Name: 마우스 모델 Rubeosis Iridis의 아이리스 Neovascularization 펑크 유발 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: 배우세요 마우스 홍채 신생혈관 유도 방법을 통해 안과 신생혈관 질환의 혈관생성 과정을 직접 관찰하는 기술입니다. 이 프로토콜은 알비노 마우스를 활용하여 비침습적 평가가 가능합니다.

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저자는 Linnea 탄 및 다이아나 Rydholm 축산에 대 한 감사합니다.

BALB/c 마우스 새끼 어느 섹스의 Ophthalmologic 및 비전 연구, 동물의 사용에 대 한 진술에 따라 사용 되었다 그리고 프로토콜 윤리적인 동물 연구에 대 한 스톡홀름의 위원회에 의해 승인 했다. 쥐 새끼, 12 h 주/야 주기, 음식 및 물, 간호 어머니 함께 되었고 매일 모니터링.
참고: 수술 절차에 대 한 마우스와 휘발성 isoflurane 마 취 유지 했다. 눈 연 고는 치료와 사용 되는 물질을 방해할 수도 눈 절차 동안 낙 심. 필요한 경우, 드라이 눈을 방지 하기 위해 살 균 정상적인 염 분 솔루션의 드롭 적용할 수 있습니다. 포도 구멍은 자가 치유, 치료 수술 도구와 무 균을 보장 하기 위해 포도 구멍 동안 찍은. 수술 후 치료는 피하, 정상적인 염 분 솔루션 수 분을 포함 그리고 tetracaine 염 산 염의 눈 국 소 관리와 진통. 새끼는 생리대에 sternal recumbency 간호 어머니의 깨끗 한 감 금 소에 게 반환 하기 전에 복구 허용 되었다. 새끼는 스트레스를 피하기 위해 같은 간호 어머니와 함께 유지 했다.
1입니다. 마 취
<ol><li>마 취 유도 챔버 하 isoflurane 마 취 관리도 결합 하는 작은 마우스 마스크를 준비 합니다. 참고: 모든 적용 가능한 윤리 허가와 모든 동물 실험을 수행 합니다.</li>
	<li>대기 공기에 3-4% 휘발성 isoflurane와 유도 챔버를 프리 필. 참고: 다른 마 취 물질 isoflurane 보다 다른 사용할 수 있습니다, 윤리 허가 따라. 휘발성 마 취 절차 통풍이 벤치 또는 연기 후드에서 수행 되어야 합니다.</li>
	<li>산 후 (P) 12.5-하루-옛 BALB/c 마우스 강아지 유도 챔버에 배치 합니다. 마 취 장치 isoflurane 유도 약 실에 제공할 준비가 되는지 확인 합니다. 참고: 마우스 강아지는 허약 하 고 최고의 아저씨에 의해 처리. 담가 또는 스트레스를 피하기 위해 간호 어머니와 새끼를 함께 유지.</li>
	<li>완벽 하 게 취 수를 강아지를 수 있습니다.</li>
	<li>부드럽게, 아저씨에 의해 마우스 강아지를 선택 합니다. 참고: 계속 유도 약 실 폐쇄에 항상 안전 하 고 안정적인 유도.</li>
	<li>설치류 마스크를 마우스를 전송 합니다. 마우스를 이동할 때 마스크 유도 실에서 마 취 흐름 전환 되었는지 확인 합니다.</li>
	<li>마 취를 확인 하는 발가락 핀치를 수행 합니다.</li>
</ol>2. 펑크 외과 Stereoscope 아래 절차
<ol><li>측면 recumbency 위치에 마우스를 놓습니다. 마스크는 물론 마우스 눈은는 stereoscope의 보기의 필드에 위치를 확인 합니다.</li>
	<li>그래서 눈은 stereoscope 쪽으로 향하도록 부드럽게 마우스 머리를 회전 합니다. 참고: 눈의 명확한 포커스는 stereoscope 아래 달성 되어야. 포지셔닝에 대 한 16 X의 확대는 권장, 40 X 수술 절차를 수행 하려면 사용 해야 합니다. 윤리적 허가 허용, 수염의 끝을 트리밍 눈의 시각화 용이 하 게 수 있습니다.</li>
	<li>등 쪽과 복 부 눈에 눈 꺼 풀에 하향 압력을 적용 하 여 강아지의 눈을 내 다 신중 하 게 작은 연결 집게를 사용 하 여.</li>
	<li>작은 집게로 강아지의 눈 뚜껑의 부드러운 하지만 회사 보류를 유지. 참고:이 좋습니다 눈 돌출을 수행 하 여 비 지배적인 손을 가진 잡고 뚜껑으로 지배적인 손에 빵 꾸 절차를 수행 해야 합니다.</li>
	<li>stereoscope를 사용 하 여 각 막 limbus를 찾습니다. 흰둥이 BALB/c limbus 원형 혈관 총 각 막에 후부에 의해 쉽게 식별할 수 있습니다.</li>
