2018년 3월 6일
실용적인 응용 프로그램 및 다운스트림 분석 biobank 프로젝트에서의 광범위 한 스펙트럼에 대 한 돼지 동물 모델의 대표적인 조직 샘플의 세대를 위한 방법의 성능을 시연, volumetry를 포함 하 여 체계적인 무작위 샘플링 그리고 차동 질적 및 양적 형태 론 적과 분자 분석 유형에 대 한 조직 샘플의 처리.
이 동영상은 바이오뱅크 돼지 조직 표본의 샘플링 및 처리를 위한 두 가지 핵심 기술을 보여줍니다. 침수 기법은 총 장기 및 조직 부피를 안정적으로 추정하고 오리엔테이터 기법은 정량적 형태학적 매개변수의 편향되지 않은 추정을 위해 무작위 등방성 조직 절편을 생성합니다. 조직 밀도 측정을 위한 침수 기법의 주요 장점은 모든 종류의 조직에 적용할 수 있고 큰 샘플뿐만 아니라 작은 샘플에 대해서도 신뢰할 수 있는 결과를 생성한다는 것입니다.
오리엔테이터 기술의 장점은 매우 효율적이며 큰 조직 샘플에서도 작동한다는 것입니다. 큰 장기에 대한 용적 측정을 시작하려면 장기에서 적절한 크기의 조직 조각을 절제합니다. 종이 타월로 샘플을 조심스럽게 닦아 과도한 혈액과 조직액을 제거합니다.
그런 다음 정밀 저울에서 샘플의 무게를 측정하고 샘플의 무게를 기록합니다. 적절한 크기의 비커에 0.9%식염수를 추가합니다. 조직 발아 중 넘침을 방지하기 위해 비커를 완전히 채우지 마십시오.
비커를 저울에 올려 놓고 집게 또는 자체 제작한 샘플 홀더를 집게 또는 샘플 홀더의 표시가 액체에 도달할 때까지 식염수에 담그십시오. 그런 다음 눈금 표시를 0으로 재설정합니다. 조직을 조심스럽게 부착하십시오.amp집게 또는 sample 홀더에 넣고 s를 완전히 담그십시오.amp표시된 위치에 도달할 때까지 s를 식염수에 담그십시오.
신뢰할 수 있는 밀도 측정을 기록하려면 샘플이 완전히 침수되었는지 확인하고 물에 잠긴 샘플이 비커의 내벽 또는 바닥에 접촉하지 않도록 하는 것이 중요합니다. 샘플을 제자리에 고정한 상태에서 저울에 표시된 중량을 기록합니다. 이 측정값과 실온에서의 식염수 밀도를 사용하여 샘플의 부피를 계산합니다.
그런 다음 샘플의 무게와 부피에서 조직 샘플의 밀도를 계산합니다. 이 신장과 같은 큰 장기 및 조직의 경우 여러 샘플로 반복 측정을 수행하고 단일 측정에서 평균 밀도를 계산합니다. 작은 샘플과 뇌하수체와 같이 전체적으로 측정된 작은 장기의 경우, 단일 측정 값에서 평균 장기 밀도를 계산하기 전에 측정을 세 번 반복하십시오.
마지막으로, 장기, 조직 또는 장기 구획의 총 부피를 무게와 밀도에서 계산합니다. 한 모서리가 0에서 180도 방향과 평행한 정삼각형 원의 인쇄물에 고정 조직 표본을 놓습니다. 그런 다음 난수 테이블을 사용하여 난수 각도를 결정합니다.
등각 원의 눈금에서 해당 표시를 찾습니다. 이 표시를 사용하여 등원의 눈금에 표시된 무작위 각도의 방향과 평행한 방향 및 샘플의 정지 표면에 수직으로 단면 평면을 사용하여 샘플을 통해 단면을 절단합니다. 단면이 아래를 향하도록 조직 블록을 코사인 가중 원에 놓습니다.
정지 표면의 가장자리를 일대일 방향과 평행하게 배치합니다. 이제 난수 테이블을 사용하여 결정된 임의의 각도로 샘플을 통해 새 섹션을 자릅니다. 결과 단면 평면은 등방성 균일 랜덤 단면입니다.
이 표는 침수 기술을 사용하여 측정된 여러 돼지 조직 및 기관의 대표 밀도를 보여줍니다. 대부분의 돼지 조직은 물의 밀도를 나타내는 것보다 약간 높은 밀도 값을 나타냅니다. 예를 들어 지방 조직과 같이 식염수에서 헤엄치는 조직은 밀도가 1보다 낮습니다.
이 그림은 오리엔테이터(orientator) 기법으로 제조된 돼지 좌심실 심근의 4가지 대표적인 IUR 절편을 보여줍니다. 다른 IUR 섹션에서 변경된 절단 각도를 확인하십시오. 일단 숙달되면 조직 밀도 측정을 위한 침수 기술을 몇 분 안에 완료할 수 있습니다.
제대로 수행되는 경우. 오리엔테이터(orientator) 기법으로 생성된 등방성 균일 무작위 조직 절편은 적절한 입체 분석 방법을 사용하여 정량적 형태학적 매개변수를 추정하는 데 적합합니다. 디지털 음악.
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본 영상에서는 바이오뱅크 돼지 조직 표본의 샘플링 및 처리를 위한 두 가지 핵심 기술을 보여줍니다. 침지법(submersion technique)은 전체 장기 및 조직의 부피를 추정하며, 정위법(orientator technique)은 편향 없는 정량적 형태학적 분석을 위해 무작위 등방성 조직 절편을 생성합니다.
돼지 바이오뱅크 조직의 표준화된 샘플링 및 처리는 바이오 제약 R&D 내 전임상 모델의 재현성과 중개 가치에 직접적인 영향을 미칩니다. 제한적이며 가치가 높은 동물 모델로부터 얻은 신뢰할 수 있는 부피 및 형태학적 데이터는 연구 간의 강력한 비교를 가능하게 하며, 초기 발견 단계에서의 예측 신뢰도를 뒷받침합니다. 이러한 검증된 기술은 후속 분자 및 정량 분석을 위한 시료의 품질을 보장함으로써 포트폴리오 결정의 근거가 됩니다.
이러한 샘플링 및 처리 방법은 돼지 바이오뱅크 조직을 초기 발견부터 전임상 연구에 이르기까지의 기초 자원으로 활용 가능하게 하여, 가설 검증, 분석법 개발 및 중개 연구를 지원합니다.