Name: 부분 Lobular Hepatectomy: Morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: 배우세요 신생아 마우스에서 부분 Lobular Hepatectomy를 이용한 형태학적 간 재생 유도 방법을. 최소 침습적 수술 기법으로 간 특이 줄기세포와 재생의학 연구에 활용됩니다.

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우리 감사 피 추 H & E와 조직학; C. 왕 및 유용한 토론에 대 한 A. 맥. 연구는 암 연구에 대 한 버지니아와 D. K. 루드비히 기금에서 자금을 통해 지원 되었다 국가 심 혼, 폐, 혈액 연구소 (R01HL058770 및 U01HL099999); 그리고 캘리포니아 연구소의 재생 의학 (RC1 00354) 보조금 I.W. 승 하는 인간 프론티어 과학 프로그램 경력 개발 상 (CDA00017), 독일 연구 재단 (RI 2787/1), Siebel 줄기 세포 연구소에 의해 지원 되었다 그리고 토마스 고 스테이 시 Siebel 재단 (1119368-104-GHBJI). J.M.T.는 새로운 미국인을 위한 NIH (T32GM007365), 국가 연구 봉사 상 (1F30DK108561), 그리고 바울과 데이지 소로 스 장학금에 의해 지원 되었다.

모든 동물 실험 평가 및 인증의 실험실 동물 케어 인터내셔널 (AAALAC) 및 스탠포드 대학 행정 패널 실험실 동물에 대 한 협회에 의해 명시 된 지침에 따라 실시 했다 케어 (APLAC), (프로토콜 번호 #10266) 미국, 또는 유럽 동물 복지 행위, 지침 2010/63/유럽에서. 프로토콜과 정부 바바리아, 독일의 동물 실험 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 더 허가 받았다: 55.2-1-54-2532-150-2015.
1. 동물 준비
<ol><li>생리대에 적절 한 침구와 빈 케이지를 준비 합니다.</li>
	<li>장갑과 동물을 만지고, 전에 어머니의 침구는 장갑에 문질러.</li>
	<li>빈으로 그들의 어머니와 장소에서 모든 강아지를 제거 합니다. 어머니의 침구의 일부를 제거 하 고 강아지와 함께 빈 감 금 소에.</li>
	<li>외과 분야에서 별도 깨끗 하 고 건조 장에 어머니를 놓습니다.</li>
	<li>외과 분야 준비 전에 돈 새로운, 깨끗 한 멸 균 장갑.</li>
</ol>2. 외과 분야 준비
<ol><li>10 mL 피 펫을 사용 하 여, 10 cm 배양 접시를 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)의 10 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>10 cm 배양 접시에 betadine 또는 반 발효 솔루션의 2 개 mL 플라스틱</li>
	<li>외과 분야에 해 범위를 놓습니다. 해 부 범위 램프 켜고 외과 의사의 편안 함에 빛의 레벨을 조정. 강아지 해 범위 램프 아래 수술 필드에 배치할 수 있습니다. 강아지의 복 부 표면에 그림자의 부재에 의해 적절 한 빛을 확인할 수 있습니다.</li>
	<li>Isoflurane 마 취 챔버 준비 ( 재료의 표참조) 코 콘. 챔버는 소변 또는 대변의 증거 없이 청소 되어야 한다. 외과 분야에서 해 범위에서 코 콘과 연결 된 튜브를 놓습니다. 산소와 isoflurane 원뿔을 전적으로의 흐름을 전환 하 고</li>
	<li>약 37 ° c.에가 열 패드와 함께 수술 복구 영역 준비 수술 복구는 난방 패드 위에 거 즈의 4 조각으로 이루어져 있어야 한다. 만약에 가능 하다 면, 어머니의 침구, 대변, 및 소변 어머니의 향기를 보존 하기 위해 거 즈 패드를 문질러. 참고: 그것은 경솔한 열 램프를 사용 하 여 온도 제어 하기 어렵습니다. 높은 온도 신생아 쥐의 죽음에서 발생 합니다.</li>
	<li>준비 하 고 압력솥으로 모든 수술 기구를 소독. 필요한 도구를 포함: 마이크로 해 부가 위, 집게를 마이크로 해 부, 거 즈, hemostat, 및 어떤 6-0 monofilament 비 흡수 봉합 사. 수술 악기 모든 유리 구슬 소독 기를 resterilzed 될 수 있습니다.</li>
</ol>3. 부분 Lobular Hepatectomy
<ol><li>그것의 다시 그리고 부드럽게 녹화 장소에는 손과 발에 코 콘에 그것을 배치 하 여 강아지를 anesthetize. 강아지 산소 5 %isoflurane 받게 될 해야 합니다.<ol>
<li>발가락 꼬 집 음 시험에 의해 확인 될 수 있는 5 분 또는 때까지 적절 하 게 취, 앉아 강아지를 허용 합니다.</li>
		<li>절 개 전에 피하 carprofen의 5 mg/kg을 주사. 참고: 전체 수술이 해야한다 더 이상 보다 30 분 가난한 결과 신생아 30 분 이상 전신 마 취 아래에서 관찰 될 수 없습니다. 주의 필드에 철저 한 준비를 통해 수술의 길이 봉합 유발 피부 눈물을 최소화 하기 위해 폐쇄 전에 피부 젖 음을 최소화 하기 위해.</li>
