Name: 일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 Transgene 식의 토끼 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-10T12:30:00.000+00:00
Duration: 13 min 58 s
Description: 학습하세요 토끼 경동맥 중재 이식 정맥 경에서의 튼튼한 트랜스진 발현 방법을 통해 혈관 이식 실패의 병인과 유전자 치료 전략을 연구하는 기법입니다.

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이 프로토콜의 중요 한 단계에는 마 취 관리, anticoagulation, 외과 동맥/투입 정 맥의 조작과 이식할된 정 맥의 hemodynamic 측정 포함 됩니다. 마 취의 적절 한 관리는 포함 하는 두 개의 비교적 긴 작업 (일반적으로 3-3.5 h 양자 정 맥 접목 및 양측 이식 변환에 대 한 1.5-2.5 h)이 여러 생존 수술 모델에에서 중요 한. 우리 마 취는 nosecone 통해 고 endotracheal 삽 관 법에 의해 관리 하 고는 삽 관 법 가능성이 긍정적인 압력 환기는 atelectasis를 방지 하기 때문에 이식 변환 수술 후 생존을 개선 하 고 관련 된 발견 호흡 실패입니다. 토끼를 넣어야 하 고, 도전 그리고 기도 삽 관 법 관련 외상 수술 stridor 발생할 수 있습니다. 그러나, 도전과 삽 관 법의 합병증은 수술 사망률 및 정 맥 이식 수술 연관 사망률의 대부분을 제거 하는 위하여 지불할 작은 가격.
Anticoagulation 중 생존 수술 후...

동맥 경화는 지질 축적과 혈관 벽에 염증 배 루멘, 심장 마비, 뇌졸중, 및 사지1,2의 손실의 축소로 이어질 만성 염증 성 질병 이다. 경 피 적인 내정간섭 (예., 혈관 및 stenting) 및 의료 치료 (예., 스타 틴과 항 에이전트) 아 테 롬;에 대 한 유용한 치료법 그러나, 그들은 하지 종종 관상동맥 및 말 초 순환에 모두 심각한 폐쇄성 질환 치료에 효과적입니다. 우회 접목, 자생 정 맥 세그먼트를 사용 하 여 심각한, 확산 관상 동맥 및 주변 혈관 질병3,4환자 치료에 대 한 일반적인 절차 남아 있다. 그러나, 모두는 관상에 이식 정 맥 그리고 주변 순환 가난한 장기 patency 요금. 관상 동맥 순환에 있는 정 맥 이식 1 년 50%에서 가려진는의 대략 10-20%는 10 년5,6에 의해 가려진. 주변 순환에서 정 맥 이식 실패 속도 5 년7에서 30-50%.
그것은 질병의 위치에 정확 하 게 치료 유전자 제품을 제공할 수 있기 때문에 유전자 치료는 정 맥 이식 실패의 예방에 대 한 매력적인 접근 이다. 따라서, 수많은 임상 연구는 정 맥 이식 유전자 치료8,9을 테스트 하 고 있다. 그러나, 기본적으로 초기 시간 포인트 (2-12 주)10,11,12,13,,1415, 에서 효능을 조사는 이러한 연구의 모든 16 , 17. 우리는 유전자 치료 개입 내구성 제공할 수 있다는 증거가 인식 (년) 일반적으로 neointimal 증식 및 동맥 경화4결과인 늦은 정 맥 이식 실패에 대 한 보호. 우리 이식할된 혈관에 튼튼한 transgene 식이 허용 함으로써 초기 뿐 아니라 늦은 시간 지점에서 유전자 치료 개입의 테스트 방법을 개발. 튼튼한 transgene 식을 위해 메서드 HDAd 벡터 지연된 변환 전략을 통합. HDAd 벡터 바이러스 성 유전자, 면역 시스템18,19,에 의해 불리고 셀의 인식 (및 제거)20, 를 방지 부족 하기 때문에 장기간된 transgene 식을 제공 21. 지연 변환 (이식 배치 후 수행된 28 일) 일찍22이식 후 발생 하는 arterialization 과정 불리고 세포의 손실 방지.
이식 배치10,,1112,15,16 시 정 맥 이식의 변환에 의존 하는 정 맥 이식 벽에 치료 transgene 식을 달성 하는 다른 방법 ,17. 연속적으로 측정 하는 경우 변환22,23후 transgene 식이이 접근을 사용 하 여 신속 하 게 거절 합니다. 따라서, 학문이 접근이 방식을 사용 하는 하지는 정 맥 접목, 가장 안 4 주 넘어 효능 평가 함께 후 12 주 이상의 효능을 시험 했다. 반면에, 우리의 방법은 정 맥 이식 달성 및 기반 비슷한 연구에서 동맥 가능성이 수행에 24 주 이상 안정적으로 지속 되는 transgene 식 계속 훨씬 더22,24. 우리는 다른 정 맥 이식 유전자 치료 개입 안정적인 transgene 표현의이 기간을 달성 하는 알고 있습니다.
우리는 우리의 방법을 개발 하는 토끼 모델을 사용. 정 맥을 테스트 하려면 큰 동물 이식 유전자 치료10,11,12,15,,1617,25, 또는 다른 사람 설치류, 토끼, 사용 26. 설치류 모델에 비해, 토끼는 더 비싼 하 고는 더 엄격한 규제 요건이 적용 됩니다. 그러나, 더 큰 동물에 비해 (예. 돼지, 개), 토끼는 구입 하 고 집까지 저렴 하 고 훨씬 쉽게 처리할. 또한, 토끼 배 순수 인간의 배를 닮은27, 그들은 충분히 큰 경 피 적인 내정간섭28,29, 테스트를 위해 사용할 수 있습니다 그리고 그들은 충분 한 조직을 제공 여러 끝점 (예., 조직학, 단백질, RNA) 단일 혈관 표본22,30을 사용 하 여 시험 될 수 있다. 또한, 먹 일 때 정 맥 이식 된 토끼는 높은 지방 다이어트와 함께, 그들은 개발 정 맥 이식 동맥 경화31,32, 관상 동맥 바이패스 정 맥 이식 실패4,5의 일반적인 원인입니다. . 이러한 동맥 경 화성 토끼 정 맥 이식이이 방법으로 전달 하는 유전자 치료 개입을 테스트 하기 위한 기판으로 사용할 수 있습니다. 제공 된 프로토콜 토끼 정 맥 이식에 튼튼한 transgene 식을 달성 하는 데 필요한 기술을 마스터 하는 수사를 도울 수 있다.

