Name: 쥐 모델에 부분 Colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: 학습하세요 쥐 모델에서 지방 조직 유래 줄기 세포 시트를 이용한 결장 직장 문합부 이식술로 수술 후 누설을 효과적으로 감소시키는 방법. 이 기술은 합성 재료 없이 조직 치유를 촉진하여 대장 직장 수술의 새로운 치료 전략을 제시합니다.

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저자는 교수 박사 S.E.R. Hovius, 박사 M.A.M. Mureau 및 모든 외과 피하 지방이 많은 직물의 컬렉션에 대 한 성형 수술의 부의 감사. P. Sukho 연구의 행위 동안에 네덜란드 친목 프로그램 (NFP-12/435)에서 교부 금에 의해 지원 됩니다. 사원 Bastiaansen Jenniskens 네덜란드 관절염 재단 (LP11)에서 교부 금에 의해 지원 됩니다.

복 부 피하 지방 조직 승인 의료 윤리 위원회 (#MEC-2014-092), 에라스무스 엠씨 대학 의료 센터, 로테르 담, 네덜란드의 인간 기증자 로부터 얻은 것입니다. 모든 동물 실험 윤리 위원회의 동물 실험, 에라스무스 엠씨 대학 의료 센터, 로테르 담, 네덜란드 (133-14-01)에 의해 승인 되었다.
1. 인간의 ASCs 격리와 문화
<ol><li>1g의 지방 조직에 대 한 절연 매체의 3 mL를 준비 합니다. 혼합 낮은 포도 당 Dulbecco의 수정이 글의 중간 (LG-DMEM) 10 g/L 소 혈 청 알 부 민 (BSA)와 콜라 1 g/L 입력 1.</li>
	<li>인간의 피하 복 부 지방 조직 해 부 (n = 8, 모든 여성, 평균 나이 40 ± 9 살) 살 균 생물 SafetyCabinet의 메 마른 외과 블레이드 크기 10, Adson 브라운 조직 집게와 Metzenbaum가 위를 사용 하 여 작은 조각 (0.5 cm).</li>
	<li>메 마른 유리 미디어 저장 병에 해 부 조직을 저장 합니다. 해 부 조직 총 양의 무게 고 준비 절연 매체 병 당 절연 매체의 150 mL와 함께 지방 조직 (50 g)와 소화를 시작 합니다. 프로토콜 롤러 믹서에 하룻밤 해 부 지방 조직 및 4 ° C에서 절연 매체 병을 저장 하 여 여기 일시 중지 될 수 있습니다. 그런 다음 다음 단계를 계속 하기 전에 15 분 동안 실내 온도 25 ° C에 다음 날 병 prewarm. 참고: 복 부 피하 지방 조직 기증자 승인 에라스무스 MC 의료 윤리 위원회 (# 멕-200)의 규범에 따라 유 방 재건 수술에서 남은 자료로 얻어 졌다: "적절 한 보조 사용 인간의 조직"의 (< http://www.federa.org>). 남은 지방 조직만 기증자 않았다 하지 탈퇴 보조 사용에서 사용 되었다.</li>
	<li>다이제스트 150 rpm에서 1 h 동안 37 ° C 배양 기 통에에서 멸 균 유리 미디어 저장 병에 해 부 지방 조직.</li>
	<li>50 mL 튜브로 소화 솔루션을 분할 하 고 튜브 390 x g에서 10 분 원심.</li>
	<li>문화 매체를 준비: LG DMEM 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 50 µ g/mL gentamicin 및 1.5 µ g/mL ampothericin B. 보충</li>
	<li>원심 분리, 다음은 상쾌한을 제거 하 고 배양 (LG-DMEM 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 50 µ g/mL gentamicin 및 1.5 µ g/mL ampothericin B 보충) 20 mL에 셀 펠 릿 resuspend. 390 x g에 5 분 동안 다시 세포를 원심 고는 상쾌한을 제거 합니다.</li>
	<li>문화 매체 (LG-DMEM 10 %FBS, 50 µ g/mL gentamicin 및 1.5 µ g/mL ampothericin B 보충)의 10 mL와 함께 셀 펠 릿을 resuspend 하 고 세포 현 탁 액 100 µ m 필터를 통해 필터링.</li>
	<li>세포 현 탁 액의 50 µ L을 (적혈구 세포)에 대 한 3% 초 산/메 틸 렌 블루 솔루션의 50 µ L을 추가 하 고 솔루션을 섞어 10 µ L를 사용 하 여 셀을 계산. 세포는 hemocytometer와 계산을 수행 합니다. 다음 문화 매체 (LG-DMEM 30 %FBS, 50 µ g/mL gentamicin 및 1.5 µ g/mL ampothericin B 보완)에 40, 000 셀/c m2 의 조밀도에 세포 격판덮개.</li>
	<li>24 시간 5% CO2 와 다습 한 대기권에서 37 ° C에서 세포를 품 어.</li>
