Name: 마우스에 가로 대동맥 수축 유도를 폐쇄 가슴 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: 배우세요 마우스에서 폐쇄 가슴 모델을 이용한 가로 대동맥 수축(TAC) 기법으로 좌심실 비대를 유도하는 방법입니다. 최소 침습적 수술로 염증 반응을 최소화하고 심혈관 연구에서 면역 반응을 분석할 수 있습니다.

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우리에 그들의 기술 지원을 었 Frede와 수잔 슐츠 감사합니다. 이 연구는 아무 자금을 받았다.

이 프로토콜은 동물 실험 LANUV Recklinghausen (#84-02.04.2016.A374)에 대 한 윤리 위원회에 의해 승인 되었다. 성인 쥐에이 절차는 수행 하는 일반적으로, > 나이의 10 주. 그러나, 그것이 젊은 동물 뿐만 아니라에이 수술을 수행할 수 있습니다. 수술 도구를 사용 하기 전에 소독 해야 하 고 무 균 조건 하에서 수행 되어야 하는 모든 단계.
1입니다. 마 취와 삽 관 법의 유도
<ol><li>Intraperitoneally 통증 완화에 대 한 buprenorphine 0.1 µ g/g 몸 무게를 주사. 수술 후 앞으로 3 일에 대 한 buprenorphine 0.1 mg/kg 매 8 h의 복 주사를 반복 합니다.</li>
	<li>유도, 1 L/min의 산소 흐름 isoflurane의 3.0 Vol %로 설정 하는 기화 기에 연결 되어 있는 마 취 유도 상자에 마우스를 놓습니다.</li>
	<li>촉각 자극을 유도 하 여 깊은 마 취 법을 확인 합니다. 참고: 증가 Vol %isoflurane 최대 5%, 마 취 유도 실패 하거나 마 취 법은 충분히 깊은 되지 않습니다.</li>
	<li>반사 부재를 보장 하기 위해 마우스의 꼬리에 꼬 집 음. 반사의 완전 한 부재의 경우 최적의 송풍기 설치에 대 한 마우스의 무게 (1.12 참조).</li>
	<li>절차에 걸쳐 37 ℃의 체온을 유지 하기 위해 온도 제어 운영 테이블에 마우스를 이동 합니다.</li>
	<li>마 취 법을 유지 하기 위해 마 취 유도 상자에 연결 된 플라스틱 원뿔에 마우스의 코를 놓습니다.</li>
	<li>마우스의 상단 incisors 나일론 봉합으로 해결. 접착 테이프를 가진 사지 흥분</li>
	<li>적절 한 마 취 법을 다시 있도록 집게의 끝과 뒷 발에 압력을 적용 합니다. 철수 반사의 부재에서 다음 단계를 진행 합니다. 참고: 마 취 유도 실패 하거나 마 취 법은 충분히 깊은 isoflurane의 볼륨 % 증가 하 고 철수 반사의 부재에 대 한 기다립니다.</li>
	<li>마 취 건조를 방지 하기 위해 각 막에 살 균 안과 윤활제를 놓습니다.</li>
	<li>직장 외상을 피하기 위해 직장 탐사선 기름칠 37 ° c.의 핵심 온도 되도록 직장 온도 프로브를 삽입</li>
	<li>제조업체의 지침에 따라 depilatory 크림 위 가슴과 목 구멍을 depilate. 1 분 후 크림을 닦아. 필요한 경우, 성공할 때까지이 단계를 반복 합니다. 참고: 출혈 시 면 기울 ㄴ 면봉을 사용 합니다.</li>
	<li>70% 에탄올 depilated 영역을 청소. Povidone-요오드 적어도 3 분 동안 현지 피부 소독 3 번 한 다음 적용.</li>
	<li>인공 호흡기 생리 적 매개 변수 설정을 조정 합니다. 150/min 및 8-10 µ L/g 체중 (BW)에 해 일 볼륨에 호흡 속도 설정 합니다.</li>