<table><tbody><tr><td>Disposables</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3mL 주사기와 24G 바늘</td><td>Becton Dickinson</td><td>309571</td><td>정맥 이식 수술용 2x; 유전자 전달용 2x; 수술용</td></tr><tr><td>1 mL 주사기 27G 바늘</td><td>Becton Dickinson</td><td>309623</td><td>정맥 이식 수술용 2x, 유전자 이식 수술용 5x</td></tr><tr><td>유전자 19G 바늘</td><td>Becton Dickinson</td><td>305187</td><td>유전자 이식 수술</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20mL 주사기, 루어 잠금</td><td>Nipro Medical Corp</td><td>JD+20L</td><td></td></tr><tr><td>카테터, 24Ga x 3/4"</td><td>Terumo Medical Products</td><td>SROX2419V</td><td></td></tr><tr><td>21G 바늘</td><td>Becton Dickinson 305165</td><td></td><td>유전자 전달 수술 및 식염수</td></tr><tr><td>거즈 4 "x 4"</td>의 20 mL 주사기<td>Dynarex</td><td>3242</td> <td>~ 10-15 수술</td></tr><tr><td>당 3-0 실크 봉합</td>사 <td>Covidien Ltd.</td><td>S-244</td><td></td></tr><tr><td>5-0 실크 봉합</td>사 <td>Covidien Ltd.</td><td>S-182</td><td></td></tr><tr><td>7-0 폴리프로필렌 봉합사</td><td>CP Medical</td><td>8703P</td><td>정맥 이식 수술</td></tr><tr><td>7-0 폴리프로필렌 봉합</td>사 <td>CP Medical</td><td>8648P</td><td>유전자 전달 수술</td></tr><tr><td>5-0 폴리글리콜산 봉합</td>사 <td>CP Medical</td><td>421A</td><td></td></tr><tr><td>3-0 폴리글리콜산 봉합사</td><td>CP Medical</td><td>398A</td><td></td></tr><tr><td>알코올 면봉</td><td>Covidien Ltd.</td><td>6818</td><td>IV 라인</td></tr><tr><td>카테터 플러그</td><td>Vetoquinol</td><td>411498</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine HCl, 100 mg/mL</td><td>Vedco Inc.</td>의 배치를 위해<td></td><td></td>5098916106</tr><tr><td>자일라진, 100mg/mL</td><td>Akorn Inc.</td><td>4821</td><td></td></tr><tr><td>리도카인, 20mg/mL</td><td>화이자</td><td>409427702</td><td></td></tr><tr><td>마르카인 0.5%</td> <td>화이자</td><td>409161050</td><td></td></tr><tr><td>Beuthanasia D-Special</td><td>Intervet Inc.</td><td>NDC 00061047305</td><td>수확 수술만 가능</td></tr><tr><td>부프레노르핀 HCl, 0.3 mg/mL</td><td>Patterson 수의학</td><td>12496075705</td><td></td></tr><tr><td>식염수 IV 백, 0.9% 염화나트륨</td><td>Baxter</td><td>2B1309</td><td></td></tr><tr><td>Heparin&nbsp; (5000U/mL)</td><td>APP 제약</td><td>NDC 63323-047-10</td><td></td></tr><tr><td>파파베린(3.5mg/ml)</td><td>미국 시약 Inc.</td><td>NDC 0517-4002-25</td><td>30mg / mL 재고에서 희석; 최대 1mL</td></tr><tr><td>펜타닐 패치, 25mcg/h</td><td>Apotex Corp.</td> 사용<td>NDC 60505-7006-2</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>여러 공급업체</td>의 <td>카탈로그 번호를 사용할 수</td><td></td> 없음</tr><tr><td>&nbsp; 바이러스 벡터</td><td></td><td></td><td>유전자 전달 수술 전용</td></tr><tr><td><강한>수술 기구</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum 바늘 홀더 7" 스트레이트</td><td>Roboz</td><td>RS-7900</td><td></td></tr><tr><td>수술 가위 6.5" 스트레이트 블런트/블런트</td><td>Roboz</td><td>RS-6828</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더 /w 봉합 가위</td><td>Miltex</td><td>8-14-IMC</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo 가위</td><td>Roboz</td><td>RS-5658</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo 바늘 홀더, 5.75" 스트레이트 잠금</td><td>장치 Roboz</td><td>RS-6412</td><td></td></tr><tr><td>Stevens 가위 4.25" 곡선 무딘/무딘</td><td>Roboz</td><td>RS-5943</td><td></td></tr><tr><td>Alm 견인기 4" 4X4 5mm 무딘 단자</td><td>Roboz</td><td>RS-6514</td><td>2x</td></tr><tr><td>Backhaus 수건 클램프 3.5"</td><td>Roboz</td><td></td><td>4x</td></tr><tr><td>마이크로 클립 설정 집게 4.75"</td><td>Roboz</td><td>RS-6496</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 혈관 클립, 11mm</td><td>Roboz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surg-I-Loop</td><td>Scanlan International</td><td>1001-81M</td><td>5cm 길이</td></tr><tr><td>Bonaccolto 집게, 4" (10 cm) 긴 세로 톱니, 크로스 톱니 팁, 1.2mm 팁 너비</td><td>Roboz</td><td>RS-5210</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3 펜치 Inox 팁 크기 .17 &times; .10 mm</td><td>Roboz</td><td>RS-5042</td><td></td></tr><tr><td>Graefe 펜치, 4" (10 cm) 긴 톱니 모양의 직선, 0.8 mm 팁</td><td>Roboz</td><td>RS-5280</td><td></td></tr><tr><td>Halstead 모기집게,&nbsp; 5" 직선, 1.3 mm 팁</td><td>Roboz</td><td>RS-7110</td><td>2x</td></tr><tr><td>Halstead 모기집게,&nbsp; 5" 곡선형, 1.3mm 팁</td><td>Roboz</td><td>RS-7111</td><td></td></tr><tr><td>Jacobson 모기집게 5" 곡선형, 섬세한, 0.9 mm 팁</td><td>Roboz</td><td>RS-7117</td><td></td></tr><tr><td>Kantrowitz 집게, 7.25" 90도 섬세함, 1.7mm 팁</td><td>Roboz</td><td>RS-7305</td><td></td></tr><tr><td>조직 집게 5", 1X2 이빨, 팁 너비 2mm</td><td>Roboz</td><td>RS-8162</td><td></td></tr><tr><td>Allis-Baby 집게, 12cm, 4x5 이빨, 팁 너비 3mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>11092-12</td><td>2x</td></tr><tr><td>Adson 집게, 12cm, 톱니, 직선</td><td>Fine Science Tools</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>수의학 전기 수술 핸드피스 및 전극</td><td>MACAN 제조</td><td>HPAC-1; R-F11</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Suite Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Circulating warm water blanket and pump</td><td>여러 공급업체</td><td>카탈로그 번호를 사용할 수</td><td></td>없음</tr><tr><td>Bair hugger 온난화 장치</td><td>3M</td><td>모델 505</td><td></td></tr><tr><td>IV 주입 펌프</td><td>Heska</td><td>Vet IV 2.2</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane 기화기 및 청소부</td> 여러 <td>공급업체</td><td>카탈로그 번호 사용 불가</td><td></td></tr><tr><td>수의학 멀티 파라미터 모니터</td><td>Surgivet</td><td>Surgivet Advisor</td><td></td></tr><tr><td>수의학 전기수술 유닛</td><td>MACAN Manufacturing</td><td>MV-9</td><td></td></tr><tr><td>수술용 현미경</td><td>D.F. Vasconcellos</td><td>M900</td><td>정맥 이식 수술을 위한 25X 배율; 유전자 이식 수술을 위한 16X 배율</td></tr></tbody></table>

