하는 방법을 보여줍니다. 우리는 대장 종양 모델에서 환경 풍부화의 효과에 초점을 맞추었지만, 이 방법은 질병의 병인학에서 마이크로바이옴의 역할을 더 잘 이해하기 위해 쉽게 적용할 수 있습니다. 통풍이 잘되는 후드 아래에서 작동하는 멸균 상태에서 케이지를 설정하십시오.이 실험의 대조군은 둥지를 틀기 위한 침구와 실험실 조직이 있는 기존 케이지로 구성되지만, 그 외에는 농축 장치가 없습니다. 강아지 사육 또는 환경이 풍부한 케이지를 설정하려면 두 개의 대형 오토클레이브 케이지를 멸균 그로밋 보안 터널과 연결하고 각 케이지에 멸균 플랫폼을 포함하여 바닥 공간을 늘리십시오. EE의 경우 멸균된 주행 바퀴, 터널, 이글루, 오두막, 크롤 볼 및 중첩 재료도 제공합니다.농축 케이지와 제어 케이지를 모두 동일한 랙에 배치하여 동일한 환기를 제공합니다. 번식을 위해 일반 케이지에 1 개의 씨수말과 2 개의 잠재적 인 댐을 결합하십시오. 매일 아침, 동물이 밤에 짝짓기를 했다는 것을 나타내는 질 마개가 있는지 확인하십시오.플러그가 보이지 않으면 질 프로빙에 대한 저항이 내부화된 플러그를 감지할 수 있습니다. 암컷에게 질 마개가 있으면 큰 강아지 사육 케이지로 옮기십시오. 최대 12개의 임산부 댐을 환경이 풍부한 케이지에 수용할 수 있으며, 플랫폼이 모두 같은 주에 분만될 것으로 예상됩니다.새끼가 생후 21일에서 28일이 되면 유전자형별로 수컷과 암컷을 대조 환경 또는 풍부한 환경에 분배합니다. 각 케이지에서 각 유전자형의 비율을 유지해야 합니다. 비농축 케이지는 최대 5마리의 마우스를 지원할 수 있는 반면, 농축 케이지는 사회적 자극을 위해 최소 20마리의 마우스가 필요하며 최대 41마리의 마우스를 지원할 수 있습니다.쥐를 안락사시키기 하루나 이틀 전에 대변을 모으기 시작하십시오. 항상 같은 시간에 수집하십시오. 살아있는 동물의 대변을 채취하려면 깨끗한 케이지 위에서 동물을 조심스럽게 긁습니다.그런 다음 멸균 집게를 사용하여 배변된 대변을 수거하고 멸균 마이크로분리 튜브로 옮깁니

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

우리는 빠르게 친 염증성 에이전트 dextran 황산 나트륨 (DSS)의 세주기에 의해 다음과 일관되게 인간의 대장염에서 본 것과 morphologic와 분자 유사성과 마우스에 결장 종양을 생성 genotoxic 에이전트 azoxymethane (AOM)의 어느 관리의 프로토콜을 보여줍니다 암을 관련.

Azoxymethane (AOM)과 Dextran의 황산 나트륨 (DSS)와 모델링 대장염 - 관련 암

이 비디오는 결장 종양 보유 마우스의 대변 샘플에서 DNA 분리 프로토콜에 대해 설명합니다. 추출된 DNA는 PCR을 사용하여 증폭되고 생성물은 마그네틱 비드 기반 접근법을 사용하여 추가로 세척됩니다. 이 방법은 대장 미생물총(microbiota) 및 동물 폐사율에 대한 환경 풍부화의 영향을 결정하는 데 사용할 수 있습니다.

대변 미생물 DNA 분리: 쥐 종양 모델의 미생물 군집 다양성에 대한 환경 풍부화의 영향 연구

이 비디오에서는 마우스 근위 결장 루프 또는 pcLoop 세그먼트를 생성하는 수술 절차를 설명한 다음 장 상피 투과성을 연구하기 위해 세그먼트에 형광 마커를 내강 내 주입하는 방법을 설명합니다.

Mouse Proximal Colon loop Model의 생성: 내강내 주사 후 혈청 내 형광 마커를 검출하여 근위 결장 루프를 생성하고 장 투과성을 측정하는 수술 절차

이 비디오는 결장 염증이 있는 인터루킨-10 결핍 마우스의 대변 미생물군 이식 절차를 보여줍니다. 장내 집락화된 대변 미생물은 2차 대사 산물을 방출하여 항염증성 사이토카인 방출을 유도하고 대장 염증을 감소시킵니다.

인터루킨-10 결핍 마우스에서 분변 미생물군 이식의 효과 평가

우리는 단단한 내시경을 사용하여 마우스의 결장 병리학 치료를 위한 치료제의 효능을 종단적으로 모니터링하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 살아있는 마우스에서 개별 종양의 치료 반응을 특성화하고 잠재적인 질병 재발을 모니터링하는 데 쉽게 사용할 수 있습니다.

라이브 마우스의 직렬 내시경 이미징을 사용하여 소장 병변에 대한 새로운 치료제의 효능의 비 침습적 평가

생쥐의 환경 강화는 복잡하고 도전적인 설정뿐만 아니라 생쥐의 강력한 대사 및 항암 효과를 보장하기 위한 포괄적인 사육 및 취급 기술을 필요로 합니다. 이 프로토콜은 마우스에서 위에서 언급한 효과를 재현하기 위한 자세한 절차를 제공합니다.

풍부한 환경에서의 주택 마우스를위한 프로토콜

염증성 장 질환 (IBD)의 현재 치료는 질병의 증상을 완화 목표로하지만 심각한 부작용을 일으킬 수 있습니다. 따라서, 대안 전략은 동물 대장염 모델에서 연구되고있다. 여기서 우리는 임상 IBD 표지판에 다이어트 보조제의 유익한 효과는 이러한 대장염 모델에서 분석 방법에 대해 설명합니다.

실험 성 대장염 동안 장내 상피 장벽 기능에 영양 보조 식품의 유익한 효과 분석

여기에서는 대장염에 대한 Bacillus cereus 의 긍정적인 효과를 조절하는 장내 미생물총(microbiota)의 역할을 조사하기 위해 항생제 유도 pseudo-germ-free dextran sulfate 나트륨 유발 대장염 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

장내 미생물군 조절을 통한 대장염에 대한 Bacillus cereus 투여의 완화 효과 조사

우리는 3차원 결장류의 발달을 위한 쥐 결장 선와(miline colonic crypt)의 분리를 자세히 설명하는 프로토콜을 설명합니다. 확립된 콜로노이드는 염증성 챌린지를 받거나 상피 단층을 형성하도록 지시되기 전에 숙주 상피의 세포 구성을 반영하도록 최종적으로 분화될 수 있습니다.

확립된 쥐 콜로노이드에 대한 시험관 내 장 염증의 상피 효과 연구

이 프로토콜은 비염증 조건에서 pks+ 대장 균 쥐를 정착하는 데 필요한 절차와, 대변 내 pks+ 대장균 확장의 비침습적 확립 및 평가 방법을 설명합니다.

비염증 조건에서 마우스 pks+ 대장균에 의한 정착

배우세요 마우스 결장 종양 모델에서 환경 농축이 장 미생물 생물다양성에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 16S rDNA 시퀀싱을 통해 미생물 정규화와 풍부한 환경이 종양 보유 마우스의 미생물 다양성을 증가시키는 과정을 탐구합니다.

마우스 결 장 종양 모델에서 콜론 미생물 생물 다양성에 환경 농축의 효과 정의 하는 방법

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