Name: 인슐린 모방 화합물 테스트용 비켜에서 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 9 s
Description: 배우세요 수정된 병아리 배아 모델을 사용하여 인슐린 모방 화합물을 평가하는 방법을 당뇨병 연구에 활용하세요. 이 기술은 살아있는 유기체에서 혈당 감소 효과를 효율적으로 테스트할 수 있어 천연 추출물의 안전성과 효능을 신속하게 확인할 수 있습니다.

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이 작품은 의학 (TIMed 센터)에서 기술 혁신에 대 한 오스트리아 연구 추진 기구 (FFG; 프로젝트 번호 850681), 대학교의 응용 과학 위 오스트리아 기본 기금 이니셔티브 (프로젝트 GlucoSTAR)와 센터에 의해 투자 되었다 그 기본 어퍼 오스트리아 지방에 의해 자금을 받습니다.

지시문 2010/63/유럽에 따르면 배아 발달의 첫번째 2/3 동안 부 화 되지 않은 조류 배아 실험 윤리 위원회에 의해 허가 필요 하지 않습니다.
1. 저장 및 계란의 번 식
<ol><li>로컬 개종에서 수정 된 암 탉 계란을 (테이블의 재료)를 가져옵니다. 참고: 계란 저장할 수 있습니다 14 ° c 습도 분위기에서 실험에 대 한 사용 하기 전에 누워 후 최대 10 일 동안.</li>
	<li>10에 대 한 40-60%의 평균 습도와 38 ° C에 계란을 품 어 또는 인큐베이터에서 11 일을 지속적으로 계란을 화나게.</li>
</ol>2입니다. 계란의 선택
<ol><li>11 일의 부 화 후 수정에 대 한 계란을 확인 하십시오. Candling 라이트를 사용 하 여이 단계에 대 한. inkpad에 candling 램프의 프린지와 계란의 뾰족한 쪽을 촛불.</li>
	<li>공기 방광을 식별 하려면 계란 정상 밝기에 차이를 확인 합니다. 참고: 때 계란 candled는 배 젖은 어두운 공기 방광 라운드, 더 투명 한 영역으로 나타납니다.</li>
	<li>공기 방광의 탐지, 후 이전에 적용 된 잉크와 계란에 대 한 약간 램프를 눌러 위치를 표시 합니다.</li>
	<li>배 젖과 공기 방광 사이의 밝기에 차이가 표시 되지 않습니다이 단계에서 비 수정 된 계란을 제외 합니다.</li>
</ol>3입니다. 물질의 주입
<ol><li>행 크의 균형된 소금물 (HBSS) 버퍼에 원하는 농도에서 물질을 희석 하 여 (예를 들어, 허브 추출 물 또는 인슐린)의 물질을 준비 합니다. 예를 들어 3.3 U/mL의 상용 인슐린 아날로그 HBSS에서.</li>
	<li>선택 된 화합물의 응용 프로그램에 대 한 신중 하 게 공기 방광의 표시 영역에서 핀셋의 뾰족한 쌍으로 달걀 껍질 펙. 주사기의 바늘의 직경 보다 큰 구멍을 형성 하지 않는다. 주사는 주사기를 통해 pecked 영역으로 관심의 물질을 포함 하는 버퍼 솔루션 (300 µ L). 참고: 살 균, 1 ml 일회용 주사기, 피 펫 팁, 및 용기를 사용 합니다. 착용 장갑 및 실험에 대 한 실험실 외 투.</li>
	<li>물질의 혈액 포도 당 감소 효과 확인 하려면 장소 계란 60, 120, 180 분, 인큐베이터에 다시 각각. 기저 혈액 포도 당 수치를 확인 하려면 적어도 10-15 비 처리 제어 계란을 포함 합니다.</li>
</ol>4. 독성 테스트
<ol><li>신청 후 24 시간에 대 한 선택 된 화합물의, 적어도 30에 대 한 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 버퍼 (전체 껍질 막 커버 하기에 충분) 껍질 막 equilibrate s.</li>
	<li>멀리 그것을 붓는 의해 초과 PBS 버퍼를 제거 합니다.</li>
	<li>뾰족한 핀셋의 쌍을 신중 하 게 달걀 껍질 막 해 내.</li>
	<li>혈관 병 변 확인 고 병아리 태아의 활력 (예를들면, 운동)를 확인 합니다. 참고: 독성 초본 추출의 신청 후 중요 한 비 배아 대 중요 한의 비교를 위해 그림 1 을 참조 하십시오.</li>
</ol>5입니다. 혈액 포도 당 가치 측정
<ol><li>해당 시간 점에서 신중 하 게 공기 방광 위에 달걀 껍질을 제거 하 고 PBS 버퍼 (전체 껍질 막 커버 하기에 충분) 껍질 막 equilibrate.</li>
	<li>멀리 그것을 붓는 의해 초과 PBS 버퍼를 제거 합니다.</li>
	<li>조심 스럽게 핀셋의 뾰족한 쌍 껍질 막 해 내.</li>
	<li>잘라 고 적합 한 혈관에 좋은 액세스할 수 있도록 하는 마이크로-시저와 chorioallantoic 멤브레인을 제거 합니다. 막 컷 2-3 cm 이상. 태아의 원치 않는 혈액 손실을 방지 하기 위해 자체 막에 있는 어떤 큰 배를 잘라 하지 마십시오.</li>
	<li>태아의 복 부에서 발생 하는 대형 선박을 찾습니다. 닫힌된 마이크로 시저와 배 젖에서이 배를 들어올린 플라스틱 산도 스트립에 배치. 마이크로 시저와 함께 개최 되는 선박에서 산도 스트립을 이동 하 고 다시 당겨 마이크로 시저 멀리 신중 하 게.</li>
	<li>다음 단계에서 혈액의 희석을 피하기 위해 피 펫과 chorioallantoic 막 아래 액체의 1-2 mL를 제거 합니다. 건조 선박 및 필터 종이로 산도 스트립 전에 그릇 잘라.</li>
	<li>1 개의 측에 신중 하 게 마이크로 시저와 함께 혈관을 잘라. 자르지 않는다 선박을 통해 완전히. 참고: 선박 약 1 m m 두께입니다. 스트립에서 풀 수 있습니다 하 고 아무 혈액 컬렉션은 가능한 선박을 통해 완전히 절단 하지 않도록 그릇의 절반 이상을 잘라 하지 마십시오.</li>
	<li>피 펫을 사용 하 여 pH 지구에 새 피를 수집 합니다. 10 microliters 혈액의 포도 당 수준을 혈액 포도 당 미터를 사용 하 여 결정 해야 합니다.</li>
</ol>6. 통계 평가
<ol><li>시간 포인트 당 10 개인 계란의 평균 값을 계산 하 고 컨트롤 계란 (계란 비 또는 버퍼-대우) 중 하나에 이러한 값을 정상화.</li>
	<li>그 후, 감소의 백분율을 결정 합니다. 또한, 인슐린을 사용 하 여 긍정적인 통제로. 참고: 각 실험에 세 번 이상 반복 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Defronzo, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Banting+Lecture.+From+the+triumvirate+to+the+ominous+octet%3A+a+new+paradigm+for+the+treatment+of+type+2+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Banting Lecture. From the triumvirate to the ominous octet: a new paradigm for the treatment of type 2 diabetes mellitus.</a> Diabetes. 58 (4), 773-795 (2009).</li>
<li>American_Diabetes_Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+classification+of+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and classification of diabetes mellitus.</a> Diabetes Care. 37, S81-S90 (2014).</li>
<li>Han Cho, N., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHan+Cho%2C+N+%22IDF+Diabetes+Atlas%22">IDF Diabetes Atlas</a>. Cavan, D. 7, International Diabetes Federation. (2015).</li>
<li>Bailey, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Individualized+glycaemic+targets+and+pharmacotherapy+in+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+%26+vascular+disease+research%22%5BJournal%5D)">Individualized glycaemic targets and pharmacotherapy in type 2 diabetes.</a> Diabetes & vascular disease research. 10 (5), 397-409 (2013).</li>
<li>Maruthur, N. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27088241">Diabetes Medications as Monotherapy or Metformin-Based Combination Therapy for Type 2 Diabetes: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Annals of internal medicine. 164 (11), 740-751 (2016).</li>
<li>Aleman-Gonzalez-Duhart, D., Tamay-Cach, F., Alvarez-Almazan, S., Mendieta-Wejebe, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+Advances+in+the+Biochemical+and+Physiological+Aspects+of+the+Treatment+of+Type+2+Diabetes+Mellitus+with+Thiazolidinediones%5BTitle%5D)+AND+%22PPAR+research%22%5BJournal%5D)">Current Advances in the Biochemical and Physiological Aspects of the Treatment of Type 2 Diabetes Mellitus with Thiazolidinediones.</a> PPAR research. , 7614270(2016).</li>