	<li>갓 부 화, 워시와 따뜻한 (37 ℃) 성 세포와 식 염 수 (PBS) 세포 파편을 제거 하 고 10 %FBS 문화 매체와 미디어를 대체 버퍼링을 다음 추가 ascorbic 산-2-인산 염 (25 µ g/mL)와 인간의 재조합 섬유 아 세포 성장 요인 2 (FGF2, 1 ng/mL).</li>
	<li>Subculture ASCs 표준 0.25% trypsin EDTA 솔루션 (3 mL T175 플라스 크에 대 한)를 사용 하 여 90% 합류에. 3-5 분 후 중화 문화 매체 (LG-DMEM 10 %FBS, 50 µ g/mL gentamicin 및 1.5 µ g/mL ampothericin B 보충)의 10 mL와 0.25% trypsin EDTA 솔루션. 참고: 일반적인 ASC 표면 마커 및 트라이-혈통 차별화 분석 수행 이전 그리고 발표 ASCs이 프로토콜 표시 ASC 특정 특성21,22를 사용 하 여 격리를 사용 하 여 cytometry 분석 흐름.</li>
	<li>T175 플라스 크에 대 한 문화 매체 (LG DMEM 보충 10 %FBS, 50 µ g/mL gentamicin 및 1.5 µ g/mL ampothericin B)의 10 mL로 세포 세척 하 고 원심 250 x g. 제거에서 8 분에 대 한 셀은 상쾌한 문화 매체의 1 mL에 셀 resuspend. hemocytometer 셀을 계산 합니다.</li>
	<li>8, 000 셀/c m2의 조밀도에 T175 문화 플라스 크에 세포 격판덮개</li>
	<li>더 사용 하기 전에 문화 매체에서 10% 디 메 틸 sulfoxide (DMSO)와 액체 질소에 나머지 ASCs를 고정.</li>
</ol>2. ASC 시트 준비
<ol><li>FBS의 1 mL와 함께 온도 응답 문화 요리 (3.5 c m 직경)를 미리 coat 다음 셀 뿌리기 전에 적어도 30 분 동안 37 ° C에서 인큐베이터에서 요리를 놓습니다.</li>
	<li>3-5 분 (3 mL T175 문화 플라스 크에 대 한) 표준 0.25% trypsin EDTA 용액을 사용 하 여 ASCs trypsinize Trypsinization 후 어떤 셀 수 풀 경우 계산 전에 100 µ m 필터를 통해 셀을 필터링 합니다.</li>
	<li>트립 신 솔루션을 무력화 LG DMEM 10% 보충 FBS (T175 플라스 크에 10 mL) 250 x g. 8 분 대 세포 현 탁 액 분리기는 상쾌한 제거와 LG DMEM 10% 보충의 1 mL에 셀 resuspend FBS.</li>
	<li>FBS와 온도 응답 문화 요리 코팅, 후 37 ° C에서 지구 온난화 접시에 인큐베이터에서 요리를 이동 하 고 접시에서 FBS를 제거 합니다.</li>
	<li>씨앗 ASCs 400000 셀/cm2 (총, 3.52 × 106 세포 배양 접시 당 2 mL에 희석).</li>
	<li>신중 하 게 가능한 균등 하 게 요리를 부드럽게 스윙 하 여 세포를 배포 합니다.</li>
	<li>5% CO2와 다습 한 대기권에서 37 ° C에서 48 h에 대 한 문화 ASC 시트. 참고: 문을 여는 인큐베이터의 온도 강하를 ASC 시트 형성을 방해할 수 있습니다 또는 구성 된 ASC 시트의 조기 분리를 방지 하기 위해 ASCs 시드 후 최소화 하십시오.</li>
</ol>3. 부분 Colectomy 및 대 장 문 합
<ol><li>유발 하 고 남성 Wistar 쥐 (250-350 g 사이 무게) 1 L/min isoflurane의 유지 (1.5-5%)/oxygen 흡입 buprenorphine 0.05 mg/kg을 피하 주사 하 고.</li>
	<li>일단 동물 일반 마 취, 마 취 깊이 반사 테스트를 사용 하 여 평가 합니다. 건조를 방지 하기 위해 눈에 비타민 A 포함 눈 연 고를 적용 합니다. 마 취는 수술에 대 한 충분 한 것으로 간주, aseptically 머리를 면도 하 고 외과 영역 70% 에탄올으로 두 번 살포 하 여 복 부를 준비 합니다. 살 균 종이 커튼으로 복 부 드러 워 진. 무 균 기술을 사용 하 고 전체 수술 중 살 균 분야를 유지 합니다.</li>
	<li>메 마른 외과 블레이드 크기 10으로 5 cm의 중간 선 복 부 절 개를 만들고 Metzenbaum가 위 절 개를 확장. 확인 하 고 콜론 exteriorize 염 분 moistened gauzes와 복 부 구멍의 나머지에서 결 팩. 오른쪽, 중간, 식별 하 고 퉁 명 스럽게 Halsted 모기를 사용 하 여 각 선박 주위 해 부는 mesentery에서 산 통 동맥을 왼쪽, 고 흡수 비 꼰 실크 4/0 각 개별 선박 선.</li>
	<li>맹 하 aborally 1.0 cm 사이 꼬리 mesenteric 동맥 위에 0.5 cm 저 승 세그먼트를 격리 합니다. 건강 한 콜론 Metzenbaum가 위를 사용 하 여 통해 transect. 저 승 세그먼트의 절제술, 후 두 긴 면봉, 원심 결 통해 트랜스 anally 그리고 근 위 결 장 끝에 도입 하 여 콜론의 인접 하 고 원심 끝을 함께 가져.</li>
