Name: 쥐 모델에 최적화 된 구조를 가진 Electrospun 혈관 이식 술의 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: 학습하세요 전기방사 혈관 이식물 제조 및 쥐 복부 대동맥 치환 모델에서의 생체 내 성능 평가 방법을. 이 기술은 재현성이 높고 동물 생존률이 우수하여 혈관 재생 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 NSFC 프로젝트 (81522023, 81530059, 91639113, 81772000, 81371699, 및 81401534)에 의해 재정적으로 지원 되었다.

실험 동물의 사용은 동물 실험 윤리 위원회의 난카이 대학에 의해 승인 하 고 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 가이드에 따라 실시.
1입니다. Electrospun PCL 이식의 제조
참고: 여기, 전기 기술 혈관 이식 조작에 이용 되었다.
<ol><li>각각, 메탄올과 클로 프롬의 혼합물에서 PCL을 용 해 하 여 25 wt %와 10 wt %의 PCL 솔루션을 준비 (1:5 볼륨 비율), 실 온 (RT) 12 시간에서.</li>
	<li>10 mL 유리 주사기를 PCL 솔루션을 로드 합니다.</li>
	<li>21-G 바늘 주사기를 놓습니다.</li>
	<li>컬렉션 악기에 스테인리스 스틸 맨 드릴 (2 mm 직경, 길이 25 c m)를 놓습니다.</li>
	<li>두꺼운 섬유 이식에 대 한 사용 하 여 25 wt %의 PCL 솔루션, 수집기 바늘 끝에서 17 cm의 거리, 8 mL/h의 유량 및 11의 전압 전기 매개 변수로 kV. 얇은 섬유 이식 10 wt %, 수집기에 바늘 끝에서 20 cm의 거리, 2 mL/h의 유량 및 18의 전압의 PCL 솔루션 사용 전기 매개 변수로 kV.</li>
	<li>얻은 이식 하룻밤 잔여 용 매를 제거 하는 진공 상태에서 배치 됩니다 확인 하십시오. 소독 절차 전에 모든 악기 고 무 균 기술을 통해 유지 합니다.</li>
	<li>주입 전에 이식 30 분 75% 에탄올 10 ml에서 그들을 immersing 및 다음 하룻밤 UV 빛에 노출에 의해 소독.</li>
	<li>섬유 및 기 공 크기 측정: 스캐닝 전자 현미경 (SEM) 이미지에 따라 ImageJ 소프트웨어를 사용 하 여 평균 섬유 직경을 계산.</li>
	<li>기계 장비의 테스트:<ol>
<li>면도날을 사용 하 여 길이 3 m m 섹션으로 관 건설 기계를 절단. 건설 기계는 마이크로미터를 사용 하 여 두께 측정 합니다.</li>
		<li>100 북 아의 부하 용량 인장 테스트 기계에 관 건설 기계를 배치</li>
		<li>파열까지 1mm 간 클램프 거리와 풀 10 m m/min의 속도로 경도 건설 기계 클램프. 인장 강도 및 파단 궁극적인 측정 합니다. 초기 선형 영역에서 탄성 계수를 계산 (최대 5% 변형) 응력-변형 곡선의.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 쥐 복 부 대동맥 이식 모델
참고: 모든 재료와 수술에 사용 되는 계기는 살 균. 수술 동안 거 즈 마스크와 감염을 피하기 위해 멸 균 장갑을 착용 하는 연산자 확인 하십시오. 실내 온도 동물 체온을 유지 하기 위해 27-30 ° C에서 유지 됩니다 확인 하십시오. 진통에 관한 현지 IACUC 지침을 따르십시오.
<ol><li>남성 Sprague Dawley 쥐 혈관 이식의 수신자로 240-270 g의 무게를 사용 합니다. 쥐 수술 하기 전에 24 시간 금식은 확인 합니다. 24 시간 단식 쥐의 목표는 빈 창 자에서 대변 충분히, 그로 인하여 확장 연산자의 수평선.</li>