<li>Cohen, F. J., Neslusan, C. A., Conklin, J. E., Song, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+antihyperglycemic+prescribing+trends+for+US+privately+insured+patients+with+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+care%22%5BJournal%5D)">Recent antihyperglycemic prescribing trends for US privately insured patients with type 2 diabetes.</a> Diabetes care. 26 (6), 1847-1851 (2003).</li>
<li>Desai, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+medication+initiation+in+newly+diagnosed+diabetes+mellitus%3A+quality+and+cost+implications%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Patterns of medication initiation in newly diagnosed diabetes mellitus: quality and cost implications.</a> The American journal of medicine. 125 (3), e301-e307 (2012).</li>
<li>Martel, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-obesogenic+and+antidiabetic+effects+of+plants+and+mushrooms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Anti-obesogenic and antidiabetic effects of plants and mushrooms.</a> Nature reviews. Endocrinology. , (2016).</li>
<li>Lanzerstorfer, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+insulin+mimetic+drugs+by+quantitative+total+internal+reflection+fluorescence+%28TIRF%29+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Identification of novel insulin mimetic drugs by quantitative total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy.</a> British journal of pharmacology. 171 (23), 5237-5251 (2014).</li>
<li>Onur, S., Stöckmann, H., Zenthoefer, M., Piker, L., Döring, F. <a target="_blank" href="http://www.ccsenet.org/journal/index.php/jfr/article/view/27642">The Plant Extract Collection Kiel in Schleswig-Holstein (PECKISH) Is an Open Access Screening Library.</a> Journal of Food Research. 2 (4), (2013).</li>
<li>Haselgrubler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gluc-HET%2C+a+complementary+chick+embryo+model+for+the+characterization+of+antidiabetic+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Gluc-HET, a complementary chick embryo model for the characterization of antidiabetic compounds.</a> PloS one. 12 (8), e0182788(2017).</li>
<li>Stadlbauer, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomolecular+Characterization+of+Putative+Antidiabetic+Herbal+Extracts%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Biomolecular Characterization of Putative Antidiabetic Herbal Extracts.</a> PloS one. 11 (1), e0148109(2016).</li>
<li>Greywe, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applicability+and+robustness+of+the+hen%27s+egg+test+for+analysis+of+micronucleus+induction+%28HET-MN%29%3A+results+from+an+inter-laboratory+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+research%22%5BJournal%5D)">Applicability and robustness of the hen's egg test for analysis of micronucleus induction (HET-MN): results from an inter-laboratory trial.</a> Mutation research. 747 (1), 118-134 (2012).</li>
<li>Manakova, E., Hubickova, L., Kostalova, J., Zemanova, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryotoxicity+of+mirtazapine%3A+a+study+using+Chick+Embryotoxicity+Screening+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+endocrinology+letters%22%5BJournal%5D)">Embryotoxicity of mirtazapine: a study using Chick Embryotoxicity Screening Test.</a> Neuro endocrinology letters. 31, Suppl 2. 8-10 (2010).</li>
<li>Ribatti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+chorioallantoic+membrane+as+a+useful+tool+to+study+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22International+review+of+cell+and+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Chick embryo chorioallantoic membrane as a useful tool to study angiogenesis.</a> International review of cell and molecular biology. 270, 181-224 (2008).</li>
<li>Yoshiyama, Y., Sugiyama, T., Kanke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+diabetes+model+in+chick+embryos+treated+with+streptozotocin%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+%26+pharmaceutical+bulletin%22%5BJournal%5D)">Experimental diabetes model in chick embryos treated with streptozotocin.</a> Biological & pharmaceutical bulletin. 28 (10), 1986-1988 (2005).</li>
<li>Wolf, T., Niehaus-Rolf, C., Luepke, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+new+methodological+aspects+of+the+hen%27s+egg+test+for+micronucleus+induction+%28HET-MN%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mutation+research%22%5BJournal%5D)">Some new methodological aspects of the hen's egg test for micronucleus induction (HET-MN).</a> Mutation research. 514 (1-2), 59-76 (2002).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