	<li>수술 현미경을 사용 하 여, 한 레이어 반전 5 중단된 봉합 (비 흡수 monofilament 폴 리아 미드 8/0)를 사용 하 여 봉합에 의해 부족 하 게 sutured 엔드-투-엔드 문 합을 만듭니다. 결 장 벽의 모든 레이어를 통해 중단된 봉합 놓고 노트 extraluminally 위치.</li>
	<li>컨트롤 또는 ASC 시트 그룹으로 무작위로 쥐를 나눕니다.</li>
</ol>4. ASC 시트 이식
<ol><li>40 분 비보에 이식, ASC 시트 분리를 촉진 하기 전에 실내 온도에 아래로 냉각 하기 위하여 문화 요리를 하실 수 있습니다. 참고:는 초연 후 약 2 cm 직경에서 축소 ASC 시트. ASC 시트 생존 분리20후 최소한 3-6 h에 대 한 높은 남아 있습니다.</li>
	<li>문화 매체와 혈 청 1 mL와 함께 그것은 lg 전자 DMEM 무료 교체를 제거 합니다.</li>
	<li>부드럽게 atraumatic 집게와 ASC 시트의 테두리를 잡아 고 anastomotic 라인 위에 ASC 시트의 요리 측을 두십시오.</li>
	<li>신중 하 게 ASC에 밖으로 스트레칭 약 0.25 cm 위와 아래 anastomotic 라인 atraumatic 집게 랩 콜론 주위 시트를 사용 하 여 시트. 랩 등 측면 주위 ASC 시트까지 콜론을 들어올립니다. 참고: ASC 시트는 anastomotic 라인을 자발적으로 준수, 조직 접착제를 사용 하는 필요 또는 다른 소재. 제어 그룹 추가 치료에 영향을 받지 않습니다.</li>
	<li>목화 면봉을 제거 하 고 장갑과 악기를 변경. 복 부에 콜론을 바꿉니다. 흡수 되기 쉬운 봉합을 사용 하 여 실행 한 레이어와 닫기 복 부-교육 알바 꼰 polyglycolic 산 5/0. 봉합은 subcutis와 함께 흡수 봉합을 사용 하 여 실행의 한 계층에서 커티스 꼰 polyglycolic 산 5/0.</li>
</ol>5. 수술 후 평가 및 후속
<ol><li>즉시 5 mL 따뜻한 식 염 수의 피하 주사로 동물 postoperatively rehydrate. 체온을 유지 하 고 동물을 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지 생체 신호를 모니터링 하는 열 램프 아래에서 동물을 놓습니다. 참고: 수술을 받은 했다 동물 했다 완전히 복구 될 때까지 다른 동물의 회사에 반환 되지 않습니다. 복구, 후 물에 자유 접근 및 일반 쥐 차 수 있도록. 수술 후 통증 완화를 위해 관리 0.05 mg/kg buprenorphine 피하 모든 6-8 h 3 일 동안. 이 연구에서 언제 든 지 아무 항생제 관리 되었다.</li>
	<li>웰빙 무게의 일일 임상 평가 얻을. 매우 낮은 웰빙 점수 또는 심한 체중 감소, 동물 마 취 아래 심장 찔린 통해 exsanguination에 의해 안락사 해야 한다.</li>
	<li>수술 후 당일 또는 하루 3 7 anesthetize 1 L/min isoflurane의와 다시 쥐 (1.5-5%)/oxygen 흡입 buprenorphine, 없이 U 자 모양의 절 개를 다시 개복 술을 수행 하 고. 복 부 복 막 염만, 섬유 유착, 그리고 농의 존재의 표시를 확인 하십시오. 유착의 심각도 점수와 복 부와 anastomotic 지역에서 농 양.</li>
	<li>문 합을 포함 하 여 콜론의 닫힌된 세그먼트에 공기 insufflation에 의해 anastomotic 파열 압력을 결정 합니다. 첫 번째 공기 파열 압력으로 누설 하는 때 공기 압력과 파열의 장소를 기록 합니다.</li>
	<li>각 희생된 동물에서 콜론을 제거 하 고-장 문 합을 포함 하는-콜론의 컷된 세그먼트 버퍼링 4% 포름알데히드, 파라핀 포함 및 콜론 4 μ m 두꺼운 부분으로 절단에 의해 해결.</li>
	<li>심장 찔린 통해 exsanguination에 의해 직접 문 합 세그먼트의 컬렉션 후 마 취 동안 동물을 안락사. 호흡 운동과 심장 박동의 부재와 함께 동물 죽음을 확인 합니다.</li>
	<li>되며 & 오신 빨강, Picro 시리우스 등 조직화 학적인 stainings 및 인간 미토 콘 드리 아, 쥐 내 피 세포 (CD34 안티) 및 (CD3 +, CD163 +) 면역 체계의 세포에 대하여 항 체와 immunohistochemical stainings 수행 합니다.</li>
	<li>컴퓨터 분석에 대 한 슬라이드를 디지털화 하 고 동물 그룹을 비교.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 연구 잠재적인 상충으로 해석 될 수 있는 어떤 상업적 또는 금융 관계의 부재에서 실시 되었다 선언 합니다.

