Name: 골 Adipocytes 차별화에 흑색 종 세포 유래 요인의 이중 효과 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-23T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: 학습하세요 골수 지방세포와 흑색종 세포 간 상호작용을 연구하는 2차원 공배양 시스템을 통해 뼈 전이 메커니즘을 탐색하는 방법을. 이 기술은 간단하고 후보 분자를 빠르게 얻을 수 있어 암 치료 전략 개발에 유용합니다.

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우리 Dov Zipori (바이 츠만 과학 연구소, Rehovot, 이스라엘) 친절 하 게 제공에 감사 우리 murine 골 수 기질 세포 라인 14F1.1. 이 연구는 중국 국가 자연과학 기초 (81771729 번)과 충칭 의료 Yongchuan 병원 대학 (개에서 교부 금에 의해 지원 되었다 YJQN201330; YJZQN201527)입니다.

참고:이 프로토콜에서 사용 하는 모든 셀 냉동된 재고 셀에서 녹고 후 적어도 3 세대에 대 한 성장 해야 합니다.
1. 수확 흑색 종 세포 파생 요소
<ol><li>
준비
	<ol>
<li>B16F10 세포 및 마우스 흑색 종 세포 라인을 얻을. 참고:이 프로토콜에 대 한 마우스 흑색 종 세포 선 과학의 중국 아카데미의 줄기 세포 은행에서 얻은 했다.</li>
		<li>B16F10 세포 배양 (100 mL)에 대 한 완벽 한 매체를 확인 합니다. Dulbecco의 수정이 글의 중간 (DMEM) 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 페니실린, 50 U/mL 및 50 µ g/mL 스 보충을 사용 합니다.</li>
		<li>혈 청 무료 매체 B16F10 세포 (50 mL)의 기아에 대 한 확인 합니다. DMEM 매체 FBS 없이, 페니실린, 50 U/mL 및 50 µ g/mL 스 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
흑색 종 조절 매체 (CM)를 준비
	<ol>
<li>100 m m에서 씨 2.0 x 105 B16F10 세포 10%의 10 mL와 FBS DMEM 요리. 다음 24 h에 대 한 5% CO2 의 분위기 속에서 37 ° C 배양 기에서 세포를 품 어.</li>
		<li>셀 합류의 약 80%에 도달, 문화 매체를 제거, 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) (1x, pH 7.4)의 5 mL로 두 번 셀을 세척 하 고 10 mL 혈 청 무료 매체는 기아에 대 한 매체를 바꿉니다.</li>
		<li>18-24 h에 대 한 보육을 셀을 반환 합니다.</li>
		<li>기아, 후 한 피 펫과 바른된 매체 (CM)를 수집 하 고 신선한 50 mL 원심 분리기 튜브에 그것을 전송. 참고: 조절된 매체 B16F10 세포 배양의 상쾌한입니다. B16F10 세포 CM를 수집 하기 전에 좋은 조건에는 다는 것을 확인 하십시오.</li>
		<li>1000 x g 4 ° c.에 5 분에 대 한 CM을 원심</li>
		<li>플라스틱은 상쾌한 하 고 신선한 무 균 튜브 또는 병에 그것을 전송. 참고: 아래쪽 튜브의 펠 릿에서 pipetting 하지 마십시오.</li>
		<li>셀 파편 제거, 살 균 병 또는 튜브 주사기 연결 0.45 μ m 필터를 통해 그것을 전달 하 여 CM을 필터링. 참고: 0.22 μ m 필터는 CM을 필터링 하는 데 적합 합니다.</li>
