Name: 급성 및 만성 Ecotoxicity 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri 의 테스트에 대 한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-24T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: 배우세요 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri를 이용한 급성 및 만성 독성물질 생물검정법으로 생활사 특성 분석 및 환경독성학 연구에 활용하는 방법입니다. 이 기법은 수생 생태계 오염 영향 평가에 중요한 통찰을 제공합니다.

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우리는 물 샘플의 분석에 대 한 감사는 UAntwerpen와는 시간적의 작물 보호 학과의 구체 그룹에. 이 프로젝트 중 지원 우수 센터에 의해 제공 된 ' 환경 및 사회 진화 역학 (PF/10/007) 구 루벤 연구 기금. AFG (11Q0516N) 및 ESJT (FWO-SB151323)로 박사 투자 했다 고 FWO 플랑드르 (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek)에서 박사 후 연구원으로 TP (12F0716N).

여기에 설명 된 모든 방법은 KULeuven의 윤리 위원회에 의해 승인 되었습니다가지고.
1. 화 명 furzeri 의 일반 유지 보수
<ol><li>준비 물고기 14 ° C의 온도에서 매체 (pH 7)와 600 µS/c m (24 ° C)의 전도도에 추가 표준화 된 소금, 정제 타입 II 물을 추가.</li>
	<li>표준화 된 조건13에서 저장 된 GRZ (Gona-토크쇼-Zhou) 연구소 라인에서 계란을 선택 합니다. (즉 해치 준비), DIII 단계에서 계란을 선택 인식할 수 있는 황금 눈9 의 그리고 부드럽게 존재에 의해 그들 핀셋의 부드러운 쌍을 전송 플라스틱 2 리터 탱크 (탱크 당 더 이상 약 30 알). 참고: 하기 위해서는 건강 한 시험 생물의 충분 한 수, 필요한 물고기 애벌레의 수로 두 번 많은 계란 해치.</li>
	<li>12 ° C에서 물고기 매체의 1 cm를 추가 하 고 물 온도 실내 온도 (24 ° C)9점차 수렴 하 게. 물고기는 처음 12 h 이내 해치 것입니다.</li>
	<li>24 시간 후 피드는 파묻혀 갓 부 화 Artemianauplii 집중된 투여 (대 한 음식의 양과 주파수에 자세히 Polačik 외. 20169번 식 프로토콜을 참조)에 의해 5 cm에 물 깊이 증가 물고기 매체 추가.</li>
	<li>36 h 후 피드는 파묻혀 갓 부 화 Artemia nauplii 의 다른 집중된 투여 하 고 물고기 매체 물 깊이 10 cm를 증가 추가 합니다.</li>
	<li>14 h:10 h에서 일정 한 온도 조건 (예: 보육, 기후 실 또는 온수 물 목욕) 물고기 컨테이너를 품 어 빛: 다크 정권.</li>
	<li>실험을 시작 하기 전에 복잡 한 물고기 컨테이너 (물고기) 노출 노출 매체의 높은 농도 함께 그들을 작성 하는 것 그것을 떠날 하 여 복합 하룻밤 실제 컨테이너에 유독의 전송을 제한 하려면 실험입니다.</li>
	<li>해칭, 후 48 h 노출 실험을 시작 하는 건강 한 부 력 애벌레를 선택 합니다. 무시 하 고 결과적으로 장애인된 부 력 그들의 수영 방광을 채우기 할 수 없었던 소위 배 슬라이더 (지속적으로 바닥에 싱크).</li>
</ol>2. 단기 노출 프로토콜
참고: 연구원 치료 당 적어도 20 복제 (별도 항아리에 20 물고기)에 대 한 목표로 한다. 용 매를 사용 하 여 화합물의 재고 솔루션을 준비 하는 경우 모든 권한 치료 뿐만 아니라 용 매 제어는 포함 되어야 합니다. 솔벤트 컨트롤 최고 노출 농도에서 용 매 농도 인 용 매의 양을 포함 해야 합니다.
<ol><li>그들 하 고 적절 한 노출 매체 (다른 toxicant 농도)와 그들을 작성 하는 것에 의해 실험 용기 (0.5 L 유리 항아리)를 준비 합니다. 정확한 농도 얻기 위해 화합물을 추가 합니다.</li>