	<li>쥐의 백 목 잡고 아래쪽으로 머리를 유지, 낮은 복 부의 복 부 구멍으로 springe 바늘을 삽입. 복 주사에 의해 chloral 하이드 레이트 (330 mg/kg)과 마 취에 대 한 쥐를 유도.</li>
	<li>쥐는 근육과 꾸준히 호흡을 완화 했다 함으로써 적절 한 anesthetization를 확인 합니다. 운영 현미경 쥐 부정사 위치에 놓습니다.</li>
	<li>바 셀 린 안과 수 의사 연 고 마 취에서 건조를 방지 하기 위해 눈에 적용 됩니다. 수술 전에 꼬리 정 맥 주입에 의해 heparinized 생리 염 분 해결책 (50 UI/mL)와 anticoagulation (UI/100kg)을 관리 합니다.</li>
	<li>면도칼 블레이드를 사용 하 여 전방 복 벽에 털을 면도 하십시오 그리고 요오드 솔루션 및 의료 알코올 솔루션을 사용 하 여 피부를 청소.</li>
	<li>수술가 위로 중간 개복 술 절 개를 수행 하 고 절 개 길이, 약 4-5 m 인지 확인 다음 복 부 구멍을 노출.</li>
	<li>철회 하 고 우선적으로 생리 식 염 수를 적신 거 즈로 내장을 포장.</li>
	<li>신중 하 게 복 부 대동맥 해 부.</li>
	<li>식별 하 고 9-0 monofilament 나일론 봉합을 사용 하 여 모든 작은 가지를 선.</li>
	<li>격리 된 섹션을 클램프 (길이 최대 1 c m) 2 개의 혈관 클램프를 사용 하 여 대동맥의. 대동맥 20-30 분 채워 남아 있을 수 있습니다.</li>
	<li>Anastomotic 사이트를 만들 마이크로-가 위를 사용 하 여 두 개의 클램프 사이의 복 부 대동맥 transect</li>
	<li>잔여 혈액을 제거 하 heparinized 염 (UI/50ml) 솔루션을 사용 하 여 대동맥의 두 끝을 플러시.</li>
	<li>마이크로-가 위를 사용 하 여 adventitia 벗기다.</li>
	<li>9-0 monofilament 나일론 봉합을 사용 하 여 숫자의 8 봉합 패턴 2 m m 내경 및 쥐의 복 부 대동맥에 길이 1 cm 이식 anastomose.</li>
	<li>첫째, 9, 3, 12, 및 근 위 측에 6 시 위치 순서 대로 4 개의 anastomoses을 구성 다음 두 봉합 사이 4 바늘 컷된 가장자리 anastomose. 근 위 봉합을 마치고 같은 방법으로 원심 측을 봉합. 참고: 모든 스티치는 네이티브 쪽은 약간은 이식에 포함 된 보장 합니다.</li>
	<li>이식, 흘러 혈액을 있도록 원심 클램프 다음 인접 클램프를 제거.</li>
	<li>멸 균 면봉 또는 스폰지 작은 거 즈를 사용 하 여 출혈을 막으려고 봉합 끝을 누릅니다. 약 3 분, hemostasis 때까지 누릅니다.</li>
	<li>복 부 구멍으로 내장을 반환 합니다.</li>
	<li>플러시 gentamicin (320 U/mL)와 따뜻한 생리 식 염 수 솔루션을 사용 하 여 복 부 구멍.</li>
	<li>각각 근육과 피부 층에 3-0 나일론 봉합 사를 사용 하 여 복 벽을 바느질.</li>
	<li>깨끗 하 고 건조 감 금 소에 쥐를 놓고 동물 체온; 유지 케이지 난방 패드를 넣어 마 취에서 회복 하기 위해 쥐를 기다립니다. Sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지 동물에 참석.</li>
	<li>후 의식 회복, 음식과 물을 함께 단일 케이지에 쥐를 넣어. 수술 후 감염을 방지 하기 위해 상처에 요오드를 적용 합니다. 그것은 완벽 하 게 복구 될 때까지 다른 동물의 회사에는 쥐를 반환 합니다.</li>
	<li>미리 정해진된 시간 지점에서 기관 지침에 따라 쥐 안락사</li>
</ol>

