Name: Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-03T14:15:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: 배우세요 생쥐 턱밑샘에 나노입자를 직접 주입하는 방법을. 32게이지 카테터를 이용한 역관주사 기법으로 전신 순환을 우회하여 정확한 약물 전달이 가능합니다. 이 방법은 방사선 치료 후 구강건조증 연구에 활용됩니다.

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이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구 (NIDCR)와 보너스 번호 R56 DE025098, UG3 DE027695, 및 CA206296 F30 국립 보건원의 국립 암 연구소 (NCI)에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다. 이 작품 또한 NSF DMR 1206219와 IADR 혁신 구강 케어 상 (2016)에 의해 지원 되었다.
우리는 제인 Gavrity IVIS 실험 수행에 그녀의 도움에 감사 하 고 싶습니다. 우리는 그들에 그녀의 지원과 입력 카 렌 벤틀리 감사 하 고 싶습니다. 우리는 페이 Lun Weng IHC와 그의 지원에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는 매튜 잉 그림 준비에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는이 논문의 중요 한 읽기 박사 Elaine Smolock, 에밀리 우 감사 하 고 싶습니다.

아래에 설명 된 모든 vivo에서 절차는 로체스터의 대학, 로체스터, 뉴욕에서 동물 자원에 대학 위원회에 의해 승인 되었다.
1입니다. 준비
<ol><li>와이어 삽입과 32 G intracranial 카 테 테 르 튜브를 사용 하 여, 3 cm 긴 축에 약 45 ° 경사진된 끝을 형성 하 고 튜브의 컷. 와이어 튜브 보다 1 cm 이상 되는지 확인 합니다.</li>
	<li>해밀턴 주사기를 50 µ L PSMA 나노 솔루션 (그림 1), 또는 다른 주입 재료를 로드 합니다. 주입 동안 barotrauma의 확률을 줄이기 위해, 주사기를 제거 stylet와 카 테 테 르 튜브를 연결 하 고 죽은 볼륨을 추방.</li>
	<li>나노는 완벽 하 게 관리 다음 ductal 방해를 방지 하기 위해 solvated 되도록 주입 솔루션을 검사 합니다.</li>
	<li>0.1 mg/mL에서 아트로핀 솔루션을 준비 합니다. 참고: 아트로핀은 빛에 민감한 시간이 지남에 저하 됩니다 때문에이 솔루션 주입의 하루와 있어야 관리까지 빛 으로부터 보호 합니다.</li>
</ol>2. 액세스 및 Ductal 진입점을 시각화
<ol><li>C57/BL6 마우스 사용 하 여 분석 균형 무게.</li>
	<li>29G x ½"바늘 0.5 mL 주사기를 사용 하 여, 100 mg/kg 케 타 민 고 10 mg/kg xylazine의 intraperitoneally 주입 된 살 균 염 분 솔루션 마우스 anesthetize. 마우스 이상에 응답 자극, 일반적으로 주사를 따라 5 ~ 10 분 이내 발생 하는 경우 다음 단계로 진행 합니다. 참고:이 절차 또한 isoflurane, 아래 수행 될 수 있습니다 하지만 구강에 대 한 액세스를 허용 하는 사용자 지정 코 콘이 필요 합니다.</li>
	<li>절차 동안 건조를 방지 하기 위해 눈에 윤활제를 적용 하 고 사용자 지정 단계에 발생 하기 쉬운 위치에 마우스를 놓습니다. 참고: 내 구두 절차에 대 한 적절 한 조건을 유지, 도구 해야 될 소독 하거나 각 사용 전에 소독 합니다.</li>
	<li>금속 빔에 상 악 앞 니를 확보 하 여 구강을 열고 신축성 밴드를 사용 하 여 악의 앞 니 (그림 2A) 뒤에 아래 긴장을 적용 합니다.</li>
	<li>턱의 시각화 되도록 해 현미경 아래 마우스를 맞춥니다.</li>
	<li>입 확대, 양측 뺨 점 막에 긴장을 적용할 사용자 지정 곡선된 강철 견인을 사용 합니다.</li>
	<li>Submandibular 용의자를 시각화 하려면 파악 하 고 부드럽게 혀 무뚝뚝한 집게를 사용 하 여 입의 바닥에서 들어올립니다. 참고:은 papillae 혀 (그림 2B) 아래 두 창백 돌출으로 표시 됩니다.</li>