		<li>-20 ° C에서 필터링 된 상쾌한 사용까지 저장 합니다. 참고: 그것은-20 ° C에서 상쾌한 1 달 이상에 대 한 저장 하지 것이 좋습니다. 또는, 체형의 분화에 대 한 시간 더 연장된 기간에 대 한-80 ° C에서 CM을 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 흑색 종 세포에서 파생 된 요소에 의해 골 Adipocytes의 유도
<ol><li>
준비
	<ol>
<li>Adipogenic 유도 중간28의 100 mL를 확인 합니다. 완전 한 DMEM 인슐린, 0.5 m m 3-isobutyl-1-methylxanthine, 1 µ M dexamethasone의 5 µ g/mL와 보완을 사용 합니다. 4 ° c.에 2 주까지 저장하시오</li>
		<li>Adipogenic 유지 보수 매체의 100 mL를 준비 합니다. 완전 한 DMEM 사용 또는 50%의 흑색 종 5 µ g/mL의 인슐린으로 보충 하는 CM와 혼합.</li>
		<li>기름 빨간 O 재고 솔루션을 확인 합니다. 소 프로 파 놀 (≥ 99.5%)의 10 mL에 기름 빨간 O 가루 30 mg을 녹이 고 소용돌이 의해 잘 그들을 믹스. 참고: 4 ° c.에서 1 년 저장</li>
		<li>기름 빨간 O 작업 솔루션을 확인 합니다. 증기 두건에서 3: 2의 비율에 있는 이온된 수로 (2.1.3 단계)에서 기름 빨간 O 재고 솔루션을 희석. 실 온에서 15 분 동안 혼합물을 품 어 하 고 사용 하기 전에 0.22 μ m 필터를 통해 필터링. 참고:만 2 시간 안에 신선한 작업 솔루션을 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
체형 차별화
	<ol>
<li>문화 stromal 세포 5% CO2의 분위기 속에서 37 ° C 배양 기에서 80 %confluency 완전 한 DMEM와 60 mm 접시에 마우스 골 수29 에서 14F1.1 라인. 참고:은 주 골 수 유래 중간 엽 세포3014F1.1를 또는 바꿉니다.</li>
		<li>1-2 분 동안 인큐베이터에 0.25 %trypsin 솔루션의 1.5 mL와 셀 trypsinize</li>
		<li>셀에 10 %FBS 매체의 5 mL을 추가 하 고 유리 hemocytometer;와 셀 숫자의 개수 계산 다음 1-2 105/mL x 약 셀 밀도 조정 합니다.</li>
		<li>씨앗 5 x 104 24-잘 접시에 잘 당 14F1.1 세포의 adipogenic 유도 매체의 0.5 mL와 함께. 2 일 후 부 화, 셀 합류의 약 90%에 도달. 참고:이 단계는 매우 중요 한입니다. 골 수 기질 세포 adipogenic 유도 매체 없이 adipocytes에 유도 될 수 없습니다.</li>
		<li>유도 매체를 제거 하 고 씻어 1 mL의 PBS로 두 번 셀 때마다.</li>
		<li>Adipogenic 유지 보수 매체의 1 mL를 변경 하 고 adipocyte 성숙까지 셀 문화 계속. 참고: 현미경, adipocytes 소형 또는 대형 비누 방울 처럼 모양과 아주 쉽게 인식할 수 있습니다. 일반적으로, 성숙 adipocytes 6번째 또는 8번째 날에는.</li>
		<li>기름 빨간 O와 성숙한 adipocytes 얼룩 또는 adipocytes 정량적 중 합 효소 연쇄 반응 (정량) 분석을 위해 수집.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
체형 얼룩
	<ol>
<li>워시 차별화 된 14F1.1 세포를 PBS로 2 배 및 1 h 3.7% 포름알데히드에 그들을 수정.</li>
		<li>60% 소 프로 파 놀 셀 린스를 완전히 건조 하도록 허용 합니다.</li>