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<li>Rnjak-Kovacina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tailoring+the+porosity+and+pore+size+of+electrospun+synthetic+human+elastin+scaffolds+for+dermal+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Tailoring the porosity and pore size of electrospun synthetic human elastin scaffolds for dermal tissue engineering.</a> Biomaterials. 32 (28), 6729-6736 (2011).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+thick+fibers+and+large+pores+of+electrospun+poly%28epsilon-caprolactone%29+vascular+grafts+on+macrophage+polarization+and+arterial+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of thick fibers and large pores of electrospun poly(epsilon-caprolactone) vascular grafts on macrophage polarization and arterial regeneration.</a> Biomaterials. 35 (22), 5700-5710 (2014).</li>
<li>Hutcheson, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genesis+and+growth+of+extracellular-vesicle-derived+microcalcification+in+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Genesis and growth of extracellular-vesicle-derived microcalcification in atherosclerotic plaques.</a> Nat Mater. 15 (3), 335-343 (2016).</li>
<li>Tara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Well-organized+neointima+of+large-pore+poly%28L-lactic+acid%29+vascular+graft+coated+with+poly%28L-lactic-co-epsilon-caprolactone%29+prevents+calcific+deposition+compared+to+small-pore+electrospun+poly%28L-lactic+acid%29+graft+in+a+mouse+aortic+implantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Well-organized neointima of large-pore poly(L-lactic acid) vascular graft coated with poly(L-lactic-co-epsilon-caprolactone) prevents calcific deposition compared to small-pore electrospun poly(L-lactic acid) graft in a mouse aortic implantation model.</a> Atherosclerosis. 237 (2), 684-691 (2014).</li>
</ol>

저자 아무 충돌 금융 관심 있다.

셀 침투는 중생에 대 한 중요 하 고16 vivo에서혈관 이식의 개장 이다. 제한 된 셀 침투는 종종 이식 벽으로 세포의 이동 방해는 이식의 상대적으로 작은 구멍 관련이 있습니다. 이 문제를 해결 하려면 우리는 큰 기 공 구조 electrospun PCL 혈관 이식 준비 하 수정된 방법을 개발. 세부 사항에, 기 공 크기는 쉽게 처리 매개 변수에 의해 제어 될 수 있는 섬유 두께의 증가 함께 증가. 결과는 호스트 세포 vivo에서 이식 후이 macroporous 이식의 벽에 쉽게 침투 수와 cellularity 수술 12 개월 후에 명백한 셀 회귀 하지 않고 상대적으로 높은 수준에서 유지 했다.
네이티브 동맥 주로 이루어져 있다 3 개의 층, 즉, 내 피, tunica 매체, 및 adventitia. 피 안티 thrombogenic 인터페이스, 혈관의 장기 patency 유지 하는 중요 한 역할을 재생 합...