	<li>구강 내에서 시각화 및 조작 추가 완화, 면 혀와 볼 점 막 사이 배치 합니다.</li>
</ol>3. ductal Cannulation 및 선 배치
<ol><li>잘 사용 하 여, 곡선된 겸 자, 와이어 삽입 된 카 테 테 르 튜브 파악. Cannulation 동안 최적의 수동 제어를 위한 겸 자 (그림 3A)의 곡률으로 튜브를 맞춥니다.</li>
	<li>보기의 필드에 집게와 와이어를 이동 해 현미경을 사용 하 여. 참고: 와이어 튜브에서 돌기 한다.</li>
	<li>부드럽게 작은, 표면, 점 막 펑크 (0.076 m m 직경) 카 테 테 르 튜브 (0.25 m m 직경)의 최신 항목을 촉진 합니다 생성 하는 삽입 된 와이어를 사용 하 여 하나의 submandibular 시의 기지에 압력을 적용. 저항을 발생 하는 경우 날카로운가 위를 해 튜브 및 와이어 삽입에 신선한 경사진된 끝을 잘라.</li>
	<li>항목에 따라는 stylet을 철회 하 고 펑크 사이트에서 타 액의 존재를 확인 해 현미경을 사용 하 여. 강력한 또는 갑자기 (철수 또는 삽입)의 움직임을 stylet 출혈이 발생할 수 있습니다 또는 ductal 무결성을 손상 하지 마십시오.</li>
	<li>(그림 3B) 배관 내 stylet을 철회.</li>
	<li>주입 튜브 여 튼의 덕트에 맞는 것을 보장 하기 위해, 이전 만든된 펑크 (그림 2 C)으로 딱딱한 가이드로는 stylet을 포함 하는 튜브를 삽입 합니다. 참고: 경우에 신속 하 게 수행 하지 로컬 붓기 다시 삽입을 방지할 수 있습니다.</li>
	<li>장기간된 ductal 방해에서 다시 압력을 방지 하기 위해 튜브를 철회 한다. 개방, 현미경, 아래 보이는 submandibular 시에서 볼 수 있습니다 확인 하려면 검사 합니다. 보이는 출혈이 발생 하는 경우는 stylet을 제거 하 고 반대 submandibular 용의자에 3.2 단계에서 다시 시도.</li>
	<li>마우스를 이동 하지 않고 절차 동안 타 액 분 비를 줄이기 위해 1 mg/kg 아트로핀 솔루션의 복 주입을 관리 합니다. 5-10 분을 기다립니다.</li>
	<li>주사기 튜브의 끝을 잡고 고 해 현미경 (그림 3C)를 사용 하 여 구멍에 삽입 합니다. 저항을 발생 하는 경우 튜브를 reattempt 신선한 경사진된 끝을 잘라.</li>
	<li>일단 튜브 submandibular 시 내에, 덕트에 3-5 m m 진행 천천히. 릴리스는 집게에서 튜브입니다.</li>
	<li>관과 submandibular 시 사이 물개를 개선 하기 위해 부드럽게 1 분 거 즈와 blotting에 의해 인터페이스를 건조.</li>
	<li>튜브의 위치는 건조 하는 동안 이동 하지 확인 하려면 검사 합니다.</li>
</ol>4입니다. 주입
<ol><li>자료는 마우스 sedated 있고 (그림 2D) 고통의 표시 표시 되지 않는 확인 하는 검사 약 10 µ L/분의 속도로 주입. 참고: 15-50 µ L의 주사는 잘 용납입니다. 더 큰 볼륨의 주입 barotrauma 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>주입, 따라와 튼의 덕트와 SMG (그림 4) 자료의 보존을 향상 시키기 위해 5 분 동안 주사기 압력을 유지 합니다. Submandibular 시 튜브 ductal 구멍을 종료 하지 않습니다 보장 하기 위해 정기적으로 검사 합니다.</li>
	<li>미세 집게를 사용 하 여 파악 하 고 부드럽게 submandibular 용의자에서 튜브를 철회. 참고: 그것은 용의자에서 일부 유체 출구를 관찰 정상입니다.</li>
	<li>스테이지에서 마우스를 이동 하기 전에 견인 및 코 튼 구강에서 제거 합니다. 참고: 동물 하지 맡겨야 한다 무인 sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지. 또한, 마우스 하지 완전히 복구 될 때까지 다른 마우스와 보관 되어 있는지 확인 합니다.</li>
</ol>5. 확인 및 분석
참고:는 vivo에서 이미징 시스템 (IVIS) 사용할 수 있습니다 (으로 표시 된 1 시간 그리고 그림 5에서 주사 후 24 h) 주입 다음 붙일 레이블된 나노 입자의 보존을 평가 하기 위해.