		<li>우물에 기름 빨간 O 작업 솔루션의 0.2 mL를 추가 하 고 0.5 ~ 2 h에 대 한 실 온에서 품 어.</li>
		<li>셀 언바운드 염료를 제거 하는 물으로 씻는 다.</li>
		<li>가벼운 현미경 염색된 adipocytes 사진.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 흑색 종 세포와 골 Adipocytes의 coculture
<ol><li>
준비
	<ol>
<li>성숙한 뼈 골 수 adipocytes 준비: 2 일, adipogenic 유도 매체와 24-잘 접시에 성숙한 BM adipocytes에 14F1.1 세포를 유발 하 고 다음 추가 6-8 일에 대 한 adipogenic 유지 보수 매체에서 그들을 유지.</li>
		<li>B16F10 세포 준비: DMEM 매체의 5 mL와 60mm 요리에서 B16F10 세포 문화.</li>
		<li>축 축 하 게 막 삽입 (예: transwell): 0.4 µ m 기 공 크기 막 삽입을 FBS 무료 DMEM 매체의 150 µ L을 추가 하 고 24-잘 접시 가득 FBS 무료 DMEM 매체의 500 µ L의 우물에 그들을 담가.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Coculture 설정
	<ol>
<li>천천히 각 삽입의 매체에서 피 펫입니다. 주: 매체를 분리할 때 막을 삭제 하지 마십시오.</li>
		<li>3.2.1 단계에서 시드 B16F10 세포 (0/103/105/106) 0.4 µ m 기 공에 삽입합니다.</li>
		<li>3.1.1 단계에서 성숙 골 adipocytes에 우물에 adipogenic 유지 보수 매체를 바꿉니다. 완전 한 DMEM 매체의 600 µ L와.</li>
		<li>Coculture 실험 (3.2.3 단계)에서 성숙 골 adipocytes와 우물에 (에서 단계 3.2.2) B16F10 세포로 가득 삽입 전송.</li>
		<li>2 일 동안 37 ° C, 5% CO2 cocultures를 품 어.</li>
		<li>외피의 48 h 후는 coculture의 삽입을 제거 하 고 다음 씻어 adipocytes 2 x 1 x PBS의 500 µ L. 참고: 필요한 경우 필요에 따라 분석에 대 한 삽입에서 B16F10 세포를 수집 합니다.</li>
		<li>기름 빨간 O 작업 솔루션 adipocytes 얼룩 또는 정량 분석을 위한 adipocytes 수집. 주: 단계 2.3에서에서 착 절차를 참조 하십시오.</li>
		<li>가벼운 현미경 염색된 adipocytes 사진.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 정량 분석 체형 관련 유전자 서명의
<ol><li>24-잘 접시에서의 준비에 사용 RNA 격리 시 약 잘 당 0.5 mL를 추가 성숙한 체형에 검색할 준비가 되어.</li>
	<li>RNA 추출 및 cDNA 합성31에 대 한 표준 프로토콜을 따릅니다.</li>
	<li>18S와 GAPDH 뇌관을 사용 하 여 컨트롤 및 CEBPα/β, 가진, FABP4, leptin, Pref-1, 또는 adiponectin 체형 관련 유전자 서명 (표 1)에 대 한.</li>
	<li>다음 반응 열 cycler에서 실행: 20 95 ° C s 1에 대 한 95 ° C의 40 주기 다음 s 및 20 60 ° C s.</li>
	<li>2-ΔΔCt 메서드를 사용 하 여 배32변경 계산 하.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 선언할 수 없다.