Anastomotic 누설은 기본 문 합으로 결 장 절제술을 다음과 같은 가장 심각한 불리 한 이벤트 이다. Anastomotic 장애 및 누설을 방지 하기 위해 최적의 기술을 여전히 부족 한. 다양 한 생체 재료의 로컬 응용 프로그램, 다양 한 결과25,,2627실시 되어 있다. 세포 치료의 목표는 조직 대체 하 여 조직 복구 또는 로컬 치유 통해 paracrine 분 비의 자극을 촉진 하기 위하여 이다.
이 쥐 모델에서 ASC 시트 이식 기술적으로 성공적 이었다. 임상 및 조직학 기본 문 합으로 결 장 절제술 후 누설을 감소에서 ASC 시트의 효과 설명 했다.
대 장 anastomoses에 ASC 시트 이식 대 장 수술에 새로운 접근 이다. 처음으로,이 연구에서...

기본 문 합으로 부분 colectomy는 대 장 암, 크 론 병, 계실 염1,2등 콜론에 영향을 미치는 많은 질병에 대 한 할 수 있는 일반적으로 수행된 수술입니다. 가장 후 대 장 문 합은 anastomotic 누설3합병증을 겁 나. 비록 anastomotic 누수와 관련 된 몇 가지 위험 요소 확인 되었습니다, 누설을 방지 하기 위한 솔루션 알4,5남아 있습니다.
지방 조직 유래 stromal 세포 (ASCs) 염증 및 영양 특성6,7, 이러한 세포 재생 요법8에 대 한 후보를 유망 하 게 연결 되어 있습니다. 조직 치유를 촉진 하는 ASCs의 효과 심장 근육, 피부, 식도9,,1011,,1213등 다양 한 조직에 표시 했다. 그러나, 장 치유를 촉진 하는 ASCs 사용 하 여에 몇 가지 보고 있다. ASC 코팅 biosutures 통해 실험 대 장 anastomoses에 ASCs의 지방 이식 또는 ASCs serosal 주사14 치유 하거나 개선 보였다 anastomotic 더 유리한도 불구 하 고 anastomotic 누설을 방지 하지 않았다 치유15.
정지에서 ASCs의 지방 이식 함께 또는 생체 부족 세포 보존 또는 이식된 세포11의 부적 절 한 배포에 연관 될 수도 있습니다. 셀 시트 기술16,17 ASC 배달18,19의 혁신적인 방법을 제공합니다. 따라서, 이전 연구에 새로운 접근 방식은 어느 ASCs 셀에 시트 실험 대 장 문 합20에 적용 수 있는 제안 했다. 이 연구는 ASC 시트 이식 쥐 모델에서 부분 colectomy 후 대 장 문 합 누출을 감소 시키기에서 성공적 증명. 이 기사 보고 ASC 시트 준비 및 외과 이식 기술 합니다.

