Name: 혀 기질과 혀 편평 세포 암 종에서 생체 외에서 의 재구성의 제조 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: 배우세요 혀 세포외기질을 분리하여 미니 바이오리액터를 이용한 3차원 배양으로 혀 편평 세포 암종 모델을 재구성하는 방법입니다. 이 기법은 임상 병리학적 특성을 모방하여 구강암 연구에 활용됩니다.

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저자는 자연 과학 재단의 중국 국가 (31371390), 상태-첨단 개발 프로젝트 (2014AA020702)의 프로그램 및 광 과학 및 기술 (2016B030231001)의 프로그램에서 연구 보조금의 지원을 인정합니다.

모든 동물 작업 동물 복지 행위, 기관 지침에 따라 수행 되었고 기관 동물 관리 및 사용 위원회, 썬 얏-센 대학교에 의해 승인.
1입니다. 준비 편
<ol><li>자 궁 경부 전위에 의해 마우스를 실행 하 고 방언 무 균 수술가 위 핀셋을 사용 하 여 제거.</li>
	<li>3 분, 75% 에탄올에 방언 담가 다음 1.5 mL으로 각 혀를 넣어 10 mM 멸 균 인산 염의 1 mL Eppendorf (EP) 튜브 버퍼링 솔루션 (PBS). 참고: 다음의 모든 단계에서 PBS의 농도이 단계에서 농도와 동일.</li>
	<li>동결 해 동 하 여 세포를 세포: 1 h-80 ° C에서 EP 튜브에 혀를 동결 하 고 다음 3 사이클에 대 일 분 동안 실내 온도에 혀를 녹여.</li>
	<li>수술 봉합 수술 바늘을 사용 하 여의 조각에 각 혀를 로드 하 고 메 마른 은박지의 작은 조각으로 봉합의 끝을 포장. 무 균 조건에서 75% 에탄올을 포함 하는 3.5 cm 또는 6 cm 문화 접시에 작업을 수행 합니다. 참고: 외과 봉합의 각 작품의 적절 한 길이 약 20cm, 그리고 각 조각의 은박지의 적절 한 크기에 대해 0.3 cm2 (1 c m × 0.3 c m). 혀는 은박지 근처 로드 합니다.</li>
	<li>30 미 수행 무 균 조건에서이 작업에 대 한 살 균 PBS의 3 mL와 함께 각 혀 3.5 cm 또는 6 cm 문화 접시에 린스.</li>
	<li>씻어 초순와 방언: 90 µ g/mL의 최종 농도에 불 임 초순의 250 mL 넓은 입 병에 ampicilin를 추가. 방언을 저 어 bar가 포함 된 병에 넣습니다. 병 밖에 남아 있는 봉합의 일부와 병 뚜껑을 조입니다. 무 균 조건에서이 작업을 수행 합니다. 참고: 5 방언까지 놓일 수 있다 봉합의 twining 고려 같은 병에. 석 박 혀 떨어져 미 끄 러에서 방지 하기 위해 병에 봉합의 끝 이다. 혀는 병 안에 남아 있는 봉합의 길이 조정 하 여 2cm 높은 병의 하단에서 배치 되어야 합니다. 이 노트 1.8, 1.10, 1.12, 및 1.16 단계 이기도합니다.</li>
	<li>12 h에 대 한 자력에 병을 넣어.</li>
	<li>NaCl와 방언 세척: 살 균 1의 250 mL 넓은 입 병에 ampicilin를 추가 M NaCl 90 µ g/mL의 최종 농도에. 병에는 방언과 볶음 바를 이동 합니다. 병 밖에 남아 있는 봉합의 일부와 병 뚜껑을 조입니다. 무 균 조건에서이 작업을 수행 합니다.</li>
	<li>24 h에 대 한 자력에 병을 넣어.</li>
	<li>트라이 톤 X-100 여 세포 세포: 살 균 2%의 250 mL와 함께 넓은 입 병에 90 µ g/mL의 최종 농도에 ampicilin를 추가 PBS에 트라이 톤 X-100. 병에는 방언과 볶음 바를 이동 합니다. 병 밖에 남아 있는 봉합의 일부와 병 뚜껑을 조입니다. 무 균 조건에서이 작업을 수행 합니다.</li>
	<li>48 h에 대 한 자력에 병을 넣어.</li>
	<li>씻어 CaCl2/MgCl2방언: 90 µ g/mL의 최종 농도에 살 균 5 m m CaCl2/MgCl2 의 250 mL 넓은 입 병에 ampicilin를 추가. 병에는 방언과 볶음 바를 이동 합니다. 병 밖에 남아 있는 봉합의 일부와 병 뚜껑을 조입니다. 무 균 조건에서이 작업을 수행 합니다.</li>
	<li>24 h에 대 한 자력에 병을 넣어.</li>
	<li>소화 DNase에 의해: 행 크의의 1 mL 균형 소금물 (HBSS) 각 EP 튜브를 추가. 각각 300의 최종 농도에 DNase HBSS로 추가 µ M.에 각 EP 튜브는 튜브 외부 봉합 부분의 각 혀 이동. 무 균 조건에서이 작업을 수행 합니다. 참고: 이전 단계에서 병 안에 남아 있는 봉합의 일부도이 단계에서 EP 튜브 안에 남아 있는지 확인 하 고 이전 단계에서 병 밖에 남아 있는 봉합의 일부도이 단계에서 EP 튜브 밖에 남아 있다 다는 것을 확인 한다.</li>
	<li>24 h에 대 한 37 ° C에서 EP 튜브에 혀를 품 어.</li>
	<li>씻어 PBS 가진 방언: 90 µ g/mL의 최종 농도에 살 균 PBS의 250 mL 넓은 입 병에 ampicilin를 추가. 병에는 방언과 볶음 바를 이동 합니다. 병 밖에 남아 있는 봉합의 일부와 병 뚜껑을 조입니다. 무 균 조건에서이 작업을 수행 합니다.</li>
