인슐린 모방 화합물 테스트용 비켜에서 모델

제시된 변형된 병아리 배아 모델의 전반적인 목표는 살아있는 유기체에서 인슐린 모방 특성을 가진 물질을 특성화하는 것입니다. 이 방법은 부작용 없이 혈당 수치를 낮추는 인슐린 모방 특성을 가진 허브 추출물을 찾는 것과 같은 당뇨병 연구 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 적절한 처리 속도로 살아있는 유기체에서 화합물의 효능을 테스트할 수 있으며 윤리 위원회의 허가가 필요하지 않다는 것입니다.

이 방법의 시각적 시연은 용기가 쉽게 준비되지 않거나 종종 완전히 절단되어 분실되기 때문에 준비 및 절단 단계를 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다. 평균 습도 40-60%의 섭씨 38도에서 최대 11일 동안 부화 후 난자의 수정 여부를 확인합니다. 이렇게하려면 촛대 램프의 가장자리를 잉크 패드에 담근 다음 달걀의 뾰족한면에 촛불을 켭니다.

공기 주머니를 식별하려면 계란 상단의 밝기 차이를 확인하십시오. 공기 주머니는 둥글고 투명한 영역으로 나타나는 반면 알부민은 더 어둡게 나타납니다. l을 눌러 공기 주머니의 위치를 표시합니다.amp 이전에 도포한 잉크로 계란에 약간 대고 있습니다.

알부민과 공기 방광 사이의 밝기 차이를 보이지 않는 수정란은 제외합니다. 인슐린 모방(insulin-mimetic) 또는 인슐린을 Hank's Balanced Salt Solution에서 원하는 농도로 희석하여 준비합니다. 선택한 화합물을 적용하려면 뾰족한 핀셋을 사용하여 공기 주머니의 표시된 영역에서 달걀 껍질을 조심스럽게 쪼아 바늘 주사기 직경과 동일한 구멍을 만듭니다.

멸균 1ml 주사기를 사용하여 관심 물질이 포함된 완충 용액 300마이크로리터를 주입합니다. 물질의 혈당 감소 효과를 확인하려면 계란을 인큐베이터에 다시 넣고 60분, 120분, 180분 후에 혈당을 측정하십시오. 적절한 시점에서, 공기 주머니 위의 달걀 껍질을 조심스럽게 제거하고 전체 막을 덮을 수 있을 만큼 충분한 PBS 완충액을 추가하여 달걀 껍질 막을 평형화합니다.

여분의 PBS를 쏟아낸 후 뾰족한 핀셋을 사용하여 달걀 껍질 막을 조심스럽게 잡아당깁니다. 마이크로 가위를 사용하여 융모대립막을 자르고 제거하면서 막의 큰 혈관을 피합니다. 배아의 복부에서 유래한 큰 혈관을 찾습니다.

닫힌 마이크로 가위로 알부민에서 이 용기를 들어 올려 플라스틱 pH 스트립에 놓습니다. pH 스트립을 용기 아래로 옮기고 마이크로 가위를 조심스럽게 뒤로 당깁니다. 복부에서 나오는 큰 혈관을 준비하는 것이 필수적인데, 작은 혈관이 찢어져 혈액 채취를 불가능하게 만들 수 있기 때문입니다.

혈액이 희석되지 않도록 피펫으로 혈관 주변의 액체를 제거하십시오. 그런 다음 여과지를 사용하여 용기와 pH 스트립을 건조시킵니다. 채혈을 위해서는 혈관이 손실될 수 있으므로 혈관을 완전히 절단하지 않는 것이 중요합니다.

그런 다음 마이크로 가위를 사용하여 한쪽 혈관을 조심스럽게 자릅니다. 용기가 완전히 절단되지 않도록 용기를 절반 이상 절단하지 마십시오. 피펫으로 pH 스트립에 누출되는 혈액을 수집합니다.

혈당 측정기를 사용하여 포도당 수치를 측정하려면 10마이크로리터의 혈액이 필요합니다. 선택한 화합물을 24시간 동안 도포한 후 이전과 같이 난각막을 PBS로 최소 30초 동안 평형을 이룹니다. 여분의 PBS 버퍼를 부어 제거합니다.

그런 다음 뾰족한 핀셋으로 달걀 껍질 막을 조심스럽게 잡아당깁니다. 혈관에 병변이 있는지 확인하고, 병아리 배아의 움직임을 관찰하여 활력을 확인합니다. combretum indicum 또는 Rangoon creeper로부터 제조된 추출물 및 추출물 0845로 표시된 공개되지 않은 추출물을 이러한 실험에 사용했습니다.

이 그림에서 알 수 있듯이 Rangoon 덩굴 추출물은 난소에서 상당한 혈당 감소를 초래하지 않았습니다. 그러나, 추출물 0845로 혈당 농도를 성공적으로 감소시켰으며, 배양 시간이 연장되었을 때 유의미한 효과가 관찰되었다. 처리되지 않은 난자와 비교했을 때, 10일째에 독성 허브 추출물로 난자를 24시간 동안 처리하면 융모막막의 혈관에 심각한 병변이 발생했습니다.

병변은 또한 정상 대조군과 비교하여 처리된 배아에서 명백했습니다. 일단 숙달되면 제대로 수행하면 5분 안에 두 개의 난자를 분석하여 포도당 수치와 독성을 분석할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 천연 또는 합성 화합물의 혈당 감소 효과를 정량화하기 위해 닭 배아 모델에서 혈관을 준비하고 혈액을 수집하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.