HET-캠 분석 결과 업계12동물 테스트를 널리 대체 테스트 시스템입니다. 여기 설명 에 비켜 시스템 HET 캠 분석 결과의 수정된 된 버전을 나타냅니다. 그것의 원래의 형태에 (서) 동안 한 캠 실험 화합물과 배합의 자극적 속성 또는 신생14,,1516의 분석 연구를 수행, 우리가 테스트 접근 방식에 적응 해야 상 상속 인슐린 모방 특성12화합물. 지시문 2010/63/유럽에 따르면 배아 발달의 첫번째 2/3 동안 부 화 되지 않은 조류 배아 실험 필요 하지 않습니다 윤리 위원회에 의해 허가 이후 이러한 실험 동물 실험으로 간주 되지 않습니다. 최근 연구 특성화 GLUT4 전-기반 기본 화면10에서 혈액 포도 당 수준을 줄이기 위해 확인 되었습니다 선택 된 초본 추출 물의 효능을 비켜에서 시스템의 적합성을 입증 했다는 인슐린12,13의 부재. 비켜에 시스템의 좋은 성능에 대 한 중요 한 포인트는: 첫째, 수정 된 알을 제공 신뢰할 수 개종. Lohmann 고전적인 갈색 닭 품종의 좋은 선택입니다. 둘째, 독성의 구현 테스트 해야 할 조사 복합 요구의 독성 효과 제외 하. 또한, 혈액 컬렉션에 대 한 적합 한 혈관의 준비는 중요 하다. 그것은이 혈액의 비 바람직 손실로 이어질 수 자체, chorioallantoic 막에 큰 혈관의 절단을 피하기 위해 중요 하다. 또한, 전에 배 산도 스트립에 절단, 그것은 함께 수 수집 된 혈액의 희석을 방지 하기 위해 필터 종이 사용 하 여 건조. 마지막으로, 충분 한 수의 실험은 중요 한 것 처럼 보인다. 각 시간 점과 각 실험의 3 겹 반복에 대 한 최소 10 계란을 사용 하는 것이 좋습니다.
당연히,이 비켜에서 방법의 몇 가지 제한이 있습니다. 물질 달걀 껍질 막을 통해 흡수 하는 chorioallantoic 막과 긴밀 한 접촉에와 서 때까지 최대 30 분 소요, 이후 적용 된 화합물에는 태아의 급속 한 응답을 계량 수는. 또한, 일부 화합물 chorioallantoic 막에 있는 혈관의 병 변에서 자주 결과 적용된 농도에서 독성이 있을 수 있습니다. 따라서, 세포 독성 약 24 시간 동안 화합물의 장기 외피를 기반으로 테스트 합리적인 나타납니다. 마지막으로, 우리는 화합물의 응용 프로그램에 사용 되는 버퍼 시스템 분석 결과의 성능에 큰 영향을 발견. 12 현재, HBSS 버퍼 사용 됩니다 그것은 태아의 혈액 포도 당 수준에 작은 효과가 발생 하기 때문에.
미래 응용 프로그램, HBSS 대신 추가 버퍼 시스템 테스트 수 있습니다. 또한, 콜레스테롤, 중성 지방 이나 단백질 같은 추가 혈액 매개 변수에 초본 추출 물의 영향 매력적인 질문을 될 수 있습니다.
우리의 새로운 에 비켜 시스템 동물 실험의 필요성 없이 살아있는 유기 체에서 인슐린 모방 특성을 가진 물질을 테스트 하는 유망 하 고 중요 한 도구입니다. 따라서, 그것은 생체 외에서 그리고 vivo에서 접근 사이 간격을 채웁니다. 기존에 비켜 모델 시스템17 에 비해 하루에 10 또는 11 보육의 배아를 사용 하는 우리가 streptozotocin (STZ) 처리에 의해 당뇨병을 유도 하기 위해 필요가 없습니다입니다. 이 단계에서 인슐린 생산 시작 되지 않은, 하지만 배아는 이미 인슐린 과민 한. 또한, 윤리 위원회에 의해 수 있습니다 필요한 배아 14-17 일을 세는 사용된17입니다. 또한, 대체 전략18에 비해, 복합 응용 프로그램 여기에 설명 된 대로 덜 유해 하 고 힘 드는, 실험을 통해 넣어 속도 증가.
함께,이 비켜 찍은 접근 인슐린 모방 물질의 혈액 감소 효과 살아있는 유기 체에서 테스트 하는 경우 매력적인 시스템입니다.