<table><tbody><tr><td>LG DMEM</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>22320022</td><td>ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>콜라겐분해효소 I형</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>17100-01</td><td>ASC 절연</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>시그마-알드리치</td><td>A9418</td><td>ASC 절연</td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>10270-106</td><td>FBS, ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>3% 아세트산 메틸렌 블루를 사용한 산</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7060</td><td>ASC 절연</td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15750-037</td><td>ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>Ampothericin B</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>15290-018</td><td>ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker 모델 10X 400)</td><td>Akribis Scientific</td><td>F240</td><td>ASC 절연</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Hettichlab</td><td>Rotina380</td><td>ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>인산염 완충액 식염수</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>14190-094</td><td>PBS, ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>아스코르브산-2-인산염</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td>ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>인간 재조합 섬유아세포 성장 인자 2</td><td>AbD Serotec</td><td>AF-100-15</td><td>FGF2, ASC 분리 및 배양</td></tr><tr><td>Trypsin EDTA</td><td>Gibco, Life technologies</td><td>25200-056</td><td>ASC 배양</td></tr><tr><td>디메틸 설폭사이드</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650-5x</td><td>DMSO, ASC 동결</td></tr><tr><td>열 반응성 배양 접시</td><td>Nunc Thermo scientific</td><td>174904</td><td>ASC 시트 준비</td></tr><tr><td>Non-absorbable braided silk 4/0</td><td>B Braun</td><td>21151042</td><td>surgery</td></tr><tr><td>Non-absorbable monofilament 폴리 아미드 8/0</td><td>B 브라운</td><td>G1118170</td><td>수술</td></tr><tr><td>흡수성 꼰 폴리 글리콜 산 5/0</td><td>B 브라운</td><td>C1048207</td><td>수술</td></tr></tbody></table>

