Name: 쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: 학습하세요 쥐의 타액 생성 측정 방법으로 Pilocarpine 자극 후 정확하고 재현 가능한 데이터를 얻습니다. 이 기술은 측정 변이성을 줄여 Sjogren 증후군 및 타액선 재생 연구에 활용됩니다.

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연구는 국립 보건원, 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구 (DE025030)에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

아래에 설명 된 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 되었다 그리고 그것은 건강의 국가 학회에 의해 설립 하는 윤리적인 지침을 따릅니다. 이 보고서에 제공 된 모든 데이터는 10-12 주 나이의 여성 쥐를 사용 하 여 생성 되었습니다. 쥐의 다음 긴장 사용 했다: C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S, 및 (B6XA/J) F1. 모든 마우스 장에 장벽 (5 동물 케이지 당) 특정 병원 체 자유로운 조건에서 지 내게 되었고 먹이 물 ad libitum 제공.
1입니다. 준비
<ol><li>Pilocarpine 염의 재고 솔루션을 준비, 화합물의 10 밀리 그램의 무게 그리고 vortexing, 5.63 mg/mL의 재고 솔루션을 제공 하 여 살 균 isotonic 식 염 수의 1.776 mL에 녹이 지. 이 솔루션을 소독 아무 필요도 없다. 하지만 원하는 경우 0.2 µ M 필터를 통해 필터링. 최대 3 개월까지-80 oC 냉장고에 여러 aliquots에서이 재고 솔루션을 저장 합니다. 각 냉동된 주식은 단일 사용 됩니다. 일단 해 동, pilocarpine 솔루션을 refreeze 하지 마십시오.</li>
	<li>0.6 mL microfuge 관을 신중 하 게 온수 18 게이지 바늘으로 각 튜브의 하단에 작은 구멍을 펀치. 이러한 튜브 2 mL 튜브로 설정 합니다. 튜브 살 균 될 필요가 없습니다.</li>
	<li>샤 프, 메 마른 면도칼 블레이드를 사용 하 여 조각 길이 약 2 ㎝ 원통형 흡수 성 면봉 잘라. 2 원뿔 모양의 면봉에 게 대각선 각 2 cm 조각 잘라. 각 0.6 mL microfuge 관 한 면봉을 배치 합니다.</li>
	<li>무게 0.6 mL microfuge 관 마른 면봉을 포함 하는.</li>
	<li>전송으로 새로운 깨끗 한 물 병 공부 하 쥐. 수집 타 액 오염에서 음식 입자를 방지 하기 위해 타 액 컬렉션의 시작 이전에 적어도 2 시간에 대 한 음식 없이 마우스를 유지. 참고: 그것은이 절차에 대 한 감 금 소 당 1 마우스를 유지 하는 데 필요한 아니다. 그러나, 각 장에 배치 하는 쥐의 수는 특정 기관의 규칙 및 동물 사용에 대 한 규정에 따라 다릅니다.</li>
	<li>2 h의 끝의 바로 전에 멸 균 식 염 수에 재고 솔루션 100 배 희석 하 여 작업 pilocarpine 솔루션 (0.0563 mg/mL)을 준비 합니다. 추가 필터를 필요는 없습니다이 솔루션을 소독. 항상 작업 pilocarpine 솔루션 얼음에 보관 합니다. 주: 표 1 pilocarpine 마우스 몸 무게 줄 마지막 복용량 0.375 mg/kg의 체중의 범위에 대 한 주입을 금액을 제공 합니다.</li>
</ol>2입니다. 절차