	<li>24 h에 대 한 자력에 병을 넣어.</li>
	<li>사용까지 준비 편 4 ° C에서 살 균 PBS에 저장 합니다.</li>
</ol>2. TSCC의 3 차원 (3D) 재구성
<ol><li>
정적 TSCC 모델 건설
	<ol>
<li>씨 1.0 x 106 단일 TSCC 셀 (Cal27) 3.5 c m 문화 접시에. Dulbecco의의 3 mL 수정 독수리의 매체/F12 (DF12) 포함 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 90 µ g/mL ampicilin, 및 90 µ g/mL 대 추가 합니다.</li>
		<li>2 ~ 3 일 동안 37 ° C에서 Cal27 셀 문화. 셀 60% 이상 커버 있는지 확인 접시 바닥의 지역.</li>
		<li>문화 접시에 Cal27 단층에 가장을 로드 합니다.</li>
		<li>28 일 동안 37 ° C에서 CO2 인큐베이터에 접시를 넣어.</li>
		<li>셀 문화 과정 매일 문화 매체를 새로 고칩니다. 인큐베이터에서 CO2 농도 5% 이다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
흔들된 TSCC 모델 건설
	<ol>
<li>
성가 냈다 minibioreactor의 준비
		<ol>
<li>10 mL 주사기에서 플런저를 꺼내.</li>
			<li>막대의 낮은 터미널 근처 구멍 (직경 1 ㎝)를 파고 및 구멍에 저 어 바 로드.</li>
			<li>플라스틱 넓은 입 병의 병 뚜껑의 중앙에 구멍 (직경 0.5 c m)를 파고 및 뚜껑을 통해 피스톤 막대를 넣어.</li>
			<li>50 mL 원심 분리기 튜브의 절반을 잘라 고 병 뚜껑의 외부 측면에 용접.</li>
			<li>fishhooks에 묶여있다는 낚시 라인 막대 여 fishhooks 막대를 연결 합니다. 참고: 4 fishhooks까지 장착할 수 막대에.</li>
			<li>압력솥 사용 하기 전에 스스로 만든된 복잡 한입니다. 참고: 플라스틱 넓은 입 병 압력솥 하지를 않습니다. 새로운 살 균 플라스틱 넓은 입 병을 사용 하 여 세포를 배양 하는 동안.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
동적 세포 배양
	<ol>
<li>씨 1.0 x 106 단일 Cal27 셀 성가 minibioreactor에. 10 %FBS, 90 µ g/mL ampicilin, 및 90 µ g/mL 대 포함 된 DF12 매체의 150 mL를 추가 합니다.</li>
		<li>막대에 연결 된 fishhooks를 사용 하 여 minibioreactor에 가장을 로드 합니다.</li>
		<li>병 뚜껑을 강화 하 고는 자력에 minibioreactor를 넣어. 7 ~ 14 일 동안 37 ° C에서 CO2 배양 기에서 200 rpm에서 minibioreactor를 활성화 합니다. 참고: CO2 배양 기에서 CO2 의 농도 5%.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>Sullivan, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+methods+of+porcine+kidneys+for+whole+organ+engineering+using+a+high-throughput+system%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Decellularization methods of porcine kidneys for whole organ engineering using a high-throughput system.</a> Biomaterials. 33, 7756-7764 (2012).</li>
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<li>Nakayama, K. H., Batchelder, C. A., Lee, C. I., Tarantal, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularized+rhesus+monkey+kidney+as+a+three-dimensional+scaffold+for+renal+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Pt+A%22%5BJournal%5D)">Decellularized rhesus monkey kidney as a three-dimensional scaffold for renal tissue engineering.</a> Tissue Eng. Pt A. 16, 2207-2216 (2010).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

