Name: 샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 Biobank 조직 샘플의 처리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: 배우세요 돼지 생물 의학 모델에서 바이오뱅크 조직 샘플링 및 처리 기법을. 침지법으로 조직 부피를 측정하고 방향자 기법으로 무편향 형태 분석을 수행합니다.

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저자는 우수한 기술 지원을 위한 리사 피 칠을 감사합니다.

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저자는 공개 없다.

돼지 동물 모델에서 biobank 샘플 컬렉션의 대표, 중복 조직 샘플의 광범위 한 범위에 적합의 재현할 수 세대의 기관/조직, 결정에 대 한 강력한 기술 및 프로토콜 필요 다른 분석 방법, 그리고 랜덤 양적 stereological 분석에 대 한 샘플 섹션의 방향에 대 한. 현재 문서에서 설명 하는 방법 돼지 장기와 조직의 크기에 적응 하 고 효과적으로 이러한 요구2,7을 충족 하도록 개발 되었습니다. 그들은 잘 인식된 방법론 원리에 기반 하 고 이전 다른 출판된 연구2,7,,1221에 그들의 실행할 수 입증. 추천된 방법 대표 샘플의 세대를 위한 그리고 그렇지 않으면 확인할 수 없는 매개 변수 ...

변환 의학, 돼지는 점점 사용을 위해 일반적으로 큰 동물 모델1,2,3,,45는 돼지 사이의 여러 유리한 유사성 때문과 인간 해부학 및 생리학, 및 설립된 분자 생물학적 방법의 세대에 대 한 허용 여부 맞춤, 유전자 변형 돼지 질병 조건1,4의 넓은 범위에 대 한 모델.
그러나, 설치류 모델에 비해, 동물 실험에 대 한 언제 든 지 제공 될 수 있다 각각 돼지 모델의 수가 제한 됩니다. 이것은 약 1 년, 그리고 돼지 모델 및 축산의 생성에 필요한 금융 및 시간 집중적인 노력 돼지 세대 간격. 따라서,이 돼지에서 생성 될 수 있는 샘플으로 서 돼지 모델의 개별 동물 들은 매우 귀중 한 유전자 변형 돼지 모델 및 장기 실험 문제 (예를 들면, 늦은 합병증의 경우에 특히 만성 질환) 세 개인2,,67에 검사 합니다.
모든 연구 과정에서 연구의 초기 실험 설계에 예정 하지 했다 추가 분석의 성능 수 나중으로 판명 관련, 예를 들어, 이전에서 발생 하는 별개 질문 발견 주소 예기치 않은 결과. 이러한 추가 실험에 대 한 적합 한 샘플을 사용할 수 없는 경우 disproportionally 높은 비용과 시간이 많이 소요 비용 추가 돼지와 조직 샘플을 생성 하는 데 필요한 수 있습니다. 그런 우발적 사건을 위해 준비 되, 다른 기관, 조직, 또는 바이오-액체, 양적 및 질적으로 후속 분석의 광범위 한 적합의 보존 백업 샘플 biobank 컬렉션의 중요 한 여겨진다 접근2,,67. 돼지 동물 모델에서 최적의 혜택을 파생, 적절 한 biobank 샘플의 가용성 또한 가능성을 제공 합니다 독특한 멀티 기관 수준에 동일한 샘플 자료에 광범위 한 다양 한 분석 방법 수행 하는 매우 동일한 개별 동물, 예를 들어, 다른 작업 그룹의 과학자 샘플의 유통 조직 연구 네트워크2,,67. 또한, biobanking에 '앞 ' 샘플링 전략 연구에 필요한 동물의 수의 감소에도 기여 한다. 돼지 모델 biobanking의 장점은 최근 다 기관, multiomics 연구, 검사 기관에서에서 입증 되었습니다에서 뮌헨 MIDY 돼지 Biobank 표본을 사용 하 여 장기 당뇨병의 유전자 변형된 돼지 모델에서 크로스 토크 2.
일반적으로 안정성과 이후에 수행된 분석의 결과의 판독을 준수 해야 합니다 biobank 샘플 몇 가지 필수 요구 사항이 있습니다. 샘플 reproducibly, 생성 해야 합니다 그리고 그들은 대표 해야 합니다, 즉, 적절 하 게 반영 하는 샘플7에서 찍은 조직/기관의 관심이 형태학 및 분자 기능. 다운스트림 분석 종류의 넓은 범위에 적합 될, 샘플 되어야 충분 한 수량에 촬영 하며 설명 포함 하 여 다른 분석 방법의 요구 사항 (시간 및 온도 조건 등)에 따라 처리 histopathological 분석, cryohistology, 파라핀 및 플라스틱 조직학, immunohistochemistry, 제자리에서 교 잡, ultrastructural 전자 현미경 분석, 임상 실험실 뿐만 아니라 분자 진단 분석 등 DNA, RNA, 단백질, 및 대사 산물의 분석.