	</ol>
</li>
	<li>부드럽게 betadine와 젖은 작은 거 즈 패드와 후부 복 벽을 청소. 1 분 동안 건조 betadine 허용.</li>
	<li>마이크로 해 부가 위 집게와 바로 흉 곽 아래 왼쪽된 중간 clavicular 0.5 c m 절 개를 확인 합니다. 부드럽게 집게를 사용 하 여 피부를 분리 하 고 두 번째 깊은 절 개 복 막 구멍 (참조 그림 1 c, 왼쪽과 가운데)에</li>
	<li>부드럽게 복 막 구멍에서 왼쪽된 엽의 꼭대기를 강제로 뒤로, 마이크로 해 부가 위, 집게의 무뚝뚝한 끝을 사용 하 여 복 부의 양쪽에서 옆 압력을 적용. 왼쪽된 엽의 왼쪽된 꼭대기 해야 쉽게 시각된 (그림 1C, 오른쪽).</li>
	<li>
정점에서 절단 하 고 제거할 조직의 양을 무게.
	<ol>
<li>마이크로 해 부가 위를 사용 하 여 부드럽게 원하는 양의 왼쪽된 엽의 꼭대기에서 조직 절단.</li>
		<li>장소는 1.5 mL 튜브에 절단된 조직 PBS 가득합니다. 분석 균형을 사용 하 여 절단된 조직 무게 ( 재료의 표참조). 참고: 균형에서 거 즈 또는 종이의 조각을 놓고 그것을 포장. 그런 다음 절단된 조직 거 즈 또는 종이에 놓고 질량을 측정 합니다.</li>
		<li>드라이 아이스 냉동된 섹션 분석을 통해 최적의 절삭 온도 (10 월) 화합물에 1 시간 실 온에서 2 %paraformaldehyde 절단된 지역 및 장소를 수정. 모든 표준 cryostat를 사용 하 여 절단 7-10 µ m 섹션에서 얼어붙은 섹션을 분석 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>부드럽게 장착 사용 하 여 거 즈의 압 연된 조각, 복 막 구멍 왼쪽된 엽. 출혈이 중지까지 구멍에 거 즈를 둡니다.</li>
	<li>거 즈를 제거 하 고 젖은 외과 사이트와 주변 지역 PBS로 적셔 거 즈로.</li>
	<li>6-0 monofilament 외과 사이트, 실행 스티치와 비 흡수 봉합을 닫습니다. 복 막과 피부는 별도로 마감 한다. 참고: PBS로 적셔 거 즈로 피부를 부드럽게 일로 봉합 유도 눈물 최소화할 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게 하지만 철저 하 게 PBS와 젖은 거 즈로 강아지를 깨끗 하 고 아무 혈액 또는 betadine 남아 보장. 젖은 거 즈 패드를 롤 하 고 어떤 혈액 또는 betadine 청소 상처 기호에 부드럽게 문질러. 참고: 이것은 그들이 부적당 하 게 청소 하는 경우 어머니는 새끼를 빼어 수 있습니다 특히 중요입니다.</li>
	<li>코 콘에서 강아지를 제거 하 고 어머니의 대변과 소변에 노출 거 즈 패드를 포함 하는 복구 영역에 배치. 일단 강아지 복구, 어머니의 침구와 빈 감 금 소에 강아지를 교체 합니다. 참고: 열 램프를 사용 하지 마십시오. 열 램프를 사용 하 여 과열 신생아를 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>강아지의 원하는 수에 절차를 반복 합니다. 모든 강아지를 사용할 수 있지만 일반적으로 운영된 강아지 함께 교체에 운영 하지 않는 몇 가지 새끼를 두고 적당 하다.</li>
	<li>어머니의 감 금 소에 있는 그들의 어머니의 침구와 동시에 모든 새끼를 교체 합니다.</li>
</ol>4. 복구 및 분석
<ol><li>
후속 쥐에 매일.
	<ol>
<li>상처 폐쇄 남아 확인 하 고 있는 경우 모든 죽은 새끼를 제거.</li>
		<li>상처는 다시, 이전 기술, 및 반복 단계 3.8 3.12로 외과 사이트 및 복구 영역을 준비 합니다.</li>
		<li>Carpofen 피하 24 및 48 h 절차의 5 mg/kg을 주사.</li>
		<li>56 일 이상 새끼를 따릅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>이산화탄소 (CO2) 노출 및 자 궁 경부 전위에 의해 원하는 양의 수술 일 후 동물을 안락사.<ol>
<li>유도에 마우스를 놓습니다 / 안락사 챔버와 마우스까지 CO2 차례 호흡을 중지.</li>
		<li>자 궁 경부 전위에 의해 안락사를 확인 합니다. 앞-손가락 및 엄지를 사용 하 여 마우스의 등 쪽 목에 밀어 하 고 꼬리에 다른 손을 사용 하 여, 풀 다운.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
전체 간 일괄적 으로 제거 하 고 그것의 무게.
	<ol>
<li>신중 하 게 각 엽 하 고 별도로 무게 합니다. 참고: 조심 해 부 횡 경 막과 키 모 포털 혈관의 여 간을 제거 합니다. 신중 하 게 각 엽 근 위 첨부 파일에서을 해 부하 여 서로 돌출부를 구분 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>전체 간의 질량에 절단된 왼쪽된 엽의 질량을 비교 하 여 중생의 범위를 결정 합니다. 손상 되지 않은 왼쪽된 엽 전체 간의 대략 30% 이다.</li>
</ol>