당뇨병 혈당이 특징인 대사 질환 이며 인슐린 분 비 또는 인슐린 작업1에서 결함에 의해 발생 합니다. 모든 당뇨병 케이스의 90 %는 카테고리 타입-2 당뇨병 mellitus (T2DM), 인슐린 저항 및 주로 인슐린 결핍2개인 설명 하는 곳. 여러 가지 요인, overnutrition, 노화, 및 육체적 인 비활동에 관련 된 특히 그들의 라이프 스타일에 변화를 포함 하 여, T2DM의 글로벌 발생률을 증가 알려져 있습니다. 약 400 백만 명이 당뇨병 mellitus 국제 당뇨병 연맹 (IDF)에 따르면 전세계 있다. 이 번호는 다음 20 년3내에서 600 백만 도달 예정입니다.
혈당 및 인슐린 저항, 고혈압, dyslipidemia, 포도 당 옹 졸, 관상 동맥 심장 질환, 뇌 혈관 질환 등으로 인 한 당뇨 합병증은 현저 하 게 감소 된 수명 및 품질4이어질. 영향을 받는 개인 필요한 포도 당을 낮추는 pharmacotherapy; 그러나, metformin5 같은 약물의 사용은 종종 극적인 부작용6,,78연관 된다. 따라서, 더 안전한, 널리 사용할 수 있으며 저렴 한 antidiabetic 접근 필요 하다.
다른 초본 화합물, 추출 물, 식물, 그리고 영양 보충 식품 기능 인슐린 모방 속성에 다양 한 세포 기능을 조절 하 여 관찰 되었습니다. 중요 한 기능은 근육에서 포도 당 및 지방 조직으로 알려진 인슐린의 부재에서의 증가 된 통풍 관의 결과로 세포내 저장 격실에서 원형질 막에 포도 당 운송업 자 (GLUT4) 4의 전 좌의 자극은 인슐린 모방 속성9. 이전에, 우리는 계량 GLUT410의 전 과정을 형광 현미경 검사 법 기반 접근 구현. 이 분석 결과 사용 하 여 추출 라이브러리11 에서 수많은 식물 추출 물의 분석 결과 유망한 후보자의 식별. 그러나, 살아있는 유기 체에서 더 테스트는 필수입니다. 이 종이, 수정된 병아리 태아 모델에서 자세히 설명 하는 접근은 인슐린 모방 특성을 가진 물질을 식별 하는 데 유망한 모델을 입증 했다. 그것은 생체 외에서 그리고 vivo에서 학문 사이의 넓은 간격을 작성 하는 매력적인 도구를 나타내고 허용 비용, 간단한 처리 절차, 적절 한 처리 속도 등 기존 시스템에 비해 몇 가지 장점을 제공 합니다. 또한, 윤리 위원회에 의해 허가 필요 하지 않습니다.