일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 transgene 식의 토끼 모델

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

정 맥 이식 수술은 폐색 동맥 질환;에 대 한 일반적인 치료 그러나, 장기적인 성공은 이식 실패 혈전 증, 내 증식 및 동맥 경화에 의해 제한 됩니다. 이 문서의 목표는 토끼, 양측 정 맥 개재 이식 배치 다음 시험 튼튼한 transgene 식 달성 유전자 전달 벡터와 이식 하는 방법을 보여 줍니다. 메서드를 사용 하면 정상적인 정 맥 이식 항상성에서 유전자와 단백질 제품의 생물 학적 역할의 조사 수 있습니다. 그것은 또한 transgenes 예정 맥 이식 실패를 막을 수 있는 활동에 대 한 테스트 수 있습니다., 여부는 transgene의 표현 neointimal 성장을 방지, 혈관 염증 감소 또는 토끼에 있는 아 테 롬을 감소 먹이 와 고 지방 다이어트. 초기 생존 수술 하는 동안 왼쪽과 오른쪽 외부 경 정 맥의 세그먼트 excised 고 반전된 엔드-투-사이드 일반적인 경 동맥 중재 이식으로 양측 배치. 두 번째 생존 수술, 28 일 후, 수행 하는 동안 각는 이식 혈관 클립 순환에서 격리 이며 루멘 채워진다 (는 arteriotomy)를 통해 도우미 종속 adenoviral (HDAd) 벡터를 포함 하는 솔루션. 20 민 부 화 후 벡터 솔루션 발음 하 고는 arteriotomy 수리 흐름 복원 됩니다. 혈관 각 실험 프로토콜에 의해 결정 하는 시간 포인트에서 수확. 28 일 간격으로 이식 배치 및 변환 동맥 순환에 정 맥 이식의 적응을 위해 필요 하다. 이 적응 정 맥 이식 불리고 전이나 접목 직후에 발생 하는 transgene 식의 급속 한 손실을 방지 합니다. 메서드는 고유한 이식할된 혈관에 내구성, 안정적인 transgene 식을 달성 하는 능력. 다른 큰 동물 정 맥 이식 모델에 비해, 토끼는 저가 및 쉬운 취급의 이점이 있다. 쥐 나 정 맥 이식 모델에 비해, 토끼 크고 조작에 쉽게 혈관이 풍부한 조직 분석을 위해 제공 하는 있다.

New 연산자의 기술 능력 연산자 실험 데이터를 생성 하려면이 메서드를 사용할 수 있습니다 확인 해야 합니다. New 연산자를 달성 해야 합니다 첫 번째 이정표는 일관 정 맥 이식 patency 초기 정 맥 이식 수술과 이후 지연 변환 수술 후. 이상 90 %patency 각 수술의 바람직한 이며 달성 후. patency 비 접촉 우리가 일반적으로 수술 후 하루 5-7에서 수행 하는 경 피 성 초음파를 사용 하 여 평가 될 수 있다. 특허 혈관과 토끼, 초음파 시험 활발 한 꼬리-두개골 혈액 흐름 (그림 3A) 앞쪽 목의 양쪽에 큰 혈관을 발표할 예정 이다. 정 맥 이식 중 차단 되 면 폐색된 이식으로 붙이는에 아무 감지 꼬리-두개골 혈이 됩니다 합니다. 그러나, 두개골-꼬리 혈 여전히 내부 경 정 맥 (그림 3B</st...