	<li>멸 균 장갑 한 켤레를 입었다. 수술 현미경 마우스를 놓고 마우스를 놓고 살 균 fenestrated 드 레이프.</li>
	<li>중간 선 악의 2nd 갈비뼈 아래로 아래 약 3 mm에 피부 incise 중간 및 submandibular 동맥의 결합 조직 식별 합니다. 다음 각된 intracapsular 집게를 사용 하 여 부드럽게 분할 하는 중간에 선 퉁 명 스럽게 두 집게와 고 tracheal 근육을 탐험.</li>
	<li>Intracapsular 집게와 파라 tracheal 근육 떨어져 퉁 명 스럽게 당겨 부드럽게 기도 준비 합니다.</li>
	<li>쉽게 삽 관 법 조건에 대 한 목 구멍을 제대로 하 고 부드럽게 기도 내 삽 관 법 정 (외경 1.2 m m)를 삽입 하는 집게와 혀에 당겨. 기관 내 튜브의 직접적인 시각화 및 적절 한 가슴 운동에 대 한 검사는 삽 관 법을 확인 합니다.</li>
	<li>1.0 L/min과 100% O2의 흐름 2 %isoflurane 삽 관 법 후 isoflurane 농도 조정 합니다. 참고: 호흡 운동을 중지 하지 않는 경우 마우스 이동 시작, 먼저 180/분까지 호흡 속도 증가. 필요한 경우 증가 isoflurane 농도 3.5%까지 이차 마우스 자체에 호흡 중지 될 때까지. 가장 일반적인 문제 누설 또는 기화 기의 부적 절 한 작성을 평가 합니다.</li>
	<li>또는 다음 하위 단계에서 제안으로 삽 관 법을 수행 합니다.<ol>
<li>60 ° 각도에서 테이블에 마우스를 놓습니다.</li>
		<li>접착 테이프를 가진 마우스의 말단을 흥분 하 고 머리를 기대 다.</li>
		<li>직접 후 두 위의 피부에 감기 빛 소스를 배치 합니다.</li>
		<li>성 대를 시각화 하는 집게로 혀를 부드럽게 당겨.</li>
		<li>성 대를 통해 4-정 (24 G)의 플라스틱 튜브를 삽입 하 고 인공 호흡기 설정에 플라스틱 튜브를 연결.</li>
		<li>Synchrone 가슴 움직임에 의해 삽 관 법을 확인 하는 정에 호흡기를 연결 합니다. 참고: 호흡 운동을 중지 하지 않는 경우 마우스 이동 시작, 먼저 분 당 180까지 호흡 속도 증가. 필요한 경우 증가 secondarily isoflurane 농도 3.5%까지 마우스 자체에 호흡 중지 될 때까지. 가장 가능성이 문제 누설 또는 기화 기의 부적 절 한 작성을 평가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 수술 전 도플러 측정
<ol><li>부드럽게 결합 조직을 집게로 떨어져 당겨 두 경 동맥 기관에는 누워 외래를 준비 합니다.</li>
	<li>오른쪽에 45 ° 미만의 각도에서 왼쪽된 경 동맥 일부 살 균 초음파 젤 20 m h z 도플러 프로브 팁을 놓습니다.</li>
	<li>천천히 회전 측면 및 도플러 신호를 찾아서 신호를 최적화 하기 위해 프로브 기울기 중간 이동 프로브.</li>
	<li>도플러 소프트웨어를 사용 하 여 표시 하 고 컴퓨터에서 오른쪽과 왼쪽 일반적인 경 동맥에 흐름 속도 저장.</li>
</ol>3입니다. thoracotomy
<ol><li>각 개별 마우스에 대 한 멸 균 장갑의 세트를 사용 하 여 수술 부위의 감염을 방지 하기 위해.</li>
	<li>피부 절 개는 시저와 함께 2차 있는 공간으로 확장 합니다.</li>