Cocultures 삽입과 셀 상호 작용을 공부 하 널리 사용 되었습니다. 2D coculture 시스템 어떻게 두는 우리가 여기 골 adipocytes에 두 개의 다른 암 세포 기반 효과 보여주는 누화에서 생체 외에서부품을 관찰 하는 효과적인 방법입니다. 많은 연구소는 adipocytes 및 암 세포6,12,,2739사이 누화를 조사 하기 위해이 방법을 활용 하 고 있다.
일반적으로, 따라서, 2D coculture 셀 누화 연구에 가장 간단 접근 이다. 그러나, 그것에 올 때 undifferentiated 셀 라인 추가 연구에 대 한 준비, 몇 가지 독특한 도전 있다. 여기에 설명 된 프로토콜에서 골 수 기질 세포의 기능 상태를이 a...

뼈 전이 고급 암 환자 중 광범위 하지만 치료 치료는 아직 사용할 수 없습니다. 지방으로 에너지를 저장 전문, 넘어 adipocytes 골 수 및 다른 장기1,2,,34,,56에서 종양 성장 및 전이 지원할 수 있습니다. 또한, adipocytes 암 세포 생물학7,,89,10 및 대사4,11,12 조절에 필수적인 역할을 재생 ,13,14,,1516, 잘에서 뼈 전이1,,412로. 골 틈새, adipocytes도 암 세포4,,617의 생물 학적 행동을 달라질 수 있습니다. 골 adipocytes osteotropism와 암 세포 사이 상호 작용에 대 한 뼈 전이의 이해 중요 하다. 그러나, 약간은 알려진 다.
현재 연구를 바탕으로, 다양 한 방법은 adipocytes, 2 또는 3 차원 (2/3 차원)와 비보 전 문화17,,1819,20,21을 포함 하 여 적용 됩니다. 최근, Herroon 그 외 여러분 암 세포22골 adipocytes의 상호 작용을 공부 하는 새로운 3D 문화 접근 방식을 설계 되었습니다. 3D coculture는 생리를 흉내 낸 위한 최적의 adipocytes와 암 사이 상호 작용 세포 vivo에서, 그것은 가난한 재현성22,23에서 고통. 2D coculture 시스템에 비해 3D coculture 시스템 셀 형태학21,22,,2425,26같은 다른 세포질 고기를 제공할 수 있습니다. 또한, 고립 된 수가 뼈 조직 파편의 비보 전 문화 adipocytes의 강력한 파생물 교양된 골 셀17에서 발생할 수 있습니다.
그러나 이러한 이전 모델과 달리, 2D 셀 문화 모델 남아 있다 고전, 안정적이 고 쉽게 기술 생체 외에서1, 세포를 신속 하 게 스캔 후보 분자와 고기 adipocytes 또는 암에 변경에 대 한 4,6,12,,1527. 더 잘 이해 하려면 골 adipocytes와 흑색 종 세포 사이 누화, 우리 흑색 종 세포와 골 adipocytes의 2D coculture 시스템에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen 주식 회사</td><td></td><td></td>11965092</tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Invitrogen Inc.</td><td>16000&ndash; 044</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Invitrogen Inc.</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>인슐린</td><td>시그마-알드리치</td><td>91077C</td><td></td></tr><tr><td>3-이소부틸-1-메틸-크산틴</td><td>시그마-알드리치</td><td>I5879</td><td></td></tr><tr><td>덱사메타손</td><td>시그마-알드리치</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>오일 레드 o</td><td>시그마-알드리치</td><td>O0625</td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>코닝</td><td>CLS3527</td><td></td></tr><tr><td>트랜스웰 인서트</td><td>Millipore</td><td>MCHT24H48</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>이소프로판올</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516</td><td></td></tr><tr><td>0.25% 트립신</td><td>Thermo Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>혈구계</td><td>Bio-Rad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>배양 인큐베이터</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon</td><td>Corning</td><td>CLS430828</td><td></td></tr><tr><td>클린 벤치</td><td>Thermo Scientific</td> <td>현미경</td><td></td></tr> <tr><td></td><td></td><td>Olympus-200</td><td></td></tr> <tr><td>&mu; L 피펫 팁</td><td>BeyoGold</td><td>FTIP620</td><td></td></tr><tr><td>1,000mL 피펫 팁</td><td>BeyoGold</td><td>FTIP628</td><td></td></tr></tbody></table>

골 adipocytes 차별화에 흑색 종 세포 유래 요인의 이중 효과

Dual Effects of Melanoma Cell-derived Factors on Bone Marrow Adipocytes Differentiation

골 adipocytes와 종양 세포 사이 누화 뼈 전이 하는 중요 한 역할을 재생할 수 있습니다. 다양 한 방법 공부 하는 중요 한 누화; 사용할 수 있습니다. 그러나, coculture에 대 한 2 차원 transwell 시스템은 고전적인, 신뢰할 수 있는, 그리고이 누화 연구에 대 한 쉬운 방법 남아 있다. 여기, 우리 골 adipocytes 및 흑색 종 세포의 coculture을 보여 주는 자세한 프로토콜을 제시. 그럼에도 불구 하 고, 이러한 coculture 시스템 수 골 adipocytes에 의해 유도 된 암 세포의 세포 신호 transductions의 연구에 기여할 뿐만 아니라 또한 기계적으로 뼈에 대 한 새로운 치료 목표를 드러낼 수 있는 뼈 전이의 연구 전이입니다.