이 방법은 토끼에 개재 정 맥 이식의 배치, 이식, 변환 및 내구성 transgene 식의 성과 설명합니다. 이로써 transgenes 이식할된 혈관에 단백질 제품의 생리 및 병 적인 역할 및 정 맥 이식 질병에 대 한 유전자 치료의 테스트의 조사.

일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 Transgene 식의 토끼 모델

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

이 방법은 정맥 이식 실패의 발병에 대한 주요 질문에 답할 수 있습니다. 예를 들어, 이식 실패의 매개체를 식별하고 이식 실패를 예방하기 위한 전략을 테스트할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 정맥 이식편 내피에서 내구성 있고 안정적인 전이유전자 발현을 달성할 수 있다는 것입니다.텍스트 프로토콜에 따라 토끼를 마취한 후 흉골 노치에서 하악골 가장자리까지 동물을 면도합니다. 수술 설정이 완료되면 전기 소작술을 사용하여 흉골 노치와 하악골 사이의 정중선을 따라 약 7-9cm 길이의 피부를 절단합니다. 그런 다음 수건 클램프를 부착하여 절개 부위를 엽니다.전체 정중선을 따라 근막 아래를 무뚝뚝하게 절개합니다. 그런 다음 전기 소작을 사용하여 정중선을 따라 절개된 근막층을 자릅니다. 다음으로, 오른쪽에서 시작하여 기관 위에 있는 흉골 설골 근육과 흉골 근육 사이를 절개하여 총경동맥을 노출시킵니다.그런 다음 총경동맥의 4-5cm 분절과 주변 조직이 없는 더 큰 가지를 조심스럽게 절개합니다. 봉합사 원위부의 각 가지를 절단하기 전에 5-0 실크 봉합사를 사용하여 총경동맥의 큰 가지를 접합합니다. 왼쪽 총경동맥 절개를 반복한 후 조직 고정 겸자를 사용하여 피하 조직층을 일시적으로 닫습니다.그런 다음 외부 경정맥이 노출될 때까지 오른쪽 피부에서 표재성 근막을 절개합니다. 외부 경정맥의 4-5cm 분절을 절개하고 주변 조직에서 그 가지를 제거합니다. 5-0 실크 봉합사를 사용하여 가지를 접합한 다음 가지를 자릅니다.다음으로 양쪽 끝에서 고립된 정맥을 접합하고 두개골 끝을 절단하고 헤파린 식염수로 내강을 씻어냅니다. 정맥 이식을 수행하려면 혈관 클립을 사용하여 고립된 분절의 두개골 끝에 있는 오른쪽 총경동맥을 고정합니다. 그런 다음 꼬리 끝에 혈관 클립을 놓습니다.이제 정맥 분절의 두개골 끝 직경과 동일한 길이의 꼬리 클램프까지 두개골 절개술을 수행합니다. 그런 다음 꼬리 동맥절개술을 통해 헤파린화된 생리식염수 주사기에 연결된 IV 카테터를 삽입하고 경동맥 내강을 세척합니다. 액체는 동맥 절개술을 통해 빠져 나옵니다.경정맥으로 돌아가서 정맥을 절제하고 동맥 옆에 놓습니다. 7-0 폴리프로필렌의 단일 스티치를 사용하여 꼬리 동맥 절개술의 꼬리 끝을 정맥 분절의 두개골 끝까지 봉합합니다. 그런 다음 첫 번째 스티치에서 180도 각도로 두 번째 스티치를 배치하여 꼬리 동맥 절개술의 두개골 가장자리를 정맥 분절의 두개골 끝까지 봉합합니다.문합 측면의 처음 두 바늘에서 같은 거리에 세 번째 바늘을 놓습니다. 그런 다음 처음 두 바늘에서 같은 거리와 세 번째 바늘 건너편에 문합의 내측에 네 번째 바늘을 놓습니다. 1에서 4까지의 각 스티치 사이에 4개의 추가 스티치를 놓습니다.