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</ol>

저자 아무 공개 있다.

급성 간 상해는 전통적으로 화학 (아 세트 아미노 펜, 에탄올, 사염화 탄소), 또는 외과 모델 (70% 부분 hepatectomy)를 사용 하 여 연구 되었습니다. 재생 반응 후 70% 부분 hepatectomy 글로벌 hepatocyte 비 그리고 세포 분열4,5의 여러 라운드 특징 되었습니다. 그러나 출혈을 중지 하,이 모델은 제한으로 주요 혈관 재생에 대 한 비정상적인 환경을 떠나 출혈 해야 합니다. 많은 연구 결과 따라서 장소에서 발생 하는 재생에 대 한 총 건축을 떠나는 화학 손상을 통해 급성 상해의 다른 보다 적게 침략 적 모델을 고용 했다. 최근, Porrello 그 외 여러분 및 장 외 , 자리 팁, 마음과 귀7,8에 급성 부상 후 현저 하 게 다른 신생아 재생 응답을 증명...

기관를 다시 생성 하거나 복원 하는 형태와 기능, 능력 주로 진화 시간이 지남에 손실 될 생각 되었다. 급성 화학 또는 물리적 손상 후 성인 포유류 간의 재생 잠재력 비 대의 파도 세포 분열, 작동 하지만에서 결과의 몇 라운드에서 발생 하는 모든 나머지 hepatocytes의 동원을 포함 발견 되었습니다. 구조적으로 다른 장기1,2,3,,45. 최근, 연구 특성화 생활6,,78의 첫 번째 주 내에서 부상 신생아 포유류 장기의 재생 반응 하기 시작 했다. 이러한 연구 신생아 개발 하는 동안 부상 때 특정 포유류 장기 보상 성장 또는 섬유 증7,8대신 형태학 중생과 반응으로 나타났습니다.
최근 연구 글로벌 구조와 기능 둘 다의 재생 초기 신생아 기간6,,78중 발생 하는 것으로 나타났습니다. 화학 상해 또는 에탄올9,,1011, 아 세트 아미노 펜12,,1314,15의 설립된 간 부상 프로토콜 포함 , 사염화 탄소16,,1718,19, 70% 부분 hepatectomy4,,2021또는 왼쪽의 제거 및 중간로 브입니다. 화학 관리 hepatocyte 세포 죽음에 이르게 되지만 종종 마이크로 및 매크로 구조 그대로. Morphologic 재생 이러한 맥락에서로 전체 간 건축은 말소 되지 쉽게 공부 될 수 없습니다. 70% 부분 hepatectomy 봉합 결 찰, 주요 혈관의 출혈을 멈추게 하는 데 필요한는 포함 되지만 맥 관 구조의 영구 중단 하면서 비 생리 환경. 또한,이 방법은 성인 설치류에만 사용 되 고 신생아의 응용 기술적으로 매우 어렵습니다. 이 염두에서에 두고, 우리 개발 왼쪽된 엽의 꼭대기의 20-30%는 신생아 P0 마우스에서 제거 하는 방법 (그림 1A-1B). 이 메서드와 보수적인 수술, 최소 침 습, 아니라 기술적으로 도전적인, 총 체 맥 관 구조, 발생 하는 재생을 위한 공간을 떠나 결 찰 하지 않고 형태학의 손실에 지도. 아래에서 설명 하는 결과 단계별 프로토콜 출생 후 생활의 초기 단계에서 포유류 신생아 재생을 공부 하기 위하여 부분 lobular hepatectomy 신생아 쥐에 수행 하기 위해 어떤 연구원에 대 한 수 있습니다. 이 방법은 또한 있다 재생 의학 및 줄기 세포 생물학, 비교 연구 분명 응용 프로그램으로 생활의 나중 단계 동안에 사용할 수 있습니다.