	<li>갈비뼈를 계산 하 여 2차 있는 공간을 시각적으로 식별 하 고 퉁 명 스럽게 intracapsular 집게와 함께이 공간을 침투. 참고: 1세인트 갈비뼈는 쇄 골 아래 있으며 따라서 보이지 않습니다 2nd 있는 공간 첫 번째 보이는 리브 (즉 2차 리브)와 3rd 갈비뼈 사이 발견 때문에.</li>
	<li>겸 팁의 도움으로 2차 있는 공간을 열고는 견인 기 삽입 합니다.</li>
	<li>Thymus의 명확한 보기 운영 테이블에 연결 된 고무 밴드와 함께 있는 견인 기를 조정 합니다.</li>
	<li>출혈 하는 경우 목화-팁을 사용 하 고 2 분 대는 표면에 누릅니다.</li>
</ol>4. 가로 대동맥의 밴딩
<ol><li>중간 및 결합 조직 식별을 200%로 확대를 조정 합니다. 다음 직각된 포 셉을 사용 하 여 부드럽게 thymus를 나눕니다. 대동맥 아치 명확 하 게 볼 수 있습니다 때까지 지방 조직을 제거 합니다.</li>
	<li>아래 ( 그림 1참조) brachiocephalic 동맥과 좌 일반 경 동맥 사이 가로 대동맥 겸 자 매 각도와 터널에 준비 합니다. 좋은 집게의 도움으로 6.0 봉합의 끝을 잡고 고 대동맥 아치 아래 스레드를 전달 합니다.</li>
	<li>아치의 다른 쪽에서 두 번째 집게와 스레드를 가져가 라.</li>
	<li>으로 바늘을 사용 하 여 27 G의 3 m m 긴 조각 길이 잘라는 쥐 쥐에 대 한 스페이서로 19-25 g 몸 무게와 26 G 바늘 사이 무게에 대 한 전술-결 찰에 대 한 스페이서 > 25 g BW.</li>
	<li>신중 하 게는 스페이서 가로 대동맥에 평행 하 게 배치 합니다.</li>
	<li>공백 요소에 느슨한 이중 매듭을 준비 하 고 대동맥을 병렬로 스페이서의 최적의 위치를 보장. 그런 다음 첫 번째 던져 고 신속 하 게 수행 하는 두 번째 반대 던져. 공백 요소를 신속 하 게 제거 합니다.</li>
	<li>가짜 마우스 제어를 수행 하려면 대동맥의 결 찰을 생략 하는 동일한 프로토콜을 따릅니다.</li>
	<li>2노스다코타 있는 공간을 6.0 폴 리 프로필 렌 봉합을 닫습니다. 때 ligating subclavian 선박에 특별 한 관심을 지불.</li>
	<li>연속 봉합 패턴에 6.0 폴 리 프로필 렌 봉합 사를 사용 하 여 피부 봉합</li>
</ol>5. 가로 대동맥의 성공적인 결 찰의 확인
<ol><li>섹션 2에서 45 ° 각도에서 목의 양쪽에 20 MHz 도플러 프로브를 배치 합니다.</li>
	<li>각 측면에 흐름 속도 문서화 합니다. 참고: 성공적인 전술 도플러 흐름 속도 의해 그림 2와 같이 유효성 수 있습니다. 사이는 오른쪽과 왼쪽 경 동맥 일반적으로 4-10의 흐름 속도 비율 보장 적절 한 전술 ( 그림 2참조).</li>
</ol>6. 심장 수확
<ol><li>1.2 단계에 따라 마 취 법을 유도. 그리고 1.3.</li>
	<li>챔버를 안락사에 마우스를 놓고 볼륨/분의 10-30% 치환 하 이산화탄소 유량 조정 합니다.</li>
	<li>수술 테이블에 마우스 흥분 가 위 및 수확 추가 분석에 대 한 정으로 열 등 한 베 나 정 맥에서 혈액으로 복 부를 엽니다.</li>
	<li>횡 경 막과 sternal 뼈 강한가 위로 잘라내어 심장 제거.</li>
	<li>심장 무게 전에 모든 동맥 및 결합 조직을 제거 합니다.</li>
	<li>우 심 실 및 좌 심 실에서 심장 고 두 샘플 무게 합니다.</li>
	<li>액체 질소에 두 조직 샘플을 동결.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