<table><tbody><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS)</td><td>Biochrom</td><td>L1825</td><td></td></tr><tr><td>Hank' Thermo</td> <td>Scientific</td><td>SH30268.02</td><td></td></tr><tr><td>NovoRapid</td><td>Novo Nordisk</td><td>8-0905-82-304-6</td><td></td></tr><tr><td>암탉 달걀 (Lohmann 클래식 갈색 닭)</td><td>Local Breeder</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Accu-check performa</td><td>Roche</td><td>6454011</td><td></td></tr><tr><td>Accu-check Inform II Teststreifen</td><td>Roche&nbsp;</td><td></td><td></td>5942861</tr><tr><td>인큐베이터&nbsp; HEKA- 터보 288</td><td>HEKA Brutger&auml; te</td><td></td><td></td></tr><tr><td>주사기 Omnican F 1 mL</td><td>Braun</td><td>09161502S&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td></td><td>PEKISH 추출물 라이브러리</td><td></td><td></td></tr><tr><td>램프 템포 Nr. 119</td><td>ORBAN</td><td></td><td></td></tr> 발췌</tbody></table>

인슐린 모방 화합물 테스트용 비켜에서 모델

An In Ovo Model for Testing Insulin-mimetic Compounds

높은 혈액 포도 당 수치를 타입-2 당뇨병 mellitus (T2DM), 복잡 하 고 multifactorial 신진 대사 질환, 인슐린 저항 및 β-셀 오류로 인해 발생 합니다. 인슐린의 주입 또는 인슐린 sensitizing 약물의 사용을 포함 하 여 다양 한 전략을 T2DM 하거나 적어도 증상을 줄일 추구 했다. 또한, 초본 화합물의 응용 프로그램 증가 주목을 받고 있다. 따라서, 그것은 식별 하 고 인슐린 모방 화합물의 특성 효율적인 테스트 시스템을 찾을 필요가 있다. 여기 우리는 합성 화합물 및 초본 추출 물 인슐린 모방 속성의 테스트를 가능 하 게 수정 된 병아리 태아 모델 개발. 사용 하는 형광 현미경-기반 기본 스크린, 플라즈마 막에 포도 당 운송업 자 (Glut4) 4의 전 좌 단정, 우리 화합물, 주로 허브 추출 물, 세포내 포도 당의 증가 이어질를 식별할 수 있었다 adipocytes에 대 한 농도 그러나, 이러한 물질의 효능 더 살아있는 유기 체에서 확인을 해야합니다. 따라서, 우리는 그들의 혈액 포도 당을 감소 속성을 식별 하는 -비켜 방식을 사용. 배아 발달의 첫번째 2/3 동안 닭 배아를 사용 하 여 동물 실험으로 간주 되지 않습니다 이후는 윤리 위원회의 승인이 필요 하지 않습니다. 여기,이 모델의 응용 프로그램 세부 사항에 설명 되어 있습니다.