	<li>0.25 m m 직경 (30 G) 경사진된 바늘으로는 uvea의 후부 limbal 제한 근처 작은 포도 펑크를 수행 합니다. 만, 바늘의 팁을 사용 하 고 더 이상 절반 경사 (0.5 m m에 해당), 펑크는 uvea. 제대로 실행 하는 경우 포도 구멍 자체 씰링, 아직 연구 물질의 안 구내 주사 같은 찔린 상처를 통해 관리 될 수 있습니다. 참고: 마우스 안구 해부학과 경험, 포도 빵 꾸 ciliary 바디와 ora 참나무 사이의 실행 됩니다. 해야 합니다 주의 포도 빵 꾸를 수행 하는 동안 렌즈 파열을 피하기 위해.</li>
	<li>첫 번째 펑크 사이트에서 눈의 반대 사이트에 두 번째 포도 빵 꾸를 수행 합니다. 거리와 자국;의 위치를 최적화 가능한 지 되 고 12 시와 6 시 자국, 12 고려 합니다.</li>
	<li>포도 빵 꾸 절차 P24.5까지 4 일 마다 반복 합니다. 모든 연속 포도 펑크 전에 포도 빵 꾸, 또는 명백한 저하 눈 압력 동안 렌즈의 손상으로 인해 외상 성 백 내장의 존재에 특히 주의 지불 하는 동물 상태를 모니터링 합니다. 최적의 효과 대 한 이전 구멍으로 동일한 위치에서 반복 구멍을 실행에 대 한 목표.</li>
</ol>3. 비 침 투 적인 Vivo에서 모니터링
<ol><li>펑크 또는 각 실험 날 주사 전에 위에서 수행 마우스를 anesthetize.</li>
	<li>측면 recumbency 위치에 마우스와 함께 부드럽게 눈을 내 다.</li>
	<li>수술 stereoscope 아이리스 맥 관 구조에 초점.</li>
	<li>수술 stereoscope 장착 카메라와 함께 아이리스 맥 관 구조의 사진을 찍을. 참고: 필요 하지 않은 감수 분열을 유도 수 있지만 동물 당 홍 채 영역을 정상화 하는 데 도움이. 감수 분열 유도 에이전트를 선택할 때 윤리적인 허가 고려 하십시오. 아이리스 맥 관 구조의 주의 집중은 더 정량 분석을 촉진 한다. 40 X의 것이 좋습니다.</li>
</ol>4. 수술 치료
<ol><li>설치류 마스크에서 BALB/c 강아지를 제거 하 고 부드럽게 외과 매트와 겹쳐 난방 패드에 전송.</li>
	<li>구멍이 눈에 1 %tetracaine 솔루션의 한 방울을 적용 합니다. 참고: 다른 진통 솔루션 사용할 수 있습니다, 윤리 허가 따라.</li>
	<li>메 마른 정상적인 염 분 해결책의 200 µ L의 피하 주입으로 동물을 하이드 레이트.</li>
	<li>깨끗 한 마우스에 간호 어머니에 게 강아지를 반환 합니다.</li>
	<li>복구 프로세스를 모니터링 합니다. 강아지를 deambulate 담가 하 수 있어야 합니다.</li>
</ol>5. 눈 Enucleation
<ol><li>자 궁 경부 전위에 의해 동물을 안락사. 절차의 더 나은 시각화를 위한 enucleation 및 해 부 한 stereoscope 아래를 수행 합니다. 참고: 다른 안락사 절차는 사용할 수 있습니다. 윤리적 허가 엄격 하 게 준수 하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>당겨 떨어져 눈에 노출을 개선 하기 위해 눈 꺼 풀.</li>
	<li>곡선 본 눈이 위 눈 뚜껑의 법 근처 작은 컷 (약 0.5 c m)를 확인 합니다.</li>
	<li>노출된 periocular 공간을 사용 하 여 궤도에서 (아래) 세계 뒤에 마이크로 연결 집게를 삽입.</li>
	<li>조직을 둘러싼 눈을 살짝 위로 당겨. 주변 조직 가까이 눈 소켓을 사용 하 여, 안구에 보관 하지 마십시오.</li>
	<li>궤도 있는 곡선된 본 눈이 위 눈 지구에 뒤에 삽입 합니다.</li>
	<li>잘라 주위 조직을 통해 눈 소켓에서 뺍니다. 참고:이 해 부 기술은 눈 해부학을 유지 하 고 후속 분석을 혜택.</li>
	<li>눈에서 외부 조직의 제거를 진행 합니다. 선호 하는 경우, 수정 후 외부 조직의 제거를 수행할 수 있습니다. 참고: BALB/c 마우스는 멜 라 닌 결핍, 따라서 증가 대비, 어두운 배경에 권장 해 부 절차를 촉진 하기 위하여.</li>