골 수에서 adipocytes 녹는 요인을 통해 종양 진행을 지원 하기 위한 초기 단계에서 종양 microenvironment1,13,33,,3435 에 나타날 수 있습니다 또는 osteoclastogenesis6,,1236, 특히 비만6,12 노화37의 컨텍스트에서 활성...

여기, 우리 골 adipocytes에 흑색 종 세포 유래 요인의 이중 효과 보여준다 종양 세포와 골 adipocytes, 사이 상호 작용을 공부 하기 위한 안정적이 고 간단한 2 차원 (2D) coculture 시스템 제시 차별화 및 뼈 전이의 기계 론 적인 연구에 대 한 전통적인 방법 포즈.

골 Adipocytes 차별화에 흑색 종 세포 유래 요인의 이중 효과

The crosstalk between bone marrow adipocytes and tumor cells may play a critical role in the process of bone metastasis. A variety of methods are ...

이 방법은 골수 지방 세포 성장에 어떤 변화가 유도되고 암 미세환경에서 발달하는지와 같은 뼈 전이 연구 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 수행하기 쉽고 후보 분자를 빠르게 얻을 수 있다는 것입니다. 이 방법은 골수 지방세포와 흑색세포 사이의 누화에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.또한 조골세포와 같은 다른 세포 유형에도 적용할 수 있습니다. 100mm 접시에 10%FBS가 보충된 10mL의 DMEM이 담긴 5번째 B16F10 흑색종 세포를 10회 두 번 파종하여 섭씨 37도에서 5%CO2로 24시간 배양합니다. 다음날, 약 80%의 융합 세포 배양을 세척당 5ml의 PBS로 2회 세척하고, 세포 배양 인큐베이터에서 10ml의 무혈청 배양 배지로 세포를 18-24시간 동안 굶깁니다.다음 날, 피펫을 사용하여 원심분리를 위해 컨디셔닝된 상등액을 50ml 원추형 튜브로 옮기고 0.45미크론 공극 필터가 장착된 주사기에 배지를 로드합니다. 그런 다음 용액을 멸균 용기에 변형시켜 남아 있는 세포 파편을 제거하고 컨디셔닝된 배지를 섭씨 영하 20도에서 최대 1개월 동안 보관합니다. 골수 지방세포를 유도하기 위해 60mm 접시에 있는 마우스 F14 1.1 골수 기질 세포를 완전한 DMEM으로 80% 포화도까지 배양합니다.적절한 배양 단계에서 섭씨 37도에서 1-2분 동안 0.25%트립신 용액 1.5ml로 세포를 수확합니다. 세포가 분리되면 10% FBS가 보충된 5밀리리터의 배지로 효소 반응을 정지시키고 신선한 혈청이 보충된 배양 배지로 세포를 1-2배 10에서 밀리리터당 5번째 세포 농도로 조정합니다. 24웰 플레이트의 웰당 0.5밀리리터의 지방생성 유도 배지에 10배에서 4번째 세포를 5번 파딩하고 약 90% 농도에 도달할 때까지 세포를 다시 2일 동안 세포 배양 인큐베이터에 다시 넣습니다.그런 다음 상층액을 웰당 1ml의 지방생성 유지 배지로 교체하고 지방세포가 성숙할 때까지 세포를 계속 배양합니다. 광학 현미경 검사에서 세포가 작은 비눗방울에서 큰 비눗방울처럼 보이면 이 성숙한 지방 세포를 PBS로 두 번 세척한 다음 3.7% 포름알데히드 0.2ml에 1시간 동안 고정합니다. 고정 된 세포를 60 % 이소프로판올로 헹구고 웰이 완전히 건조되도록합니다.실온에서 30-120분 배양을 위해 0.2ml의 Oil Red O 작업 용액을 세포에 첨가하고 세포를 물로 세척하여 광학 현미경으로 지방 세포를 이미징하기 위해 결합되지 않은 염료를 제거합니다. 또는 성숙 시 즉시 사용 가능한 RNA 분리 시약 0.5ml를 각 지방 세포 배양 웰에 첨가하고 적절한 프라이머를 사용하여 세포의 지방 세포 특이적 유전자 서명을 확인합니다. 그런 다음 표시된 설정을 사용하여 열 순환기에서 반응을 실행합니다.골수 유래 지방 세포 흑색종 세포 공동 배양을 설정하려면 먼저 0.4 미크론 공극 크기의 멤브레인 인서트의 내부 챔버에 150 마이크로리터의 무혈청 DMEM을 추가하고, 웰당 500 마이크로리터의 무혈청 배지를 포함하는 24 웰 플레이트의 한 웰에 각 인서트를 배치합니다. 80% 세포 배양에서 B16F10 흑색종 세포를 새로운 무혈청 배지에서 실험적으로 적절한 농도로 희석하고 각 삽입물의 내부 챔버에 있는 배지를 150마이크로리터의 세포로 교체합니다. 다음으로, 90% confluent mature 골수 지방세포 배양의 각 웰에 있는 지방생성 유지 배지 상등액을 600마이크로리터의 완전한 DMEM으로 교체하고 흑색종 세포 함유 삽입물을 성숙 지방세포 배양판의 각 웰로 옮깁니다.모든 삽입물이 옮겨졌으면 플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 넣습니다. 이틀 후, 삽입물을 제거하고 세척 당 500 마이크로 리터의 PBS로 각 우물의 바닥을 두 번 세척하십시오. 그런 다음, 오일 레드 O 작업 용액으로 지방세포를 염색하거나, 입증된 바와 같이 정량적 PCR에 의해 지방세포 유전자 발현을 분석합니다.종양-조건화된 배지에서 분화된 성숙한 지방세포는 지질 방울을 함유하고 있어 분화된 지방세포를 Oil Red O 염색으로 쉽게 식별할 수 있습니다. 이러한 세포의 지방 세포 특이적 유전자 서명은 정량적 PCR로도 확인할 수 있습니다. 많은 수의 흑색종 세포가 있는 상태에서 공동 배양된 지방세포에서 지질 저장의 감소가 관찰되며, 이전에 성숙한 세포에서 지방 세포 특이적 유전자 발현이 감소한 것으로 입증된 바와 같이 지방 세포 표현형의 탈분화가 관찰됩니다.이 동영상을 시청한 후에는 서로 다른 두 세포 유형 간의 상호 작용을 연구하기 위한 2D 공동 배양 시스템을 설계하고 설정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