합성 중합체에서 만든 혈관 이식 심장 혈관 질병 (CVDs)의 치료를 위한 병원에 널리 활용 됩니다. 불행히도, 작은 직경의 혈관 이식의 경우 (D < 6 m m) 사용할 수 없습니다 종종 이르게 혈전 증, 내 증식, 그리고 다른 감소 된 혈액 흐름 속도 의해 발생 하는 낮은 patency 성공적인 제품 있다 합병증1.
조직 공학 장기 patency 및 항상성 비 계 기반 혈관 재생 및 재건에 따라 실현 하는 대체 전략을 제공 합니다. 자세히, 혈관 이식, 3 차원 서식 파일로 제공할 수 있는 기계적인 지원 및 혈관 조직 및 기능의 영향 세포, 세포 접착, 이동, 확산를 포함 하 여 재생 하는 동안 구조 지도 기질2분 지금까지, 다양 한 합성 폴리머 혈관 조직 공학에서 응용 프로그램에 대 한 평가. 이러한 고분자 중 poly(ε-caprolactone) (PCL)가 집중적으로 조사 좋은 셀 호환성 및 느린 저하 몇 개월에서 2 년3에 이르기까지. 쥐 대동맥 모델4,,56, PCL 혈관 이식 전기 처리 우수한 구조적 무결성 및 patency, 뿐만 아니라 지속적으로 증가 세포 침입과에서 neovascularization 전시는 최대 6 개월까지 이식 벽입니다. 그러나, 불리 한 조직 세포와 모세 혈관의 석 회화, 회귀를 포함 하 여 리 모델링 또한 관찰 되었다 더 긴 timepoints에서 최대 18 개월.
Cellularization 혈관 이식의 조직 재생을 결정 하 고7을 remolding 핵심 요소입니다. 전기, 다양 한 기법으로는 널리 고용 나노 섬유 구조8혈관 이식의 준비에 대 한. 불행히도, 상대적으로 작은 기 공 구조는 종종 후속 조직 재생을 제한 하는 electrospun 혈관 이식에 부족 한 세포 침투를 끈다. 이 문제를 해결 하려면 다양 한 기술은 시도 기 공 크기와 전반적인 다공성,9,10, 수집 장치, 레이저 방사선11에 의해 치료 후의 수정 leaching 소금/폴리머를 포함 하 여 증가 , 등등. 사실, electrospun 이식 (를 포함 하 여 섬유 직경, 기 공 크기 및 다공성)의 구조는 밀접 하 게 관련이 처리 조건12,13. 중 전기, 섬유 직경 폴리머 솔루션, 흐름 속도, 전압 등의 농도 같은 매개 변수를 변경 하 여 쉽게 제어할 수 있습니다. 14 , 15, 그러므로, 숨 구멍 크기와 다공성 향상 되었습니다 따라와.
우리는 최근 macroporous 구조 (5-7 µ m의 직경 및 30-40 µ m의 모 섬유) 수정된 PCL electrospun 이식을 했다. Vivo에서 쥐 복 부 대동맥을 대체 하 여 이식 3 개월 후 수술16patency, 좋은 endothelialization, 부드러운 근육 중생의 높은 비율을 보였다. 더 중요 한 것은, 아니 불리 한 조직의 석 회화 및 셀 회귀를 포함 하 여 개장 이식의 1 년 후에 관찰 될 수 있었다.

<table><tbody><tr><td>폴리(&엡실론;-카프로락톤) (PCL) 펠릿(Mn=80,000)</td><td>시그마</td><td>704067</td><td></td></tr><tr><td>메탄올</td><td>톈진 화학 시약 회사</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>알코올</td><td>톈진 화학 시약 회사</td><td>1083</td><td></td></tr><tr><td>클로로포름</td><td>톈진 화학 시약 회사</td><td>A1007</td><td></td></tr><tr><td>설탕</td><td>톈진 펑촨 회사</td><td>2296</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Alfa Aesar</td><td>A16046</td><td></td></tr><tr><td>Sprague Dawley 쥐</td><td>실험실 동물 센터 군사 의학</td><td></td><td></td>아카데미</tr> 일반 <tr><td>식염수</td><td>Hebei Tiancheng 제약 회사</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chloral hydrate</td><td>Tianjin Ruijinte 화학 회사</td><td>2223</td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodium injection</td><td>Tianjin Biochem 제약 회사</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gentamycin Sulfate Injection</td><td>Jiangsu Lianshui Pharmaceutical company</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mouse anti-&alpha;-SMA primary antibody</td><td>Abcam</td><td>ab7817</td><td></td></tr><tr><td>Mouse anti-smooth MYH primary antibody</td><td>Abcam</td><td>ab683</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit polyclonal anti-rat elastin 항체</td><td>Abcam</td><td>ab23748</td><td></td></tr><tr><td>토끼 항 폰 Willebrand 인자 1 차 항체</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td></td></tr><tr><td>염소 항 마우스 IgG (Alexa Fluor 488)</td><td>Invitrogen</td><td>ab150117</td><td></td></tr><tr><td>염소 항 토끼 IgG (Alexa Fluor 488)</td><td>Invitrogen</td><td>ab150077</td><td></td></tr><tr><td>5 % 정상 염소 혈청</td><td>Zhongshan Golden bridge</td><td>ZLI9022</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin 및 eosin (H & E)</td> <td>베이징 leagene 생명 공학</td><td>DH0006</td><td></td></tr><tr><td>Masson의 trichrome</td><td>베이징 leagene 생명 공학</td><td>DC0032</td><td></td></tr><tr><td>Verhoeff-van Gieson (VVG)</td> <td>베이징 leagene 생명 공학</td><td>DC0059</td><td></td></tr><tr><td>폰 Kossa</td><td>베이징 leagene 생명 공학</td><td>DS0003</td><td></td></tr><tr><td>실, 3-0 실크</td><td>상하이 Jinhuan 의료 용품 회사</td><td>G3002b</td>와 수술 봉합 바늘<td></td></tr><tr><td>실, 9-0 실크</td><td>상하이 Jinhuan 의료 용품 회사</td><td>H901</td><td></td> 실과 수술 봉합</tr></tbody></table>사 바늘