	<li>짧게 페 트리 접시에 전체 눈 씻어 멸 균 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS)으로 가득합니다.</li>
	<li>2 mL 튜브 4% 버퍼링 말린 솔루션의 1.5 mL를 포함 하는 눈을 전송 합니다.</li>
	<li>실 온에서 6 h에 대 한 눈을 수정. 참고: 조직의 강성 수 여 하 고 홍 채의 절 개를 용이 하 게 해결. 시간을 수정 해야 테스트 되며 다른 응용 프로그램에 대 한 조정.</li>
</ol>6. 아이리스 Stereoscope 아래 해 부 절차
<ol><li>1.5 mL 플라스틱 파스퇴르 피 펫 (또는 유사한), 튜브에서 통 솔루션을 제거 하 고 세 번 신선한 PBS로 눈을 씻어.</li>
	<li>위쪽으로 향하게 하는 앞쪽 챔버와 고정된 눈 부드러운 마른 표면 (해 부 대)에 배치 합니다.</li>
	<li>경사진 30g 바늘 후부는 limbus 진입점을 수행 합니다.</li>
	<li>작은 연결 집게와 이전 세그먼트를 잡고, 이전에 만든 오프닝으로 Clayman 욕실이 직선 위의 한 끝을 삽입 합니다. 참고: 그것은 비 지배적인 손 가진 집게와 지배적인 시저를 제어 하 고 좋습니다.</li>
	<li>회전 하는 동안 연결 집게와 눈 주위에 눈의 뒤 세그먼트를 제거 하려면 limbus 잘라. 참고: 조직에 크게 계속가 위 내 면 끝 과정을 용이 하 게 허용할 것 이다 부분 컷을 수행.</li>
	<li>아래쪽으로 직면 하 고, 노출은 렌즈 앞쪽 세그먼트를 놓습니다.</li>
	<li>신중 하 게 작은 집게로 잡아와 위쪽으로 당기는 렌즈를 제거 합니다. 참고: beveled 바늘 찔린 고 렌즈를 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>각 막 면이 아래로와 보기의 필드에 수직인 컷 앞쪽 세그먼트를 놓습니다.</li>
	<li>부드럽게 작은 연결 집게와 조직 ciliary 시체에 후부를 잡아.</li>
	<li>Clayman 욕실이 바로 위, 배수 채널을 제거 하 여 홍 채 격리 모양 몸 앞쪽 단지 트림을 진행 합니다. 확인 하는 배수 채널 제거 됩니다; 홍 채는 각 막 내에서 이동 해야 합니다.</li>
	<li>신중 하 게 각 막, PBS의 200 µ L을 포함 하는 96 잘 접시를 들고 작은 연결 집게와 앞쪽 아이피를 전송 합니다.</li>
	<li>각 막에 잘 들고 계속 하 고 홍 채는 피 펫으로 PBS를 가진 홍 조에 의해 해 부. 참고: 현재, 그리고 30 G 바늘의 경사 각 막, 일부 배수 채널에 아이리스 남아 점착 있을 경우 전치 홍 채 도움을 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>작은 연결 집게와 96-우물에서 각 막 제거 하 고 추가 분석에 대 한 잘 격리 된 아이리스를 유지.</li>
	<li>4 ° c.에 부동성 아이리스 샘플 저장 참고: 고정 되 고에 불구 하 고 아이리스 부동성 샘플의 장기 보관 권장 하지 않습니다.</li>
</ol>7. 가능한 실험적인 지요
<ol><li>해 부의 홍 채에 혈관을 시각화 하려면 부동성 전체 마운트 immunohistochemistry 혈소판 내 피 성장 세포 접착 분자 (PECAM)-1 등 표식 방법 얼룩 또는 isolectin B4. 또는, 높은 분자량 형광 표시 된 dextrans 같은 혈관 얼룩과 전신 관류를 사용 합니다.</li>
	<li>비보에 비 침 투 적인 이미지를 사용 하 여 실리콘에 플랫-마운트를 수행 하 고 전체 아이리스 맥 관 구조 적절 한 이미징 소프트웨어 계량. 참고: 맥 관 구조를 측정할 수 있습니다, vivo에서 그리고 생체 외에서densitometry를 사용 하 여 또는 맥 관 구조 분석 소프트웨어9.</li>
	<li>핵 산 및 단백질 추출, PCR 또는 immunoblotting 방법, 구멍이 눈의 분자 분석을 수행 하 여 다음에 대 한 전체 안구를 처리 합니다. 참고: 조직의 분자 분석은 최고의 고정 되지 않은 조직으로 수행 하지만 고정 되지 않은 홍 채의 절 개는 매우 도전, 그리고 전체 눈의 사용 이전의 연구8에서 통계적으로 유의 한 결과 렌더링은.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