dual-effects-melanoma-cell-derived-factors-on-bone-marrow-adipocytes

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 비디오는 골수 기질 세포(BMSC)가 지방 세포로 분화되는 과정을 보여줍니다. 2단계 과정에서, 특정 성장 인자와 호르몬이 존재할 때, 미분화된 BMSC는 먼저 지방세포로 분화합니다. 포도당과 인슐린 치료와 관련된 두 번째 단계는 여러 지질 방울을 가진 성숙한 지방 세포의 형성으로 이어집니다.

In vitro Mouse Bone Marrow Stromal Cell Differentiation into Adipocytes(체외 마우스 골수 기질 세포에서 Adipocytes로의 분화)

지방 조직(AT)은 전신 항상성에 영향을 미칠 수 있으므로 지방 세포 분화 및 기능의 분자 메커니즘을 이해하는 것이 중요합니다. 우리는 유도 지방 세포 자멸사에 대한 모델로서 지방 세포 항상성, 분화 및 저산소증 노출을 분석하여 이러한 과정에 대한 새로운 통찰력을 얻기 위한 프로토콜을 제공합니다.

분화 및 세포 사멸 항상성을 통해 성인 유기체에있는 지방 세포의 숫자의 규제의 메커니즘

다세포 유기체에서 분비된 용해성 인자는 부분비 신호의 결과로 다른 세포 유형으로부터 반응을 이끌어냅니다. Insert co-culture 시스템은 세포-세포 접촉이 없을 때 분비된 용해성 인자에 의해 매개되는 변화를 평가하는 간단한 방법을 제공합니다.