원위 클립의 꼬리 쪽에서 두개골 동맥 절개술을 수행합니다. 두개골 동맥절개술의 두개골 끝과 꼬리 동맥 절개술의 꼬리 끝 사이의 거리는 정맥 분절의 길이와 같아야 합니다. 두개골 동맥 절개술의 길이는 정맥 분절의 꼬리 끝 지름과 같습니다.문합에서 경동맥을 따라 두개골로 정맥이 확장되면 정맥이 뒤틀리지 않도록 합니다. 그런 다음 헤파린화된 생리식염수를 사용하여 두개골 동맥절개술을 통해 경동맥과 정맥을 씻어냅니다. 다음으로, 두개골 동맥절개술의 꼬리 끝을 정맥 분절의 꼬리 끝까지 봉합하기 위해 첫 번째 바늘을 꿰매십시오.그런 다음 첫 번째 스티치에서 180도 각도로 두 번째 스티치를 배치하여 두개골 동맥 절개술의 두개골 가장자리를 정맥 분절의 꼬리 끝까지 봉합합니다. 비디오의 앞부분에서 설명한 대로 문합을 완료합니다. 정맥 이식편이 혈액으로 채워질 수 있도록 두개골 클립을 임시로 해제하고 마른 거즈로 부드러운 압력을 가하여 출혈을 멈춥니다.문합에서 더 이상 출혈이 없을 때까지 이 단계를 반복합니다. 그런 다음 두개골과 꼬리 클립을 모두 제거합니다. 거즈를 사용하여 문합에서 추가 출혈을 멈춥니다.3-0 실크 봉합사를 사용하여 문합 사이의 총경동맥 분절의 양쪽 끝을 결찰합니다. 그런 다음 경동맥을 합자 사이의 중간으로 나눕니다. 정맥 이식편에서 활발한 맥동이 보여야 합니다.왼쪽에서 정맥 이식 배치를 반복합니다. 5-0 PGA 봉합사로 연속적인 패턴으로 피하 조직을 닫습니다. 그런 다음 3-0 PGA 봉합사를 사용하여 피내 패턴으로 피부를 닫고 양쪽 끝의 매듭을 묻습니다.텍스트 프로토콜에 따라 수술 후 관리 및 경피적 초음파를 수행합니다. 유전자 이식 수술을 수행하려면 이식편에 인접한 경동맥 1.5-2cm를 포함한 두개골과 꼬리 양쪽의 오른쪽 정맥 이식편을 조심스럽게 분리하십시오. 같은 방법으로 왼쪽의 해부를 반복합니다.음파를 전달할 수 있도록 오른쪽 수술 상처강을 채우기 위해 생리식염수를 사용합니다. 2mm 혈관 주위 유량 프로브를 체적 유량계에 연결하고 프로브를 상처 구멍의 식염수에 담그십시오. 유속을 0으로 설정합니다.정맥 이식편에 대한 꼬리 또는 두개골의 경동맥 주위에 흐름 프로브를 놓습니다. 그런 다음 전자 데이터 수집 시스템을 사용하여 유량 프로브의 데이터를 기록합니다. IV 카테터를 통해 토끼에게 헤파린을 주입하고 식염수로 씻어낸 후 혈관 클립을 사용하여 정맥 이식편의 두개골 끝에 있는 총경동맥을 고정합니다.그런 다음 두 번째 클립을 경동맥에 적용하고 꼬리 문합에서 꼬리 약 10mm를 사용하여 동맥 절개술을 위한 공간을 남겨둡니다. 그런 다음 정맥 이식편 바로 꼬리 부분의 경동맥 주위에 두 개의 실크 넥타이를 느슨하게 놓습니다. 다음으로, 미리 준비된 구부러진 21 게이지 바늘을 사용하여 경동맥 꼬리를 이식편에 뚫고 두개골만 꼬리 혈관 클립에 구멍을 뚫습니다.바늘을 내강으로 앞뒤로 두 번 전진시켜 내강이 깨끗한지 확인합니다. 그런 다음 조심스럽게 바늘을 빼냅니다. 텍스트 프로토콜에 따라 DMEM으로 주사기 및 IV 카테터를 준비한 후 일반 경동맥 절개술에 굴곡 지점까지 삽입하고 0.5ml의 DMEM을 2회 채워 정맥 이식 내강을 세척합니다.장갑을 낀 손가락을 사용하여 이식편의 두개골 끝을 가볍게 눌러 이식편에서 DMEM을 제거합니다. 그런 다음 이식편을 따라 손가락을 이식편의 꼬리 끝 쪽으로 조심스럽게 밀어 동맥 절개술을 통해 내강 내용물을 씻어냅니다. 