가장 일반적인 급성 간 상해 연구는 화학적으로 유도 된 손상, 성인 간 절단, 또는 70% 부분 hepatectomy. 화학 손상 자주 아 세트 아미노 펜, 사염화 탄소, 또는 에탄올, 정 맥, 복 또는 구두 관리를 포함 하 고 비교적 간단 하 고 비-침략 적 부상 모델 이다. 이전, 화학 손상 결과를 hepatocyte 세포 죽음, 하지만 종종 잎 기질 및 실질 구조 그대로, morphologic 중생에 대 한 주장을 하 고 어려운 논의 했다. 화학 손상 종종 간장 혈관에 센터 공부 사이트와 셀 관련 부상, 유용한 기술 하기가 하지만 또한 어려운가, 전체 기관 수준에서 다른 인구는 선박에서 놓일 수 고를 수 있습니다. 재생에 기여 한다. 이러한 제한에도 불구 하 고 화학 손상에 유용 하 고 매우 순수 관련 부상 모델 아직도 남아 있다.
성인 70% 부분 hepatectomy 결 찰 간 맥 관 구조에 따라 왼쪽과 중간 엽의 제거를 포함. 응답 hepatectomy로 잘 특징 되었습니다: 절단된 간 게시물 70% 부분 hepatectomy 나머지 오른쪽 고 꼬리가 돌출부의 hepatocytes로 원래 손상된 엽의 조잡 한 다른 아키텍처를 개발 하는 14 일 비 대 및 세포 분열4,5의 몇 라운드를 받 다. 이 분실 된 질량와 기능, 하지만 두 절단된 돌출부를 다시 생성 실패 하 고 따라서 총 형태를 대체 하지 않습니다. 그 결과, 70% 부분 hepatectomy 부상 응답 제한 재생으로 보상 성장 메커니즘 연구 유용 합니다.
여기, 우리는 완전히 신생아 부분 lobular hepatectomy에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 절차에는 적절 한 동물 선택 및 준비, 수술 필드 준비, 수술, 및 복구 포함 한다. 각이 단계 적응과 최적화 프로토콜의 다른 응용 프로그램에 대 한 필요할 수 있습니다.
그러나, 다른 세포 인구와 재생성의 메커니즘 연구, 우리 또한 사용 다양 한 Cre를 은닉 하는 쥐를 포함 하 여 다양 한 유전자 변형 동물, 우리는 광범위 하 게 수행 하 고 야생 유형 C57BL/6J 강아지 (잭 스 000664)에이 프로토콜을 최적화 하 고 CreERT2 transgenes 또는 노크 기능 (잭 스Axin2CreERT2 018867, 및 Sox9CreERT2 잭 스 018829) 무지개 및 mTmG 시스템 (R26VT2/GK3, 같은 형광 기자와 함께 R26 mT/mG) 22 , 23. 우리 발견 다른 마우스 변종에 대 한이 방법론을 변경할 필요가 없습니다 생존 결과 또는 재생 잠재력에 차이가 관찰 했다.
다른 동물 긴장을 사용 하 여, 우리는 또한 4-hydroxy-tamoxifen 등 5-ethynyl-2-deoxyuridine (듀) 작은 분자 치료 신생아 쥐에 부분 lobular hepatectomies 수행. 옥수수 기름은 사망률의 중요 한 원인 발견으로 디 메 틸 sulfoxide (DMSO)와 에탄올 용 매로 사용 되었다. 우리는 그렇지 않으면 작은 분자의 복 관리 생존 또는 재생 결과 미치지 않았다 것을 발견. 우리는이 프로토콜 중생의 다양 한 측면이 다른 작은 분자와 함께 사용 하기 위해 적용할 것 이다 예측.
신생아 마우스 수술 기술적으로 도전적 일 수 있다 고 동물 처리 및 해 부 현미경에서 특별 한 전문성을 요구할 수 있습니다. 축산 전문 산 모 식인 풍습을 방지 해야 하는 수술 하 고 즉각적인 복구 기간 동안.