현재 프로토콜에서 포도 펑크에 의해 아이리스 혈관 반응의 유도 대 한 새로운 방법을 제공 됩니다. 찔린 상처 치유 메커니즘을 트리거합니다 하 고 아이리스10,11혈관 응답을 촉진 합니다. 이것은 PDR, NVG, 눈의 뒤 세그먼트에서 망막에서 악화 신생 응답 rubeosis iridis, 홍 채12의 증가 vascularization의 임상 상태에서 완결 등 눈 병 리와 ,13.
각 막 avascular 이며 투명도 결과로 독특한 콜라겐 구조를 소유한 다. 이 맞춰 시각화 아이리스 맥 관 구조에 대 한 눈의 앞쪽 세그먼트의 제품은 비 침범 성 방법13,14 v...

홍 채, 모양 체 및 맥락 막, 눈의 가장 vascularized 조직 uvea 구성 되어 있습니다. 홍 채 맥 관 구조는 눈의 앞쪽 챔버에 항상성 유지에 필수적 이다. 동맥과 정 맥 사이의 풍부한 anastomotic 연결, 결과로 아이리스 혈관 영양소 뿐만 아니라 자체, 아이리스 하지만1눈 앞쪽 전체 세그먼트에 산소의 공급을 제공합니다.
새로운 혈관, 또는 기존의 것 들에서 신생 혈관의 형성은 개발 및 상처 치유2등 생리 적 과정에 기본적 이다. 신생은 가늘게 정식 요인, 플라스 미노 겐 활성 제 억제 물 (파이), 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF) 등 여러 염증 성 요인의 군중에 의해 통제 되 고 이러한 요소의 불균형에 pathologic 이어질 수 있습니다. 신생3.
눈, neovascularization 증식 당뇨 성 망막 증 (PDR) 등 신생 녹 내장 (NVG) 시력을 위협 하는 질병의 원인입니다. 이러한 눈 질환에 초점 neovascularization는 일반적으로 망막 조직에 염증 성 불균형에 있으며 모두 후부와 앞쪽 눈 실에서 눈의 신생 요인 rubeosis iridis와 연결 되어 있는 홍 채 병 적인 neoangiogenesis4임상 용어. 이러한 병 리 신생을 성인 아이리스의 기능을 나타냅니다. 마우스에서 눈 맥 관 구조 성숙 출생 후 이며 성숙 산 후 계속. 개발의이 특성은 산소에 유도 된 망막, 밀접 하 게 조산5의 망막 질환의 임상 상태를 모방 하는 모델의 마우스 모델에 악용 됩니다. 또한, 신생 염증과 재생 메커니즘6, 치유 하는 상처에 중추적인 역할 그리고 상처 자체 치유 신생 모델7과 연결 되었습니다.
이 연구에서 우리는 펑크 유발 아이리스 neovascularization의 모델을 설명합니다. 포도 자국 limbus의 외부 한계 근처는 상처 치유 시스템을 실행 하 여 홍 채 neovascularization를 유도 수행 됩니다. 때문에 각 막의 투명도, 아이리스 맥 관 구조 될 수 있습니다 쉽게 비보 비 침 투 적인 방법으로 분석. 구멍이 눈 플라스 미노 겐 활성화 및 염증 성 마커8의 증가와 관련 있다 홍 채, 혈관 침대의 증가 제시. 제시 모델 신생 신생 화합물, 상영을 공부 하 고 새로운 도구로 큰 잠재력을가지고 고 직접 vivo에서 신생 프로세스의 시각화를 있습니다.