수 있도록 다양 한 숫자, 볼륨, 길이, 또는 독특한 조직 구조의 표면 영역 같은 뚜렷한 양적 형태학 매개 변수 평가 대 한 양적 stereological 분석에 의해, 무작위로 섹션의 비행기는 각각 장기/조직의 조직학 샘플7,,89,,1011준비를 해야 합니다. 양적 형태학 연구, 조직, 기관, 또는 기관 구획의 총 볼륨의 정확한 결심에에서 샘플 (즉, 참조 공간)에서 찍은 결정적으로 중요 한7,9 , 12 각 기관, 조직, 또는 유기 체 내에서 관심이 매개 변수의 절대 수량 계산 하. 결국, 조직학 단면도의 준비 하는 동안 포함-관련 조직 수축 효과 결정 하 여 계정13에 있다. 따라서, 이전 연구에서 보관 된 샘플 (고정 조직 샘플, 임베디드 조직 블록, 조직학 단면도, 등등)의 특히 양적 stereological 분석은 때때로 심각 하 게 제한 하거나 심지어 불가능 한12, 특히 각 기관/조직의 volumetry 수행 되지 않았습니다, 아니 적절 한 샘플링 디자인 영장 대표 샘플을 숫자와 양의 사용 가능한 개별 샘플 충분 하지 않은 경우에 적용 하는 경우 또는 경우의 처리는 샘플의 양적 형태학 매개 변수 추정과 호환 되지 않습니다. 매니폴드 가능한 영향을 미치는 요인으로 인해 뚜렷한 양적 형태학 매개 변수 분석에 대 한 아카이브 샘플 자료의 적합성 명백 하 게 답을 수 없는, 그러나 각 개인적인 케이스의 신중한 평가에 따라 달라 집니다.
따라서, 위치, 크기, 숫자, 처리, 트리밍, 방향과 샘플의 후속 분석의 결과 영향을 줄 것 이다, 이러한 요인 매우 중요 하 고 어떤 연구의 실험 설계에 고려 되어야 한다. 이러한 측면 및 돼지 해부학, 돼지에 적응된 동물 모델 설립 되었습니다 최근, 포괄적인, 상세한, 대규모 샘플링 지침의 특수 기능 표준화, 재현성에 대 한 강력한 참조를 제공 하 그리고 50 개 이상의 다른 돼지 장기와 조직6,7에서 중복, 적절 하 게 처리, 높은-품질의 효율적인 생성.
방법론 설명 및 현재 문서에 표시 된 비디오 튜토리얼 제공, 설명, 이해할 수 있는, 단계-의해 단계를 지시 volumetry를 위한 기술의 다양 한의 실제 성능에 대 한 돼지 직물의 샘플링 및 장기, 고 다른 다운스트림 분석 방법에 대 한 조직 샘플의 처리. 관련 조직의 3 차원 수축 량의 크기의 결정을 포함 하 여 추천된 기술 기관/조직 볼륨 및 Archimedes 및 Cavalieri9의 원칙에 따라 밀도의 결정에 대 한 메서드를 포함 합니다 조직학 검사에 대 한 처리 하는 동안 다른 포함 미디어14 에 포함, 실용적인 볼륨 가중치 체계적인 무작위 샘플링의 응용 프로그램, 샘플된 조직 표본에 대 한 처리 접근 다른 후속 분석7,8,,915및 적절 하 게 지향 및 잠재적인 양적 stereological 분석7,8, 샘플 처리 9,,1011. 돼지 biobank 프로젝트에 응용 프로그램, 옆 시연된 메서드는 일반적으로 장기/조직의 양적 조직 형태학 속성을 검사 하는 모든 연구에 대 한 적절 한. 또한, 체계적인 무작위 샘플링 디자인은 분자 분석 방법을 사용 하 여 풍부한 변경의, 예를 들면, RNAs, 단백질, 또는에서 대사 산물을 검출 하는 실험에서 대표 샘플의 세대에 대 한 특히 유용 각종 기관 및 조직입니다.
다음 단락에서는 그들의 실질적인 성능을 프로토콜 섹션에서 설명 하는 동안 이러한 방법에 대 한 간략 한 소개를 제공 합니다.
기관/조직 볼륨의 결정 장기 무게와 볼륨의 결정은 여러 실험 설정에서 중요 한으로 이러한 요소를 나타낼 수 있습니다 변경, 잠재적으로 관련 된 실험적으로 시험 관심의 요인. 기관/조직의 총 볼륨 또한 일반적으로 절대 양적 매개 변수 (예:, 전체 휴대폰 번호), stereologically 예상된 숫자 볼륨 밀도 (즉, 볼륨 단위 당 세포의 수에서 계산 하는 데 필요한 조직)의7,12. 컴퓨터 단층 촬영, 같은 복잡 한 기술적인 장비를 사용 하 여 기술을 제외 하 고는 기본적으로 일반적으로 기관 또는 조직의 절대 볼륨을 결정 하는 데 사용 하는 세 가지 실용적인 방법. 장기의 볼륨 "직접 체적 측정" Archimedes, 즉의 원칙에 따라, 물 또는 염 분 완전히 빠져들 때 구조에 의해 난민의 볼륨을 측정 하 여 확인할 수 있습니다. 그러나, comparably 대형 돼지 장기에 대 한 이러한 접근은 허무 하 고 경향이 부정확성, 이후 그들은 매우 큰 체적/측정 플라스 크를 필요로. 더 편리 하 게,의 기관/조직 볼륨의 무게와 밀도7,,1216, 효율적으로 "침수 방법"7,12 사용 하 여 결정 될 수 있는 산출 될 수 있다 ,16 (프로토콜 단계 1.1.). 기관/조직 볼륨 (1598-1647) "Cavalieri의 원칙"에 따라 volumetry 접근을 사용 하 여 추정 또한 수 있습니다. 간단한 기간에서는, Cavalieri 원칙 상태, 두 개체는 접지 평면에 평행한 평면에 구분 하 고 섹션의 프로필에 해당에 두 개체를 극복 하는 경우 지 면에서 거리는 동일한 지역, 두 개체 동일한 볼륨이 있다. 