	<li>컨테이너 (개별 모니터링에 대 한 컨테이너 당 1 물고기)에 애벌레 (48 h 후 부 화)를 개별적으로 전송 합니다. 참고: 물고기 음식과 침략에 대 한 경쟁 등 사회적 상호 작용의 잠재적인 혼란 효과 최소화 하기 위해 개별적으로 노출 됩니다. 그러나, 물고기 실험 동물 사용에 대 한 윤리 기준에 따라에서 시각적으로 상호 작용할 수 있습니다.</li>
	<li>최대 2 주 동안이 급성 노출 후속. 그 시간 동안, 물고기 먹이 광고 libitum Artemia nauplii 두 번 하루, 7 일/주를.</li>
	<li>새로 고침 매체 매일 수 질을 유지 하 고 복합 저하의 잠재적인 영향을 최소화 합니다. 주요 물 변수 모니터링 (용 존된 산소 수준 80%를 초과 한다, 전도도 해야 600 그리고 700 µS/c m, pH 7.8와 8.2, 고 경도 (CaCO3)로 사이 350와 450 mg/L, 최적의 양육 조건의 범위 내 명. furzeri 9)에 대 한. 전과 후 실제 화합물 농도 결정 하는 매체 물 샘플을 가져가 라.</li>
	<li>끝점<ol>
<li>물고기 사망, 스트레스에 대 한 확인 (예: 탈 선 행동: 거꾸로 수영) 또는 질병 매일 (아침, 저녁). Shedd 외 의 게시를 참조 하십시오 (1999) 사망률, 스트레스 또는 질병의 관찰에 대 한 내용은 12 .</li>
		<li>LC 계산 복용량 응답 곡선 (리츠와 Streibig, 2005)를 사용 하 여 다른 시간 지점에서 사망률에 따라50 값. Drm 함수를 사용 하 여 R v3.2.3 (연구 개발 핵심 팀, 2016) drc 패키지에서 또는 유사한 통계 접근.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 만성 노출 프로토콜
참고: 상태 생선/25 비뚤어진된 섹스 률의 가능성을 최소화 하 고 자연적인 원인으로 인 한 잠재적인 배경 사망률에 맞게 실험의 발병의 최소 목표 (즉. 연령 관련 사망률).
<ol><li>(참조 1) 부 화</li>
	<li>차 전 (2 일 후-16 일 후 부 화 부 화)<ol>
<li>2.1-2.4에 설명 된 대로 프로토콜을 따라</li>
		<li>실험의 두 번째 단계 동안 매체 주 (없음 다, 아래 참조)에 걸쳐 떨어집니다. 화합물의 비슷한 저하를 허용 하기 위하여 큰 불활성 용기에 1 주일에 대 한 매체의 필요한 양을 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>단계 II (16 일 후 부 화-끝)<ol>
<li>2 L 준비 실험 유리 항아리 complexing에 의해 그들 화합물으로. 정확한 노출 매체와 항아리와 항아리 공기에 쐬는 공기 튜브를 추가. 실험의 나머지 부분에 대 한 이러한 항아리에 개별적으로 집 물고기. 윤리 기준에 맞게 시각적 상호 작용을 허용 합니다.</li>
		<li>주 당 한 번 매체를 새로 고칩니다. 동일한 노출 매체를 포함 하는 새 항아리에 그물과 물고기를 전송. 각 농도 처리에서 화합물의 저하를 모니터링 하는 데 1 주일 동안 매일 물 샘플을 가져가 라. 각 치료 경우 여러 스트레스에 대 한 저하 곡선 테스트 (예: 다른 온도 정권에서 화합물의 독성)를 계산 합니다. 주 당 세 번 abiotic 매개 변수 (pH, 온도, 용 존 % 산소, 전도도)를 측정 합니다.</li>
		<li>2 일 후 부 화 (dph) 23 dph까지, 하루에 두 번, 주 ad libitum Artemia nauplii 당 7 일 물고기를 먹이. 24 dph-37 dph에서에서 다진된 Chironomus 애벌레와 광고 libitumArtemia 다이어트를 보완. 에 38 dph에서 두 번 하루, 7 일 주일 광고 libitum Chironomus 애벌레 냉동 물고기를 먹이.</li>
	</ol>
</li>
	<li>끝점<ol>
<li>매일 물고기 사망, 스트레스 또는 질병12에 대 한 확인 합니다.</li>
		<li>결정 성장, 페 트리 접시에 생선을 전송 하 여 (9 dph-16 dph-21 dph-...) 주간 기준 본문 크기를 측정 하는 그들의 저수지에서 매체 가득 합니다. (고정된 높이)에서 4-5 위에서 물고기의 보정 크기 사진을가 고 디지털 공간 측정 프로그램 (예: ImageJ)를 사용 하 여 그들을 분석. 참고: 성인 물고기에 대 한 전체 프로세스를 측정 하는 동안 잠긴 모든 물고기를 유지 하 여 처리 스트레스를 최소화 하기 위해 높은 페 트리 접시를 사용 합니다.</li>