<ol><li>피부를 통해 서울시 내의 형광 신호를 더 나은 시각화 하려면 overlying SMGs 하거나 면도 하거나 화학 탈모를 사용 하 여 복 부 털을 제거 합니다. 참고: 안락사, 다음 서울시 조직 또한 수확 수 있습니다, 고정 (4 %paraformaldehyde)에서 1 박, 그리고 붙일 레이블된 NP의 지 속성 주사 (그림 6)에 따라 1 일 것인지 immunohistochemistry를 사용 하 여 스테인드.</li>
</ol>

<ol><li>Miranda-Rius, J., Brunet-Llobet, L., Lahor-Soler, E., Farre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salivary+Secretory+Disorders%2C+Inducing+Drugs%2C+and+Clinical+Management%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Salivary Secretory Disorders, Inducing Drugs, and Clinical Management.</a> International Journal Of Medical Sciences. 12 (10), 811-824 (2015).</li>
<li>Acauan, M. D., Figueiredo, M. A. Z., Cherubini, K., Gomes, A. P. N., Salum, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy-induced+salivary+dysfunction%3A+Structural+changes%2C+pathogenetic+mechanisms+and+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy-induced salivary dysfunction: Structural changes, pathogenetic mechanisms and therapies.</a> Archives of Oral Biology. 60 (12), 1802-1810 (2015).</li>
<li>Dirix, P., Nuyts, S., Vander Poorten, V., Delaere, P., Van den Bogaert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+xerostomia+after+radiotherapy+on+quality+of+life%5BTitle%5D)+AND+%22Supportive+Care+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">The influence of xerostomia after radiotherapy on quality of life.</a> Supportive Care in Cancer. 16 (2), 171-179 (2008).</li>
<li>Vissink, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+management+of+salivary+gland+hypofunction+and+xerostomia+in+head-and-neck+cancer+patients%3A+successes+and+barriers%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">Clinical management of salivary gland hypofunction and xerostomia in head-and-neck cancer patients: successes and barriers.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (4), 983-991 (2010).</li>
<li>Delporte, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+fluid+secretion+after+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+to+irradiated+rat+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Increased fluid secretion after adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA to irradiated rat salivary glands.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94 (7), 3268-3273 (1997).</li>
<li>Samuni, Y., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+in+salivary+glands%3A+from+the+bench+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Gene delivery in salivary glands: from the bench to the clinic.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1812 (11), 1515-1521 (2011).</li>
<li>Beahm, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+the+submandibular+gland%3A+A+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to the submandibular gland: A review of literature.</a> International Journal of Surgery. 7 (6), 503-509 (2009).</li>
<li>Zheng, C., Shinomiya, T., Goldsmith, C. M., Di Pasquale, G., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Convenient+and+reproducible+in+vivo+gene+transfer+to+mouse+parotid+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+diseases%22%5BJournal%5D)">Convenient and reproducible in vivo gene transfer to mouse parotid glands.</a> Oral diseases. 17 (1), 77-82 (2011).</li>
<li>Zheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+Radiation-Induced+Salivary+Hypofunction+Following+hKGF+Gene+Delivery+to+Murine+Submandibular+Glands%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Prevention of Radiation-Induced Salivary Hypofunction Following hKGF Gene Delivery to Murine Submandibular Glands.</a> Clinical Cancer Research. 17 (9), 2842-2851 (2011).</li>
<li>Okazaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acceleration+of+rat+salivary+gland+tissue+repair+by+basic+fibroblast+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Acceleration of rat salivary gland tissue repair by basic fibroblast growth factor.</a> Archives of Oral Biology. 45 (10), 911-919 (2000).</li>