따라서, 임의로 모양의 개체의 볼륨 병렬, 동등 하 게 먼 섹션 평면 및 단면 평면 사이의 거리에 그들의 섹션 프로필 분야의 제품으로 추정 될 수 있습니다. 이것은 다음과 같은 비유를 이해할 수: 동일한 동전 같은 수로 구성 된 두 개의 스택을 병행 하 여, 서로 양보는 동전, 스택과 다른 원통 모양 모양 스택 동전 질서와 하나의 스택 배치 됩니다 고려 오프 센터 코인의 스택 위치 동전 (그림 3A). 두 동전 더미의 형태는 다른, 그들의 볼륨 동일 합니다, 이후 두 스택의 해당 수준에서 동전의 영역 (즉, 병렬 섹션의 프로필 영역에서 동등한 거리에서 두 동전 스택을 통해 잘라는 접지) 같습니다. 돼지 장기 및 조직 Cavalieri 원리7,,1215 를 사용 하 여 볼륨의 추정 단계 1.2에서에서 설명 되어 있습니다.
조직학 포함 관련 조직 수축의 범위 결정 조직학 직물 단면도에서 측정 된 여러 양적 형태학 매개 변수 분석, 포함-관련 조직 수축 조직 조직학에 대 한 처리 중에 발생의 효과 결정 하 고 고려 한다. 포함-관련 조직 수축 범위 변수를 있을 수 있습니다 그리고 모두 처리, 조직과 포함 중간8,,1317,,1819에 따라 달라 집니다. 포함-관련 변경 사항 (즉, 주로 수축) 조직 샘플의 볼륨의 공간, 및, 따라서, 양적 stereological 분석8에 의해 모든 차원 매개 변수 추정의 모든 3 개 차원에서 발생 하는 일반적으로, . 기본적으로, 단계 1.3에서에서와 같이 포함-관련 조직 수축, 선형 조직 수축 계수 (fS)로 표현 된 범위 추정 수 있습니다. 그리고 (수축 구분) 양적 형태학 매개 변수14의 수정에 대 한 사용.
기관/조직의 체계적인 무작위 샘플링 볼륨 가중치 돼지 장기/조직 샘플의 biobank 컬렉션의 설립에 대 한 볼륨 가중치 체계적인 무작위 샘플링 방법과 같은 2 단계에서 설명한 입증 실용적, 시간-절약 및 효율적인 기술 대표의 생성에 대 한 다목적 조직7,8,,915샘플링합니다.
Stereological 정량 분석에 대 한 임의의 균일 한 등방성 섹션 및 임의의 유니폼 수직 섹션의 세대 Biobank 조직 샘플 매개 변수를 적절 하 게 준비 된 표본 없이 확인할 수 없습니다 그의 최대의 견적에 대 한 다른 양적 stereological 분석 방법의 넓은 범위에 적합 해야 합니다. 거의 모든 양적 stereological 매개 변수, "등방성 (독립) 획 일 한 무작위 (IUR) 섹션"8,9를 사용 하 여 결정 수 있습니다. IUR 섹션에서 조직 샘플의 섹션 평면 3 차원 방향 무작위입니다. "Isector" 방법11 (3.1 단계 프로토콜), 또는 단면 평면을 기준의 방향의 랜덤 적용이 섹션 비행기의 위치를 기준으로 조직 샘플의 위치는 랜덤에 의해 달성 될 수 있다는 "Orientator" 방법10 (프로토콜 단계 3.2)에서 조직 샘플 피부 또는 점 막 견본 표시는 또는 정의 자연스럽 게 존재 하 고 제대로 식별 수직 축, "수직 획 일 한 무작위 (VUR) 섹션"의 준비 등 조직 샘플에서 (프로토콜 단계 3.3.)의 평면 내에서 엄격 하 게 구분 그들의 수직 축은 유리8,20입니다. IUR/VUR 샘플링의 이론적 기초 및 잠재적인 다운스트림 양적 stereological 분석에 대 한 포괄적인 논의의 완전 한 담 론에 대 한 관심이 있는 독자 양적 stereology 인생에서의 교과서 라고 과학8,9.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Carl Roth GmbH, 독일</td><td>한천(분말), Cat.: 5210.3</td><td>유리 또는 플라스틱 비이커에 10ml의 찬물에 약 1g의 한천을 녹이고 전자레인지에서 700W로 가열한 다음 용액을 엄격하게 저어주면서 두 번 끓입니다. 아직 따뜻할 때 곰팡이에 던지고 굳히십시오. 주의: 뜨거운 액체 한천으로 취급하는 동안에는 보호용 고글과 장갑을 착용하십시오.</td></tr><tr><td>캘리퍼스</td><td>Hornbach Baumarkt GmbH, Bornheim, Germany</td><td>Schieblehre Chrom/Vernickelt 120 mm Cat.: 3664902</td><td>모든 종류의 캘리퍼(기계 또는 전자식)도 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>주조 금형 (금속)</td><td>Engelbrecht Medizin & Labortechnik, Ederm&uuml; nde, 독일</td><td>Einbettsch&auml; lchen aus Edelstahl, 14 x 24 x 5mm, Cat.: 14302b</td><td>파라핀 임베딩에 사용되는 다른 종류의 금속 주조 금형도 마찬가지입니다.