쥐 모델에 최적화 된 구조를 가진 electrospun 혈관 이식 술의 이식

Implantation of Electrospun Vascular Grafts with Optimized Structure in a Rat Model

여기, 우리는 macroporous PCL 혈관 이식 조작 및 복 부 대동맥 교체의 쥐 모델을 사용 하 여 평가 프로토콜을 설명 하는 프로토콜을 제시. Electrospun 혈관 이식 자주는 이식으로 세포 침투를 제한 하 고 재생성 하 고 개장 하는 신 동맥의 방해는 상대적으로 작은 구멍을가지고 있다. 이 연구에서는 두꺼운 섬유 (5-6 µ m)와 더 큰 모 (~ 30 µ m) PCL 혈관 이식 수정된 처리 기술을 사용 하 여 조작 했다. 이식의 장기 성능 쥐 복 부 대동맥 모델에 주입에 의해 평가 되었다. 초음파 분석은 이식 남아 동맥 또는 이식의 12 개월 후에 발생 하는 협 착 증 없이 특허를 보여주었다. Macroporous 구조는 셀 ingrowth를 개선 하 고 따라서 3 개월에서 재생성 조직 승진. 더 중요 한 것은, 12 개월 후 이식 벽 내 석 회화 등 불리 한 개장의 아무 표시도 없었다. 따라서, 처리 하는 수정 된 macroporous와 electrospun PCL 혈관 이식 장기 이식에 대 한 동맥 대체 될 잠재적인 개최.

PCL 이식 했다 explanted 3 개월 및 12 개월에서 post-operatively 및 hematoxylin에 오신 (H &amp; E), 표준 조직학 기술에 의해 trichrome Masson, 분석 Verhoeff 반 Gieson (VVG), 폰 Kossa, 면역 형광 α-SMA를 위한 얼룩 MYH, vWF, 그리고 엘라 스 틴입니다. 조직학 이미지 똑바로 현미경을 사용 하 여 찍은 그리고 면역 형광 이미지 ﬂuorescence 현미경을 사용 하 여 찍은.
모든 데이터는 ± sd. 의미를 표현 했다 학생의 t쌍 두 꼬리-시험 차이 비교 하는 데 사용 되었다. P 의 값 &lt; 0.05 통계적으로 간주 되었다.
...

여기, 우리는 PCL 두꺼운 섬유와 큰 모 공, 혈관 이식 조작 및 복 부 대동맥 교체의 쥐 모델에서 vivo에서 성능을 평가 하기 위해 프로토콜을 설명 하는 수정 된 전기 방법을 제시.

쥐 모델에 최적화 된 구조를 가진 Electrospun 혈관 이식 술의 이식

Here, we present a protocol to fabricate macroporous PCL vascular graft and describe an evaluation protocol by using a rat model of abdominal aorta ...