전술 때문에 고혈압의 급속 한 발병 대동맥 협 착 증 또는 고혈압으로 인 한 임상 관련 비에서 다릅니다. 그럼에도 불구 하 고, 심장 마비를 유발 하는 작은 동물 모델의 사용에는 많은 이점이 있다 고 많은 조사11선택 따라서. 이 닫힌된 가슴 모델 쥐4가로 대동맥 수축 유도 하는 수술 방법의 기존 모델을 향상 시킵니다.
가장 중요 한 단계는 대동맥 아치 아래 통로 이다. 대동맥 주위 너무 꽉 봉합 신장 등 중요 장기에 혈액 흐름의 치명적인 감소를 발생할 수 있습니다. 하 겐 Poiseuille의 법률, 흐름은 주로 반지름에 의존 합니다. 따라서, 일부 체중에 맞게 스페이서 우리의 프로토콜에서 사용 되었다. 이 절차는 더 보편적으로 적용 가능한, 개별 실험 설정에 따라 매우 젊 거 나 오래 된 쥐에 관한 특히이 모델을 만든다.
수술 외상 자체 면역...

마우스 모델 종종 인간의 질병1을 모방 하는 데 사용 됩니다. 가로 대동맥 수축 (TAC) 압력 과부하를 유도 하는 데 사용 하 고 왼쪽 심 실 비 대2. 오픈 가슴 전술 모델 쥐에서 Rockman 외. 에 의해 확인 되었다 3 고 수술 DeAlmeida 그 외 여러분 에 의해 자세히 설명 되어 4. 가로 대동맥의 Banding은 복 부 대동맥 수축에 비해 더 유리한 순환의 더 큰 부분이 후자의 절차2의 부정적인 효과 보완할 수 있기 때문에.
가로 대동맥의 밴딩 오름차순 대동맥 및 brachiocephalic 동맥에서 동맥 압력이 증가에 이르게 되지만 장기의 충분 한 관류 (즉 왼쪽된 일반적인 경 동맥, 왼쪽된 하 말 초 혈관을 통해 동맥, 그리고 하강 대동맥)입니다. 증가 심장 afterload 및 상승 된 심장 벽 긴장을이 끈다. 벽 스트레스 때문에 섬유 두껍게5이후에 감소합니다. 심장 hemodynamics 만성 변화 maladaptation의 좌 심 실 팽창 결과. 이 이런식으로 TAC의 심장 비 대 증 결국 심장 마비로 이어지는 재현할 모델을 만듭니다.
DeAlmeide 그 외 여러분 에 의해 설명 된 대로 전술에 대 한 표준 절차 4 갈비뼈와 흉 골은 mediastinum으로 흉 막 캐비티 입력의 절 개를 통해 부분 상단 thoracotomy 통해 대동맥 아치를 접근 한다. 대동맥 아치와 사이드 가지 좋은 볼 수 있습니다. 불행 하 게도, 해 부 늑 골 수 없습니다 수 다시 연결, 자유롭게 떠 하 고 그로 인하여 호흡 역학 변경 그들 나뭇잎.
우리는, 그러므로, 2nd 있는 공간을 통해 측면 외과 접근을 사용 하 여 대동맥 아치에 대 한 최소한 침략 적 폐쇄 가슴 접근 설립. 이 모델의 가장 큰 장점은 갈비뼈도 절단 없이 전술 수행 능력입니다. 수술 외상의 피부 절 개 하 고 있는 근육의 해 부로 제한 됩니다. 이 절차는 외상 자체를 최소화 하 고 적절 한 가슴 안정성을 유지 하는 데 도움이.
여기는 전체 또는 상위 thoracotomy 수행 하지 않고 마우스에서 전술 수술을 수행 하는 자세한 단계별 절차에 설명 합니다. 높은 주파수 도플러 전술의 성공 앞에서 설명한 6,7보장 하기 위해 사용 되었다.