Gluc HET 접근의 설명:
관심의 물질과 부 화 후 수정 된 알은 열리고 (그림 2) 달걀 껍질의 제거에 의해 혈액 컬렉션에 대 한 준비. 더 준비 평형 chorioallantoic 막에 대 한 액세스를 얻기 위해 달걀 껍질 막의 제거를 포함 됩니다. 이 막 다음 적합 한 혈관에 혈액 컬렉션에 대 한 액세스를 제공 하기 위해 신중 하 게 절단 됩니다. 선호, 태아의 복 부에서 발생 하는 큰 그릇은 플라스틱 산도 스트립에 배치 됩니다. 수집 하는 동안 혈액의 희석을 피하기 위해, 선박 및 산도 스트립 필터 종이 건조 했더니입니다. 혈관은 다음 잘라내어 혈액 산도 스트립에 새는 피 펫을 사용 하 여 분석을 위해 수집 됩니다.
혈액 포도 당 수준에 선택 된 초본 추출 물의 효과:
최근에 설립 된 GLUT4 전 정량 기반 기본 화면, 우리 인슐린 모방 특성10물질을 식별할 수 있습니다. 수용 성 허브 추출 물 수백의 심사 결과 여러 안타의 식별. 이러한 추출 물 -비켜 모델에서 테스트 되었습니다. Combretum indicum (랑 군 기)에서 준비 된 추출 물과 비 공개 추출 (추출 0845 불리)이이 실험을 위해 사용 되었다. 우리 녹 HBSS 버퍼 300 mg/l, 이전 연구12,13에 적합 한 것으로 밝혀졌다는 농도에서 추출 물. 물질은 11 일 동안 incubated 배아에 적용 했다. 그림 3에 표시 된 대로 중요 한 혈액 포도 당 감소 -비켜랑 군 기에서 추출 발생 하지 않았다. 그러나, 혈액 포도 당 농도 성공적으로는 상용 인슐린 아날로그를 사용 하 여 관찰 하는 효과에 비해 추출 0845, 60 분, 후 작은 감소와 함께 감소 되었다. 상당한 효과 계란의 부 화 시간이 연장 했다 때 관찰 되었다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig1.jpg"> 그림 1: 배아 활력에 유독한 화합물의 영향. 계란 알을 품을 11 일 (A와 C) 에 대 한 또는 다른 24 h에 대 한 10 일째에 독성 초본 추출 물으로 치료 (B와 D). 추출의 응용 프로그램 chorioallantoic 막 (D) 와 (B)태아에 혈관의 심한 병 변으로 이끌어 냈다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig2.jpg"> 그림 2: 설명에 비켜 모델의. 왼쪽에서 오른쪽: 달걀 껍질의 제거와 (1-2); 평형 및 제거 chorioallantoic 막으로 달걀 껍질 막의 노출 (3); 준비 된 배 산도 스트립 (4); 혈액 포도 당 미터 (5)를사용 하 여 포도 당 농도의 측정의 컬렉션입니다. Haselgruebler 외에서 적응. 2017,12. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57237/57237fig3.jpg"> 그림 3: 치료 또는 인슐린 치료 계란에 비해 혈액 포도 당 수준에 초본 추출 물의 효과. 계란 11 일 동안 incubated 되었고 지정 된 물질과 치료 (상용 인슐린 아날로그: 3.3 U/mL; 추출 물: 300 mg/L) 3 h. 혈액 포도 당 수준을 혈액 포도 당 미터를 사용 하 여 결정 했다 HBSS 버퍼 (300 µ L 볼륨)에서 해산. 결과 버퍼의 효과 없이 표시 됩니다. 오차 막대는 뜻의 표준 오류를 기반으로 합니다. * P < 0.05와 * * * P < 인큐베이션 동시의 계란 HBSS 취급에 관하여 0.0001, 상당한 감소. Haselgruebler 외에서 적응. 2017,12. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57237/57237fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

이 연구에서 우리는 살아있는 유기 체에서 인슐린 모방 화합물을 테스트 하는 유망한 도구로 -비켜 시스템을 설명 합니다. 주요 이점 적절 한 처리량 속도 허용 비용, phytochemicals 인슐린 모방 속성의 id를 포함 합니다.

Elevated blood glucose levels in type 2 diabetes mellitus (T2DM), a complex and multifactorial metabolic disease, are caused by insulin resistance and ...