</td></tr><tr><td>크로스 그리드(5mm - 6cm)의 복사 템플릿</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>크로스 그리드(5mm - 6cm)의 복사 템플릿은 Albl et al.&nbsp;의 추가 데이터 파일에 제공됩니다. 톡시콜 파톨. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)</td></tr><tr><td>등각 및 코사인 가중 원의 복사 템플릿</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>등각 및 코사인 가중 원의 복사 템플릿은 Nyengaard & 군데르센. Eur Respir Rev. 15, 107-114, doi: 10.1183/09059180.00010101 (2006) 및 Gundersen et al. Stereological Principles and Sampling Procedures for Toxicologic Pathologists. 에서: Haschek 및 Rousseaux&acute; s Handbook of Toxicologic Pathology(독성 병리학 핸드북). 3판, 215-286, ISBN: 9780124157590 (2013).</td></tr><tr><td>폴드백 클램프(YIHAI 바인더 클립, 15mm 및 19mm)</td><td>Ningbo Tianhong Stationery Co ltd., 중국</td><td>Y10006 및 Y10005</td><td>다른 유형의 표준 사무실 폴드백 클램프도 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>겸자 (해부학적)</td><td>NeoLab Migge GmbH, 하이델베르크, 독일</td><td>NeoLab Standard -Pinzette 130 mm, anatomisch, rund, Cat.: 1-1811</td><td>모든 유형의 해부학적 겸자가 가능합니다.</td></tr><tr><td>포름 알데히드 용액 4 %</td> <td>SAV-Liquid Produktion GmbH, Flintsbach, Germany</td><td>포름 알데히드 37/40 %, 카탈로그 : 1000411525005</td><td>농축 용액에서 4 %로 희석합니다. 중성 pH에 대한 완충액. 적절한 눈, 손 및 호흡기 보호구를 착용하십시오. 배기 후드 아래에서 포름알데히드 용액으로 고정된 조직 샘플을 처리하고 보호용 고글과 실험실 장갑을 착용합니다.</td></tr><tr><td>그래프 용지(교정용)</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, 예나, 독일. </td><td>www.bueromarkt-ag.de Penig Millimeterpapier A4, Cat.: 2514</td><td>모든 유형의 그래프 용지(밀리미터 단위로 축척)가 가능합니다.</td></tr><tr><td>실험실 비커 (5ml, 10 ml, 50 ml, 100 ml)</td><td>NeoLab Migge GmbH, 하이델베르크, 독일</td><td>Becherglas SIMAX&reg; , niedrige Form, Borosilikatglas 3.3 Cat.: E-1031, E-1032, E-1035, E-1036</td><td>5 &ndash; 100 ml 용량의 모든 종류의 유리 또는 플라스틱 비커가 가능합니다.</td></tr><tr><td>실험실 규모</td><td>Mettler Toledo GmbH, Gie&szlig; en, 독일</td><td>PM6000</td><td>측정 범위가 0.1 mg에서 약 20 g 사이, 각각 100 mg에서 약 500 g 사이인 모든 표준 실험실 저울은</td></tr><tr>Sartorius AG, G&ouml을 수행합니다<td></td><td>. 독일 팅겐</td><td>BP61S</td><td></td></tr><tr><td>마이크로톰 블레이드</td><td>엥겔브레히트 메디진 & Labortechnik, Ederm&uuml; nde, 독일</td><td>FEATHER Microtome blasdes S35, Cat.:14700</td><td>모든 종류의 일회용 마이크로톰 블레이드가 가능합니다.</td></tr><tr><td>형태 측정 / 플라 니메트리 소프트웨어 / 시스템</td><td>국립 보건원 (NIH)</td><td>ImageJ</td><td>https://www. imagej.nih.gov/ij/ (1997)에서 다운로드.