<table><tbody><tr><td>본 아이시저</td><td>Bausch & Lomb</td><td>23060</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas 곡선 가위</td><td>Bausch & Lomb</td><td>E3383 C</td><td></td></tr><tr><td>Clayman-Vannas 스트레이트 가위</td><td>Bausch & Lomb</td><td>E3383 S</td><td></td></tr><tr><td>카메라용 대물렌즈</td><td></td><td>N/A</td><td>또는 현미경에 카메라를 적용할 수 있는 모든 시스템</td></tr><tr><td>히팅 패드 100-110 와트</td><td>Non Applicable</td><td>N/A</td><td>애완동물/수의사 상점에서 사용 가능</td></tr><tr><td>Hypodermic 30g 베벨 바늘</td><td>KDM GmBH 독일</td><td>911914</td><td></td></tr><tr><td>Iphone 4S</td><td>Apple</td><td>Non Applicable</td><td>또는 다른 고해상도 이미지 수집 장치</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter</td><td>KDG 9623</td><td></td></tr><tr><td>McPherson 매는 집게</td><td>Bausch & 롬</td><td>E1815 S</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 타이 집게</td><td>바우쉬 & 롬</td><td>63140</td><td></td></tr><tr><td>Minims 테트라카인 염산염</td><td>Bausch & Lomb</td><td>N/A</td><td>1 % (w/v) 안약</td></tr><tr><td>중성 완충 포르말린</td><td>Bioreagens</td><td>0018-40</td><td></td></tr><tr><td>일반 식염수</td><td>Fresenius Kabi</td><td>210352</td><td>0.9 % (w/v) 주사 가능한 물 내 NaCl</td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010023</td><td>Balanced and buffered PBS pH 7.4</td></tr><tr><td>Petri dish 10 cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 3cm</td><td>Starstedt</td><td>83.3900</td><td></td></tr><tr><td>안전 밀봉 튜브 2.0mL</td><td>Starstedt</td><td>72.685.200</td><td>또는 모든 에펜도르프 스타일 튜브</td></tr><tr><td>TC 플레이트 96-well</td><td>Starstedt</td><td>83.3924</td><td></td></tr><tr><td>트랜스퍼 피펫 3.5mL</td><td>Starstedt</td><td>86.1171</td><td>또는 기타 파스퇴르 피펫 스타일</td></tr><tr><td>Univentor 400 마취 장치</td><td>Univentor Limited</td><td>N/A</td><td>또는 휘발성 마취용 유도 챔버 및 마스크가 있는 동등한 유량 조절기</td></tr><tr><td>Wild M650 수술용 현미경</td><td>Wild Heerbrugg</td><td>N/A</td><td>또는 기타 수술 또는 확대 입체경</td></tr></tbody></table>

마우스 모델 rubeosis iridis의 아이리스 neovascularization 펑크 유발

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

우리 신생의 비 침범 성 평가 위한 일반적인 모델으로 찔린 유도 아이리스 neovascularization의 모델을 설명합니다. 이 모델은 또한 신생 녹 내장, 당뇨병 성 망막 증의 시력을 위협 하는 합병증을 타겟팅에 대 한 관련. 이 메서드와 BALB/c 마우스에 자체 봉인 포도 구멍의 시리즈에 의해 아이리스 혈관 반응의 유도에 따라 마우스 눈 맥 관 구조의 산 후 성숙의 활용. 마우스 강아지 포도 자국에서 출생 후 하루 12.5, 새끼 자연스럽 게 열 때 그들의 눈, 산 후 날 24.5까지 받을. 때문에 각 막의 투명도, 아이리스 맥 관 구조 분석할 수 있습니다 쉽게 시간을 통해 비 침 투 적인 비보에 방법으로. 또한, BALB/c 마우스의 반투명 아이리스 최소한의 일반적인 배경 얼룩과 자세한 immunohistologic 분석에 대 한 flatmounted 수 있습니다. 이 모델에서 신생 주로 염증에 의해 구동 됩니다 하 고 플라스 미노 겐 활성화 시스템. 펑크 유발 모델 작은 설치류에 아이리스 neovascularization를 유도 하기 위해 처음 이며 직접 비 침범 성 비보에 신생 과정의 분석을 허용의 이점이 있다. 또한, 모델 신생 vivo에서 관점의 연구의 가능성을 강조는 신생 변조 물질과 결합할 수 있습니다.