Decellularized ECM 제조에 잘 설립 프로토콜 조직에서 세포 구성 요소를 제거 하는 동안 네이티브 ECM 구성 유지 한다 거의 완전 하 게21. 현재 보고 된 decellularization 프로토콜 대류 수송에 의해 세포 물질을 제거 하는 맥 관 구조를 통해 관류를 요구 하는에 불구 하 고 기계적인 동요 채택 되었다 여기, 전통적인 간단 하 고 저렴 한 방법22 로 알려진 , 23 , 24 , 25 , 26. 또한, 이후 혀 lingualis에서 풍부 하 고 몇 가지 큰 혈관 혈관에는,이 프로토콜은 위에서 설명한 다른 프로토콜 보다 혀 조직에 더 적합.
<p class="jov...

혀는 deglutition, 조음, 시음 등 다양 한 중요 한 기능이 있다. 따라서, 혀 기능 장애 환자 들의 삶의 질1에 큰 영향을가지고. 구강에서 가장 일반적인 악성 종양은 혀 편평 세포 암 종 (TSCC), 일반적으로 알코올 음료 또는 담배2를 연기 하는 사람에서 생기는.
최근 몇 년 동안, 작은 진행 TSCC에 기초 연구에 달성 되었습니다. 효율적인 생체 외에서 연구의 부족 모델 가장 큰 문제 중 하나 남아 있다. 따라서, 기질 (ECM) 잠재적인 솔루션으로 밖으로 변합니다. ECM 고도로 조직된 매트릭스 구성 요소 구성 하는 복잡 한 네트워크 프레임 이기 때문에, 비 계 재료는 ECM 같은 구조와 구성 암 연구에 대 한 능력이 될 것 이다. Decellularized ECM는 같은 기원에 생체 외에서ECM의 가장 중요 한 이점을 밝혀에서 셀에 대 한 완벽 하 게 틈새를 제공할 수 있습니다.
ECM 세제와 효소를 사용 하 여 decellularization 통해 조직에서 제거 되는 세포 구성 성분으로 유지 될 수 있습니다. Decellularized 매트릭스의 콜라겐, fibronectin, 및 laminin를 포함 하 여 다양 한 ECM 구성 요소, 배양된 세포 생존, 확산, 그리고 셀3의 홍보에 대 한 기본-조직-같은 microenvironment을 제공 합니다. 또한,이 식 위한 immunogenicity ECM에 세포 구성 성분의 부재와 함께 최소한의 수준으로 줄일 수 있습니다.
지금까지, decellularized ECM에 대 한 제작 방법은 다른 조직 및 장기 심장4,5,,67년 간8,9,10 등에서 시도 되었습니다. ,11, 폐12,13,14,15,,1617및 신장18,19 , 그러나 20., 관련 연구 우리의 지식 최선 다 해 혀에서 비슷한 작품에서 찾을 수 있다.
이 연구에서는 decellularized 혀 기질 (가장) 물리, 화학, 및 효소 치료의 일련에 의해 효율적으로 그리고 싸게 조작 했다. 다음은 가장 TSCC 동작 및 개발에 대 한 적절 한 시뮬레이션을 보여주는 TSCC에서 생체 외에서정리에 사용 되었다. 가장 좋은 생체 적합성으로 가장 TSCC 연구3큰 잠재력을 가질 수 있음을 나타내는 조직-특정 틈새에 셀 가이드 수 있다. 여기에 표시 된 프로토콜 연구자 중 병 또는 TSCC의 임상 치료에 대 한 선택을 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>C57-BL/6J 마우스</td><td>Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>에탄올</td><td>광저우 화학 시약 공장</td><td>HB15-GR-2.5L</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501218</td><td></td></tr><tr><td>염화칼</td>륨 <td>Sangon Biotech</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>이염기성 인산나트륨</td><td>광저우 화학 시약 공장</td><td>BE14-GR-500G</td><td></td></tr><tr><td>인산칼륨 모노베이직&nbsp;</td><td>Sangon Biotech</td><td>A501211</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL EP 튜브</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-A</td><td></td></tr><tr><td>초저온 냉동고&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.5cm 세포 배양 접시</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>153066</td><td></td></tr><tr><td>6cm 세포 배양 