		<li>남성 성숙에 대 한 시각적으로 매일 15 dph 이후부터 채색에 대 한 물고기를 검사 합니다. 결혼식 채색 (2 차 성적 특성)의 첫 번째 징후에 대 한 지 느 러 미를 확인 하십시오. 이 표시 됩니다 프록시 남성 성숙으로 첫 날을 사용 합니다.</li>
		<li>커플 비 sexed 물고기 같은 치료 그룹의 남성 또는 주당 3 회 실험 비 남성 30 dph에서 이후 여성 성숙 시간 (첫 번째 계란 입금 일)을 결정 하기 위하여. 이 위해, 3.4.5에 설명 된 산란 프로토콜을 사용 합니다.</li>
		<li>통치에 대 한 몇 가지 성숙한 성숙한 남성과 여성 3 회 / 30 dph 주 이후, 그들의 처리에서 사용 하 여 횡단 계획.<ol>
<li>산란 탱크 (1 L) 기판 산란 보충 남성 수족관에서 노출 매체를 사용 하 여 각 커플에 대 한 준비 (미세 모래 < 500 µ m).</li>
			<li>산란 탱크에 남성과 여성 모두 전송 및 2 시간 동안 산란 하도록 허용. 인간의 활동 또는이 프로세스 동안 산란 컨테이너 주위 방해를 최소화 합니다.</li>
			<li>그 후, 부드럽게 물고기 다시 전송 그들의 원래 주택 컨테이너 산란 기판에 달걀을 소용돌이 물의 불필요 한 혼합 없이.</li>
			<li>500 µ m 메쉬 위에 산란 기질을 붓는 의해 계란을 필터링. 계란을 계산 하 고 그들을 전송 (사용 하 여 부드러운 핀셋) 접시9,14에서 축축한 물 이끼를.</li>
			<li>매일 죽은 계란을 제거 합니다. 후 주, 물개는 페 트리 필름 밀봉 된 접시와 온도에 저장 제어 28 ° C에서 인큐베이터와 14시 10분 h 빛: 다크 DIII 단계 (즉, 약 3 주 후 해치 준비)을 즉시 개발 주기. 장기 보관을 위해 따라 계란 휴면 단계를 입력 하 고 가능한 여러 년 남아 지속적인 암흑에서 17 ° C에 계란을 저장. 14:10 h 28 ° C 조건 실험, 휴면이 계란에서 모집 물고기 전송 휴면 계란 빛: 다크 DIII 단계로 개발 수 있도록 약 3 주에 대 한 주기.</li>
		</ol>
</li>
		<li>성인 물고기의 중요 한 열 최대 (CTmax) (15성능 측정)를 측정 합니다.<ol>
<li>0.33 ° C/min의 일정 한 속도로 열 물 목욕을 사용 하 고 물을 지속적으로 순환 됩니다. 각 개별 물고기에 대 한 몇 가지 1 L aquaria을 추가 합니다. 참고: 물 목욕에서 공간 제약을 감안할 때, 그것은 여러 시리즈에서 일 필요가 있다. 시리즈 중 조건에서 잠재적인 차이 계정에 임의의 요소로 ' 시리즈'를 포함 하 여 통계 분석을 수행할 때 취해야 한다.</li>
			<li>수족관에 물에는 물고기 (일반적으로 28 ° C)의 실험적인 양육 온도 도달 했습니다 때 수족관에 물고기를 추가 하 여 재판을 시작 합니다. 디지털 온도계 (0.1 ° C 스케일)를 사용 하 여 모든 5 분 1 L aquaria CTmax 목욕의 온도 모니터링 합니다.</li>
			<li>물고기 dorso ventrally 수직 위치를 유지 하거나 무 겁 게16,17꿈 틀 시작 때 재판을 종료. 중요 한 최대 온도 1 L 수족관에서 온도 측정 합니다. 물고기는 그것의 실험 주택 복구에 대 한 다시 전송.</li>
		</ol>
</li>
		<li>건조 모리 아 티와 무게 보트에 전송 하 여 실험의 마지막 날에는 생선의 무게 (0.1 mg 정확도)를 측정 합니다. 참고: 모든 생선 창 자에서 음식 무게 표준화에 마지막 수 유 후 4 시간 측정 한다.</li>
		<li>0.1%를 사용 하 여 물고기를 안락사 Tricaine.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Transgenerational 노출 프로토콜
주: 명. furzeri에 오염 물질의 transgenerational 효과 측정 하는 1 세대에 대 한 위에서 설명한 만성 노출 프로토콜을 따릅니다.
<ol><li>매주 두 번, 28 ° C에 저장 된 생산된 계란 (즉 2 세대)의 개발 확인 14시 10분 DIII 단계에서 배아의 배양 접시를 검사 하 여 h 빛: 다크 주기 조건 (Polačik 외. 참조 20169)입니다. 각 부모의 치료의 50 개 이상의 복제 완전히 개발 되는 때, 1.1에서 프로토콜을 따르고 그들을 해치.</li>
	<li>건강 한, 잘 뜨는 물고기 정확 하 게 동일한 설치 및 부모의 물고기 치료를 노출.</li>
</ol>

