부분 Lobular Hepatectomy: Morphologic 간 재생에 대 한 수술 모델

이 수술 절차의 전반적인 목표는 부분 소엽 간 절제술을 통해 형태학적 간 재생을 유도하는 것입니다. 이 방법은 줄기세포 생물학 및 재생 의학 분야에서 형태학적 간 재생 및 간 특이적 줄기세포에 대한 주요 질문에 답할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 최소 침습적이며 화학적 모욕이나 소작이 필요하지 않다는 것입니다.

동물을 만지기 전에 어미 우리에서 가져온 침구를 장갑에 문지릅니다. 그런 다음 어미의 새장에서 모든 새끼와 일부 침구를 발열 패드 위에 있는 빈 우리로 옮깁니다. 다음으로, 해부 현미경 아래에 강아지를 놓습니다.

발가락 꼬집음에 대한 반응 부족으로 적절한 수준의 진정을 확인한 후, 작은 거즈 패드를 사용하여 동물의 후복벽을 베타딘으로 소독합니다. 마이크로 절개 가위와 집게를 사용하여 흉곽 바로 아래 왼쪽 쇄골 중간 50cm 절개를 만듭니다. 집게를 사용하여 피부를 부드럽게 분리합니다.

그런 다음 복막강을 두 번째로 깊게 절개하고 미세 절개 가위와 집게의 뒤쪽 뭉툭한 가장자리를 사용하여 복부 양쪽에 부드러운 측면 압력을 가하여 왼쪽 엽의 정점을 복막강 밖으로 밀어냅니다. 좌엽의 왼쪽 정점이 보이면 엽에서 적절한 양의 실험 조직을 절단하고 조직을 얼음 위의 1.5ml PBS 튜브에 넣습니다. 말린 거즈 조각을 사용하여 왼쪽 엽을 복강으로 부드럽게 되돌립니다.

출혈이 멈추면 거즈를 제거하고 PBS를 적신 거즈로 수술 부위와 주변 부위를 적십니다. 봉합사와 러닝 스티치로 수술 부위를 봉합합니다. 그런 다음 PBS에 적신 거즈를 강아지와 상처 부위에 부드럽지만 철저히 굴려 혈액이나 베타딘이 남지 않도록 합니다.

강아지가 어미의 대변과 소변에 노출된 거즈 패드 근처에서 회복할 수 있도록 합니다. 모든 새끼가 간절제술을 받았을 때 모든 동물과 침구를 어미의 우리로 되돌려 보냅니다. 엽의 무게를 잰 후 조직 샘플을 실온에서 1시간 동안 2%파라포름알데히드에 고정합니다.

고정이 끝나면 드라이 아이스 위에서 얼기 위한 최적의 절단 온도 매체를 포함하는 개별 냉동 금형으로 조직을 옮깁니다. 그리고 표준 저온 유지 장치를 사용하여 각 엽의 7-10마이크로미터 단면을 획득합니다. 최소 56일 동안 매일 새끼를 확인하여 상처가 닫혀 있는지 확인하고 수술 후 24시간 및 48시간 후에 진통제를 주사합니다.

적절한 실험 종료 지점에서 블록에 있는 각 강아지의 간을 수확하고 무게를 잰다. 그런 다음 근위부에 있는 각 엽을 조심스럽게 분리하고 절단된 좌엽의 질량을 전체 간의 질량과 비교하여 각 엽의 재생 정도를 결정합니다. 좌엽의 미묘한 재생은 수술 후 7-14일 후에 관찰할 수 있으며 전체 재생은 종종 56일 후에 관찰됩니다.

조직학적 분석에 의해 밝혀진 재생된 간의 간세포 영역에는 큰 차이가 없습니다. 또한, 신생아용 마우스에 EdU를 주사한 결과, 손상되지 않은 대조군에 비해 손상된 재생 좌엽의 증식 세포 수가 크게 증가한 것으로 나타나 세포 증식이 신생아의 좌엽 재생에 기여한다는 것을 시사합니다. 그러나 출생 후 14일차 어린 마우스의 간절제술은 좌엽의 재생이 감소하고 손상되지 않은 엽의 보상이 증가합니다.

14일이 지나면 급성 절제술에 대한 부상 반응이 엽 특이적 재생에서 전체 보상으로 전환됨을 나타냅니다. 이 기술을 숙달하면 제대로 수행하면 15분 이내에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 어미나 새끼에게 과도한 스트레스를 주지 않도록 최대한 주의하는 것이 중요합니다.

이 절차에 따라 연속 간절제술 또는 만성 간 손상과 같은 다른 방법을 수행하여 간의 재생 가능성을 추가로 평가할 수 있습니다. 개발 후 이 기술은 줄기세포 생물학 분야의 연구자들이 신생아 쥐의 간 재생을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 신생아 마우스 간의 엽 특이적 제어 절단 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

이소플루란으로 작업하는 것은 매우 위험하며 이 절차를 수행할 때 항상 안면 마스크와 장갑과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.