쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법

이 절차의 전반적인 목표는 필로카르핀 자극 후 생쥐의 타액을 정확하고 재현성 있게 수집하고 측정하는 것입니다. 설치류의 타액 생성을 측정하는 것은 까다로운 절차이며 변동성이 높은 경향이 있습니다. 이 방법은 간단하며 전체 연구의 여러 시점에서 동일한 동물에 대해 반복할 수 있습니다.

이 방법은 생성된 타액의 양을 측정할 수 있을 뿐만 아니라 타액에서 분비될 수 있는 생체 활성 분자를 추가로 분석하기 위해 타액을 수집하는 데에도 사용할 수 있습니다. 궁극적으로 이것은 설치류 모델 시스템에서 쇼그렌 증후군, 타액선 섬유증 또는 타액선 재생을 조사할 때 큰 도움이 될 것입니다. 이 절차를 위해 Pilocarpine hydrochloride 분취액을 준비하고 3개월 이내에 냉동해야 합니다.

해동된 부분 표본을 다시 얼리지 마십시오. 0.6mL 마이크로분리 튜브를 준비하는 것으로 시작합니다. 가열된 18게이지 바늘로 튜브 바닥에 작은 구멍을 조심스럽게 뚫습니다.

마우스당 하나의 튜브를 만듭니다. 그런 다음 이 튜브를 2mL 튜브로 설정합니다. 불임은 문제가 되지 않습니다.

다음으로, 무균 방법을 사용하여 원통형 흡수성 면봉을 2cm 길이로 자릅니다. 그런 다음 각 2cm 조각을 대각선으로 잘라 두 개의 원뿔 모양의 면봉을 만듭니다. 준비된 각 마이크로퓨지 튜브에 원뿔형 면봉 하나를 놓습니다.

그런 다음 마른 면봉으로 각 0.6mL 튜브의 무게를 잰다. 이제 연구를 위해 마우스를 새로운 깨끗한 케이지로 옮깁니다. 그들은 함께 수용 될 수 있습니다.

다음 두 시간 동안은 얼음물을 주되 음식은 주지 마십시오. 2시간의 기간이 끝나기 직전에 멸균 식염수에 함유된 100x 스톡의 부분 표본을 1x로 희석하여 작업 중인 Pilocarpine 용액을 준비합니다. 튜브를 소용돌이치고 용액을 얼음 위에 보관하십시오.

시작하려면 각 마우스의 무게를 측정하여 복용량을 계산하십시오. 그런 다음 케타민과 자일라진을 복강내 주사로 마우스에 마취시킵니다. 4 분 후에 쥐가 마취되지 않으면 복용량을 조정하십시오.

이제 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 지중해 연고를 바르십시오. 다음으로, 복강내 경로를 사용하여 계산된 용량의 필로카르핀을 마우스에 전달하고 타이머를 2분으로 설정합니다. 이 2분 간격 동안 머리와 귀만 튀어나오도록 50mL 억제 튜브에 마우스를 삽입합니다.

튜브를 45도 각도로 배치하고 마우스의 머리는 아래를 향하고 복부 표면은 위를 향하도록 합니다. 그런 다음 테이프로 튜브를 고정합니다. 2분 직후 아래턱을 들어 올려 입을 벌리고 닫힌 해부 겸자를 1-2mm 입 안으로 부드럽게 삽입합니다.

혀가 집게의 위쪽 팔에 놓여 있는지 확인합니다. 다른 손으로는 한 쌍의 가는 집게를 사용하여 미리 계량된 마른 면봉을 원뿔형 끝 부분에 가깝게 잡습니다. 그런 다음 면봉의 원뿔 모양 끝을 입으로 부드럽게 밀어 넣고 면봉 끝을 구강에 남겨두고 집게를 빼냅니다.

이제 면봉이 입에 최대한 닿을 때까지 면봉을 잡고 회전시켜 떨어지지 않도록 합니다. 면봉의 넓은 끝은 입 밖에 있어야 합니다. 면봉을 이 위치에 15분 동안 유지합니다.

15분 후 면봉을 부드럽게 돌려 흡수되지 않은 타액을 모읍니다. 그런 다음 타액에 적신 면봉을 0.6mL 마이크로분리 튜브에 옮깁니다. 튜브의 뚜껑을 닫고 얼음 위에 놓인 2mL 튜브에 넣습니다.

이제 마우스를 복구 케이지로 다시 옮깁니다. 다이어트 젤이나 축축한 음식 알갱이를 케이지에 제공하여 수분을 보충하는 데 도움이 됩니다. 회복을 가속화하기 위해 0.2mL의 등장성 식염수를 피하 주사할 수도 있습니다.

모든 타액 샘플을 수집한 후 무게를 측정하여 수집된 타액의 질량을 결정합니다. 더 작은 타액 샘플 튜브가 들어 있는 2mL 튜브에서 캡을 잘라낸 다음 냉장 원심분리기에 넣고 7, 500g, 섭씨 4도에서 2분 동안 회전시킵니다. 타액은 2mL 튜브에 고입니다.

그런 다음 마이크로피펫을 사용하여 샘플의 부피를 측정합니다. 타액 생산은 기술된 방법을 사용하여 11주 된 C57 블랙 6마리의 암컷 마우스에서 측정되었습니다. 체중 1g당 1마이크로그램의 필로카르핀을 투여했을 때, 일부 쥐는 고통의 징후를 보이기 시작했습니다.

필로카르핀과 타액 생산 사이에는 양호한 용량 반응 관계가 있었다. 또한 타액의 무게와 부피 사이에는 상당한 일치가 있었습니다. 설명된 기술을 사용하여 타액의 변형 대 변형 차이가 발견되었습니다.

129 S6 균주의 마우스는 가장 적은 양의 타액을 생성했습니다. 타액선 기능 저하를 감지하기 위한 실험에서 선천성 면역 반응을 활성화하기 위해 지질다당류를 주입했습니다. 반응하는 동안 쥐는 더 적은 타액을 생성했습니다.

타액선 기능 저하를 유도하는 또 다른 방법은 생쥐에게 보조제 명반과 항-Ro52 항체를 주입하는 것이었습니다. 차량 제어는 Alum으로만 처리되었습니다. 이것은 또한 설명된 기술로도 감지할 수 있었습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 마우스의 타액 생성을 정확하고 재현성 있게 측정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 일단 숙달되면 약 2시간 30분 안에 10마리의 쥐를 평가할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 복강 내 주사부터 면봉 배치, 각 단계의 시간 간격 관리에 이르기까지 모든 단계에서 매우 일관성을 유지하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

필로카르핀 염산염은 심혈관계에 작용하여 서맥과 저혈압을 유발한다는 사실을 잊지 말자. 따라서 생쥐에 필로카르핀을 주입하는 것은 주의해서 수행해야 합니다.