제시된 변형된 병아리 배아 모델의 전반적인 목표는 살아있는 유기체에서 인슐린 모방 특성을 가진 물질을 특성화하는 것입니다. 이 방법은 부작용 없이 혈당 수치를 낮추는 인슐린 모방 특성을 가진 허브 추출물을 찾는 것과 같은 당뇨병 연구 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 적절한 처리 속도로 살아있는 유기체에서 화합물의 효능을 테스트할 수 있으며 윤리 위원회의 허가가 필요하지 않다는 것입니다.이 방법의 시각적 시연은 용기가 쉽게 준비되지 않거나 종종 완전히 절단되어 분실되기 때문에 준비 및 절단 단계를 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다. 평균 습도 40-60%의 섭씨 38도에서 최대 11일 동안 부화 후 난자의 수정 여부를 확인합니다. 이렇게하려면 촛대 램프의 가장자리를 잉크 패드에 담근 다음 달걀의 뾰족한면에 촛불을 켭니다.공기 주머니를 식별하려면 계란 상단의 밝기 차이를 확인하십시오. 공기 주머니는 둥글고 투명한 영역으로 나타나는 반면 알부민은 더 어둡게 나타납니다. l을 눌러 공기 주머니의 위치를 표시합니다.amp 이전에 도포한 잉크로 계란에 약간 대고 있습니다.알부민과 공기 방광 사이의 밝기 차이를 보이지 않는 수정란은 제외합니다. 인슐린 모방(insulin-mimetic) 또는 인슐린을 Hank's Balanced Salt Solution에서 원하는 농도로 희석하여 준비합니다. 선택한 화합물을 적용하려면 뾰족한 핀셋을 사용하여 공기 주머니의 표시된 영역에서 달걀 껍질을 조심스럽게 쪼아 바늘 주사기 직경과 동일한 구멍을 만듭니다.멸균 1ml 주사기를 사용하여 관심 물질이 포함된 완충 용액 300마이크로리터를 주입합니다. 물질의 혈당 감소 효과를 확인하려면 계란을 인큐베이터에 다시 넣고 60분, 120분, 180분 후에 혈당을 측정하십시오. 적절한 시점에서, 공기 주머니 위의 달걀 껍질을 조심스럽게 제거하고 전체 막을 덮을 수 있을 만큼 충분한 PBS 완충액을 추가하여 달걀 껍질 막을 평형화합니다.여분의 PBS를 쏟아낸 후 뾰족한 핀셋을 사용하여 달걀 껍질 막을 조심스럽게 잡아당깁니다. 마이크로 가위를 사용하여 융모대립막을 자르고 제거하면서 막의 큰 혈관을 피합니다. 배아의 복부에서 유래한 큰 혈관을 찾습니다.닫힌 마이크로 가위로 알부민에서 이 용기를 들어 올려 플라스틱 pH 스트립에 놓습니다. pH 스트립을 용기 아래로 옮기고 마이크로 가위를 조심스럽게 뒤로 당깁니다. 복부에서 나오는 큰 혈관을 준비하는 것이 필수적인데, 작은 혈관이 찢어져 혈액 채취를 불가능하게 만들 수 있기 때문입니다.혈액이 희석되지 않도록 피펫으로 혈관 주변의 액체를 제거하십시오. 그런 다음 여과지를 사용하여 용기와 pH 스트립을 건조시킵니다. 채혈을 위해서는 혈관이 손실될 수 있으므로 혈관을 완전히 절단하지 않는 것이 중요합니다.그런 다음 마이크로 가위를 사용하여 한쪽 혈관을 조심스럽게 자릅니다. 용기가 완전히 절단되지 않도록 용기를 절반 이상 절단하지 마십시오. 피펫으로 pH 스트립에 누출되는 혈액을 수집합니다.혈당 측정기를 사용하여 포도당 수치를 측정하려면 10마이크로리터의 혈액이 필요합니다. 선택한 화합물을 24시간 동안 도포한 후 이전과 같이 난각막을 PBS로 최소 30초 동안 평형을 이룹니다. 여분의 PBS 버퍼를 부어 제거합니다.그런 다음 뾰족한 핀셋으로 달걀 껍질 막을 조심스럽게 잡아당깁니다. 혈관에 병변이 있는지 확인하고, 병아리 배아의 움직임을 관찰하여 활력을 확인합니다. combretum indicum 또는 Rangoon creeper로부터 제조된 추출물 및 추출물 0845로 표시된 공개되지 않은 추출물을 이러한 실험에 사용했습니다.이 그림에서 알 수 있듯이 Rangoon 덩굴 추출물은 난소에서 상당한 혈당 감소를 초래하지 않았습니다. 그러나, 추출물 0845로 혈당 농도를 성공적으로 감소시켰으며, 배양 시간이 연장되었을 때 유의미한 효과가 관찰되었다. 처리되지 않은 난자와 비교했을 때, 10일째에 독성 허브 추출물로 난자를 24시간 동안 처리하면 융모막막의 혈관에 심각한 병변이 발생했습니다.병변은 또한 정상 대조군과 비교하여 처리된 배아에서 명백했습니다. 일단 숙달되면 제대로 수행하면 5분 안에 두 개의 난자를 분석하여 포도당 수치와 독성을 분석할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 천연 또는 합성 화합물의 혈당 감소 효과를 정량화하기 위해 닭 배아 모델에서 혈관을 준비하고 혈액을 수집하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

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연구

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Neuroscience

신경과학

인슐린 모방 화합물 테스트를 위한 In Ovo 모델

보존 인슐린 신호 전달은 과일 파리에서 찾은...

인슐린 주입 및 성인에서 인슐린 민감도를 측정하는 Hemolymph 추출 Drosophila melanogaster</em

췌장과 같은 progenitors은 인슐린을 표현 식민지로 차별화할 수있는 3 차원 clonogenic 분석이 설명되어 있습니다. 이 방법은 메틸 셀룰로오스, Matrigel 및 성장 요인을 포함하는 반 고체의 미디어 활용,하는 하나의 progenitors는 분아 따위에 의해 중식과...