<ol><li>각 마우스 무게 고 각 마우스를 사용 하 여 표 1에 대 한 마 취 혼합의 복용량을 결정 합니다. 복 경로 의해 마 취 혼합의 적절 한 볼륨으로 최초의 마우스를 주사. (대부분 마우스 긴장이이 프로토콜에서 테스트로 이동 자 2 분) 2 분 타이머를 설정 합니다. 마우스가 제대로 걷는 때 평평한 표면에 배치의 부족에 의해 마 취를 확인 합니다. 마우스는 여전히 걷고, 다음 단계로 진행 하기 전에 추가 2 분 동안 기다립니다. 건조를 방지 하기 위해 두 눈을 윤 활 유 안과 연 고의 한 방울을 적용 합니다. 참고: 테이블 1의 마 취 혼합의 복용량은 0.007 mL/g 몸 무게. 이 절차에 대 한 최적의 범위 0.006 0.008 mL/g 몸 무게는. 그러나, 4 분, 마우스는 여전히 산책을 하거나 육 포의 움직임을 전시 하는 경우 적절 하 게 증가 하는 마 취의 복용량에 대 한 제도적 수 의사와 상담 후.</li>
	<li>표 1 을 사용 하 여 마우스에 대 한 pilocarpine의 복용량을 결정 하 고 복 경로 의해 적절 한 금액을 투입. 2 분 타이머를 설정 하 고 머리와 귀 스틱 컷된 쪽으로 때까지 50 mL restrainer 튜브에 마우스를 삽입 합니다. 장소, 머리는 45도 각도로 튜브 및 위 복 부 표면. 이동에서 계속 절차 보드 튜브 테이프. 주: 표 1 제공 합니다 복용량을 17 g 보다는 마우스에 대 한이 절차가 쥐 17 g 아래의 무게에 시도 하지 않은.</li>
	<li>2 분의 끝에, 부드럽게 입으로 집게를 해 부 마이크로의 닫힌된 쌍을 삽입 하 고 입 열을 위쪽으로 아래 턱을 들어. 입, 혀는 집게의 최고 팔에 볼 다는 것을 확인에 집게를 1-2 m m 더를 밀어. 또 한 쌍의 좋은 집게, 원뿔 끝 가까이 미리 무게 마른 면봉 붙.</li>
	<li>부드럽게 입으로는 면봉의 원뿔 끝을 밀어. 구강에는 면봉의 끝 동안에 집게를 철회 한다.</li>
	<li>입 밖으로 확장 하는 면봉의 넓은 끝을 잡고 그것을 회전 입과의 접촉의 최대 영역을 허용 하도록. 15 분 동안이 자리에는 면봉을 유지. 참고: 이렇게 하면 면봉 컬렉션 동안 입안에 남아 있습니다. 면봉의 원뿔 끝 역할 심지와 면봉의 넓은 부분을 참고 입 밖으로 남아 있습니다.</li>
	<li>15 분의 끝에, 부드럽게 흡수 되지 어떤 타 액을 수집에 면봉을 회전 하 고 0.6 mL microfuge 관에서 젖은 면봉을 배치. 튜브를 닫고 얼음에 2 mL 튜브에 그것을 설정 합니다. 참고:이 시점에서 구강 점 막이 나타납니다 완전히 건조. 마우스 이제 이동할 수 있습니다 다시 그것의 감 금으로 마 취에서 회복을 위한.</li>
	<li>장에 마우스를 전송 합니다. 빠른 재 수 있도록 타 액 수집 후 장에 moistened 음식 펠 릿을 놓습니다. 참고: 쥐를 컬렉션의 끝 후 10 분 이내를 시작. 0.2 mL 미리 따뜻하게 isotonic 식 염 수의 피하 주사도 회복을 가속 화 하기 위해 주어진 수 있습니다.</li>
	<li>다음 마우스를 이동 합니다. 모든 그들은 완전히 복구 될 때까지 모니터링 해야 하는 쥐와는 보 행.</li>
</ol>3입니다. 측정
<ol><li>모든 컬렉션의 끝에, 젖은 면봉 0.6 mL 튜브 무게. 젖은 무게와 타 액 생산의 무게를 건조 무게의 차이 계산 합니다. 2 mL 튜브에 다시 타 액 0.6 mL 튜브를 놓습니다.</li>
	<li>2 ml 튜브의 뚜껑을 잘라. 그런 다음 복구는 타 액을 마이크로 원심 분리기에 4oC에서 7500 x g에서 2 분 동안 2 mL 튜브 원심. micropipette를 사용 하 여 얻은 타 액의 양을 측정 합니다.</li>
	<li>타 액 무게 (mg)10 15 분 이상 또는 타 액 무게 (mg)의 비율으로 결과 표현/몸 무게 (g) 마우스. 참고: 면봉에서 추출 하는 타 액의 양을 측정 하는 경우 타 액 복구 (mL)의 볼륨 또는 타 액의 양 (mL)의 비율으로 결과 표현 / 몸 무게 (g) 마우스.</li>
</ol>