쥐 모델에 부분 colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식

Transplantation of Adipose Tissue-Derived Stem Cell Sheet to Reduce Leakage After Partial Colectomy in A Rat Model

Anastomotic 누설 대 장 수술 후 비참 한 합병증은 이다. 누출 방지에 대 한 현재 메서드는 임상 효능의 다른 수준, 그들은 지금 불완전 한 솔루션까지 있습니다. 줄기 세포 치료 ASC 시트를 사용 하 여이 문제에 대 한 솔루션을 제공할 수 있습니다. ASCs 조직 그들의 영양 및 immunomodulatory 속성 때문에 치유를 승진 시키기를 위한 유망 후보자 이라고 여겨진다. 여기, 우리는 누설을 줄이기 위해 쥐 모델에서 대 장 문 합에 이식 하는 고밀도 ASC 시트를 생산 하는 방법을 제공 합니다. ASCs 셀 시트 쉽게 분리 될 수 있는 온도 응답 문화 요리에 형성. 이식의 날, 5 봉합 대 장 문 합으로 부분 colectomy 수행 되었다. 동물 쥐 당 1 ASC 시트와 함께 즉시 이식 했다. ASC 시트 없이 어떤 접착제, 봉합 사, 또는 어떤 소재 문 합을 자발적으로 준수 됩니다. 동물 그룹 3 ~ 7 일을 희생 했다 postoperatively. 이식된 동물에 비해, anastomotic 농 양 및 누설의 부각 더 높았다 제어 동물. 우리의 모델에서 대 장 문 합 후 ASC 시트 이식 성공적이 고 낮은 누설 율으로 연결 했다.

ASC 시트 문화 및 결 장 절제술 및 문 합 절차를 묘사 하는이 연구의 흐름 차트는 그림 1에 표시 됩니다. 그림 2 는 ASC 시트 현미경 형태학 및 중 고 분리 후 ASC 시트의 거시적인 외관. 그림 3 ASC 시트 분리 및 이식의 다른 단계를 보여 줍니다. 그림 4 는 anastomotic 선 및 누설 방지에 ASC 시트의 존재 3 일 postoperatively.
후속 기간 대 장 문 합 평가 대 한 허용입니다. 다른 평가 수치와 테이블에 표시 됩니다. 제어 동물에 비해, 이식된 동물 그룹 덜 자주 anastomotic dehiscence과 수...

준비와 쥐 모델에서 부족 하 게 봉합 대 장 anastomoses에 지방 조직 유래 줄기 세포 (ASC) 시트의 이식 제공 됩니다. 이 새로운 응용 프로그램은 ASC 시트 대 장 문 합 누출을 줄일 수 있습니다 보여줍니다.

쥐 모델에 부분 Colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식

Anastomotic leakage is a disastrous complication after colorectal surgery. Although current methods for leakage prevention have different levels of ...