<table><tbody><tr><td>Animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mother with litter of day 0 neonatal pups (any strain)대</td>리모 및 대리모 깔짚 (선택 사항)<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Standard Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Serum (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Providine-iodine or equivalent antiseptic solution</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Surgical Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td>Zeiss</td><td>ZEMSDV4L MFR # 435421-9901-000</td><td></td></tr><tr><td>3mm 스트레이트 스프링 마이크로 가위</td><td>Vannas</td><td>72932-01</td><td></td></tr><tr><td>5SF 집게</td><td>Dumont</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>스트레이트 켈리 집게</td><td>Grainger</td><td>17-050G</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드</td><td>Sunbeam</td><td>000771-810-000</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Abbott Labs</td><td>0044-5260-05</td><td></td></tr><tr><td>설치류 마취 시스템</td><td>Kent Scientific</td><td>1205S</td><td></td></tr><tr><td>거즈, 10.16 x 10.16cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-761-52</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Standard Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1.5ml microcentrifuge tube</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td></td></tr><tr><td>6-0 monocryl sutures</td><td>Ethicon</td><td>MCP489G</td><td></td></tr><tr><td>Petri</td><td>dish Fisher Scientific</td><td>S35839</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-Aid, 일반, 110V</td><td>Drummond</td><td>4-000-110</td><td></td></tr><tr><td>Mettler Toledo NewClassic ME 분석 저울</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-912-402</td><td></td></tr><tr><td>저비용 인덕션 챔버</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0730</td><td></td></tr></tbody></table>