<ol><li>European-Chemicals-Bureau. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22TAPIR+Three+point+three-A+Project+for+the+Information+Requirements+of+REACH.+Final+Report-2+August+2005.+Scoping+study+on+the+development+of+a+Technical+Guidance+Document+on+information+requirements+on+intrinsic+properties+of+substances+%28RIP+3.3-1%29%22">TAPIR Three point three-A Project for the Information Requirements of REACH. Final Report-2 August 2005. Scoping study on the development of a Technical Guidance Document on information requirements on intrinsic properties of substances (RIP 3.3-1)</a>. , (2005).</li>
<li>Philippe, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+and+chronic+sensitivity+to+copper+of+a+promising+ecotoxicological+model+species%2C+the+annual+killifish+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Ecotoxicol+Environ+Saf%22%5BJournal%5D)">Acute and chronic sensitivity to copper of a promising ecotoxicological model species, the annual killifish Nothobranchius furzeri.</a> Ecotoxicol Environ Saf. , 26-35 (2017).</li>
<li>Noyes, P. D., Lema, S. C. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/cz/article/61/4/669/1803158">Forecasting the impacts of chemical pollution and climate change interactions on the health of wildlife.</a> Current Zoology. 61 (4), 669-689 (2015).</li>
<li>Consommateurs, S. S. d <a target="_blank" href="https://yosemite.epa.gov/oa/EAB_Web_Docket.nsf/Attachments%20By%20ParentFilingId/7B39B959EEFC9DEE85257FD20046C85C/$FILE/PBNX%20047.pdf">Health & Consumer Protection Directorate-General European Commission</a>. 4, Brussels (BE). SANCO/3268/2001 rev. 4 (final) (2002).</li>
<li>Commission, E. E. <a target="_blank" href="https://yosemite.epa.gov/oa/EAB_Web_Docket.nsf/Attachments%20By%20ParentFilingId/7B39B959EEFC9DEE85257FD20046C85C/$FILE/PBNX%20047.pdf">Guidance document on aquatic ecotoxicology. Under Council directive 91/414/EEC.</a> SANCO/3268/2001 Rev 4. 2002b. , (2002).</li>
<li>EPA. Ecological Effects Test Guidelines, OPPTS 850.1500 Fish life cycle toxicity. , Available from:
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</ol>