<ol><li>Proctor, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiology+of+salivary+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol+2000%22%5BJournal%5D)">The physiology of salivary secretion.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).</li>
<li>Fox, R. I. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16039337">Sjögren's syndrome.</a> Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).</li>
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</ol>

저자는 공개 관심의 없습니다 충돌 있다.

타 액 생산은 복잡 한 프로세스 이며 많은 요인에 의해 영향을 받습니다. 따라서, 실험실 동물에 침 샘 기능을 측정 하는 것은 도전 될 수 있습니다. 추가 도전 침 샘 기능 같은 동물에서의 반복된 측정은 질병의 발병을 설정 하거나 복구 치료 다음과 설명 필요입니다.
이 보고서에 설명 된 면봉 메서드는 데이터를 표현 하기 위해 여러 옵션을 수행할 수 기술적으로 간단 하다. 얻은 결과 작은 간 연산자 변이로 재현할 수 있습니다. 메서드는 침 샘 기능 장애의 다른 모델에 타 액 생산에 감소를 검색할 수 있습니다. 중요 한 이점은 이다 불활성, 높은 흡수 성 고분자의 사용 및 수 침 생체 측정 수집, 타 액의 효율적인 복구. 이 방법의 또 다른 장점은 하나의 연산자에 의해 한 번에 최대 2 마우스에서 동시에이 절차를 수행 하는 것. 이 한 번에 하나의 마우스에서 수행 됩니다 일부 다른 방법 보다 훨씬 더 효율적입니다.
타 액 생산 측정의...