<li>Arany, S., Benoit, D. S., Dewhurst, S., Ovitt, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle-mediated+gene+silencing+confers+radioprotection+to+salivary+glands+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle-mediated gene silencing confers radioprotection to salivary glands in vivo.</a> Molecular Therapy. 21 (6), 1182-1194 (2013).</li>
<li>Cotrim, A. P., Sowers, A., Mitchell, J. B., Baum, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+irradiation-induced+salivary+hypofunction+by+microvessel+protection+in+mouse+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Prevention of irradiation-induced salivary hypofunction by microvessel protection in mouse salivary glands.</a> Molecular Therapy. 15 (12), 2101-2106 (2007).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotechnic & Histochemistry. 84 (6), 253-260 (2009).</li>
<li>Grundmann, O., Fillinger, J. L., Victory, K. R., Burd, R., Limesand, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+radiation+therapy-induced+salivary+gland+dysfunction+in+mice+by+post+therapy+IGF-1+administration%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Restoration of radiation therapy-induced salivary gland dysfunction in mice by post therapy IGF-1 administration.</a> BMC Cancer. 10, 417-417 (2010).</li>
<li>Limesand, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-Like+Growth+Factor-1+Preserves+Salivary+Gland+Function+After+Fractionated+Radiation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Radiation+Oncology+Biology+Physics%22%5BJournal%5D)">Insulin-Like Growth Factor-1 Preserves Salivary Gland Function After Fractionated Radiation.</a> International Journal of Radiation Oncology Biology Physics. 78 (2), 579-586 (2010).</li>
<li>Marmary, Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26759233">Radiation-induced loss of salivary gland function is driven by cellular senescence and prevented by IL-6 modulation.</a> Cancer Research. , (2016).</li>
<li>Baum, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+responses+to+adenoviral-mediated+transfer+of+the+aquaporin-1+cDNA+for+radiation-induced+salivary+hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Early responses to adenoviral-mediated transfer of the aquaporin-1 cDNA for radiation-induced salivary hypofunction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (47), 19403-19407 (2012).</li>
<li>Arany, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pro-apoptotic+gene+knockdown+mediated+by+nanocomplexed+siRNA+reduces+radiation+damage+in+primary+salivary+gland+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Pro-apoptotic gene knockdown mediated by nanocomplexed siRNA reduces radiation damage in primary salivary gland cultures.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 113 (6), 1955-1965 (2012).</li>
<li>Benoit, D. S. W., Henry, S. M., Shubin, A. D., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH-responsive+polymeric+siRNA+carriers+sensitize+multidrug+resistant+ovarian+cancer+cells+to+doxorubicin+via+knockdown+of+polo-like+kinase+1%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+pharmaceutics%22%5BJournal%5D)">pH-responsive polymeric siRNA carriers sensitize multidrug resistant ovarian cancer cells to doxorubicin via knockdown of polo-like kinase 1.</a> Molecular pharmaceutics. 7 (2), 442-455 (2010).</li>
<li>Malcolm, D. W., Varghese, J. J., Sorrells, J. E., Ovitt, C. E., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effects+of+Biological+Fluids+on+Colloidal+Stability+and+siRNA+Delivery+of+a+pH-Responsive+Micellar+Nanoparticle+Delivery+System%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">The Effects of Biological Fluids on Colloidal Stability and siRNA Delivery of a pH-Responsive Micellar Nanoparticle Delivery System.</a> ACS Nano. , (2017).</li>