저자는 공개 없다.

이 작품 Nothobranchius furzeri, 신흥 모델 유기 체, 개인 연구를 사용 하 여 새로운 생물을 설명 하 고 유독 다른 스트레스의 장기적인 효과 결합. 제시 프로토콜 성공적으로 유독 (구리, 카드뮴, 3, 4-dichloroaniline, 및 chlorpyrifos)의 배열에 종의 감도 측정에 적용 했다. 그것의 빠른 수명 주기 때문이 척추 모델 sublethal의 평가 대 한 허용 하 고 transgenerational 4 개월 이내 효과. 이 어류를 사용 하 여 독성 심사를 모델의 또 다른 주요 장점은 가뭄 방지 계란 생산 하는 사실 이다. 이 연구팀은 달걀을 저장 하거나 공급 업체에서 그들을 얻을 수 있습니다 하 고 비용과 시간이 소요 현장 문화에 대 한 필요성을 제거 합니다. 또한, 배아 파묻혀 필요한12때까지 몇 년 동안 저장할 수 있습니다.
공부 후 참조 이용과의 수 명. furzeri<...

전략적으로 선택한 유독 종족의 감도 프로필 유럽 도달 법안 (등록, 평가, 승인, 및 화학 물질의 제한)에 대 한 설명된1 되었습니다. 급성 또는 단기 독성 테스트 그들은 종족의 감도의 빠른 알려주지이 목적을 위해 주로 사용 했다. 그러나, 그들의 자연 환경에서 유기 체는 더 이상 기간 동안 노출 하 고 전체 수명 주기 또는 심지어 여러 세대 수 있습니다 영향을 받는2키를 누릅니다. 또한, 오염 된 환경에 있는 유기 체는 일반적으로 노출 이상의 스트레스를 한 번에, 서로 상호 작용 수 있는 시너지 효과3발생할. 따라서, 안전한 농도 계산된에 따라 급성, 단일 스트레스 독성 테스트 이용과 자연 환경에 의해 부과 된 실제 위험을 과소 평가 수 있습니다. 그것은, 그러므로, 또한 유럽 위원회4,5 와 USEPA (미국에 의해 주 창으로 환경 관련 컨텍스트에서 이용과의 sublethal 농도의 만성 및 대가족제 효과 공부 하는 것이 좋습니다. 미국 환경 보호국)6,7. 특히 척추 연구, 노동, 돈, 그리고 시간 비용에 높은 척추 동물 무척 추 동물 모형 유기 체에 비해 상대적으로 긴 수명으로 인해 만성 및 대가족제 노출 연구를 수행할 때. 따라서, 그것은 가장 적절 한 물고기 모델 유기 체, 연구 질문에 따라 선택 하는 것이 좋습니다. 또한, 광범위 한 척 추가 있는 종 규정 가장 민감한 종에 따라 적응 수 종에 걸쳐 응답의 보편성을 테스트 하기 위해 사용할 수 있어야. 지금, 새로운, 척추 모델 종 척추 동물7,8에 만성와 대가족제 노출 수행의 비용을 줄이고 짧은 주기가 특징으로 효율적인 프로토콜을 개발 하는 필요가 있다.
청록색 송사리 Nothobranchius furzeri 는 짧은 성숙 시간과 라이프 사이클 (생성 시간 4 주9미만) 때문에 같은 장기 노출 실험에 사용 하는 재미 있는 물고기 모델입니다. 즉, 성숙 시간과 통치 등 생태 관련 끝점 다른 물고기 모델7에 비해 짧은 시간 프레임 내에서 공부 될 수 있다. 또한,이 물고기 유지 함으로써 지속적인 문화9에 대 한 필요성을 제거 하는 표준 조건 하에서 저장 될 때 몇 년 동안 가능한 가뭄 방지, 휴면 계란 생산. Ecotoxicological 연구에서이 또한 물고기 수 모두 해치 할 정확한 동일한 순간에 서로 다른 시간에 생산 하는 계란의 배치 중 에서도 모든 동물에 대 한 시간 synchrony에 결과 복제를 의미 합니다. GRZ 스트레인 실험실을 사용 하 여 노출 실험을 수행 하는 것이 좋습니다. 이 긴장 실험실 조건 하에서 잘 수행, homozygous (성 염색체)를 제외 하 고는 게놈은 잘 성격 나타낸된10,11.
Ecotoxicological 연구에서 그것은 시험 농도의 적절 한 범위를 선택 하는 것이 중요입니다. 여러 가지 보완적인 방법을이 끝을 사용할 수 있습니다. 공칭 농도 범위 Nothobranchius guentheri12등 관련된 동물의 감도 기반으로 수 있습니다. 또는, 범위는 표준 어 모델, 대부분 유독 (필립 외 에 비해 감도가 zebrafish (Danio rerio)2 의 감도에 근거 할 수 있다 (에서 검토)). 함께, 이러한 옵션을 모두 찾는 실험 범위 명목상 농도 범위를 선택 하 실시 한다. 급성 테스트에 대 한 연구는 toxicant에 노출의 24 시간 후 100% 사망률, 중간 사망률 0% 사망률과 집중 치료에 대 한 목표로 한다. 테스트용 만성, 그것은 찾는 경우 높은 테스트 농도 조건에서 애벌레 사망률이 기준 기간 동안 10%를 초과 하지 않는 확인 하려면 2 주 동안 실험 범위를 실행 하는 것이 좋습니다.
프로토콜은 스트레스 두 개인 및 세포 수준에서의 잠재적인 효과 조사 waterborne 오염 물질에 급성 및 만성 노출 명. furzeri에 수행 하는 기준으로 사용할 수 있습니다. 그것은 또한 높은 생태 관련성, 다른 유독한 화합물을 혼합 또는 오염 및 다른 자연 스트레스 (예: 포식) 간의 대화형 효과 공부에 맞게 멀티 스트레스 연구를 수행 하 사용 될 수 있습니다 또는 anthropogenic 스트레스 (예: 기후 변화로 인해 지구 온난화).