부분 lobular hepatectomy: morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델

Partial Lobular Hepatectomy: A Surgical Model for Morphologic Liver Regeneration

형태학 기관 재생 급성 조직 손실 다음 낮은 척추 동물 중 일반적 이지만 거의 포유류 출생 후 생활에서 관찰 됩니다. 성인 간 재생 70% 부분 hepatectomy 후 남은 엽 대사 활동의 복원 하지만 부상된 엽의 형태와 건축의 영구 손실에 일부 복제 hepatocyte 비 결과. 여기, 우리는 생리 환경 재생에 도움이 되는 신생아에서 새로운 수술 방법 선발. 이 모델 왼쪽된 엽 정점 및 후속 보수적인 관리 처방의 절단을 포함 하 고 주요 간 선박 또는 생리 환경 재생 발생할 수 있습니다 떠나는 화학 상해의 결 찰에 대 한 필요성을 결여 된다. 우리는 자르고 있는 동안 부상된 간 전환 기관 재생에서 보상 성장에 비 대에 의해 청소년 (p 7-14) 쥐에 게이 프로토콜을 확장 합니다. 제시, 짧은 30 분 프로토콜 중생, 포유류에서 그것의 나이 관련 된 감소 및 상 상속 간 줄기 또는 창시자의 특성화의 메커니즘을 연구 하는 프레임 워크를 제공 합니다.

그림 1A ( 그림 1B에서 도식), 신생아 부분 lobular hepatectomy의 일반적인 타임 라인과 재생 관찰 될 때까지 대기 하는 시간의 예상된 길이 자세히 설명 합니다. 왼쪽된 엽의 미묘한 재생 관찰된 7-14 일 게시물 수술 수 있습니다. 전체 재생 56 일 게시물 수술 후에 종종 관찰 되었다. 마우스는 수술 후 생리 이상이의 흔적을 표시 합니다.
마우스 부분 lobular hepatectomies를 겪고 2, 7, 14, 35, 복구 및 56 일 허용 되었다. 되며과 복구 후 이러한 마우스에서 다친된 왼쪽된 돌출부의 오신 (H &amp; E)은 그림 2에 표시 됩니다. 특히, 56 일 후 ...

여기, 우리 신생아 (0 일) 쥐에서 왼쪽된 간 엽의 부분 절제 하는 새로운 방법을 제시. 이 새로운 프로토콜은 급성 간 상해 및 신생아 속에서 상해 응답 공부 적합 합니다.

부분 Lobular Hepatectomy: Morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델

Morphological organ regeneration following acute tissue loss is common among lower vertebrates, but is rarely observed in mammalian postnatal life. Adult ...