접시</td><td>Greiner</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900502</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>449164</td><td></td></tr><tr><td>DNase</td><td>시그마-알드리치</td><td>D5025</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 황산염</td><td>산곤 생명공학</td><td>A601988</td><td></td></tr><tr><td>포도당</td><td>시그마-알드리치</td><td>158968</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>암피실린</td><td>시그마-알드리치</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>카나마이신</td><td>시그마-알드리치</td><td>PHR1487</td><td></td></tr><tr><td>외과용 봉합</td>사 <td>Shanghai Jinhuan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>250 mL Wide mouth bottle</td><td>SHUNIU</td><td>1407</td><td></td></tr><tr><td>Magnetic stirrer</td><td>AS ONE</td><td>1-4602-32</td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>SHEL LAB</td><td>SCO5A</td><td></td></tr><tr><td>10 mL 주사기</td><td>Hunan Pingan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원심분리기 튜브</td><td>Greiner</td><td>227270</td><td></td></tr><tr><td>Cal27 세포</td><td>중국과학원, 상하이 세포은행</td><td></td><td>혀 편평세포 암종 세포주</td></tr><tr><td>U2OS 세포</td><td>중국과학원, 상하이 세포은행</td><td></td><td>인간 골육종 세포주</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>시그마-알드리치</td><td>D0547</td><td></td></tr><tr><td>피루브산나트륨</td><td>시그마-알드리치</td><td>P5280</td><td></td></tr><tr><td>헤페스 유리산</td><td>BBI</td><td></td><td></td>A600264</tr><tr><td>FBS</td><td>하이클론</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>4 &deg; C 냉장고</td><td>하이얼</td><td></td><td></td></tr><tr><td>정수기</td><td>ELGA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>혈구계</td><td>BLAU</td><td>717805</td><td></td></tr></tbody></table>

혀 기질과 혀 편평 세포 암 종에서 생체 외에서 의 재구성의 제조

Fabrication of Tongue Extracellular Matrix and Reconstitution of Tongue Squamous Cell Carcinoma In Vitro

혀 편평 세포 암 (TSCC) 시험관에대 한 효과적이 고 현실적인 모델을 생성 하기 위해 방법은 생산 decellularized 혀 기질 (가장) TSCC 건설 기능 건설 기계를 제공 하 게 만들어졌습니다. 가장 세포 성장, 감 별 법 및 셀 마이그레이션에 대 한 생체 외에서 틈새를 제공합니다. 원시 세포 외 기질 (ECM) 및 decellularized 매트릭스에 유지 하는 생 화 확 적인 작곡의 마이크로 구조 정박 하는 셀에 대 한 조직의 특정 틈새를 제공 합니다. 가장의 제조 deoxyribonuclease (DNase) 소화 유기 또는 무기 전처리의 심각한 동반에 의해 실현 될 수 있다. 이 프로토콜은 운영 하 게 쉬운 하 고는 decellularization에 대 한 높은 효율을 보장. 가장 TSCC 모델의 건설을 가능 하 게 TSCC 셀 정적 또는 흔들 문화 조건에 대 한 유리한 cytocompatibility를 보여주었다. 스스로 만든된 생물 세포 배양에 대 한 영구 촉발된 조건 또한 사용 되었다. 가장을 사용 하 여 복원된 TSCC 보여주었다 임상 TSCC histopathology, 닮은 속성과 특성 TSCC 연구 잠재력을 제안.