<table><tbody><tr><td>정제수 유형 1 (milli Q)</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>바다 소금</td><td>인스턴트 오션</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2L 플라스틱 탱크</td><td>SAVIC</td><td></td><td>제어 및 독성 처리를 위해 항상 재료 분리</td></tr><tr><td>1L 플라스틱 탱크 (산란)</td><td>Avamoplast</td><td></td><td>제어 및 독성 처리를 위해 항상 재료 분리</td></tr> 그물 <tr><td></td><td>Aqua bilzen</td><td></td><td>제어 및 독성 처리를 위해 항상 재료 분리</td></tr><tr><td>2L 유리병</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>제어 및 독성 처리를 위해 항상 재료 분리</td></tr><tr><td>0,5L 유리병</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>제어 및 독성 처리를 위해 항상 재료 분리</td></tr><tr><td>Artemia eggs</td><td>Ocean Nutrition</td><td></td><td></td></tr><tr><td>chironomus</td><td>Ocean Nutrition</td><td></td><td>냉동</td></tr><tr><td>tricaine</td>, <td>시그마, aldrich</td><td></td><td></td></tr>, <tr><td>페트리 접시</td>, <td>VWR,</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라 필름</td>, <td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫,</td><td>MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>핀셋</td>, <td>FST</td><td></td><td></td></tr><tr><td>500 &micro; m 메쉬 체</td><td>/</td><td></td><td>자체 제작</td></tr><tr><td>마이크로 원심분리기 튜브(2ml)</td><td>브랜드</td><td></td><td>냉동실</td></tr><tr><td>유리 바이알에</td> 물고기를 보관하려면 <td>시그마 알드리치</td><td></td><td>물 분석용</td></tr><tr><td>계량 보트</td><td>MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jiffy 7c 펠릿</td><td>Jiffy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수조</td><td>Gilac</td><td></td><td>Ctmax</td></tr><tr><td>액체 질소용</td><td>공기 액체</td><td></td><td></td></tr><tr><td>디지털 온도계</td><td>Testo AG</td><td>testo 926</td><td></td></tr><tr><td>HETO 열 히터</td><td>Anker Schmitt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>보정 저울</td><td>Mettler-Toledo AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>카메라</td><td>/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>플랫폼용 카메라</td><td>/</td><td></td><td>자체 제작</td></tr><tr><td>Multiparameter Kit</td><td>HACH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>냉동고 (-80&deg; C)</td> <td>Panasonic 초저온 냉동고</td><td></td><td></td></tr><tr><td><강한>이름</td><td>Company</td><td>카탈로그 번호</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Fysio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>homogenization buffer</td><td>VWR</td><td></td><td>0.1&nbsp; M 트리스&ndash; HCl, pH 8.5, 15&nbsp;% 폴리비닐 피롤리돈, 153&nbsp; &마이크로; 엠 MgSO4&nbsp; 및 0.2&nbsp;% 트리톤 X-100</td></tr><tr><td>클로로포름:메탄올</td><td>시그마 알드리치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>글리세릴 트리팔미테이</td><td>트 시그마 알드리치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>아밀로글루코시다아제</td><td>시그마 알드리치</td><td>A7420</td><td></td></tr><tr><td>포도당 분석 시약</td><td>시그마 알드리치</td><td>G3293</td><td></td></tr><tr><td>Biorad 단백질 염료</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96-well microtiter 플레이트</td><td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>384 마이크로타이터 플레이트</td><td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2ml 유리관</td><td>Fiers</td><td></td><td>지방 분석용</td></tr><tr><td>2,5ml 에펜도르프 튜브</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>homogeniser</td><td>Ultra-turrax TP 18/10</td><td></td><td></td></tr><tr><td>광분광계</td> 유리관용 <td>인피니트 M200 TECAN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>히터</td><td>Hach COD REACTOR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Eppendorf Centrifuge 5415 R</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Bumako</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

급성 및 만성 ecotoxicity 청록색 송사리 nothobranchius furzeri 의 테스트에 대 한 프로토콜

Protocol for Acute and Chronic Ecotoxicity Testing of the Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

송사리 Nothobranchius furzeri ecotoxicology의 분야에서 신흥 모델 유기 체 이며, 급성 및 만성 ecotoxicity 테스트에 그것의 적용은 입증 되었습니다. 전반적으로, 독성 화합물을 종족의 감도, 또는 이상, 다른 모델의 범위입니다.
이 작품 명. furzeri에 대 한 단일 및 결합 된 스트레스 효과의 급성, 만성, 및 대가족제 생물 검정을 위한 프로토콜을 설명합니다. 짧은 성숙 시간 및 주기,이 척추 모델 4 개월 이내 끝점 성숙 시간과 통치 등의 연구를 수 있습니다. Transgenerational 전체 수명 주기 노출 시험 빠르면 8 개월만에 수행할 수 있습니다. 이 종 가뭄 방지 계란을 생산 하 고 있기 때문에 가능한 오랫동안 유지, 종족의 현장 문화 필요 하지 않습니다 하지만 개인 필요할 때 채용 될 수 있습니다. 프로토콜은 측정 생활 역사 특색 (사망률, 성장, 통치, 무게)와 중요 한 열 최대 설계 되었습니다.