P12.5에서 흰둥이 BALB/c 마우스 새끼 4 매일 반복 하는 포도 자국을 복종 되었다 (실험적인 하루 0, 4, 8, 12), P24.5까지. P27.5, 마우스 했다 안락사 고 홍 신중 하 게 해 부 (실험 하루 15). 사진 마우스 눈의 홍 채 혈관 반응의 비 침범 성 평가 평가 모든 펑크 시리즈 각 실험 하루에서 전에 수술 stereoscope에 연결 된 카메라와 함께 촬영 했다. 포도 자국 상처 치유 시스템 (그림 1)을 실행 하 여 홍 채에서 혈관 응답을 유도. 때문에 각 막과 멜 라 닌 결핍 BALB/c 마우스의 투명도, 증가 아이리스 맥 관 구조 실험 하루 4 (P16.5)에서 쉽게 볼 수 이며 프로토콜의 기간 내내 강렬 하 게. PECAM-1 Immunohistochemistry 이미지 컨트롤 (그림 2)에 비해 구멍이 눈의 홍 채에 전반적인 맥...

아이리스 neovascularization, 허 혈 성 망막 질환의 일반적인 합병증은 신생 녹 내장 시력을 위협 하 될 수 있습니다. 여기, 우리는 신생 변조 물질의 비 침범 성 평가 위해 사용할 수 있는 실험 아이리스 neovascularization를 유도 하는 murine 프로토콜을 설명 합니다.