세포 - 세포 연락이없는 두 세포 유형의 삽입 공동 배양 시스템 개발

여기에서는 MCS (Magnetic-activated Cell Sorting)를 사용하여 Perivascular Adipose Tissue (PVAT)에서 지방 세포 전구 세포 (Adipocyte Progenitor Cell, APC) 개체군을 분리하는 방법을보고합니다. 이 방법은 FACS (Fluorescence-Activated Cell Sorting)와 비교할 때 지방 조직 1g 당 APC의 증가 된 분리를 허용합니다.

자기 활성화 세포 정렬에 의해 분리 된 혈관 주위 지방 조직으로부터의 지방 전구 세포 전구 세포의 확장 및 지방 생성 유도

Adipogenic 차별 평가의 전통적인 방법은 저렴 하 고 사용 하기 쉬운, 하지만 특정 유전자 발현에서 변화 하지 않습니다. 성숙한 adipocytes 계보 특정 마커를 사용 하 여에 중간 엽 세포 분화 척도를 분석 결과 개발 했습니다. 이 분석 결과 기초 연구 및 임상 의학에 걸쳐 다양 한 응용 프로그램 있다.

시각화 및 간 엽 세포 계보 특정 표시와 함께 Adipogenic 차별화 가능성의 정량화

지방 조직 혈관 창시자에서 흰색과 베이지색 adipocytes의 차별화는 비만에 대사 개선 위한 잠재력을 맺는 다. 우리는 CD34 + CD31 + 인간의 지방에서 내 피 세포 격리 및 후속 시험관에 확장 및 차별화 흰색과 베이지색 adipocytes에 프로토콜을 설명합니다. 여러 다운스트림 응용 프로그램을 설명 합니다.

절연, 확장, 및 Adipogenic CD34 + CD31 + 인간의 Omental 및 피하 지방 조직에서 내 피 세포의 유도

다음 절차는 유전자 조작 된 마우스 모델을 사용 하 여 뮤 린 등 피부에 멜 라 세포 종양 개시의 공간적 및 시간적 제어를 위한 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 거시적 뿐만 아니라 현미경 피부 흑색 종 개시를 설명 합니다.

돌연변이 멜 뮤 린 줄기 세포에서 시작 하는의 공간적 및 시간적 제어

이 프로토콜은 유도 만능 줄기 세포(iPSC)로부터 순수한 지방세포 집단의 생성을 허용합니다. 레티노산은 iPSC를 지방세포 생성에 사용되는 중간엽 줄기세포(MSC)로 분화시키는 데 사용됩니다. 그런 다음 나일 레드 염색을 기반으로 한 분류 접근법을 사용하여 순수한 지방 세포를 얻습니다.

지방 세포 관련 장애를 연구하기 위해 인간 iPSC를 순수한 지방 세포 집단으로 강력하게 분화

이 프로토콜은 지방전구세포를 얻고 시험관 내에서 지방세포 분화를 달성하기 위해 쥐 지방 조직에서 기질 혈관 분획(SVF)의 반자동 분리를 설명합니다. 콜라게나제 분해를 위해 조직 해리제를 사용하면 실험 변동이 줄어들고 재현성이 높아집니다.

조직 해리기를 사용하여 쥐 백색 지방 조직에서 기질 혈관 분획의 반자동 분리

이 논문에서는 M-LMD를 연구하기 위한 전임상 모델을 개발하기 위해 흑색종 관련 연수막 질환(M-LMD) 환자로부터 수집한 뇌척수액순환종양세포(CSF-CTC)의 증식을 위한 프로토콜에 대해 설명합니다.

Ex 생체 내 흑색종 관련 연수막 질환을 연구하기 위한 흑색종 환자의 대뇌 척수액 내 순환 종양 세포 배양

학습하세요 골수 지방세포와 흑색종 세포 간 상호작용을 연구하는 2차원 공배양 시스템을 통해 뼈 전이 메커니즘을 탐색하는 방법을. 이 기술은 간단하고 후보 분자를 빠르게 얻을 수 있어 암 치료 전략 개발에 유용합니다.

골 Adipocytes 차별화에 흑색 종 세포 유래 요인의 이중 효과

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