<table><tbody><tr><td>압력량 카테터</td><td>Millar Instruments, 미국</td><td>SPR-839</td><td></td></tr><tr><td>마우스 인공호흡기</td><td>Harvard Appliances GmbH, 독일</td><td>Minivent - TYPE 845</td><td></td></tr><tr><td>마우스 인공호흡기</td><td>Harvard Apparatus GmbH, 독일</td><td>삽관 캐뉼라 OD 1.2mm 73-2844</td><td></td></tr><tr><td>기화기</td><td>Dr&auml과 Y-연결; ger 의학 AG&CO. KG, 독일</td><td>19.3 이소플루란-기화기(최신 버전은 카탈로그 번호에서 사용할 수 있습니다&nbsp; D-877-2010)</td><td></td></tr><tr><td>현미경&nbsp;</td><td>Leica Microsystems, 독일</td><td>MZ 7.5</td><td></td></tr><tr><td>광원&nbsp;</td><td>Schott AG, 독일</td><td>KL 1500 LCD</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Prolene</td><td>Ethicon, 미국</td><td>폴리프로필렌 봉합사 BV-1 9.3 mm 3/8c</td><td>수술용 봉합</td></tr>사 <tr><td>Seraflex</td><td>Serag Wiessner, 독일</td><td>USP 5/0 슈바르츠; &nbsp; IC108000&nbsp;</td><td>수축을 위한 봉합사</td></tr><tr><td>동종 제어 수술대</td><td>Harvard Apparatus GmbH, 독일</td><td>Typ 872/3 HT with 삼각대 스탠드 및 동종 컨트롤러 Type 874; 73-4233</td><td></td></tr><tr><td>유연한 직장 프로브</td><td>Harvard Apparatus GmbH, 독일</td><td>1.6 mm OD; 55-7021</td><td></td></tr><tr><td>도플러 신호 시각화 기기</td><td>Indus Instruments, 미국</td><td>20MHz 펄스 도플러 모듈이 있는 도플러 신호 처리 워크스테이션(DSWP)</td><td></td></tr><tr><td>Arruga Intracapsular Forceps</td><td>Altomed, 영국</td><td>A5400</td><td></td></tr><tr><td>도플러 프로브</td><td>Indus Instruments, 미국</td><td>20MHz 튜빙 장착 프로브</td><td></td></tr><tr><td>Jaffe Lid Retractor</td><td>Altomed, UK</td><td>A3513</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스에 가로 대동맥 수축 유도를 폐쇄 가슴 모델

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

심장 비 대 및 심장 마비에 대 한 연구는 자주 압력 과부하 마우스 모델 전술에 의해 유도 된 기반으로 합니다. 부분 thoracotomy 가로 대동맥 아치 시각화를 수행 하는 표준 절차입니다. 그러나, 오픈 가슴 모델에서 thoracotomy로 인 한 수술 외상 변경 호흡 생리학 갈비뼈를 해 부하 고 가슴 폐쇄 후 첨부 되지 않은 왼쪽. 이 방지 하려면 측면 thoracotomy 통해 최소 침 습, 닫힌 가슴 접근을 설립 했습니다. 여기 우리는 접근 대동맥 아치 2nd 있는 공간을 통해 가슴 구멍을 입력 하지 않고 마우스에서 복구할 수 보다 적게 외상 성 부상으로 떠나. 우리는 동등한 생존 률 오픈 가슴 전술 절차에 대 한 표준 실험실 설정을 사용 하 여이 작업을 수행 합니다. 닫힌된 가슴 접근 방식으로 인해 생리 적 호흡 패턴을 유지, 떨어져 쥐 보여주는 빠른 복구 혜택을 덜 침략 적 기술을 나타납니다 빠른 치유 과정을 촉진 하 고 외상 후 면역 응답을 감소 시킬 것으로 보인다.

성공적인 전술 압력 과부하 및 왼쪽된 심 실 비 대의 유도 보장합니다. 압력 과부하의 ad hoc 유효성 검사는 그림 2와 같이 도플러 흐름 속도 측정을 사용 하 여 얻을 수 있습니다. 수술 전 혈액 흐름 속도 두 경 동맥에서, 전술 인해 증강된 혈액 속도 좌 심 실 그리고 대동맥에 높은 압력으로 인해 오른쪽 경 동맥에 포스트 stenotic 감쇠 혈액 흐름 속도에서 발생 하는 동안은 왼쪽 경 동맥.
전술과 그 결과 비 대의 효능 하루 3, 6, 21 일 수술 후에 남성 마우스 C57BL/6J 심장 무게/몸 무게 비율 (HW/BW; mg/g)의 계산에 의해 확인 되었다. HW/BW 비율 전술 쥐 수술 후 6 일 비 줄무늬 쥐에 비해 크게 증가 (4.78 ± 0.18 대7.66±1.43 mg/g,...