이 프로토콜의 가장 준비에 대 한 효율적이 고 적절 한 것으로 판명. 가장 완벽 한 decellularization 국어 조직 비교 했다. Decellularization의 효능 hematoxylin-오신 (그) (그림 1A-B) 얼룩에 의해 확인 되었다. 그 결과 얼룩 가장 (그림 1B)에서 핵 얼룩의 완전 한 실종을 밝혔다. 또한, 이전 작품에서 DNA 콘텐츠 정량화가 보여주었다 DNA 가장3에서 거의 완전히 제거 되었다. 이 프로토콜도 셀 구성 (그림 1B)를 제거 하는 동안 조직의 무결성에 드문 손상을 보여주었다.
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메서드는 효율적인 decellularization와 혀 세포 외 매트릭스 (가장)의 준비에 대 한 여기 표시 됩니다. 가장 정적 또는 흔들 문화 조건 하에서 혀 편평 세포 암 종 (TSCC) 모델의 재구성 기능 건설 기계로 사용할 수 있습니다.

In order to construct an effective and realistic model for tongue squamous cell carcinoma (TSCC) in vitro, the methods were created to produce ...

이 방법은 체외에서 적절한 T-보조 모델을 구축하는 방법과 같은 구강암 연구 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 재구성된 TSCC가 임상 TSCC 조직병리학과 매우 유사한 종양 특성을 발현한다는 것입니다. 이 방법에 대한 아이디어를 처음 떠올렸을 때 2-D 배양 TSCC 세포가 TSCC의 기본 표현형을 제대로 나타내지 않는다는 것을 깨달았을 때.또한, 암 생존 회피 및 분화를 위한 세포외 기질의 중요성을 깨달았습니다. 미니 생물반응기를 사용한 혀 세포 외 기질의 준비 및 3D 배양은 단어만으로는 배우기 어렵고 설명을 위해 보이는 것이 가장 좋기 때문에 이 방법의 시각적 시연은 매우 중요합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 안락사된 쥐에서 혀를 분리한 후 조직을 75% 에탄올에 3분 동안 담그십시오.그런 다음 각 혀를 1.5mL 마이크로 원심분리기 튜브와 1mL의 10milliMolar 멸균 PBS로 옮깁니다. 세포 용해를 수행하려면 혀를 섭씨 영하 80도에서 1시간 동안 얼립니다. 그런 다음 실온에서 45분 동안 조직을 해동합니다.동결/해동을 두 번 더 반복합니다. 다음으로, 75%에탄올이 함유된 3 1/2cm 또는 6cm 배양 접시에 수술용 바늘을 사용하여 각 혀를 수술용 봉합사 조각에 로드합니다. 그리고 작은 멸균 주석 호일 조각으로 봉합사 끝을 감쌉니다.3 1/2cm 또는 6cm 배양 접시에 PBS 3ml를 사용하여 각 혀를 30초 동안 헹굽니다. 그런 다음 입이 넓은 병에 250ml의 멸균 초순수에 암피실린 밀리리터당 90마이크로그램을 준비하고 교반 막대를 추가합니다. 바닥에서 약 2cm 떨어질 때까지 5개의 혀를 병 안으로 내리고 봉합사의 일부가 병 밖에 남아 있도록 뚜껑을 조입니다.병을 자석 교반기에 12시간 동안 올려 놓습니다. 그런 다음 배양 후 멸균 1 몰 염화나트륨에 암피실린 밀리리터당 250 마이크로그램 90 밀리리터를 준비합니다. 혀와 저어주는 바를 병에 옮기고 뚜껑을 조입니다.자석 교반기에 병을 24시간 동안 올려 놓습니다. 세포 용해를 수행하려면 PBS에서 250ml의 멸균 2% TritonX-100에 암피실린 밀리리터당 90마이크로그램을 준비합니다. 혀와 젓는 막대를 병에 옮기고 뚜껑을 조입니다.그런 다음 48시간 동안 병을 저어줍니다. 암피실린으로 염화칼슘과 염화마그네슘을 준비한 후 티슈와 교반 막대를 병에 넣고 24시간 동안 저어줍니다. 각 혀

fabrication-tongue-extracellular-matrix-reconstitution-tongue

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

표시 셀 다중 광자 현미경을 통해 혀를 이내 구강 암 종양 침략의 양적 모니터링 마우스 모델을 생성에 관련된 기술의 포괄적인 개요는 제공됩니다. 이 시스템은 침입 방지 화합물의 분자 평가 및 약물 효능을위한 유용한 플랫폼이 될 수 있습니다.

