수 면 기간 설치류의 비 침범 성, 높은 처리량 결정

이 실험의 전반적인 목표는 높은 처리량과 비침습적 방식으로 총 수면 시간을 기록하는 것입니다. 이 방법은 총 수면 시간과 같은 수면 필드의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 처리량이 많고 비침습적이며 쉽게 실행할 수 있다는 것입니다.

이 절차를 시연하는 것은 실험실의 학사 후 연구원인 Abigail Lemons입니다. 절차를 시작하려면 감지기를 이미터 반대편에 정렬합니다. 적외선 빔이 안쪽을 향하고 같은 높이에 정렬되어 있는지 확인하십시오.

그런 다음 제공된 나사를 사용하여 감지기와 이미터를 금속 스탠드의 원하는 높이에 배치합니다. 이 높이는 케이지의 침구가 적외선 빔 수준보다 낮도록 조정해야 하지만 빔은 동물의 활동을 감지하기에 적절한 높이에 있습니다. 이렇게 하면 27cm x 32cm의 내부 영역이 만들어집니다.

그런 다음 각 이미터와 함께 각 감지기에 연결합니다. 수신기에 연결된 제공된 허브에 이미터를 연결합니다. X 평면과 Y 평면 모두에 대해 이 작업을 수행합니다.

모든 설정에 대해 이 작업을 반복합니다. 그런 다음 제공된 USB 허브가 있는 컴퓨터에 수신기를 연결합니다. 소프트웨어를 설정하려면 파일을 클릭한 다음 실험 구성을 열어 기본 실험 구성을 엽니다.

그런 다음 실험, 속성을 클릭합니다. 그런 다음 스캔 탭을 클릭합니다. 스캔 속도를 10초로 변경합니다.

그런 다음 활동 탭을 클릭합니다. 활동 샘플링 속도를 10초로 변경합니다. 그런 다음 파일, 다른 이름으로 실험 구성 저장을 클릭하여 향후 실험을 위해 이러한 구성 설정을 저장합니다.

이 단계에서는 길이 31cm, 너비 16.5cm의 깨끗한 우리에 쥐를 단독으로 수용합니다. 생쥐가 침구를 쌓아 올리고 빔을 방해하는 것을 방지하려면 3mm 깊이의 침구를 사용하고 추가 중첩 재료를 제공하지 마십시오. 빔을 방해하지 않도록 케이지 상단에 있는 와이어 피더를 통해 마우스가 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있도록 합니다.

필요한 경우 연구 기간 동안 3-5일마다 케이지를 교체할 때 음식을 다시 채우고 물병을 교체하십시오. 그런 다음 마우스 케이지를 적외선 빔 설정 내부에 정렬하여 전체 커버리지를 위해 콩의 대략 중앙에 놓이도록 합니다. 이제 기본 구성 파일을 엽니다.

파일, 실험 구성 열기를 클릭하여 원하는 실험 구성 또는 기본 실험 구성을 엽니다. 그런 다음 실험을 클릭한 다음 설정을 클릭합니다. 데이터 파일을 저장할 위치와 백업 파일을 저장할 위치를 지정합니다.

그런 다음 각 수면실에 동물 ID를 지정하고 원하는 경우 동물의 체중을 입력합니다. 실험에서 챔버가 사용되지 않는 경우 상자를 선택 취소하면 해당 챔버가 비활성화됩니다. 식별 정보를 입력했으면 완료를 클릭합니다.

파일, 다른 이름으로 실험 저장을 클릭하여 현재 실험 구성을 원하는 파일 이름으로 저장합니다. 그런 다음 실험, 실행을 클릭하여 녹음을 시작합니다. 10초 동안 Epoch를 기다렸다가 모든 챔버가 활동을 감지하는지 확인합니다.

동물에게 방금 주입했기 때문에 동물이 적외선 빔에 감지될 수 있을 만큼 충분히 움직일 가능성이 높습니다. 다음 날, 주입 시 실험을 클릭한 다음 중지를 클릭하여 기록을 종료합니다. 그런 다음 파일, 내보내기, 주제 CSV 생성을 클릭하여 각 마우스의 원시 데이터를 수집합니다.

그런 다음 파일, 내보내기 및 절전 분석을 클릭하여 원시를 열어 각 실험에 대한 절전 파일을 내보냅니다. CDTA 데이터 파일. detection parameters activity source(감지 매개 변수 활동 소스)에서 X-axis(X축) 및 Y-axis(Y축) 상자가 모두 선택되어 있는지 확인합니다.

다음으로, sleep threshold epochs(절전 임계값 epochs)에서 4개의 Epoch가 선택되었는지 확인합니다. sleep threshold activity threshold(절전 임계값 활동 임계값)에서 0 카운트가 선택되었는지 확인하고 light-dark cycle(명암-어두움 주기)에서 light-dark cycle(명암 주기)에 대한 적절한 시간을 확인합니다. 분석 창에서 원하는 분석 시간을 선택합니다.

주입 연구의 경우 날짜를 기본값으로 둡니다. 24시간 동안 시작 시간을 ExpSTART로 설정하고 기간을 24:00로 설정합니다. 데이터 내보내기 시간을 절약하기 위해 구성을 저장한 다음 업데이트를 클릭합니다.

CSV 파일 생성을 클릭하고 파일을 원하는 위치에 저장합니다. 각 기록 세션의 데이터를 분석하려면 수면 파일을 엽니다. 피험자 ID를 할당하려면 각 챔버의 개별 CSV 파일을 열어 피험자 ID를 확인합니다.모든 동물의 밝은 단계와 어두운 단계 모두에 대해 TOT 수면, 시간, 분, 초를 기록합니다.

개별 주제 CSV 파일에 기록 실패를 나타내는 불일치가 있는지 확인합니다. 한 평면에서 하이 빔 수가 감지되지만 다른 평면에서 카운트가 관찰되지 않으면 이는 빔 실패를 나타냅니다. 이 그림은 오전 9시에 식염수 또는 30% 사이클로덱스트린을 매일 IP 주사한 생쥐를 보여줍니다.

밝은 단계에서. 화살표 주위의 상자는 케이지 변경을 나타냅니다. 사후 T-테스트는 첫날의 수면 시간이 다른 날과 빛 단계에서 차이가 있음을 시사하며, 이는 수면 설정과 IP 주입 모두에 대한 습관화를 나타냅니다.

6일, 9일, 13일째에 케이지를 바꾸어 다른 날에 비해 수면을 줄였습니다. 사이클로덱스트린 주사 후 수면 시간은 케이지를 바꾸지 않은 날마다 비교적 안정적이었으며, 이는 마우스가 IP 사이클로덱스트린 주사에 익숙해졌음을 나타냅니다. 마스터하면 한 시간 이내에 설정을 수행할 수 있으며 분석도 매우 빠르게 수행할 수 있습니다.

이 절차에 따라 수면 단편화 또는 수면 단계와 같은 추가 질문에 답하기 위해 EEG와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.