마우스 모델 Rubeosis Iridis의 아이리스 Neovascularization 펑크 유발

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

이 절차의 전반적인 목표는 홍채 혈관 구조를 유도하여 혈관 형성 과정을 직접 생체 내에서 시각화할 수 있도록 하는 것입니다. 이 방법은 안과 분야, 특히 신생혈관 질환의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 알비노 마우스를 사용하여 혈관의 생체 내 시각화를 지시할 수 있다는 것입니다.이 방법을 통해 안구 신생혈관 질환에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 또한 새로운 혈관신생 요법에 대한 테스트와 같은 혈관신생의 일반적인 모델로 적용할 수 있습니다. 이 방법의 시각적 시연은 쥐 눈의 크기가 작기 때문에 홍채 박리가 어렵기 때문에 매우 중요합니다.그러나 연습을 통해 숙달할 수 있습니다. P12.5 마우스를 마취하고 시술을 준비한 후 입체경 아래의 측면 누운 위치에 놓고 마스크가 잘 배치되었는지 확인합니다. 눈은 시야를 채워야 합니다.눈의 명확한 초점이 필수적입니다. 다음으로, 주로 사용하지 않는 손에 작은 묶는 집게를 사용하여 눈꺼풀, 등쪽 및 배쪽에 눈의 아래쪽 압력을 가하여 조심스럽게 눈을 돌출시킵니다. 눈꺼풀을 단단히 잡으면 도움이 됩니다.진행하기 전에 40X에서 혈관 구조를 사진으로 문서화합니다. 다음으로, 입체경을 사용하여 각막 변연부를 찾습니다. 알비노 BALB/c 마우스의 변연계는 각막 후방의 원형 혈관신경총으로 쉽게 확인할 수 있습니다.이제 주로 사용하는 손에서 30게이지 경사진 바늘을 잡고 이를 사용하여 모양체와 구좌 세라타 사이의 포도막의 후방 윤부 한계 근처에서 작은 포도막 천자를 수행합니다. 바늘 끝과 베벨의 절반 이하를 사용하여 구멍을 뚫습니다. 렌즈가 파열되지 않도록 하십시오.천자는 자체 밀봉되어야 하지만 여전히 상처를 통해 연구 물질의 안구 내 주입이 가능해야 합니다. 다음으로, 눈의 반대쪽 부위에 두 번째 포도막 천자를 수행합니다. 펑크가 가장 등쪽과 가장 배쪽 위치에 있도록 최적화합니다.P24.5까지 4일마다 같은 두 위치에서 포도막 천자를 반복합니다. 그리고 천자를 반복하기 전에 항상 외상성 백내장이 있는지 확인하십시오. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 눈을 적출하고 고정한 후 고정 용액을 제거하고 새 PBS로 눈을 세 번 헹굽니다.그런 다음 앞쪽이 위쪽을 향하도록 매끄럽고 건조한 표면에 눈을 놓습니다. 다음으로, 경사진 30게이지 바늘을 변연 뒤쪽에 삽입하여 진입점을 만듭니다. 그런 다음 작은 묶는 집게로 앞쪽 부분을 고정하고 Clayman-Vannas 스트레이트 가위를 사용하여 눈을 회전시키면서 가장자리 주위를 자릅니다.부분 절단을 사용하면 프로세스를 더 쉽게 만들 수 있습니다. 완료되면 눈의 뒤쪽 부분이 풀려야 합니다. 다음으로, 앞쪽 부분을 아래쪽으로 배치하여 수정체를 노출시킵니다.작은 집게로 렌즈를 잡고 위로 당겨 조심스럽게 제거합니다. 이제 각막이 아래를 향하고 절단부가 시야에 수직이 되도록 앞쪽 세그먼트를 배치합니다. 그런 다음 주로 사용하지 않는 손에 작은 묶는 집게를 사용하여 모양체의 뒤쪽 조직을 부드럽게 잡습니다.Clayman-Vannas는 섬유주 그물망을 제거하고 홍채를 분리하는 것을 목표로 섬모체 바로 앞쪽을 다듬는 직선 가위입니다. 그런 다음 홍채는 각막 내에서 움직여야 합니다. 다음으로, 작은 묶는 집게를 사용하여 각막을 잡고 전방 안구 컵을 200마이크로리터의 PBS가 들어 있는 96웰 플레이트로 조심스럽게 옮깁니다.각막을 잡고 PBS로 조직을 씻어내어 홍채를 계속 절개합니다. 필요한 경우 30게이지 바늘을 사용하여 홍채를 대체하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이제 작은 묶는 집게를 사용하여 각막을 제거합니다.그런 다음 분리된 홍채는 실험할 때까지 섭씨 4도의 PBS에 임시로 저장할 수 있습니다. P12.5의 알비노 BALB/c 마우스는 설명된 대로 P24.5까지 4일마다 반복되는 포도막 천자를 받았습니다. 각막의 투명성과 BALB/c 마우스의 멜라닌 결핍으로 인해 홍채 혈관 구조는 P16.5 새끼에서 쉽게 볼 수 있으며 프로토콜 기간 동안 강화됩니다.P27.5에서는 생쥐를 안락사시키고 홍채를 조심스럽게 해부했다. 천공은 상처 치유 시스템을 촉발하여 홍채의 혈관 반응을 유도했습니다. PECAM1에 대해 면역조직화학을 수행했습니다.그 결과 얼룩은 대조군에 비해 구멍이 뚫린 눈의 홍채에서 전반적인 혈관 구조가 증가한 것으로 나타났습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 홍채 혈관 형성을 유도하고 마우스 홍채를 성공적으로 분리하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 절차에 따라 QBCR과 같은 다른 방법을 수행하여 혈관신생촉진 또는 항혈관신생 물질의 효능 검사와 같은 추가적인 분자 및 세포 질문에 답할 수 있습니다.개발 후 이 기술은 연구자들이 작은 설치류를 모델로 사용하여 생체 내 비침습적 방법으로 신생혈관 질환을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

puncture-induced-iris-neovascularization-as-mouse-model-rubeosis

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오에서 마취된 쥐는 홍채각막각을 차단하기 위해 자기장 아래 전방에 자기 구슬을 주입하는 안구 시술을 받습니다. 이 막힘은 섬유주 그물망을 방해하여 수액 배출을 막고 안압을 증가시켜 망막 신경절 세포와 시신경을 손상시킵니다. 이것은 녹내장과 같은 상태로 발전합니다.