<li>Baranello, M. P., Bauer, L., Benoit, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poly%28styrene-alt-maleic+anhydride%29-based+diblock+copolymer+micelles+exhibit+versatile+hydrophobic+drug+loading%2C+drug-dependent+release%2C+and+internalization+by+multidrug+resistant+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Poly(styrene-alt-maleic anhydride)-based diblock copolymer micelles exhibit versatile hydrophobic drug loading, drug-dependent release, and internalization by multidrug resistant ovarian cancer cells.</a> Biomacromolecules. 15 (7), 2629-2641 (2014).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fracture-Targeted+Delivery+of+%CE%B2-Catenin+Agonists+via+Peptide-Functionalized+Nanoparticles+Augments+Fracture+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Fracture-Targeted Delivery of β-Catenin Agonists via Peptide-Functionalized Nanoparticles Augments Fracture Healing.</a> ACS Nano. 11 (9), 9445-9458 (2017).</li>
<li>Baranello, M. P., Bauer, L., Jordan, C. T., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s12195-015-0391-x">Micelle Delivery of Parthenolide to Acute Myeloid Leukemia Cells.</a> Cellular and Molecular Bioengineering. 8 (3), 455-470 (2015).</li>
<li>Kuriki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannulation+of+the+Mouse+Submandibular+Salivary+Gland+via+the+Wharton%27s+Duct%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), e3074(2011).</li>
<li>Nair, R. P., Zheng, C., Sunavala-Dossabhoy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroductal+Submandibular+Gland+Instillation+and+Localized+Fractionated+Irradiation+in+a+Rat+Model+of+Salivary+Hypofunction%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Retroductal Submandibular Gland Instillation and Localized Fractionated Irradiation in a Rat Model of Salivary Hypofunction.</a> Journal of Visualized Experiments. (110), (2016).</li>
<li>Wang, Y., Malcolm, D. W., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+and+sustained+delivery+of+siRNA%2FNPs+from+hydrogels+expedites+bone+fracture+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Controlled and sustained delivery of siRNA/NPs from hydrogels expedites bone fracture healing.</a> Biomaterials. 139 (Supplement C), 127-138 (2017).</li>
<li>Hoffman, M. D., Van Hove, A. H., Benoit, D. S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degradable+hydrogels+for+spatiotemporal+control+of+mesenchymal+stem+cells+localized+at+decellularized+bone+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Degradable hydrogels for spatiotemporal control of mesenchymal stem cells localized at decellularized bone allografts.</a> Acta Biomaterialia. 10 (8), 3431-3441 (2014).</li>
<li>Nguyen, C. Q., Yin, H., Lee, B. H., Chiorini, J. A., Peck, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL17%3A+potential+therapeutic+target+in+Sjogren%27s+syndrome+using+adenovirus-mediated+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Investigation%22%5BJournal%5D)">IL17: potential therapeutic target in Sjogren's syndrome using adenovirus-mediated gene transfer.</a> Laboratory Investigation. 91 (1), 54-62 (2011).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

Retroductal 주사 침 샘에 지역화 된 약물 전달에 대 한 중요 하다. 이 기술은 응용 프로그램 Sjogren 증후군 및 RIH9,,1028를 포함 하 여 조건에 대 한 치료제를 심사에 있다. Retroductal 주입을 통해 서울시에 직접 약물 전달 주요 이점이 그것의 잠재력을 줄이기 위해 오프 대상 효과, 면역 활성화11를 포함 하 여 조직의 관리를 제공 합니다. 지역 약물 전달, 주변 조직에 축적 없이 최대화 수 치료 복용량 광범위에서 보다 체계적으로 달성 될 수 있는 테스트를 사용할 수도 있습니다.
우리는이 프로토콜을 제시, murine 서울시20왓슨의 덕트를 통해 고분자 나노 재료를 제공 하는 상세 하 고 업데이트...

침 샘 기능 장애는 많은 etiologies, Sjögren의 증후군, 기능성 분 비 조직, 그리고 방사선 유발 hyposalivation (RIH), 머리와 목 암 방사선 치료1의 일반적인 sequella의 자기 면역 중재 손실을 포함 하 여 있다. 어느 조건 때문에 침 기능 손실 구두 및 조직의 감염, 충 치, 소화 하 고 삼 키는 기능 장애, 언어 장애, 그리고 주요 우울증1,2,3에 개인을 걸리기. 결과적으로, 삶의 질 크게 겪고 있다, 중재 치료4보다는 증상의 일시적 완화에 국한. Vivo에서새로운 치료 조사, 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 관리 하는 관심입니다.