카테터에서 DMEM 주사기를 제거하고 카테터를 혈관에 남겨둡니다.바이러스 용액이 들어 있는 주사기를 연결하여 카테터에 공기가 들어가지 않도록 합니다. 느슨하게 매듭진 실크 넥타이를 카테터 끝 주위가 될 때까지 동맥 아래로 이동하되 조이지 마십시오. 0.03ml의 바이러스 용액을 주입하여 카테터에 남아 있는 DMEM을 밀어냅니다.그런 다음 손가락을 사용하여 정맥 이식 내강에서 모든 액체를 제거하고 두개골에서 꼬리로 부드럽게 누릅니다. 동맥과 카테터 끝을 둘러싼 두 개의 넥타이를 조여 내강을 밀봉합니다. 그런 다음 정맥이 팽창할 때까지 바이러스 용액을 주입합니다.거즈 둥지 위에 주사기를 부드럽게 놓습니다. 20분 후 빈 주사기를 사용하여 이식편에서 바이러스가 포함된 용액을 혈관이 무너질 때까지 부드럽게 흡인합니다. 주사기를 제거하여 카테터를 제자리에 둡니다.그런 다음 실크 봉합사를 자르고 풀고 혈관에서 카테터를 빼냅니다. 이제 X 패턴으로 7-0 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 동맥 절개술을 닫습니다. 그런 다음 봉합사 끝을 부드럽게 당겨 두 개의 사각형 매듭으로 묶습니다.텍스트 프로토콜에 설명된 대로 오른쪽 정맥 이식편에서 혈류를 회복한 후 왼쪽에서 바이러스 주입을 반복합니다. 형질도입된 이식편을 적출하기 위해, 정맥 이식편과 총경동맥을 절개하고 앞서 설명한 것처럼 왼쪽과 오른쪽 모두에서 흐름을 측정합니다. 3-0 실크 봉합사를 사용하여 이식편에 오른쪽 총경동맥 두개골을 접합합니다.그런 다음 3-0 실크 봉합사를 사용하여 경동맥 꼬리를 이식편에 접합합니다. 각 결찰과 인접한 문합 사이의 인접한 경동맥을 나누어 오른쪽 정맥 이식편을 절제합니다. 그런 다음 토끼의 정맥 이식편을 제거하고 식염수를 사용하여 내강을 씻어냅니다.새로운 시술자가 달성해야 하는 첫 번째 이정표는 초기 정맥 이식 수술과 후속 지연된 형질 도입 수술 후 일관된 정맥 이식 개통입니다. 정맥 이식편이 특허를 받은 경우, 초음파 검사는 꼬리에서 두개골 혈류가 활발한 큰 혈관을 드러낼 것입니다. 이식편은 형질도입 3일 후에 적출하여 절편으로 자르고 X-gal로 염색했습니다.내강 표면의 En-face 이미징은 효율적인 형질도입과 불량한 형질주입을 가진 정맥 이식편을 보여주었습니다. 이 그래프에서 볼 수 있듯이, 새로운 조작자에 의해 형질도입된 정맥 이식편에서 베타 갈락토시다아제 mRNA의 수치는 숙련된 조작자에 의해 이식된 정맥 이식편에서 베타 갈락토시다아제 mRNA의 수치와 크게 다르지 않았습니다. 이 프로토콜을 수행할 때 문합에 걸리기 전에 정맥 이식편 두개골을 꼬리로 역전시키는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이것은 정맥 덩어리에 의한 혈류 방해를 피하기 위해 필요합니다. 이러한 수술을 마스터하면 정맥 이식 절차의 경우 약 3시간, 정맥 이식 유전자 이식 절차의 경우 약 2시간, 채취 절차의 경우 45분 이내에 완료할 수 있습니다. 이 프로토콜은 바이러스 벡터와 날카로운 물체에 대한 작업을 필요로 하기 때문에 적절한 생물 안전성 및 날카로운 물건 절차를 따라야 한다는 것을 잊지 마십시오.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