인슐린을 표현 콜로니를 형성 Progenitors에 대한 정량 분석

이 프로토콜은 하나가 당뇨병 치료를위한 잠재적인 치료 표적을 찾기 위해 기능성 베타 세포 질량을 조절 요소를 식별할 수 있습니다. 프로토콜은 adenoviruses과 유전자 발현의 조작에 따라 분리된 쥐의 islets에 섬 복제 및 베타 세포 기능을 평가하기위한 간소화된 방법으로 구성되어 있습니다.

에서 복제와 베타 세포 기능을 평가 Adenovirally-transduced 절연 쥐 Islets

우리는 여기에서 제2형 당뇨병의 마우스 모델, Leprdb에서 섬을 분리하기 위한 프로토콜과 2개의 광자 현미경을 사용하는 온전한 섬에서 인슐린 분비를 측정하기 위한 라이브 셀 분석의 세부 정보를 제시합니다.

Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; 2 형 당뇨병의 마우스 모델 : 본래 독도 췌장 섬 세포의 분리 및 라이브 셀 2 광자 이미징

당뇨병 연구 분야에 중요한 도전은 섬 β 세포 복제를 조절하고 β - 세포 재생을 자극하는 방법을 개발하는 분자 메커니즘을 이해한다. 여기서 높은 콘텐츠 스크리닝 방법 식별 및 작은 분자의 β 세포의 복제를 촉진 활성을 평가하기 제시된다.

높은 콘텐츠<em&gt; 체외</em&gt; 췌장 작은 섬의 β 세포 복제 디스커버리 플랫폼

여기에서는 β세포 증식에 대한 후속 면역형광 분석을 통해 배양에서 온전한 마우스 섬에 관심 부하가 있는 폴리(락틱-코-글리콜산)(PLGA) 미세구의 화합물을 생성하고 관리하는 방법론을 제시합니다. 이 방법은 후보 β세포 유사분열제의 효능을 측정하는 데 적합합니다.

본래 마우스 독도에 β 세포 분열 촉진 물질의 지속적인 관리<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 생분해 성 폴리 (락트산 - 코 - 글리콜 산) 마이크로 스피어를 사용하여

여기, 우리가 현재의 균질 시간 세포에서 분 비 하는 인슐린의 신속한 검출을 위한 효율적인 방법으로 무서 워 (HTRF) 해결.

균질 시간 해결 포스터 공명 에너지 전송 기반 분석 결과 인슐린 분 비의 검출에 대 한

이 프로토콜은 베타 세포에서 인슐린 분비를 위한 프록시로 인슐린 연결된 Gaussia luciferase를 사용하여 중간 처리량에서 급속한 저비용 luciferase 분석기를 능력을 발휘하는 방법을 기술합니다. 이 분석은 대부분의 발광 플레이트 판독기 및 다중 채널 파이펫으로 수행될 수 있습니다.

공동 분비 된 루시퍼라제 대리를 사용하여 상대 인슐린 분비 측정

이 프로토콜은 고리형 아데노신 모노포스페이트(cAMP) 바이오센서, cAMP 차이 검출기 in situ (cADDis) 및 미세페리퓨전 시스템의 아데노바이러스 전달을 사용하여 일차 인간 유사섬에 의한 세포 내 신호전달 이벤트의 동기 획득 및 공동 정합 및 인슐린 및 글루카곤 분비를 위한 방법을 설명합니다.

형광 바이오센서 역학 및 호르몬 분비 프로파일의 동기 평가를 위한 인간 유사섬 시스템

우리는 쥐 맥락막신경총에서 인슐린 수용체 이성질체 IR-A 및 IR-B를 매핑하기 위해 Duplex in situ hybridization assay를 구축하여 기존 방법의 한계를 극복했습니다. 이 고해상도 접근법은 동형(isoform) 특이적 발현을 밝혀 뇌 인슐린 신호전달에 대한 새로운 통찰력과 신경 장애에 대한 잠재적인 동형(isoform) 표적 치료에 대한 새로운 통찰력을 제공합니다.

RNA In Situ Hybridization Assay를 사용한 쥐 뇌의 인슐린 수용체 A 및 B의 정확한 시각화

배우세요 수정된 병아리 배아 모델을 사용하여 인슐린 모방 화합물을 평가하는 방법을 당뇨병 연구에 활용하세요. 이 기술은 살아있는 유기체에서 혈당 감소 효과를 효율적으로 테스트할 수 있어 천연 추출물의 안전성과 효능을 신속하게 확인할 수 있습니다.

인슐린 모방 화합물 테스트용 비켜에서 모델

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