침 샘 침 다양 한 신경 및 기계적 자극1에 대 한 응답을 생성합니다. 자극에 선 아드레날린 및 해 수용 체 교감 및 부 교감 신경 신경 시스템을 통해 수행 됩니다. Pilocarpine muscarinic 수용 체에 우위 하 게 작동 해, 파라 sympathomimetic 에이전트입니다. 침 샘에 그것은1M3 muscarinic 아 세 틸 콜린 수용 체에 행동에 의해 타 액의 생산을 유도합니다. Pilocarpine 관리에 따라 타 액 생산 자극에 응답 하는 침 샘의 능력의 지표 이며 침 샘 기능의 측정으로 상용 된다.
타 액 생산의 정확한 측정은 Sjögren의 증후군2 등 방사선 상해 다음 머리와 목 암 치료3침 샘 질환의 연구에 중요 합니다. 여러 가지 다른 방법은 설치류에 타 액 생산을 측정 하기 위해 개발 되었습니다. 4배설 침 덕트, 진공5, 아래 구강에서 타 액의 수집 그리고 유리 모 세관6 또는 micropipette7,8, 를 사용 하 여 컬렉션의 직접적인 cannulation 포함 됩니다. 9. 직접 cannulation 침 덕트의 가장 정확 하 고 순수한 타 액을 제공 합니다. 그러나, 이것은 기술적으로 도전적인 절차, 그리고 ductal 상해를 일으키는 원인이 되기를 위한 잠재력 같은 동물에서 반복적인 침 컬렉션 걸로 하겠습니다. 진공에서 타 액을 수집 튜브에서 타 액의 건조 변수 결과 발생할 수 있습니다. 이 감소는 감소 된 타 액 분 비와 쥐에 더 과장 된다. 그러나 유리 모 세관 후속 분석을 위해 타 액의 컬렉션, 병에 걸린 상태에서 분 비 하는 타 액의 점도 변화는 모 세관의 효율적인 충전을 방지 하는. 또한, 잔여 타 액을 수집 구강 청소 하려고 부상으로 이어질 수 있습니다. 피펫으로 메서드는, 완전 한 컬렉션에 대 한 수 있습니다 하 고 같은 연산자에 대 한 그것은 눈에 띄게 실험 사이. 그러나, 알 수 없는 이유로이 방법은 다른 연산자 사이의 중요 한 변화를 보여줍니다. 따라서, 적절 한 비교를 허용 하려면 동일한 연산자는 특정 프로젝트와 관련 된 모든 실험을 수행 필수적 된다. 명확 하 게,이 실험실을 위한 중요 한 불리를 나타냅니다.
이러한 문제를 해결 하려면 프로시저 결합 타 액 수집 방법 인간과 설치류에 대 한 사용 개발 되었다. Pilocarpine 유도 침 볼륨 측정에 대 한 아래 설명 하는 면봉 방법을 간단 하 고, 재현성, 연산자에 의해 영향을 받지 이며 같은 동물에 반복적으로 수행할 수 있습니다. 또한, 단백질, 면역 글로불린, 또는 다른 생체의 후속 분석을 위해 타 액을 수집 하는 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Chemicals for Saliva Collection</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pilocarpine hydrochloride</td><td>Alfa Aesar, Tewksbury, MA, USA</td><td>B21410</td><td>멸균 등장성 식염수에 희석합니다. 100X 재고의 일회용 부분 표본을 -80oC</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</strong</td><td>>카탈로그 번호</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Anesthesia Mix solution</td><td></td><td></td><td>Mix 1 mL 케타민 염산염 + 0.5 mL 자일라진 + 8.5 mL 멸균 등장 식염수를 멸균 바이알에 혼합합니다. 3 개월 동안 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Zetamine (Ketamine hydrochloride)</td><td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td><td>C3N VT1</td><td>재고는 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Anased (Xylazine)</td><td>Med-Vet International, Mettawa, IL, USA</td><td>RXANASED-20</td><td>재고는 20 mg/mL</td></tr><tr><td>Isotonic sterile Saline</td><td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td><td>501032</td><td>희석제로 사용</td></tr><tr><td>인공 눈물(윤활제 안과 연고)</td><td>Henry Schien, Dublin, OH, USA</td><td>48272</td><td>시술 중 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 사용</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트</strong</td></tr><tr><td>>타액 채취용 재료</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>SalivaBio 어린이용 면봉</td><td>Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, 미국</td><td>N/A</td><td>개별 포장된 면봉</td></tr><tr><td>50mL 폴리프로필렌 튜브</td><td>VWR, Radnor, PA, USA</td><td>89004-364</td><td>튜브의 바닥을 1cm 잘라냅니다. 절단면이 매끄러운지 확인하십시오.</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브 0.6 mL</td><td>VWR, Radnor, PA, USA</td><td>87003-290</td><td>가열된 18 게이지 바늘로 튜브 바닥에 구멍 만들기</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브 2 mL</td><td>VWR, Radnor, PA, USA</td><td>87003-298</td><td></td></tr><tr><td>영구적으로 부착된 바늘이 있는 인슐린 주사기</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>18 게이지 일반 베벨 바늘</td><td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>멸균 메스 블레이드 #11</td><td>Integra York Inc PA, USA</td><td>4-311</td><td></td></tr><tr><td>미세해부 겸</td>자 <td>Roboz, Gaithersburg, MD, USA</td><td>RS-5139</td><td>톱니 모양의 각도 0.8mm 팁, 4" 길이</td></tr><tr><td>라벨 테이프</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA</td><td>sc-224487</td><td></td></tr><tr><td>3채널 타이머</td><td>Amazon.com, 미국 워싱턴주 시애틀</td><td>B06W2KCYVN</td><td></td></tr><tr><td>분석 저울</td><td>Mettler Toledo, Columbus OH, USA</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>strong>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Chemicals/ reagents for inducing salivary dysfunction</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Invivogen, San Deigo, CA, USA</td><td>tlrl-b5lps</td><td>내독소가 없는 물에 용해시키고 스톡 용액을 5mg/mL로 저장합니다. 멸균 HBSS 100 ug/mL로 희석 - 100 uL/ moue ip</td></tr><tr><td>Imject Alum adjuvant</td><td>Thermo Scientific</td><td>77161</td><td>주입 멸균 식염수에 1:1로 희석합니다. 복강내 0.1mL 주입</td></tr> 마우스 <tr><td>Rabbit anti-Ro52 antiserum</td><td>실험실</td><td></td>에서 <td>생성 재조합 마우스 Ro52</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</strong</td><td>>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Chemicals/ 타액 분석용 키트</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Salivary lysozyme estimation</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EnzChek Lysozyme Assay Kit</td><td>Molecular Probes, Eugene, OR, USA</td><td>E-22013</td><td>제조사의 지시에 따라 사용됨</td></tr><tr><td>Name</strong</td><td>>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments </td></tr><tr><td>샌드위치 ELISA에 의한 Salivary IgA 추정 ELISA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgA</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td><td>0106-01</td><td>샌드위치 ELISA에 대한 표준 - 범위 30 ng/mL - 0.5 ng/mL</td></tr><tr><td>염소 항-마우스 IgA unlabeled</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td><td>1040-01</td><td>중탄산염 완충액에서 1 ug/mL의 코팅</td></tr><tr><td>염소 항-마우스 IgA HRP</td><td>Southern Biotech, Birmingham, AL, USA</td><td>1040-05</td><td>1:4000 희석</td></tr><tr><td>TMB 기질</td>에서 사용되는 검출 항체 <td>Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA</td><td>555214</td><td>제조업체의 지침에 따라 사용</td></tr><tr><td>Immulon 4HBX Microtiter 96 well plates</td><td>Thermo Scientific, Rochester, NY, USA</td><td>3855</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트</td></tr><tr><td>타액 단백질 추정</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad 단백질 분석 염료 시약 농축</td>액 <td>BioRad, Hercules, CA, USA</td><td>5000006</td><td>제조업체의 지침에 따른 단백질 추정</td></tr></tbody></table>

쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Sjögren의 증후군, 전 분 비에 영향을 미치는 면역 질환 환자는 침 샘 염증을 개발 하 고 타 액 생산을 감소 했습니다. 마찬가지로 타 액 생산 머리와 목 암에 대 한 방사선 치료를 받은 환자에서 심각 하 게 손상 됩니다. 설치류 모델, 이러한 임상 조건 모방 개발 질병 pathogenesis의 이해를 촉진 하 고 새로운 치료 전략의 개발에 대 한 허용. 따라서, 정확 하 게, reproducibly, 그리고 반복적으로 동물 모델에서 침 샘 기능을 측정 하는 능력은 중요 합니다. 문학에서 설명한 이전 절차에 건물, 메서드는 이러한 기준을 충족 하 고 쥐에 있는 침 샘 기능을 평가 하는 데 사용 했다 개발 되었다. 이 새로운 방법의 추가적인 이점은 그것 쉽게 마스터 하 고는 작은 간 연산자 변화입니다. 침 샘 기능 (무게 또는 양) 또는 pilocarpine 자극에 대 한 응답에서 생산 하는 타 액의 속도 (mL/min)로 평가 됩니다. 수집 된 타 액 단백질 콘텐츠, 면역 글로불린 농도, 및 다른 생체 분석에 대 한 좋은 소스입니다.

실험 마우스 모델 시스템에서 응답 pilocarpine 자극으로 타 액을 생산 하는 능력은 침 샘 기능의 지표로 서 사용 됩니다. 타 액 생산 면봉 메서드에서 11 주 된 C57BL/6 여성 쥐에서 측정 했다. 그림 1A, 결과 타 액 (mg) 수집된 pilocarpine의 증가 복용량을 다음의 금액으로 표시 됩니다. 체중 1 mg/kg의 복용량에 쥐의 일부 (무의식적인 떨고 고 떨고) 조 난 전시 시작 했다. 따라서 더 높은 복용량의 1 밀리 그램/kg 체중 넘어 pilocarpine 하지이 연구에서 테스트 되었습니다. 그림 1B, 결과 마우스 몸 무게 (g)을 타 액 무게 (mg)의 비로 표시 됩니다. 샨 다, 이러한 데이터 좋은 복용량 응답 관계를 pilocarpine 양과 타 액 생산을 보여줍니다. 면봉에서 회복 하는 타 액의 양을 측정 했다. <strong...