명. furzeri 의 구리의 다른 농도 급성 노출의 결과 2.5.2에서 계산, cleardose-응답 관계 (그림 1). Toxicant 농도 증가와 사망률에서 증가 있다. LC50 값 시간이 지남에 감소는 농도 감소와 함께 더 많은 시간 복제 다의 50% 통과 의미. 에 대 한 자세한 결과 다른 종에 비해 종 감도의 비교 뿐만 아니라 구리 하 명 furzeri 의 급성 및 만성 노출 우리 필립 외. 20177를 참조 하십시오.
만성 노출 시험에서 신체 크기와 통치는 민감한 끝점. 온도18에 따라 물고기의 성장에 광범위 한 변화 될 수 있습니다. 30에서 5...

이 작품에서는, 우리는 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri에 단일 및 결합 된 스트레스의 효과 공부 하는 급성, 만성 및 대가족제 검정을 설명 합니다. 이 프로토콜은 생활 역사 특색 (사망률, 성장, 통치, 무게)와 중요 한 열 최대 공부 하도록 설계 되었습니다.

급성 및 만성 Ecotoxicity 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri 의 테스트에 대 한 프로토콜

The killifish Nothobranchius furzeri is an emerging model organism in the field of ecotoxicology and its applicability in acute and chronic ecotoxicity ...

이 실험의 전반적인 목표는 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri에 대한 독성 물질의 영향을 연구하는 것입니다. 이 방법은 성숙 시간, 성장 또는 번식력과 같은 중요한 생활사 특성에 대한 스트레스 요인의 장기적인 영향과 같은 생태 독성학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 실험의 가장 큰 장점은 매우 빠른 수명주기를 가진 척추 동물을 사용하여 시간과 비용 효율적인 실험을 할 수 있다는 것입니다.이 송사리는 스트레스 요인의 장기적 및 다세대 효과의 영향을 연구하는 데 이상적인 모델입니다. 궁극적으로 독성 물질이 환경에 미치는 영향을 더 잘 이해하는 데 기여할 것입니다. 이 방법은 독성 물질과 온도의 결합된 영향에 대한 새로운 통찰력을 제공할 수 있지만 자외선, 음식 부족 및 PH 변화와 같은 다른 스트레스 요인에도 적용할 수 있습니다.송사리는 생태독성학의 새로운 모델 시스템이기 때문에 작업하기가 까다롭고, 많은 오염 물질에 대한 민감성은 아직 알려지지 않았습니다. 우리는 송사리의 수명이 매우 짧다는 것과 선반에 몇 년 동안 보관할 수 있는 휴면 알을 생산할 수 있는 능력에 대해 처음 알게 되었을 때 이 실험 방법에 대한 아이디어를 개발했습니다. 이 방법의 시각적 시연은 실험의 유형과 개인의 취급으로 인해 결과가 변경될 수 있으므로 매우 중요합니다.시작하려면 황금빛 눈의 존재로 알아볼 수 있는 D3 단계에서 고나 레이 동물원 또는 GRZ 알을 선택하십시오. 그리고 부드러운 핀셋을 사용하여 플라스틱 2리터 탱크에 부드럽게 옮깁니다. 섭씨 12도에서 부화 매체 1cm를 추가하고 수온이 점차 실온으로 조정되도록합니다.24시간 후, 갓 부화한 아르테미아 나우플리(artemia nauplii)를 농축량으로 먹이고 물고기 배지를 추가하여 수심을 5cm로 늘립니다.부화 후 48시간이 지나면 건강하고 부력이 있는 유충을 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 노출 매체 및 독성 물질 농도가 있는 개별 용기로 옮깁니다. 매일 아침과 저녁에 물고기의 폐사율, 스트레스 및 질병을 확인하고 텍스트 프로토콜에 따라 LC50 값을 계산합니다.개별 용기에 올바른 노출 매체를 채워 만성 노출 시험을 수행하고 공기 튜브를 추가하여 용기를 폭기합니다. 실험의 나머지 부분 동안 물고기를 항아리에 옮깁니다. 부화 후 2일에서 23일 또는 DPH 후 23일까지 물고기 artemia nauplii에게 하루에 두 번 먹이를

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연구

JoVE Journal

Environment

환경

이 연구, 화학 물질, 산업 폐수 또는 하수 및 해수 갑각류에 액상 환경 시료에 의해 진력 장기 (14 일) 치명적인 독성을 결정하는 중요한 방법론 프로토콜의 개발 및 표준화에...