이 수술 절차의 전반적인 목표는 부분 소엽 간 절제술을 통해 형태학적 간 재생을 유도하는 것입니다. 이 방법은 줄기세포 생물학 및 재생 의학 분야에서 형태학적 간 재생 및 간 특이적 줄기세포에 대한 주요 질문에 답할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 최소 침습적이며 화학적 모욕이나 소작이 필요하지 않다는 것입니다.동물을 만지기 전에 어미 우리에서 가져온 침구를 장갑에 문지릅니다. 그런 다음 어미의 새장에서 모든 새끼와 일부 침구를 발열 패드 위에 있는 빈 우리로 옮깁니다. 다음으로, 해부 현미경 아래에 강아지를 놓습니다.발가락 꼬집음에 대한 반응 부족으로 적절한 수준의 진정을 확인한 후, 작은 거즈 패드를 사용하여 동물의 후복벽을 베타딘으로 소독합니다. 마이크로 절개 가위와 집게를 사용하여 흉곽 바로 아래 왼쪽 쇄골 중간 50cm 절개를 만듭니다. 집게를 사용하여 피부를 부드럽게 분리합니다.그런 다음 복막강을 두 번째로 깊게 절개하고 미세 절개 가위와 집게의 뒤쪽 뭉툭한 가장자리를 사용하여 복부 양쪽에 부드러운 측면 압력을 가하여 왼쪽 엽의 정점을 복막강 밖으로 밀어냅니다. 좌엽의 왼쪽 정점이 보이면 엽에서 적절한 양의 실험 조직을 절단하고 조직을 얼음 위의 1.5ml PBS 튜브에 넣습니다. 말린 거즈 조각을 사용하여 왼쪽 엽을 복강으로 부드럽게 되돌립니다.출혈이 멈추면 거즈를 제거하고 PBS를 적신 거즈로 수술 부위와 주변 부위를 적십니다. 봉합사와 러닝 스티치로 수술 부위를 봉합합니다. 그런 다음 PBS에 적신 거즈를 강아지와 상처 부위에 부드럽지만 철저히 굴려 혈액이나 베타딘이 남지 않도록 합니다.강아지가 어미의 대변과 소변에 노출된 거즈 패드 근처에서 회복할 수 있도록 합니다. 모든 새끼가 간절제술을 받았을 때 모든 동물과 침구를 어미의 우리로 되돌려 보냅니다. 엽의 무게를 잰 후 조직 샘플을 실온에서 1시간 동안 2%파라포름알데히드에 고정합니다.고정이 끝나면 드라이 아이스 위에서 얼기 위한 최적의 절단 온도 매체를 포함하는 개별 냉동 금형으로 조직을 옮깁니다. 그리고 표준 저온 유지 장치를 사용하여 각 엽의 7-10마이크로미터 단면을 획득합니다. 최소 56일 동안 매일 새끼를 확인하여 상처가 닫혀 있는지 확인하고 수술 후 24시간 및 48시간 후에 진통제를 주사합니다.적절한 실험 종료 지점에서 블록에 있는 각 강아지의 간을 수확하고 무게를 잰다. 그런 다음 근위부에 있는 각 엽을 조심스럽게 분리하고 절단된 좌엽의 질량을 전체 간의 질량과 비교하여 각 엽의 재생 정도를 결정합니다. 좌엽의 미묘한 재생은 수술 후 7-14일 후에 관찰할 수 있으며 전체 재생은 종종 56일 후에 관찰됩니다.조직학적 분석에 의해 밝혀진 재생된 간의 간세포 영역에는 큰 차이가 없습니다. 또한, 신생아용 마우스에 EdU를 주사한 결과, 손상되지 않은 대조군에 비해 손상된 재생 좌엽의 증식 세포 수가 크게 증가한 것으로 나타나 세포 증식이 신생아의 좌엽 재생에 기여한다는 것을 시사합니다. 그러나 출생 후 14일차 어린 마우스의 간절제술은 좌엽의 재생이 감소하고 손상되지 않은 엽의 보상이 증가합니다.14일이 지나면 급성 절제술에 대한 부상 반응이 엽 특이적 재생에서 전체 보상으로 전환됨을 나타냅니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 15분 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 어미나 새끼에게 과도한 스트레스를 주지 않도록 최대한 주의하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라 연속 간절제술 또는 만성 간 손상과 같은 다른 방법을 수행하여 간의 재생 가능성을 추가로 평가할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 줄기세포 생물학 분야의 연구자들이 신생아 쥐의 간 재생을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 신생아 마우스 간의 엽 특이적 제어 절단 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.이소플루란으로 작업하는 것은 매우 위험하며 이 절차를 수행할 때 항상 안면 마스크와 장갑과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

partial-lobular-hepatectomy-surgical-model-for-morphologic-liver

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

간 전이 절제 후 종양 재발률이 높은 것은 해결되지 않은 문제로 남아 있습니다. 예시된 마우스 모델은 이러한 재발의 이유를 조사하는 데 유용할 수 있습니다. 간 절제 모델과 간내 종양 세포 주입을 최초로 결합합니다.

간내 종양 성장에 대한 간 절제술의 영향

상연 hepatectomy에 대 한 연결 간 파티션 및 포털 정 맥 결 찰을 사용 하 여 빠른 간 비 대를 유도 (ALPPS) 경계선 불과하다 간 종양의 절제에 대 한 제안 되었습니다. 이 모델 급속 한 비 대에 관여 하는 메커니즘을 명료 하 고 홍보 또는 중생의 가속을 차단 하는 약물의 테스트 있습니다.