Neointimal 증식이 arterialized 정맥의 협착의 주요 원인입니다. 우리는 오른쪽 바깥목 정맥은 Sprague Dawley 쥐 온목 동맥에 커프 기술을 사용하여 이식되어 상기 새로운 프로토콜을 제안합니다. 생존 속도는 희생의 시점에서 100 %이다.

쥐 온목 동맥에 개재 외부 경정맥 정맥 이식의 : 정교한 Microsurgical 기술을 교육

이 비디오에서는 토끼 모델에서 경정맥의 일부를 외과적으로 적출하는 절차를 보여줍니다. 절제된 부분은 동맥 혈압으로 인해 발생하는 내막 증식을 연구하기 위한 자가 정맥 이식편으로 사용할 수 있습니다.

토끼 모델에서 경정맥 이식 수확: 생체 외 연구를 위해 토끼 경정맥 부분을 절제하는 수술 절차

이 비디오는 토끼 경동맥과 경정맥의 삽입을 보여주며, 정맥에 동맥 압력을 가하여 정맥 내막 증식을 유도합니다. 이 모델은 혈관재생술 후 내막 증식증의 진행을 약화시키기 위한 분자 및 유전적 중재를 조사하는 데 도움이 될 것입니다.

경동맥 및 경정맥 삽입: 토끼 모델에서 정맥 내부 증식을 유도하는 기술

이 메서드는 transgene 토끼 경 동맥의 내 피에 소개 하는. 소개는 transgene의 transgene 제품 정상적인 동맥 또는 질병 모델에서의 생물학적 역할의 평가 허용 한다. 방법은은 DNA 규제 시퀀스의 활동을 측정 하기 위한도 유용 합니다.

Vivo에서 토끼 일반적인 경 동맥 내 피에 유전자 이동

본 프로토콜은 정맥 이식편을 사용하여 정맥 혈관 화 수술 후 정맥 심상 증식을 감쇠하는 전략을 개발하기 위한 동맥 혈압에 정맥을 복종시킴으로써 정맥 친혈증을 실험적으로 만드는 것을 목표로 합니다.

정맥 이식편을 사용하여 동맥 혈압하에서 인티맥 증식을 평가하는 재혈관 외과를 모방한 토끼 정맥 중개 모델

대동맥판막협착증(AVS)의 기저에 있는 병리학적 기전을 이해하고 치료적 개입의 효능을 평가하기 위해서는 적절한 동물 모델이 필요하다. 본 프로토콜은 생체 내에서 직접 풍선 손상을 통해 AVS 토끼 모델을 개발하기 위한 새로운 절차를 설명합니다.

직접적인 풍선 손상으로 인한 토끼 대동맥 판막 협착증 모델

여기에서는 커프 기법을 사용하여 조직 공학 혈관 이식편을 마우스 경동맥에 이식하기 위한 프로토콜을 제시하여 혈관 조직 재생 메커니즘을 조사하는 데 적합한 동물 모델을 제공합니다.

커프 기법을 통한 마우스 경동맥에 조직 공학 혈관 이식편 이식

증거가 축적되고, 그 허혈 (PC) - 뇌에 대한 비 손상 허혈성 도전 - 후속 손상 허혈성 모욕을 과도 전압 보호 기능을 부여. 우리는 C57BL6 / J 생쥐의 일시적인 국소 대뇌 허혈 (중간 대뇌 동맥 폐색, MCAO에 의한)에 초기 허혈 내성 (IT) 유도 컨디셔닝 자극으로 양측 경동맥 폐색 (BCCAO)를 설립했다.

초점 대뇌 국소 빈혈에 조기 허혈성 공차를 유도하기 위해 적절한 전처리 자극으로 양측 경동맥 동맥 폐색

마우스 경동맥 동맥 스텐트 시술의 모델이 설명되어 있습니다. 다른 유사한 방법에 비해,이 절차를 편리하게 다른 약물 용출 스텐트 재 협착의 분자 메커니즘 혈관 벽의 반응에서 공부 할 수있는 가능성을 제공, 매우 빠른, 간단하고 액세스 할 수 있습니다.

재 협착의 연구에 대한 경동맥 스텐트 시술의 쥐과 모형

우리는 성인 마우스에서 대뇌 정맥 고혈압 안정적인 모델을 생성하는 방법을 설명한다. 이 모델은 광범위 래트에서 설명되고 시험되었다. 마우스에서이 새로운 상대 유전자 변형 동물을 사용할 수있는 가능성을 열어하여 모델의 애플리케이션을 넓게.

성인 마우스 정맥 ​​고혈압 모델 : 외부 경정맥 정맥 문합에 경동맥.

학습하세요 토끼 경동맥 중재 이식 정맥 경에서의 튼튼한 트랜스진 발현 방법을 통해 혈관 이식 실패의 병인과 유전자 치료 전략을 연구하는 기법입니다.

일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 Transgene 식의 토끼 모델

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