마우스 모델 Rubeosis Iridis의 아이리스 Neovascularization 펑크 유발

이 절차의 전반적인 목표는 홍채 혈관 구조를 유도하여 혈관 형성 과정을 직접 생체 내에서 시각화할 수 있도록 하는 것입니다. 이 방법은 안과 분야, 특히 신생혈관 질환의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 알비노 마우스를 사용하여 혈관의 생체 내 시각화를 지시할 수 있다는 것입니다.

이 방법을 통해 안구 신생혈관 질환에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 또한 새로운 혈관신생 요법에 대한 테스트와 같은 혈관신생의 일반적인 모델로 적용할 수 있습니다. 이 방법의 시각적 시연은 쥐 눈의 크기가 작기 때문에 홍채 박리가 어렵기 때문에 매우 중요합니다.

그러나 연습을 통해 숙달할 수 있습니다. P12.5 마우스를 마취하고 시술을 준비한 후 입체경 아래의 측면 누운 위치에 놓고 마스크가 잘 배치되었는지 확인합니다. 눈은 시야를 채워야 합니다.

눈의 명확한 초점이 필수적입니다. 다음으로, 주로 사용하지 않는 손에 작은 묶는 집게를 사용하여 눈꺼풀, 등쪽 및 배쪽에 눈의 아래쪽 압력을 가하여 조심스럽게 눈을 돌출시킵니다. 눈꺼풀을 단단히 잡으면 도움이 됩니다.

진행하기 전에 40X에서 혈관 구조를 사진으로 문서화합니다. 다음으로, 입체경을 사용하여 각막 변연부를 찾습니다. 알비노 BALB/c 마우스의 변연계는 각막 후방의 원형 혈관신경총으로 쉽게 확인할 수 있습니다.

이제 주로 사용하는 손에서 30게이지 경사진 바늘을 잡고 이를 사용하여 모양체와 구좌 세라타 사이의 포도막의 후방 윤부 한계 근처에서 작은 포도막 천자를 수행합니다. 바늘 끝과 베벨의 절반 이하를 사용하여 구멍을 뚫습니다. 렌즈가 파열되지 않도록 하십시오.

천자는 자체 밀봉되어야 하지만 여전히 상처를 통해 연구 물질의 안구 내 주입이 가능해야 합니다. 다음으로, 눈의 반대쪽 부위에 두 번째 포도막 천자를 수행합니다. 펑크가 가장 등쪽과 가장 배쪽 위치에 있도록 최적화합니다.

P24.5까지 4일마다 같은 두 위치에서 포도막 천자를 반복합니다. 그리고 천자를 반복하기 전에 항상 외상성 백내장이 있는지 확인하십시오. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 눈을 적출하고 고정한 후 고정 용액을 제거하고 새 PBS로 눈을 세 번 헹굽니다.

그런 다음 앞쪽이 위쪽을 향하도록 매끄럽고 건조한 표면에 눈을 놓습니다. 다음으로, 경사진 30게이지 바늘을 변연 뒤쪽에 삽입하여 진입점을 만듭니다. 그런 다음 작은 묶는 집게로 앞쪽 부분을 고정하고 Clayman-Vannas 스트레이트 가위를 사용하여 눈을 회전시키면서 가장자리 주위를 자릅니다.

부분 절단을 사용하면 프로세스를 더 쉽게 만들 수 있습니다. 완료되면 눈의 뒤쪽 부분이 풀려야 합니다. 다음으로, 앞쪽 부분을 아래쪽으로 배치하여 수정체를 노출시킵니다.

작은 집게로 렌즈를 잡고 위로 당겨 조심스럽게 제거합니다. 이제 각막이 아래를 향하고 절단부가 시야에 수직이 되도록 앞쪽 세그먼트를 배치합니다. 그런 다음 주로 사용하지 않는 손에 작은 묶는 집게를 사용하여 모양체의 뒤쪽 조직을 부드럽게 잡습니다.

Clayman-Vannas는 섬유주 그물망을 제거하고 홍채를 분리하는 것을 목표로 섬모체 바로 앞쪽을 다듬는 직선 가위입니다. 그런 다음 홍채는 각막 내에서 움직여야 합니다. 다음으로, 작은 묶는 집게를 사용하여 각막을 잡고 전방 안구 컵을 200마이크로리터의 PBS가 들어 있는 96웰 플레이트로 조심스럽게 옮깁니다.

각막을 잡고 PBS로 조직을 씻어내어 홍채를 계속 절개합니다. 필요한 경우 30게이지 바늘을 사용하여 홍채를 대체하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이제 작은 묶는 집게를 사용하여 각막을 제거합니다.

그런 다음 분리된 홍채는 실험할 때까지 섭씨 4도의 PBS에 임시로 저장할 수 있습니다. P12.5의 알비노 BALB/c 마우스는 설명된 대로 P24.5까지 4일마다 반복되는 포도막 천자를 받았습니다. 각막의 투명성과 BALB/c 마우스의 멜라닌 결핍으로 인해 홍채 혈관 구조는 P16.5 새끼에서 쉽게 볼 수 있으며 프로토콜 기간 동안 강화됩니다.

P27.5에서는 생쥐를 안락사시키고 홍채를 조심스럽게 해부했다. 천공은 상처 치유 시스템을 촉발하여 홍채의 혈관 반응을 유도했습니다. PECAM1에 대해 면역조직화학을 수행했습니다.

그 결과 얼룩은 대조군에 비해 구멍이 뚫린 눈의 홍채에서 전반적인 혈관 구조가 증가한 것으로 나타났습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 홍채 혈관 형성을 유도하고 마우스 홍채를 성공적으로 분리하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 절차에 따라 QBCR과 같은 다른 방법을 수행하여 혈관신생촉진 또는 항혈관신생 물질의 효능 검사와 같은 추가적인 분자 및 세포 질문에 답할 수 있습니다.

개발 후 이 기술은 연구자들이 작은 설치류를 모델로 사용하여 생체 내 비침습적 방법으로 신생혈관 질환을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.