Experimental Glaucoma Induction via Iridocorneal Angle Obstruction In a Mouse Model

출처: Lani-Louzada, R., et al., 설치류의 외과적 유도 녹내장에 대한 변지 혈관신경총의 전원형 소작. J. Vis. Exp. (2022)이 비디오는 쥐 모델에서 상승된 안압(IOP)의 유도 및 모니터링을 보여줍니다. 이 과정에는 변부 혈관을 소작하는 것이 포함되며, 그 결과 혈관 폐색과 안압 상승이 발생합니다. 그런 다음 쥐가 회복되도록 하고 IOP는 비교를 위해 실험 눈과 대조 눈 모두에서 정기적으로 모니터링됩니다.

 쥐 모델에서 상승된 안압 유도

여기에서는 신생혈관 연령 관련 황반변성(AMD)의 혈관 특징을 재현하는 실험 모델인 마우스 레이저 유도 맥락막 신생혈관화(CNV) 프로토콜을 제시합니다. 일단 마스터하면 다양한 실험 측정을 테스트하기 위한 모델 시스템으로 CNV를 안정적이고 효과적으로 유도할 수 있습니다.

레이저에 의한 맥락막 신생 혈관에 대한 마우스 모델

이 문서에서는 마우스에서 안압 상승으로 망막 허혈 - 재관류 손상을 유도하는 절차를 설명합니다. 안압 상승으로 망막 허혈 - 재관류 손상은 망막 신경 혈관 기기의 인간 질병에 대한 잠재적 인 세포 메커니즘과 치료를 조사하는 연구를 가능하게 망막에 손상 산소와 영양 공급에 의해 특징 인간의 병리를 모델링하는 역할을한다.

안압 상승을 통해 망막 허혈 - 재관류 손상의 마우스 모델

여기, 선물이 쥐에서 안 neovascularization 레이저 유도의 형태학 변화의 후속에서 경도 vivo에서 화상의 유용성.

Vivo에서 복합 이미징 및 마우스 레이저 유도 안 Neovascularization 모델의 분석

만성 안구 고혈압 쥐와 쥐, 일치 녹 내장 망막 신경 절 세포의 기능 및 구조 저하로 이어지는 circumlimbal 봉합을 적용 하 여 유도 된다.

쥐와 쥐에 Circumlimbal 봉합에 의해 유도 된 녹 내장의 모델

산소 유발 망막병증(OIR)은 미숙아 및 증식 성 당뇨병 망막증의 망막병증과 같은 허혈성 망막 질환을 모델링하고 신생아 질환에 대한 항 혈관 신생 약물을 평가하는 개념 증명 연구의 모델로 사용될 수 있다. OIR는 정량화 될 수있는 망막에서 견고하고 재현 가능한 신생 혈관화를 유도합니다.

설치류에 있는 허혈성 망막 질병을 위한 산소 유도한 망막병증 모형

이 보고서에서 우리는 조사자가 안내 포도막염의 마우스 모델을 생성 할 수있는 프로토콜을 제시합니다. 더 일반적으로 실험적 자가면역 포도막염(EAU)이라고 하는 이 확립된 모델은 인간 질병의 여러 측면을 포착합니다. 여기에서는 여러 판독값을 사용하여 질병 진행을 유도하고 모니터링하는 방법을 설명합니다.

실험적 자가면역 포도막염: 안구내 염증성 마우스 모델

여기에서는 장미 벵골을 사용한 망막 정맥 폐색에 최적화된 프로토콜과 유전자 변형 균주에서 재현성을 극대화하기 위한 권장 사항과 함께 레이저 유도 망막 영상 현미경 시스템에 대해 설명합니다.

가변성을 제한하기 위한 망막 정맥 폐색 마우스 모델의 최적화

이 프로토콜의 목표는 아급성 안구 고혈압을 유발하는 변연 혈관 신경총의 360° 열 소작을 기반으로 하는 녹내장 신경 퇴행의 새로운 모델을 특성화하는 것입니다.

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

이 프로토콜은 전방삽관 삽입 및 안압 상승을 통해 망막 허혈을 유도한 다음 안압 정상화를 통해 재관류를 시작하여 마우스 눈의 망막 허혈-재관류 손상을 모델링합니다.

Induction of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury in a Mouse Eye Model

배우세요 마우스 홍채 신생혈관 유도 방법을 통해 안과 신생혈관 질환의 혈관생성 과정을 직접 관찰하는 기술입니다. 이 프로토콜은 알비노 마우스를 활용하여 비침습적 평가가 가능합니다.

마우스 모델 Rubeosis Iridis의 아이리스 Neovascularization 펑크 유발

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