갑각류와 장기 치명적인 독성 시험 Artemia franciscana</em

물고기의 행동에 환경 오염 물질의 영향을 측정하는 것은 종종 주관적이고 치사 엔드 포인트를 다룰 때 특히 도전이다. 우리는 동안 구리 다양한 농도의 96 시간 급성 노출 후 초기 생활 단계 흰 철갑 상어 (인 Acipenser transmontanus)의 수영 동작을 정량화하는 비디오 기술을 포함하는 방법을 설명합니다.

컴퓨터 원호 비디오 및 디지털 이미지 분석을 사용하여 수성 구리의 급성 노출에 대한 응답에 물고기가 수영 동작을 정량화

내분비 교란 화합물 (EDC)는 수생 환경에 상당한 위험을 초래할. 시 폐수 처리 공장은 지표수의 에스트로겐 효능에 큰 기여입니다. 이 문서에서 제공하는 방법은 EDC 제거에 대한 효능 및 폐수 처리 공정의 적합성의 평가를 할 수 있습니다.

폐수 처리 프로세스의 효능의 평가를위한 화학 및 생체 독성 방법의 배터리를 사용하면 에스트로겐 효능을 제거하는 방법

이 연구는 항생제에 의해 피부와 장내 마이크로 바이 옴의 사회 구성의 변경 다음 모델 물고기 호스트에 효과를 나타 내기 위해 방법을 포함한다.

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이 연구는 해양 박테리아 인 Vibrio anguillarum을 사용하여 나노 물질과 같은 새로운 오염 물질을 포함하여 오염 물질의 생태 독성을 평가하는 새로운 프로토콜을 설명 합니다. 이 방법은 6 시간 노출 후에 박테리아 배양 가능성을 50 % 감소시키는 농도 인 LC 50 또는 사망률을 결정합니다.

해양 박테리아와 생태 독성 학적 방법<em&gt; 비브리오 앵 귈라 룸</em&gt; 환경 오염 물질의 급성 독성 평가

실험실 주택 터키석 송사리 집 고 효율적으로 개별 물고기의 수천 고용 표준 zebrafish 시설에 사용 하는 동일한 인프라는 중앙 집중식된 물 여과 시스템에서 확장할 수 있습니다. 여기 우리가 유지 보수 효율적 송사리 수 있도록 표준화 된 절차의 목록을 자세하게.

실험실 주택의 청록색 송사리 (Nothobranchius furzeri)에 대 한 프로토콜

이 논문에서는 신열대성 아누란 종의 바이오마커 평가를 위한 표준화된 생태독성학적 방법을 제시합니다. 특히, 이 논문은 유전적, 세포-조직학적, 생화학적, 형태학적 및 개별 수준과 같은 다양한 규모의 생태독성학적 평가에서 여러 방법론을 자세히 설명합니다.

신열대성 아누란에서 다양한 규모의 바이오마커를 평가하기 위한 생태독성학적 방법론

이 프로토콜은 96웰 플레이트에서 제브라피쉬 배아(ZEM2S) 및 간(ZFL) 세포주의 세포독성 평가에 적합한 일반적으로 사용되는 세포독성 분석(Alamar Blue[AB], CFDA-AM, Neutral Red 및 MTT 분석)을 제시합니다.

Zebrafish 세포주를 이용한 세포독성 분석

여기에서는 단일 수조를 사용하여 성체 제브라피쉬에 대한 화학 물질(예: 메스암페타민 및 글리포세이트)의 잠재적인 신경 독성 영향을 효과적으로 결정하기 위해 새로운 수조, Shoaling 및 사회적 선호도 테스트를 포함한 포괄적인 행동 테스트 배터리를 제시합니다. 이 방법은 신경 독성 및 환경 연구와 관련이 있습니다.

단일 탱크에서 행동 테스트 배터리를 사용한 성인 Danio rerio 의 신경 독성 평가

이 프로토콜은 수정 후 3-7일 후에 제브라피시 유충에 대한 약물 스크리닝 절차와 형태학적 평가를 설명합니다.

초기 단계 제브라피시 유충의 소분자 스크리닝 및 독성 테스트

배우세요 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri를 이용한 급성 및 만성 독성물질 생물검정법으로 생활사 특성 분석 및 환경독성학 연구에 활용하는 방법입니다. 이 기법은 수생 생태계 오염 영향 평가에 중요한 통찰을 제공합니다.

급성 및 만성 Ecotoxicity 청록색 송사리 Nothobranchius furzeri 의 테스트에 대 한 프로토콜

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