이 외과적 개입의 전반적인 목표는 전기방사 혈관 이식편을 쥐의 복부 대동맥에 이식하고 이식편의 장기적인 성능을 평가하는 것입니다. 이 방법은 Deling Kong 교수와 우리 그룹의 다른 동료들에 의해 확립되었으며, 혈관 재생에 대한 이식편의 구조 및 표면 특성의 영향과 같은 전기 방사 혈관 이식편 연구의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 반복성이 좋고 동물 생존율이 높다는 것입니다.또한 동물 모델은 저렴한 비용으로 관리하기 쉽습니다. 이 연구는 동료인 Wang 박사가 수행할 것입니다. 먼저 메탄올과 클로로포름의 1-5 혼합물에 폴리카프로락톤을 용해시키고 실온에서 12시간 동안 교반하여 폴리머 용액을 준비합니다.폴리머 용액을 10밀리리터 유리 주사기에 넣고 뭉툭한 21게이지 바늘을 장착합니다. 그런 다음 수집 기기에 스테인리스 스틸 맨드릴을 놓고 제대로 접지되었는지 확인합니다. 25% 폴리카프로락톤 용액에 대해 바늘 끝에서 수집기까지의 작동 거리를 17cm로 조정합니다.그런 다음 주사기 펌프의 유량을 시간당 8밀리리터로 설정합니다. 그런 다음 전원 공급 장치의 전압을 11kW로 설정하고 적절한 광섬유 분포를 위해 전기 방사 섬유를 수집하기 위해 40RPM에서 맨드릴 회전을 시작합니다. 이제 모든 것이 설정되었으면 전원 공급 장치와 주사기 펌프를 켜서 전기 방사 섬유를 수집하기 시작합니다.4.5분 후 주사기 펌프, 전원 공급 장치 및 맨드릴 모터를 끕니다. 이식편이 후드에서 1 시간 동안 건조되도록하십시오. 그런 다음 절대 알코올을 사용하여 맨드릴에서 이식편을 제거하고 밤새 진공 상태에 두어 잔류 용매를 제거합니다.이식편을 에틸렌 옥사이드로 멸균하고, 멸균 생물학적 격리 후드에서 건조시킵니다. 표준 기술을 사용하여 이식편 내강의 SEM 이미지를 얻고 ImageJ로 가져옵니다. 측정 도구를 사용하여 각 이미지의 섬유 직경과 평균 기공 크기를 모두 측정하여 샘플 간의 일관성을 보장할 수 있습니다.이식 재료의 기계적 특성에 대한 정보를 얻으려면 먼저 면도날을 사용하여 관형 골격을 3mm 섹션으로 자릅니다. 그런 다음 캘리퍼를 사용하여 골격의 두께를 측정합니다. 다음으로, 그립 사이에 1mm가 있도록 인장 시험기의 그립에 스캐폴드를 로드합니다.골격이 파열될 때까지 분당 10mm의 속도로 축 방향으로 유지합니다. 샘플의 인장 강도와 극한 파단 연신율을 모두 기록해야 합니다. 수술 전, 몸무게가 240-270g인 빠른 수컷 Sprague Dawley 쥐는 이식 수술 전 24시간 동안 쥐를 사육합니다.쥐를 마취하고 동봉된 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 수술을 준비합니다. 쥐의 근육이 이완되고 호흡이 안정적인지 확인하여 적절한 마취를 확인하십시오. 그런 다음 작동 현미경 아래에 쥐를 누운 자세로 놓습니다.수술용 가위를 사용하여 4-5cm 길이의 정중선 개복술을 절개하고 복강을 노출시킵니다. 