구강 편평 세포 암종의 Orthotopic 마우스 모델에서 종양 세포 침략의 다중 광자 이미징

이 비디오에서는 쥐의 혀에서 상피 세포를 분리하는 방법에 대해 설명합니다. 이러한 세포는 세포 콜로니를 발생시키기 위해 추가로 배양될 수 있습니다.

쥐 혀 상피 세포의 분리 및 배양: 마우스 모델에서 혀 상피 세포를 분리하고 배양하는 절차

이 비디오는 채취한 혀를 일련의 물리적, 화학적, 효소적 처리에 노출시키는 탈세포화 방법을 사용하여 쥐의 혀 세포 외 기질을 준비하는 방법을 보여줍니다. 그 결과 생성된 TEM 골격은 고유한 세포외 기질 구성을 유지하여 세포 구성 요소를 제거합니다.

생쥐 모델에서 세포외 기질의 제작: 쥐 혀에서 탈세포화된 혀 세포외 기질을 준비하는 효과적인 절차

조직 공학 섬유 아세포 유래 기본 행렬은 상피 세포의 증식과 분화를 지원하는 기질 기판을 생성하는 새로운 도구입니다. 이곳에서 종양 세포 생물학에 다른 간질 세포 유형의 영향을 평가하기 위하여이 방법을 적용하는 프로토콜이 제시된다.

암 세포의 침략에 응용 프로그램을 사용하여 종양의 기질 미시의 조직 공학

이 원고는 생산, 특성화 및 일반 차 인간의 식도 섬유 아세포와 드 cellularized 돼지 비계 내에서 시드 편평 상피 세포로부터 제조 된 조직 설계 3D 식도 구조의 사용 가능성에 대해 설명합니다. 결과 정상적인 인간 식도 유사한 성숙한 상피 성층의 형성을 입증한다.

3 차원 조직 공학 인간의 식도 점막 모델의 제조, 특성 및 사용 가능성

두경부암 환자에서 돌연변이된 특정 유전자를 가진 뮤린 모델의 개발은 신생물의 이해를 위해 요구된다. 여기서, 우리는 특정 게놈 변경을 가진 뮤린 HNC 세포주를 생성하기 위하여 아데노 관련 바이러스 Cas9 시스템을 사용하여 1 차적인 뮤린 혀 세포의 시험관 내 형형변환을 위한 프로토콜을 제시한다.

아데노 관련 바이러스-Cas9 시스템을 사용하여 유전자 조작 된 뮤린 머리와 목 암 세포라인의 시험관 내 설립

우리는 배아와 성인 마우스 혀의 상피 및 중간/ 결합 조직에서 대량의 고품질 단일 세포를 해리시키는 일반화 프로토콜을 개발했습니다.

배아의 날 12.5 및 8 주 된 마우스의 혀 상피 및 메센키메 / 결합 조직에서 세포 해리

이 프로토콜은 성인 마우스의 후미 유두로부터 분리된 맛 줄기 세포로부터 추출한 언어 오르가노이드를 배양하고 가공하는 방법을 제시한다.

성인 마우스 맛 줄기 세포에서 파생 된 언어 오르가노이드의 생성 및 배양

이 프로토콜은 화학적 발암을 통해 유도된 정상, 전종양 및 편평 세포 암종 병변을 나타내는 쥐 구강-식도 3D 오가노이드를 생성하고 특성화하는 주요 단계를 설명합니다.

3D 오가노이드에서 구강-식도 편평 세포 암종 모델링

구강 내에 형성된 구강 편평세포암 종양을 외과적으로 절제하는 독특한 방법을 여기에서 소개합니다.

구강 편평세포암의 마우스 전임상 모델을 위한 번역 관련 종양 절제 모델

배우세요 혀 세포외기질을 분리하여 미니 바이오리액터를 이용한 3차원 배양으로 혀 편평 세포 암종 모델을 재구성하는 방법입니다. 이 기법은 임상 병리학적 특성을 모방하여 구강암 연구에 활용됩니다.

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