여기, 선물이 측면 thoracotomy 통해 가로 대동맥 수축 (TAC)의 프로토콜. 이 기술은 압력 과부하 및 마우스 활용 표준 전술 실험실 설정에서에서 심장 마비를 시뮬레이션을 최소 침 습, 닫힌 가슴 수술입니다.

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

이 절차의 전반적인 목표는 쥐 폐쇄 흉부 모델에서 횡방향 대동맥 수축을 수행하여 좌심실 심근 비대를 유도하는 것입니다. 이 최소 침습적 기법은 호흡기 질환을 줄이고 염증 반응을 최소화하는 데 도움이 된다. 이 방법은 면역학 분야의 주요 질문, 예를 들어 좌심실 비대 발병에서 심장 대식의 반응에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.이 기술의 가장 큰 장점은 흉곽이 손상되지 않아 외상이 최소화된다는 것입니다. 공간과 일회 호흡량은 체중에 맞게 조정되기 때문에 이 프로토콜은 다양한 크기의 마우스에 사용할 수 있습니다. 또한 수술 외상을 줄이고 측정 값의 편차를 줄입니다.마우스 마취 후 텍스트 프로토콜에 따라 마우스를 온도 조절이 가능한 수술대로 옮기고 마취 유도 상자에 연결된 노즈콘을 분리하여 마취 상태를 유지합니다. 나일론 봉합사로 마우스의 위쪽 앞니를 고정합니다. 반사가 없는지 확인하기 위해 꼬리를 꼬집습니다.접착 테이프를 사용하여 사지를 고정합니다. 직장 프로브를 삽입한 후 제조업체의 지침에 따라 목구멍과 가슴 위쪽에 제모 크림을 바르고 1분 동안 그대로 두십시오. 그런 다음 크림을 닦아내고 필요한 경우 반복합니다.인공호흡기 설정을 생리학적 매개변수에 맞게 조정하고 동물을 수술용 현미경으로 관찰한 상태에서 하악 아래 약 3mm 정중선의 피부를 두 번째 갈비뼈까지 절개합니다. 턱밑샘의 정중선과 결합 조직을 확인합니다. 그런 다음 두 개의 각진 집게를 사용하여 정중선에서 분비선을 부드럽고 뭉툭하게 나누고 기관 근육을 탐색합니다.기관주위 근육을 무뚝뚝하게 당겨 기관을 부드럽게 준비합니다. 삽관이 더 쉬워질 수 있도록 집게를 사용하여 혀를 당겨 목을 곧게 펴고 기관 내부에 삽관 캐뉼라를 부드럽게 삽입합니다. 기관 내부의 튜브를 직접 시각화하고 흉부가 제대로 움직이는지 확인하여 삽관을 확인합니다.기관에 부속되어 있는 양쪽 경동맥을 겸자로 하여 결합 조직을 부드럽게 잡아당겨 준비합니다. 20헤르츠 도플러 프로브 끝에 초음파 젤을 바르고 프로브 끝을 45도 미만의 각도로 오른쪽 및 왼쪽 경동맥에 놓습니다. 프로브를 천천히 회전하여 측면 및 내측으로 이동하여 도플러 신호를 찾은 다음 프로브를 기울여 신호를 최적화합니다.새 멸균 장갑과 가위를 사용하여 피부 절개 부위를 두 번째 늑간 공간까지 확장합니다. 그런 다음 집게 끝으로 두 번째 늑간 공간을 열고 견인기를 삽입합니다. 