조직 치유에 긍정적 인 효과를 가정하기 때문에 ASC 시트는 심근 경색과 같은 많은 질병 모델에서 테스트되었습니다. 이 실험은 ASC 시트가 복강 내에서 사용될 수 있으며 장에 적용될 수 있음을 보여줍니다. ASC 시트의 주요 장점은 합성 재료가 필요하지 않다는 것입니다.또한 ASC 시트 이식은 적은 양의 연습만으로 비교적 쉽게 수행할 수 있습니다. ASC 시트 이식의 이 새로운 응용 프로그램은 장 절제 후 누출을 방지하기 위해 개발되었으며 새로운 치료 전략의 첫 번째 단계를 제공합니다. 장 문합에 적용되는 ASC 시트는 누출 방지에 유망한 것으로 나타났습니다.ASC 시트는 요로와 같은 다른 복강 내 장기에도 적용될 수 있습니다. 먼저 10 사이즈의 멸균 수술용 칼날, Adson-Brown 조직 겸자 및 Metzenbaum 가위를 사용하여 인간의 피하 복부 지방 조직을 0.5cm 조각으로 해부합니다. 멸균된 유리병에 담긴 절개된 조직의 총량을 계량합니다.병당 30ml의 분리 배지를 추가합니다. 그리고 절개된 지방 조직을 쉐이커 인큐베이터에서 150rpm 및 섭씨 37도의 온도에서 1시간 동안 소화합니다. 한 시간 후에 소화된 조직 해결책을 50 ml 관으로 나누고, 390 G.Following 원심분리에 의하여 제거한다 상등액에 10 분 동안 관을 분리기를 분리하십시오.배지를 추가하여 세포 펠릿을 재현탁시키고 최대 45ml의 배양 배지를 더 추가합니다. 결합된 세포를 390G에서 5분 동안 원심분리하고 상층액을 제거합니다. 세포 펠릿을 10ml의 배양 배지로 재현탁시킵니다.그리고 100 미크론 필터를 통해 셀 현탁액을 필터링합니다. 3% 산산 메틸렌 블루 용액 50l를 세포 현탁액 50l에 첨가하여 적혈구를 이가 만듭니다. 용액을 혼합한 후 혈구계에 10l를 피펫팅하고 세포를 계수합니다.배양 배지가 포함된 T175 플라스크에 제곱 cm당 40000 세포의 밀도로 세포를 플레이트화합니다. 그리고 섭씨 37도의 습한 분위기에서 24시간 동안 5%CO2로 세포를 배양합니다. 다음날, 따뜻한 인산염 완충 식염수로 세포를 세척하여 세포 파편을 제거합니다.그런 다음 배지를 10% FBS 배양 배지와 새로 첨가된 아스코르브산-2-인산염 및 인간 재조합 섬유아세포 성장 인자 2로 교체합니다. 세포가 90% confluence에 도달할 때까지 배양합니다. 표준 0.25% 트립신-EDTA 용액을 사용하여 90% 합류점에서 지방

transplantation-adipose-tissue-derived-stem-cell-sheet-to-reduce

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연구

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Medicine

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이 비디오는 쥐 대동맥 주위 지방 조직에서 형광 표지된 신경능선 유래 지방 유래 줄기세포(ADSC)를 분리 및 배양하는 기술을 보여줍니다. 분리 후 NCADSC를 검출하고 형광 활성화 세포 분류를 사용하여 분류한 후 플레이트에서 배양하여 세포 증식을 촉진합니다.

쥐 대동맥 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 분리

2001 년, UCLA의 연구자들은 성체 줄기 세포의 인구의 분리는 지방 조직에서 지방 유래 줄기 세포 나부터 ASC라고 기술. 이 문서는 콜라게나 제를 사용 설명서, 소화 효소의 프로토콜을 사용 lipoaspirates에서부터 ASC의 분리를 설명.