조심스럽게 수축시키고 식염수를 적신 거즈로 장을 감쌉니다. 작동 중인 현미경을 통해 보면서 인접한 조직에서 복부 대동맥을 벗겨냅니다.9-0 모노필라멘트 나일론 봉합사를 사용하여 하행 대동맥의 모든 작은 가지를 식별하고 접합합니다. 다음으로, 혈관 클램프를 사용하여 대동맥의 고립된 부분을 최대 1cm까지 고정합니다. 그런 다음 한 쌍의 마이크로 가위를 사용하여 클램프 사이의 복부 대동맥을 횡단합니다.대동맥의 양쪽 끝을 헤파린 식염수를 사용하여 세척하여 잔여 혈액을 제거합니다. 마이크로 가위를 사용하여 고정된 대동맥의 외막을 벗겨냅니다. 그런 다음 대동맥 절편을 제거한 틈새에 멸균된 이식편의 1cm 길이 절편을 놓습니다.9-0 모노필라멘트 나일론 봉합사를 사용하여 9시, 3시, 12시, 그리고 근위부의 6시 위치에 8자 봉합사 패턴을 사용하여 4개의 문합을 구성합니다. 그런 다음 근위부의 각 봉합사 사이에 다른 4개의 문합을 구성합니다. 이식편을 수직으로 배치하여 작동 현미경 아래에 있는 8개의 바늘 사이에 동일한 간격을 표시합니다.근위 봉합사를 마친 후 원위부에서 이 과정을 반복합니다. 이식편이 부착되면 혈액이 이식편으로 흐를 수 있도록 원위 클램프를 제거한 다음 근위 클램프를 제거합니다. 멸균 면봉을 사용하여 봉합 지점에서 관찰된 출혈을 멈추도록 압력을 가합니다.지혈이 발생할 때까지 약 3분 동안 누릅니다. 그런 다음 장을 복강으로 되돌려 놓고 겐타마이신이 함유된 따뜻한 생리식염수를 사용하여 복강을 씻어냅니다. 그런 다음 근육과 피부층의 3-0 나일론 봉합사를 사용하여 복벽을 꿰매십시오.수술 후 절개 부위에 요오드는 한 번만 사용하십시오. 쥐가 완전히 회복되면 다른 사람들에게 돌려주세요. 전기 방사 용액에서 폴리카프로락톤의 농도는 섬유 직경과 이식편의 기계적 특성 모두에 영향을 미칠 수 있습니다.더 높은 농도의 25% 용액은 10% 용액보다 더 두꺼운 섬유와 더 큰 기공을 가진 혈관 이식편을 생성합니다. 생체 내에서 3개월이 지난 후, 조직학적 염색 결과 이식편의 내강에 형성된 새로운 조직층과 이식편 자체 내에 상당한 양의 콜라겐 침착이 밝혀졌습니다. 이 새로운 조직층에는 내피 세포가 늘어서 있으며, 그 아래에는 평활근 세포와 원주방향으로 정렬된 엘라스틴층이 있습니다.생체 내에서 12개월이 지난 후, 새로운 조직은 잘 통합된 것처럼 보였고 내피 근육 및 평활근 층은 손상되지 않은 상태로 유지되었습니다. 이 기술을 숙달하면 적절하게 수행하면 1-2시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차에 따라 다음과 같은 추가 질문에 답하기 위해 컬러 도플러 초음파와 같은 다른 측정을 수행할 수 있습니다.이 비디오를 시청한 후에는 전기 방사 혈관 이식편을 제작하는 방법을 잘 이해하고 쥐 복부 동맥 교체 모델에서 생체 내 성능을 평가해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