200% 배율에서 정중선 및 결합 조직을 식별합니다.그런 다음 각진 집게를 사용하여 흉선을 부드럽게 나눕니다. 대동맥궁이 명확하게 보일 때까지 지방 조직을 제거합니다. 각진 엄지 손가락 집게를 사용하여 횡 대동맥 아래, 상완 두동맥과 왼쪽 총경동맥 사이의 터널을 준비합니다.그런 다음 가는 집게를 사용하여 6-0 봉합사를 잡고 실을 대동맥궁 아래로 통과시킵니다. 두 번째 집게로 아치의 반대쪽에서 실을 가져옵니다. 스페이서를 횡 대동맥과 평행하게 조심스럽게 놓습니다.스페이서에 느슨한 이중 매듭을 준비하고 대동맥과 평행하게 스페이서의 최적 배치를 보장합니다. 그런 다음 첫 번째 매듭을 묶고 빠르게 두 번째 반대 매듭을 만든 다음 스페이서를 즉시 제거합니다. 전체 절차에서 가장 중요한 단계는 두 매듭을 빠르고 단단히 묶고 스페이서를 즉시 제거하는 것입니다.6-0 폴리프로필렌 봉합사로 두 번째 늑간 공간을 닫고 결찰할 때 쇄골하 혈관에 특히 주의하십시오. 그런 다음 6-0 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 피부를 연속 봉합사 패턴으로 꿰매십시오. 결찰을 확인하고 텍스트 프로토콜에 따라 수술 후 관리를 수행합니다.이러한 도플러 유속 측정은 좌심실과 대동맥의 압력 상승으로 인해 우측 경동맥의 혈액 속도를 증가시키는 동시에 좌측 경동맥에서 협착 후 혈류 속도를 유발하는 성공적인 TAC를 검증합니다. 이 그래프에서 볼 수 있듯이, 심장 체중과 체중 비율은 수술 6일 후에 밴드가 없는 마우스에 비해 TAC 마우스에서 유의하게 증가했습니다. 이 비율은 21일 후에도 거의 일정했습니다.심박수는 좌심실 수축성과 심박출량에 상당한 영향을 미칩니다. 이 그래프는 21일 후 대동맥 띠 마우스와 비 대동맥 띠 마우스의 심박수에 차이가 없음을 보여줍니다. 여기에서 입증된 바와 같이, 대동맥의 지속적인 밴딩은 21일 후 좌심실 카테터를 통해 측정된 수축기 혈압 증가에 의해 입증되었습니다.C57 블랙 식스 마우스는 일반적으로 TAC 후 수축기 기능 장애를 동반한 편심 비대가 발생하는 것으로 알려져 있습니다. 좌심실 직경의 증가가 발견되었으며, 이는 압력 부피 측정에서도 중요한 것으로 보입니다. 그 결과, 수축기 말기 및 이완기 용적이 크게 증가했습니다.이 기술을 마스터하면 제대로 수행한다면 10분 이내에 수행할 수 있습니다. 마지막으로, 이 절차는 최소한의 외과적 외상이 면역 체계의 비특이적 유도를 제한하기 때문에 좌심실 비대에서 면역 반응에 대한 최적화된 분석을 제공합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 표준화된 최소 침습적 횡방향 대동맥 수축을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