연결 간 파티션과 무대 Hepatectomy (ALPPS) 절차에 대 한 포털 정 맥 결 찰의 쥐 모델

우리는 끄 덕의 부분 hepatectomy (PHx) 및 비장을 통해 세포 이식 수행을 위한 프로토콜을 설명 했습니다. SCID (끄 덕 임. CB17-Prkdcscid/J) 쥐. 이 프로토콜에서 절 개 노출 하 고 셀의 intrasplenic 이식에 대 한 또 다른 절 개에 의해 따라 간 좌 엽 resect 이루어집니다.

끄 덕 임에서 부분 Hepatectomy 후 Hepatocytes의 intrasplenic 이식 SCID 마우스

우리 더 vivo에서 부분 간 미래에 엔지니어링을 공부에 대 한 전제 조건으로 쥐에서 vivo에서 단일 간 엽 관류 모델에 대 한 새로운 수술 기법을 설정 합니다.

Vivo에서 부분 간 엔지니어링을에서 위한 쥐를 기초로 새로운 수술 기법

이 프로토콜은 간 재생의 연구를 가능하게 하기 위하여 성인 얼룩말물고기에 있는 간의 복부 엽을 제거하기 위한 절차를 기술합니다.

성인 얼룩말 피시의 부분 간 절제술

지질이 함유된 간세포는 간 재생에 내재되어 있지만 일반적으로 밀도 구배 원심분리 시 손실됩니다. 여기에서 우리는 지방성 간세포를 유지하는 최적화된 세포 분리 프로토콜을 제시하여 마우스에서 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 대표적인 집단을 생성합니다.

생쥐의 부분 간 절제술 후 재생 간세포의 분리

수많은 연구에서 해부학 적 절제술의 장점이 입증되었습니다. 그럼에도 불구하고 해부학적 절제가 R0 절제율을 증가시킬 수 있는지 여부는 여전히 논란의 여지가 있습니다. 결과적으로, 본 연구는 수술 후 재발 및 전이를 줄일 수 있는 복강경 간 절제술에서 해부학적 절제술과 결합된 en bloc 개념을 포함하는 혁신적인 절차를 설명합니다.

복강경 간 절제술에서 해부학적 절제술과 결합된 En Bloc 개념의 적용

단계적 간절제술(ALPPS)을 위한 간 분할 및 문맥 결찰술의 연관성은 1단계 수술 후 몇 주 후에 놀라운 간 재생을 초래하는 것으로 나타났습니다. ALPPS를 받은 동물 모델은 잠재적인 간 재생 능력을 탐색하고 유리한 임상 결과를 달성하기 위해 개발되었습니다.

현미경 검사의 도움을 받은 병기 간절제술 절차를 위한 연관 간 분할 및 문맥 결찰의 마우스 모델

환자 종양에서 생성된 오가노이드를 생쥐 간에 항소적으로 주입합니다. 종양이 없는 간 조직의 절제는 종양이 위치한 간 조직에 재생 환경을 조성합니다.

간 재생이 종양 성장에 미치는 영향을 조사하기 위한 간세포 암 환자 유래 오가노이드 이종이식 모델

부분 2/3(66%) 간절제술의 마우스 모델은 문헌에 잘 설명되어 있지만, 간 이식 후 소형 증후군을 모방한 더 확장된 간절제술은 거의 사용되지 않았습니다. 우리는 건강한 마우스에서 약 50%의 수술 후 치사율을 초래하는 마우스 모델에서 확장된 78% 간 절제술 절차에 대해 설명합니다.

마우스 수술 모델에서 확장된 78% 간절제술

배우세요 신생아 마우스에서 부분 Lobular Hepatectomy를 이용한 형태학적 간 재생 유도 방법을. 최소 침습적 수술 기법으로 간 특이 줄기세포와 재생의학 연구에 활용됩니다.

부분 Lobular Hepatectomy: Morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델

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