침 샘 hypofunction는 자가 면역 질환과 방사선 치료의 빈번한 결과 이다. 이러한 질병 마우스 모델에서 침 샘 기능의 재현 평가 기술 도전 이다. 여기, 쥐에 타 액 생산의 정확 하 고 재현 가능한 측정을 위한 간단한 방법을 설명 합니다.

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

이 절차의 전반적인 목표는 필로카르핀 자극 후 생쥐의 타액을 정확하고 재현성 있게 수집하고 측정하는 것입니다. 설치류의 타액 생성을 측정하는 것은 까다로운 절차이며 변동성이 높은 경향이 있습니다. 이 방법은 간단하며 전체 연구의 여러 시점에서 동일한 동물에 대해 반복할 수 있습니다.이 방법은 생성된 타액의 양을 측정할 수 있을 뿐만 아니라 타액에서 분비될 수 있는 생체 활성 분자를 추가로 분석하기 위해 타액을 수집하는 데에도 사용할 수 있습니다. 궁극적으로 이것은 설치류 모델 시스템에서 쇼그렌 증후군, 타액선 섬유증 또는 타액선 재생을 조사할 때 큰 도움이 될 것입니다. 이 절차를 위해 Pilocarpine hydrochloride 분취액을 준비하고 3개월 이내에 냉동해야 합니다.해동된 부분 표본을 다시 얼리지 마십시오. 0.6mL 마이크로분리 튜브를 준비하는 것으로 시작합니다. 가열된 18게이지 바늘로 튜브 바닥에 작은 구멍을 조심스럽게 뚫습니다.마우스당 하나의 튜브를 만듭니다. 그런 다음 이 튜브를 2mL 튜브로 설정합니다. 불임은 문제가 되지 않습니다.다음으로, 무균 방법을 사용하여 원통형 흡수성 면봉을 2cm 길이로 자릅니다. 그런 다음 각 2cm 조각을 대각선으로 잘라 두 개의 원뿔 모양의 면봉을 만듭니다. 준비된 각 마이크로퓨지 튜브에 원뿔형 면봉 하나를 놓습니다.그런 다음 마른 면봉으로 각 0.6mL 튜브의 무게를 잰다. 이제 연구를 위해 마우스를 새로운 깨끗한 케이지로 옮깁니다. 그들은 함께 수용 될 수 있습니다.다음 두 시간 동안은 얼음물을 주되 음식은 주지 마십시오. 2시간의 기간이 끝나기 직전에 멸균 식염수에 함유된 100x 스톡의 부분 표본을 1x로 희석하여 작업 중인 Pilocarpine 용액을 준비합니다. 튜브를 소용돌이치고 용액을 얼음 위에 보관하십시오.시작하려면 각 마우스의 무게를 측정하여 복용량을 계산하십시오. 그런 다음 케타민과 자일라진을 복강내 주사로 마우스에 마취시킵니다. 4 분 후에 쥐가 마취되지 않으면 복용량을 조정하십시오.이제 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 지중해 연고를 바르십시오. 다음으로, 복강내 경로를 사용하여 계산된 용량의 필로카르핀을 마우스에 전달하고 타이머를 2분으로 설정합니다. 이 2분 간격 동안 머리와 귀만 튀어나오도록 50mL 억제 튜브에 마우스를 삽입합니다.튜브를 45도 각도로 배치하고 마우스의 머리는 아래를 향하고 복부 표면은 위를 향하도록 합니다.

a-method-for-the-measurement-of-salivary-gland-function-in-mice

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

쥐 호흡 생리학과기도 염증 세포의 샘플링의 반복 측정이 바람직하지만, 일반적으로 가능하지 않습니다. 여기 구두기도 염증 세포의기도 기능 항 진성과 샘플링의 반복 측정을 허용 쥐를 intubating에 대한 반복 방법을 설명합니다.