</td></tr><tr><td>Zeiss-Kontron, Eching, Germany</td><td>VideoplanTM 이미지 분석 시스템</td><td>품절</td><td></td>된</tr><tr><td>사진 카메라</td><td>Nikon</td><td>D40</td><td>삼각대에 장착할 수 있는 모든 종류의 디지털 사진기가 가능합니다.</td></tr><tr><td>플라스틱 투명 필름</td><td>Avery Zweckform GmbH, Oberlaindern, Germany</td><td>Laser Overhead-Folie DINA4 Cat.:&nbsp; 3562</td><td>모든 (레이저) 인쇄 가능한 플라스틱 투명도가 가능합니다.</td></tr><tr><td>난수 테이블</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>난수 테이블은 다음과 같은 난수 생성기를 사용하여 편리하게 생성 할 수 있습니다 (정의 된 수의 난수 및 정의 된 간격 내에서). https://www.random.org/</td></tr> <tr><td>Razor blades</td><td>Plano GmbH, Wetzlar, Germany</td><td>T5016</td><td>모든 종류의 면도날이 가능합니다.</td></tr><tr><td>통치자</td><td>B&uuml; romarkt B&ouml; ttcher AG, 예나, 독일. www.bueromarkt-ag.de</td><td>Office-Point Lineal 30 cm, Kunststoff, transparent, Cat.: ln30</td><td>모든 종류의 cm-mm 스케일 눈금자도 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>식염수 (0.9 %)</td> <td>Carl Roth GmbH, 독일</td><td>나트리움 클로리드, >99 % 카탈로그 : 0601.1</td><td>0.9 % 식염수를 준비하려면 9>C에서 1000ml의 증류수에 NaCl을 용해합니다.</td></tr><tr><td>메스 블레이드</td><td>Aesculap AG & Co KG, Tuttlingen, Germany</td><td>BRAUN 수술용 블레이드 N&deg; 22</td><td>어떤 종류의 메스 날이든 가능합니다.</td></tr><tr><td>스캐너</td><td>Hewlett-Packard</td><td>hp scanjet 7400c</td><td>150-600dpi의 해상도로 스캔할 수 있는 모든 유형의 표준 사무용 스캐너가 가능합니다.</td></tr><tr><td>슬라이싱 장치</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>자체 제작 슬라이싱 장치의 예는 Knust, et al. Anatomical record. 292, 113-122, doi: 10.1002/ar.20747 (2009) 및 Albl et al.&nbsp; Toxicol Pathol. 44, 414-420, doi: 10.1177/0192623316631023 (2016)의 보충 데이터 파일에서 찾을 수 있습니다.</td></tr><tr><td>구형 주조 금형 (예 : 직경 25.5mm)</td> <td>Pralinen-Zutaten.de, Windach, Germany</td><td>Pralinen-Hohlkugeln Vollmilch, 25.5mm</td><td>구형 주형 주형은 자체 제작하거나 다른 제과 공급 업체 (프랄린의 경우)에서 얻을 수 있습니다. 여기에 표시된 주조 금형은 실제로 중공 프랄린 본체의 패키지/포장입니다(먼저 프랄린을 먹은 다음 i-섹터 섹션 생성을 위해 패키지를 사용).</td></tr><tr><td>얇은 와이어</td><td>Basteln & 취미 Schobes, Stra&szlig; 독일의 푸르스. www,bastel-welt.de</td><td>Messingdraht (0.3 mm) Cat.: 216464742</td><td>다른 종류의 얇은 와이어도 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>티슈 페이</td>퍼 <td>NeoLab Migge GmbH, 하이델베르크, 독일</td><td>Declcate Task Wipes-White, Cat.: 1-5305</td><td>다른 종류의 실험실 티슈 페이퍼도 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>방수 펜</td><td>Staedler Mars GmbH & Co KG, N&uuml; rnberg, Grmany</td><td>Lumocolor 영구 313, 0.4mm, S, 검정색, Cat.: 313-2</td><td>다른 종류의 방수 펜도 마찬가지입니다.</td></tr></tbody></table>

샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 biobank 조직 샘플의 처리

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

변환 의료 연구에서 돼지 모델 꾸준히 더 인기가 되고있다. 특히 유전자 변형된 돼지의 개별 동물의 높은 가치를 고려 하 고 모델과이 모델의 사용 가능한 동물의 자주 제한 수, 적절 하 게 처리 조직 샘플의 (biobank) 컬렉션의 설립에 적합 한 샘플링, 시간 시점에서 지정 되지 않은 분석을 포함 하 여 후속 분석 방법의 광범위 한 의미 있는 접근을 활용 모델의 변환 값을 나타냅니다. 돼지 해부학의 특성에 관하여 포괄적인 지침 최근 대표, 다른 돼지 장기와 조직에서 높은-품질 샘플의 표준화 된 세대에 대 한 설립 되었습니다. 이러한 지침의 결과 다른 연구와 조사 사이 그들의 comparability 재현성에 대 한 필수적인 전제 조건은 없습니다. 기본 데이터, 장기 무게 볼륨, 결정의 샘플링 위치와 조직 샘플의 숫자의 생성으로 그들의 방향, 크기, 처리 및 트리밍 방향, 녹음 관련 요인이 가해질 및 분자, 질적, 양적 형태소 분석에 대 한 견본의 유용성을 결정. 여기, 한 설명, 실용적인, 단계별 데모의 가장 중요 한 기술 담당자의 세대에 대 한, 돼지 조직에서 다목적 biobank 견본 제공 됩니다. 여기에 설명 된 방법이 포함 기관/조직 볼륨 및 밀도, 조직의 수축의 넓이의 포인트-세기, 결정에 의해 parenchymal 장기에 대 한 볼륨-가중치 체계적인 무작위 샘플링 절차의 응용 프로그램 결정 샘플, 및 "Orientator" 및 "Isector" 방법, 및 수직 제복에 의해 생성 된 균일 한 임의의 등방성 (IUR) 섹션 등 양적 stereological 분석에 대 한 무작위로 지향 샘플 세대의 조직학 포함 관련 무작위 (VUR) 섹션입니다.

조직/기관 밀도의 결정에 대 한 잠수 기술
그림 12A -B 는 밀도의 대표 결정 돼지 신장 단계 1.1 (그림 1, 그림 2)에서 설명 된 침수 기술을 사용 하 여 볼륨을 보여줍니다. 더 대표 추가 돼지 장기 및 조직의 밀도 측정 결과 표 2에 표시 됩니다. 다양 한 돼지 조직 및 장기의 기준 밀도의 더 포괄적인 목록 "조직 샘플링 가이드에 대 한 돼지 생명 모델"7에 표시 됩니다. 침수 메서드를 사용 하 여 가져온 조직 밀도 측정 값의 유효성은 독립적인 견본의 동일한 샘플의 반복된 측정 하 여 추정 수 있...

