무척 추 동물 모델 시스템으로 독성 테스트 실험실에서 초파리 를 사용 하 여 실험 프로토콜

이 프로토콜은 다양한 발달 단계에서 독성 물질이 피트니스에 미치는 영향을 이해하고 세대에 걸쳐 오염 물질에 대한 노출의 영향을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 제 연구실에서 콜로라도 주립 대학교 푸에블로(Colorado State University Pueblo)의 적극적인 줄기 참여를 구축하는 커뮤니티의 일부인 두 명의 학부생인 휴 롱(Hugh Long)과 타일러 하비(Tyler Harvey)가 절차를 시연할 것입니다. 관심 있는 환경 오염 물질로 작업을 시작하려면 먼저 화합물 초혈증의 치사량 50%를 결정하십시오.

확립된 방법을 사용하여 용량 반응 곡선을 만듭니다. 다음으로, 원하는 농도의 화합물로 성장 배지를 준비합니다. 예를 들어, 인스턴트 매체를 만들 때 물 분취액에 화합물을 첨가하십시오.

병행하여, 첨가된 화합물 없이 대조 매체를 만드십시오. 실험 동물을 채집할 배양을 설정하려면 표준 방법을 사용하여 생식 성체를 성장 배지로 옮깁니다. 바이알당 파리의 수를 표준화하고 성충이 과도하게 밀집되지 않도록 합니다.

그런 다음 표준 조건에서 1-4일 동안 파리를 배양합니다. 부화 후에는 성체를 버리고 수정을 한 난자를 남겨두고 테스트를 위해 성숙시킵니다. 그런 다음 바이알을 인큐베이터에 다시 넣습니다.

노출은 모든 발달 단계에서 설정할 수 있습니다. 또한 실험 목표에 따라 모든 발달 단계에서 실험 대상을 수집할 수 있습니다. 매일 발달 중인 동물을 확인하여 방황하는 세 번째 instar 유충과 같은 관심 단계의 첫 번째 징후를 식별합니다.

방황하는 세 번째 instar 유충 단계에 대한 노출의 영향을 테스트하려면 불을 켠 후 한 시간 이내에 유충이 먹이 기질에서 나오기 시작할 때 유충을 수집하십시오. 다음으로 물을 붓고 유충을 실험실 티슈로 옮겨 여분의 물을 부드럽게 제거합니다. 건조되면 유충을 적절한 튜브로 옮겨 수집합니다.

성인에 대한 노출의 영향을 테스트하려면 새로 폐쇄된 성인을 수집합니다. 이산화탄소 마취는 괜찮습니다. 파리가 생식적으로 성숙하고 짝짓기를 시작하기 전에 파리를 모으는 것을 잊지 마십시오. 파리를 성별에 따른 그룹으로 나누고 기존 노출과 일치하도록 대조군 또는 실험적으로 오염된 배지가 적재된 바이알로 옮깁니다.

나중에, 성충 파리의 오염 물질을 측정하기 24시간 전에 대조 배지와 오염된 배지에 있는 성인을 대조 배지가 장전된 바이알로 옮겨 성인이 몸에서 과도한 배지를 손질할 수 있도록 합니다. 24시간 동안 털을 손질한 후 적절한 방법을 사용하여 파리를 테스트할 수 있습니다. 예를 들어, 짝짓기 선택 분석을 사용하여 행동 변화를 테스트할 수 있습니다.

이러한 방법을 사용하면 오염 물질 노출의 세대 간 영향에 대한 연구가 매우 쉽습니다. 통제 매체에 노출된 성체 사이에 교배를 설정하고 Fnot 노출이 자손에 미치는 영향을 연구하기만 하면 됩니다. 이 프로토콜은 동일한 세대의 자손 내에서 납의 축적, 제거 및 격리를 평가하는 데 사용되었습니다.

초파리는 다양한 용량, 발달 단계 및 진화 규모에서 납을 쉽게 축적했습니다. 여러 세대에 걸친 노출을 사용하여 부모의 노출이 성인 자손의 1세대에게 전달되지 않는 것으로 밝혀졌습니다. 따라서 이 프로토콜을 사용하면 다양한 진화 규모에서 적응 반응과 세대 간 효과 Fnot 노출을 테스트할 수 있습니다.

다음으로, 파리를 대조군 또는 납 배지에서 알 단계에서 성체로 사육하고 정화 24시간 후 짝 선호도를 테스트했습니다. 암컷은 납이 함유된 매체에서 자랐으며, 대조군에 노출된 수컷보다 납에 노출된 수컷과 우선적으로 짝짓기를 했습니다. 반면에, 남성은 동일한 편견을 보이지 않았다.

이 동영상을 시청한 후에는 다양한 질문과 독성학에 답하기 위해 초파리를 사육하고 수집하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 일단 마스터하면 이 프로토콜이 제대로 수행되면 1-2개월 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 불필요한 스트레스를 유발하지 않도록 파리를 부드럽게 다루는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

이 절차에 따라 행동, 유전 및 신경학적 질문과 같은 다른 질문을 테스트할 수 있습니다. 오염 물질로 작업하는 것은 매우 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 개인 보호 장비를 착용하고 후드에 오염 물질을 준비하는 것과 같은 예방 조치를 항상 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.