에어웨이 저항 측정 및 마우스에 Bronchoalveolar 세척 유체 샘플링에 대한 가역, 비침습 방법

마우스 침샘에서 줄기 세포의 격리를 위해 최적화된 프로토콜이 설명되어 있습니다. 방법은 효소와 소화 기계를 고용하고, 줄기 세포의 특징과 세포를 포함하는 salispheres의 절연을 수 있습니다.

마우스 침샘에 줄기 세포의 분리

이 방법은 생쥐에서 유선 개발 및 기능을 해부하다하고 평가하는 방법에 대해 설명합니다. 우유 방출은 옥시토신 기반 myoepithelial 세포 수축 분석을 사용하여 평가하는 동안 Excised 내유 분비가 전체 마운트를 사용하여 개발의 정도에 대한 평가입니다.

마우스 모델에서 유선 개발 및 기능 평가

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 cannulation을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 본 실험은 trypan 푸른 솔루션은이 기법을 효과적으로 타겟 선에 혼합을 제공하는 방법을 보여줍니다하고, 침샘의 재생을위한 잠재적인 약물 임상 / 세포 치료 등이 새로운 접근 방법의 신뢰성을 제안하는 다이로 사용됩니다.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

의 intravital 현미경은 살아있는 동물의 다양한 생물학적 과정을 영상화 할 수있는 강력한 도구입니다. 이 문서에서는, 우리는 살아있는 생쥐의 침샘에서 이러한 분비 과립으로 세포 내 구조의 역학 이미징을위한 자세한 방법을 제시한다.

형광 단백질을 표현 라이브 마우스의 이미징 세포 이하의 구조물의 intravital 현미경

우리는 수술 노출 하 고 안정화 murine submandibular 침 샘 intravital 이미징 똑바로 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 머리와 목 지역 쥐 및 다른 작은 설치류의 다른 전 동맥에 쉽게 적응 합니다.

똑바로 Intravital 현미경 Murine Submandibular 침 샘의 준비

선물이 murine tracheostomy 등 3 개의 주요 침 샘의 침 컬렉션을 수행 하는 자세한 접근.

Pilocarpine 자극 다음 통해 murine 침 기능 평가 분류 한 방사선

본 프로토콜에서, 턱밑샘(SMG)의 내피 장벽 기능은 이광자 레이저 스캐닝 현미경 하에 생체 내에서 시험 동물 모델의 각 정맥에 상이한 분자 가중 형광 추적자를 주입함으로써 평가되었다.

생체 내 마우스 턱밑샘의 혈관 투과성 검출

면역형광 이미징은 복잡하고 시간에 따라 달라지는 생물학적 과정을 단 한 번의 스냅샷으로 관찰할 수 있는 능력에 제약을 받습니다. 이 연구는 정밀하게 절단된 쥐의 턱밑샘 절편에 대해 수행된 실시간 이미징 접근 방식을 간략하게 설명합니다. 이 접근법을 통해 항상성 중 세포-세포 상호 작용과 재생 및 복구 과정을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

Ex vivo Live Cell Imaging을 통한 타액선의 세포 간 상호 작용 조사

여기에서는 연구 동물이 최소한의 스트레스와 불편함으로 치료제를 쉽게 섭취하도록 장려하는 구강 배당의 대체 방법으로 마이크로피펫 유도 약물 투여(MDA)를 설명합니다.

설치류 모델에서 구강 배게이지에 대한 대체 방법으로 마이크로피펫 유도 약물 투여 사용

여기에서는 비침습적 및 실시간 전신 혈량측정(WBP) 시스템을 사용한 기침 측정과 생쥐의 조직 샘플을 채취하는 규범적 절차를 설명하고 기도 염증을 평가하는 몇 가지 방법을 소개합니다.

마우스에서 기침 및 기도 염증을 감지하는 방법

학습하세요 쥐의 타액 생성 측정 방법으로 Pilocarpine 자극 후 정확하고 재현 가능한 데이터를 얻습니다. 이 기술은 측정 변이성을 줄여 Sjogren 증후군 및 타액선 재생 연구에 활용됩니다.

쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법

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