여기, 우리는 방실 (AV) - 홈 성인 루이스 쥐에서 설계 조직을 이식하는 심장 수술을 설명합니다.

랫 중심에 엔지니어링된 조직의 주입

세포 및 분자 neotissue 형성에 대한 우리의 지식을 개선하기 위해, TEVG의 쥐 모델은 최근에 개발되었다. 이식은 C57BL / 6 마​​우스의 신동맥 대정맥 개재 이식으로 이식되었다. 이 모델은 우리의 임상 연구에서 달성 된 것과 유사한 결과를 얻을 수 있지만, 훨씬 단축 된 시간 과정을 통해.

마우스 모델에서 하대 정맥 끼어 이식의 주입

여기, 우리는 두 번 시드를 부분적으로 유도 만능 줄기 세포로 쥐에 이식을위한 기능적인 조직 설계 혈관 이식을 생성하는 프로토콜을 제시 (PiPSC은) - 탈세 포화 선박 발판 생물 반응기에서 유래 내피 세포 - 평활근 세포 및 PiPSC 산출했다.

마우스 모델에서 조직 공학 혈관의 생성 및 손톱 확장

동물 모델은 조직 공학 이식편을 평가하기 위한 중요한 도구입니다. 이 논문은 전방 십자 인대 조직 공학에 사용하기 위한 전기 방사성 생분해성 고분자 이식편을 준비하기 위한 프로토콜과 쥐 모델에 이식하기 위한 수술 프로토콜을 제시합니다.

엔지니어링 전방 십자 인대 이식의 평가 흉선 쥐 모델

우리는 고립과 잘 특성화 된 환경에서 생체 내에서 혈관을 분석하기위한 모델로서 동정맥 (AV) 루프의 생성을위한 미세 수술 방법을 설명합니다. 이 모델은뿐만 아니라 혈관 신생의 조사에 유용 할뿐만 아니라 최적의 엔지니어링 축 방향으로 혈관 및 이식 가능한 조직에 적합합니다.

소형 동물 모델에서의 동정맥 (AV) 루프는 혈관 신생과 혈관을 조성한 조직 공학을 공부하기

이 비디오는 쥐의 정맥 삽입 수술 후 근육 내막 증식증의 발달을 연구하는 모델을 보여줍니다.

정맥 삽입 위치 모델 : 바이 패스 이식 개통을 연구하기위한 적절한 모델

식도 재건은 도전적인 절차이며, 식도 점막과 근육의 재생을 가능하게하고 인공 이식으로 이식 할 수있는 조직 공학 식도의 개발이 필요합니다. 여기에서는 스캐폴드 제조, 생물 반응기 재배 및 다양한 수술 기법을 포함한 인공 식도를 생성하는 프로토콜을 제시합니다.

쥐의 원주 식도 재건을 위한 조직 공학 이식편

본 프로토콜은 정맥 이식편을 사용하여 정맥 혈관 화 수술 후 정맥 심상 증식을 감쇠하는 전략을 개발하기 위한 동맥 혈압에 정맥을 복종시킴으로써 정맥 친혈증을 실험적으로 만드는 것을 목표로 합니다.

정맥 이식편을 사용하여 동맥 혈압하에서 인티맥 증식을 평가하는 재혈관 외과를 모방한 토끼 정맥 중개 모델

이 연구는 중증 대동맥 협착증 또는 저형성 좌심 증후군과 같은 선천성 심장 결함에서 볼 수 있는 내피에서 중간엽으로의 전이 유도 섬유증의 동물 모델을 제시하여 상세한 조직학적 조직 평가, 조절 신호 경로 식별 및 치료 옵션 테스트를 가능하게 합니다.

내피에서 중간엽으로의 전환 연구를 위한 신생아 이종성 쥐 심장 이식 모델

여기에서는 커프 기법을 사용하여 조직 공학 혈관 이식편을 마우스 경동맥에 이식하기 위한 프로토콜을 제시하여 혈관 조직 재생 메커니즘을 조사하는 데 적합한 동물 모델을 제공합니다.

커프 기법을 통한 마우스 경동맥에 조직 공학 혈관 이식편 이식

이 연구는 대퇴 동맥의 소구경 이식편을 평가하기 위한 돼지 모델을 제시합니다. 이 모델은 인간의 혈관 역학을 모방하고 이식편 개통성, 혈류역학 및 혈관 리모델링을 종합적으로 평가합니다. 혈관 이식편을 검사하고 도플러 초음파 및 혈관 조영술로 모니터링할 수 있는 유용한 플랫폼을 제공합니다.

소구경 혈관 이식편을 테스트하기 위한 돼지 모델에 대퇴 혈관 이식편 이식

학습하세요 전기방사 혈관 이식물 제조 및 쥐 복부 대동맥 치환 모델에서의 생체 내 성능 평가 방법을. 이 기술은 재현성이 높고 동물 생존률이 우수하여 혈관 재생 연구에 활용됩니다.

쥐 모델에 최적화 된 구조를 가진 Electrospun 혈관 이식 술의 이식

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