a-closed-chest-model-to-induce-transverse-aortic-constriction-in-mice

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스의 가로 대동맥 수축 (TAC)은 심장 비대 및 심장 마비 개발을 기본 메커니즘을 연구하기 위해 일반적으로 사용되는 실험적인 모델입니다. 여기, 우리는 절차가 생쥐에서 심장 비대의 재현성 학위를 만들 수있는 대동맥을 수축에 대해 설명합니다.

마우스의 가로 대동맥 수축

외과 외상은 염증 반응을 유도합니다. 크린 시토킨 및 내생 리간드는 국소 빈혈과 reperfusion에 따라 심근 경색 크기를 조절하는 것으로 알려져 있습니다. 우리는 thoracotomy의 영향을 최소화하기 위해 매달려 가중치를 사용하여 murine 국소 빈혈과 reperfusion의 수정된 폐쇄 가슴 모델을 제시.

심근 국소 빈혈 및 Reperfusion의 Murine 폐쇄 가슴 모델

이 비디오에서는 압력 과부하로 인한 심부전을 조사하기 위해 마우스에서 최소 침습적 횡단 대동맥 수축에 대한 실험 프로토콜을 시연합니다.

마우스 모델의 횡방향 대동맥궁 밴딩: 좌심실에서 고압 유도를 위한 마우스의 최소 침습 기술

우리는 작은 금속 클립을 사용하여 상행 대동맥의 수축에 의해 위 스타 쥐의 압력 과부하 및 좌심실 비대를 만들기위한 단계별 절차를 설명합니다. 이 모델은 광범위하게 심장 비대 동안 리모델링 변경을 공부하고 이러한 변화의 회귀를위한 전략을 파악하고 평가하기 위해 사용된다.

압력 과부하 심장 비대 모델의 창조를위한 쥐의 대동맥 수축 오름차순

이 프로토콜의 목적은 비 침습적 및 M B- 모드 초음파 심장 검진 및 컬러 / 맥파 도플러 촬상을 이용하여 횡 대동맥 수축에 의해 생성 된 심장 질환의 마우스 모델에서 심장 구조적 및 기능적 변화를 평가하는 것이다.

심 초음파 이미징에 의해 가로 대동맥 수축의 마우스 모델에서 심장 형태 학적 평가 및 기능 변경

기관 삽관과 인공 호흡기의 사용을 제거하면서 최소 침습 가로 대동맥 수축 (MTAC)는 일반 가로 대동맥 수축 (TAC)의 본질을 절약합니다. 그것은 특히 병진 연구에서 좌심실 과부하에 높은 처리량 연구를위한 매우 바람직한 방법으로 증명한다.

마우스의 최소 침습 가로 대동맥 수축

이 프로토콜의 목표는 단계별로 설명 하는 최소 침 습 가로 대동맥 수축 (TAC) 생쥐에서의 기술. 삽 관 법 그리고 일반적으로 사용 되는 표준 절차 필수는 환기의 제거, 최소 침 습 전술 수술 절차를 간소화 하 고 동물에 긴장을 감소 시킨다.

왼쪽된 심 실 비 대의 유도 대 한 생쥐에서 최소 침 습 가로 대동맥 수축의 기술

이 프로토콜은 흡수 가능한 봉합사를 사용하여 일시적인 심근 비대증을 얻는 향상된 방법을 제시하며 압력 과부하를 제거 한 후 좌심실 비대 감소를 시뮬레이션합니다. 심근 대위 축 대 사전 조절에 대 한 연구에 대 한 가치가 있을 수 있습니다.

과도 심근 비대증을 얻기 위해 흡수 가능한 봉합사와 횡단 대동맥 수축 을 작동

본 프로토콜은 자체 제작 견인기를 사용하여 최소 침습적 횡 대동맥 수축(TAC) 절차를 사용하여 수정되고 단순화된 기술을 설명합니다. 이 절차는 인공 호흡기 또는 현미경없이 수행 할 수 있으며 압력 과부하를 유발하여 결국 심장 비대 또는 심부전으로 이어집니다.

생쥐의 횡방향 대동맥 수축에 대한 수정된 기술

주요 인간 autoantigen을 표현 아데노 바이러스와 생쥐의 감염은 CYP2D6의 광범 간염, 섬유증 및 생성을 특징으로 면역 - 매개 간 질환의 영구적인 형태로 제 2 형자가 면역 간염 결과에서 고통받는 환자 세라 인정 P450 2D6 (hCYP2D6)를 시토크롬 특정 면역 반응.

CYP2D6 동물 모델 : 마우스에 면역 간염을 유발하는 방법

배우세요 마우스에서 폐쇄 가슴 모델을 이용한 가로 대동맥 수축(TAC) 기법으로 좌심실 비대를 유도하는 방법입니다. 최소 침습적 수술로 염증 반응을 최소화하고 심혈관 연구에서 면역 반응을 분석할 수 있습니다.

마우스에 가로 대동맥 수축 유도를 폐쇄 가슴 모델

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