실용적인 응용 프로그램 및 다운스트림 분석 biobank 프로젝트에서의 광범위 한 스펙트럼에 대 한 돼지 동물 모델의 대표적인 조직 샘플의 세대를 위한 방법의 성능을 시연, volumetry를 포함 하 여 체계적인 무작위 샘플링 그리고 차동 질적 및 양적 형태 론 적과 분자 분석 유형에 대 한 조직 샘플의 처리.

샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 Biobank 조직 샘플의 처리

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

이 동영상은 바이오뱅크 돼지 조직 표본의 샘플링 및 처리를 위한 두 가지 핵심 기술을 보여줍니다. 침수 기법은 총 장기 및 조직 부피를 안정적으로 추정하고 오리엔테이터 기법은 정량적 형태학적 매개변수의 편향되지 않은 추정을 위해 무작위 등방성 조직 절편을 생성합니다. 조직 밀도 측정을 위한 침수 기법의 주요 장점은 모든 종류의 조직에 적용할 수 있고 큰 샘플뿐만 아니라 작은 샘플에 대해서도 신뢰할 수 있는 결과를 생성한다는 것입니다.오리엔테이터 기술의 장점은 매우 효율적이며 큰 조직 샘플에서도 작동한다는 것입니다. 큰 장기에 대한 용적 측정을 시작하려면 장기에서 적절한 크기의 조직 조각을 절제합니다. 종이 타월로 샘플을 조심스럽게 닦아 과도한 혈액과 조직액을 제거합니다.그런 다음 정밀 저울에서 샘플의 무게를 측정하고 샘플의 무게를 기록합니다. 적절한 크기의 비커에 0.9%식염수를 추가합니다. 조직 발아 중 넘침을 방지하기 위해 비커를 완전히 채우지 마십시오.비커를 저울에 올려 놓고 집게 또는 자체 제작한 샘플 홀더를 집게 또는 샘플 홀더의 표시가 액체에 도달할 때까지 식염수에 담그십시오. 그런 다음 눈금 표시를 0으로 재설정합니다. 조직을 조심스럽게 부착하십시오.amp집게 또는 sample 홀더에 넣고 s를 완전히 담그십시오.amp표시된 위치에 도달할 때까지 s를 식염수에 담그십시오.신뢰할 수 있는 밀도 측정을 기록하려면 샘플이 완전히 침수되었는지 확인하고 물에 잠긴 샘플이 비커의 내벽 또는 바닥에 접촉하지 않도록 하는 것이 중요합니다. 샘플을 제자리에 고정한 상태에서 저울에 표시된 중량을 기록합니다. 이 측정값과 실온에서의 식염수 밀도를 사용하여 샘플의 부피를 계산합니다.그런 다음 샘플의 무게와 부피에서 조직 샘플의 밀도를 계산합니다. 이 신장과 같은 큰 장기 및 조직의 경우 여러 샘플로 반복 측정을 수행하고 단일 측정에서 평균 밀도를 계산합니다. 작은 샘플과 뇌하수체와 같이 전체적으로 측정된 작은 장기의 경우, 단일 측정 값에서 평균 장기 밀도를 계산하기 전에 측정을 세 번 반복하십시오.마지막으로, 장기, 조직 또는 장기 구획의 총 부피를 무게와 밀도에서 계산합니다. 한 모서리가 0에서 180도 방향과 평행한 정삼각형 원의 인쇄물에 고정 조직 표본을 놓습니다. 그런 다음 난수 테이블을 사용하여 난수 각도를 결정합니다.등각 원의 눈금에서 해당 표시를 찾습니다. 이 표시를 사용하여 등원의 눈금에 표시된 무작위 각도의 방향과 평행한 방향 및 샘플의 정지 표면에 수직으로 단면 평면을 사용하여 샘플을 통해 단면을 절단합니다. 단면이 아래를 향하도록 조직 블록을 코사인 가중 원에 놓습니다.정지 표면의 가장자리를 일대일 방향과 평행하게 배치합니다. 이제 난수 테이블을 사용하여 결정된 임의의 각도로 샘플을 통해 새 섹션을 자릅니다. 결과 단면 평면은 등방성 균일 랜덤 단면입니다.이 표는 침수 기술을 사용하여 측정된 여러 돼지 조직 및 기관의 대표 밀도를 보여줍니다. 대부분의 돼지 조직은 물의 밀도를 나타내는 것보다 약간 높은 밀도 값을 나타냅니다. 예를 들어 지방 조직과 같이 식염수에서 헤엄치는 조직은 밀도가 1보다 낮습니다.이 그림은 오리엔테이터(orientator) 기법으로 제조된 돼지 좌심실 심근의 4가지 대표적인 IUR 절편을 보여줍니다. 다른 IUR 섹션에서 변경된 절단 각도를 확인하십시오. 일단 숙달되면 조직 밀도 측정을 위한 침수 기술을 몇 분 안에 완료할 수 있습니다.제대로 수행되는 경우. 오리엔테이터(orientator) 기법으로 생성된 등방성 균일 무작위 조직 절편은 적절한 입체 분석 방법을 사용하여 정량적 형태학적 매개변수를 추정하는 데 적합합니다. 디지털 음악.