인간 Lipoaspirates에서 지방 유래 줄기 세포를 수동으로 분리

지방 유래 줄기 세포 (ASCs) 쉽게 격리 하 고 정상 쥐의 지방에서 수확. ASC 시트 셀 시트 엔지니어링을 사용 하 여 만들 수 있습니다 하 고 주 커 전체 두께 전시 하는 당뇨 지방 쥐 결함 노출 된 뼈와 피부와 다음 인공 피부의 bilayer 덮여에 이식 될 수 있다.

생성 및 당뇨병 치유 하는 부상을 모델에서 줄기 세포 지방이 많은 파생 (ASC) 시트의 이식

이 연구는 내시경 지방 조직 유래 기질 세포 (ADSC)의 성공적인 방법을보고하는 돼지 모델의 확장 내시경 점막하 절제술 (ESD) 후 식도 협착 방지를위한 - 시트 이식.

ADSC 매 이식은 확장 식도 내시경 점막하 절개 후 협착을 방지하는

여기, 우리는 vivo에서 암 모델 셀 시트 기술을 사용 하 여 개발 하는 프로토콜을 제시. 이러한 모델은 항 암 치료제의 평가 위한 매우 유용할 수 있었다.

Vivo에서 간세포 암 종 개발에 중간 엽 줄기 세포의 잠재력을 탐험

본 문서는 수용자 동물의 중간 절단 된 흰색 지방 패드로 기증자 쥐 유방 상피 세포를 이식하는 이식 방법을 설명합니다. 이 방법은 유방 상피 발달에 호스트 및/또는 기증자 효력을 검토하기 위하여 이용될 수 있고 사전 정리를 위한 필요를 제거하여, 이 기술의 유용성을 확장합니다.

쥐 유방 상피 세포 이식에 갑피 흰 지방 패드

이 지방으로 덮인 췌도 이식 방법은 복강 내 이식 된 섬의 검출에 적합합니다. 특히, 생체 결합제의 사용 또는 봉합이 필요하지 않습니다.

부고환 백색 지방 조직을 이용한 지방으로 덮인 췌도 이식

이 프로토콜은 낭염의 쥐 모델을 확립하는 방법을 설명합니다. 회장낭 모델은 미세수술 기법을 사용하여 회장낭-항문 문합(IPAA) 수술을 수행하여 만들어졌습니다. 수술 후, 쥐는 4 일 동안 4 % 덱스트란 설페이트 나트륨 (DSS)으로 치료되었습니다.

덱스트란 설페이트 나트륨을 사용한 직장결장절제술 및 회장낭-항문 문합술 후 낭염의 쥐 모델

여기에서 우리는 당뇨병 및 비만 BTBR 마우스의 신장 기능을 개선하면서 난임, 비만 및 고혈당증을 역전시키는 유망한 전략을 제공하는 흰색 및 갈색 지방 조직 이식 프로토콜을 제시합니다.

백색 및 갈색 지방 이식편: 흑색 및 황갈색 완장(BTBR) 비만 마우스의 생식, 대사 및 신장 결핍을 교정하기 위한 접근 방식

여기서는 처리 시간이 &gt;90% 감소하고, 세포 생존율이 높으며, 광범위한 호환성을 특징으로 지방유래 줄기세포와 지방세포를 효율적으로 분리하는 표준 방법을 제시합니다.

돼지 지방 조직에서 지방 유래 줄기세포와 지방세포의 효율적인 분리

학습하세요 쥐 모델에서 지방 조직 유래 줄기 세포 시트를 이용한 결장 직장 문합부 이식술로 수술 후 누설을 효과적으로 감소시키는 방법. 이 기술은 합성 재료 없이 조직 치유를 촉진하여 대장 직장 수술의 새로운 치료 전략을 제시합니다.

쥐 모델에 부분 Colectomy 후 누설을 줄이기 위해 지방 조직 유래 줄기 세포의 이식

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