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연구

JoVE Journal

Medicine

의학

현재의 연구는 생체 재료 소프트 (뇌, 간, 건, 지방 등)의 축 동적 기계적 응답을 얻기 위해 결합 실험 - 유한 요소 시뮬레이션 방법을 규정하고있다. 때문에 표본의 발생 다축 실험 결과는 생체 재료의 유한 요소 해석의 반복 최적화를 통해 시뮬레이션 할 때 단축 진 응력 - 변형 동작으로 렌더링 된 분할 홉 킨슨 압력 바 시험에서 얻은 돌출.

소프트 생체 재료의 높은 변형 속도 기계 응답을 평가하기위한 결합 실험 - 유한 요소 모델링 방법론

이것은 야생에서 잡힌 박쥐의 게놈, 전사체 및 단백질 분석을위한 최적의 조직 준비를위한 프로토콜입니다. 그것은 박쥐 포획 및 해부, 조직 보존 및 박쥐 조직의 세포 배양을위한 프로토콜을 포함한다.

-Omics 분석 및 1 차 적인 세포 배양을 위한 박쥐의 조직 수집

이 프로토콜에서, 돼지 특이적 프라이머는 설계되었고, 플라스미드함유 돼지 특이적 DNA 단편이 시공되었고, 수량에 대한 표준 곡선이 확립되었다. cpsDNA는 종별 프라이머를 사용하여 돼지-마우스 세포 이식 모델 및 돼지-원숭이 동맥 패치 이식 모델에서 qPCR에 의해 정량화되었다.

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바이오뱅크는 생물의학 연구를 위한 중요한 자원이며 유럽 종양학 연구소의 중개 및 디지털 의학 부서를 위한 바이오뱅크는 이 분야의 모델입니다. 여기에서는 다양한 유형의 인간 생물학적 샘플 관리를 위한 바이오뱅크의 표준 운영 절차에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

중개 의학을 위한 바이오뱅크: 최적의 시료 관리를 위한 표준 운영 절차

이 프로토콜은 근치적 전립선 절제술 표본에서 샘플 수집을 용이하게 하는 방법을 설명합니다. 목표는 해부병리학적 기준에 따라 표본의 조직 샘플을 Biobank에 저장하기 전에 매핑, 특성화 및 미시적 매크로 절개하는 것입니다.

개선된 샘플링 기법 및 조직학적 특성 분석을 통한 전립선 종양 바이오뱅킹 신뢰성 향상

이 프로토콜은 3개월 된 덴마크 재래종 돼지에게 고속 공압 드릴을 사용하여 두개골 절제술을 수행하는 것을 설명합니다. 접근은 전두골을 통해 이루어지며 복부 경막과 기저 대뇌 반구를 드러냅니다. 이 절차를 통해 돼지 뇌의 많은 부분에 접근할 수 있습니다.

고속 Pneumatic Drill Craniectomy를 통한 돼지 뇌 접근

여기서는 처리 시간이 &gt;90% 감소하고, 세포 생존율이 높으며, 광범위한 호환성을 특징으로 지방유래 줄기세포와 지방세포를 효율적으로 분리하는 표준 방법을 제시합니다.

돼지 지방 조직에서 지방 유래 줄기세포와 지방세포의 효율적인 분리

배우세요 돼지 생물 의학 모델에서 바이오뱅크 조직 샘플링 및 처리 기법을. 침지법으로 조직 부피를 측정하고 방향자 기법으로 무편향 형태 분석을 수행합니다.

샘플링 전략 및 돼지 생물 의학 모델에서 Biobank 조직 샘플의 처리

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