Retroductal 주사 침 샘에 직접 생리 활성 화합물을 제공 하 고 질병, 부상, 또는 정상 조직의 항상성에서 효능을 테스트 하는 귀중 한 방법입니다. 3 개의 주요 침 샘은 귀 밑 (PG), submandibular (서울시), 그리고 삶의 (SLG), 배설 덕트를 통해 구강에는 빈의 모든. murine의 해부학 SMG cannulation 혀5아래 입의 바닥에 있는 왓슨의 덕트를 통해 직접 액세스를 허용 합니다. Cannulation, solvated 마약 SMG에 직접 관리할 수 있습니다. Retroductal 배달, 다음 외 선의 확산 구조6주위 물자의 교류를 통제 하는 주변 조직 캡슐에 의해 제한 됩니다. SMG와 그 덕트 마찬가지로 인간에서는, 구조는 SMG 수술 및 sialoendoscopy7중에 정기적으로 액세스. 인간과 쥐에서 PG는 마찬가지로 볼 점 막8에서 Stensen의 덕트를 통해 액세스할 수 있습니다.
RIH murine 모델, SMG retroductal 주입 치료제 등 성장 요인, 일차 전지, adenoviral 벡터, cytokines, 부상, 세포질 응답을 조절 하 고 그 결과 감소 하는 항 산화 화합물을 제공 하는 데 사용 되었습니다. 조직 손상5,9,10,11,12,13,14,,1516. Retroductal 주입의 가장 주목할 만한 임상 성공이 이다 (Aquaporin 1; 물 채널의 표현을 직접 adenoviral vector의 관리 AQP1) 머리와 목 암17방사선 환자에.
이전에 우리는 개발과 RIH11,18,,1920에서 침 샘 기능을 보호 하기 위해 retroductally 주입 고분자 나노-siRNA 시스템의 효능 표시. 우리의 과거 작품의 확장, 여기, 우리 우리의 프로토콜 로드 하 고 그렇지 않으면 가난 하 게 녹는 제공 붙일 레이블된 나노 (NP)를 사용 하 여 retroductal 서울시 주입 약21,22, 설명 23.
우리 diblock 공중 합체 폴 리 (스 티 렌-alt-maleic anhydride)-b-poly(styrene) 가역 추가 체인 조각화 (뗏목) 중 합, 앞에서 설명한21통해 (PSMA)의 구성에서 NP를 합성 할. 솔벤트 교류를 통해 이러한 고분자 자발적으로 자기 조립 micelle NP 구조는 소수 성 내부와 친수성 외부21에. NPs는 동물을 희생 하지 않고도 동맥에 NP 배달의 확인을 허용 하도록 텍사스 레드 fluorophore와 함께 표시 됩니다. 동물 영상 라이브와 SMG immunohistochemistry 1 시간 그리고 1 일 주사를 다음에 표시 됩니다.
이 업데이트 하 고 재현할 수 cannulation 프로토콜 retroductal 주입을 달성 하기 위해 다른 사람을 사용 해야 합니다. 우리는이 세련 된 기술을 vivo에서 연구 및 치료 개발24,25에 대 한 중요 한 될 것입니다 기대 합니다.

<table><tbody><tr><td>필로 카르 핀 하이드로 클로라이드</td><td>시그마 알드리치</td><td>P6503</td><td>필로 카르 핀</td></tr><tr><td>학생 Vannas 봄 가위</td><td>미세 과학 도구</td><td>91500-9</td><td>기관 절개술 용 스프링 가위</td></tr><tr><td>멸균 식염수</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>식염</td></tr>수 <tr><td>Dumont # 7 집게</td><td>미세 과학 도구</td><td>11274-20</td><td>곡선 집게</td></tr><tr><td>Dumont # 5 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>스트레이트 집게</td></tr><tr><td>표준 패턴 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>무딘 집게</td></tr><tr><td>Fine Scissors- 텅스텐 카바이드</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>해부 가위</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillary tubes</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 항체</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistical Software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>안연 도포구</td></tr><tr><td>0.5cc 인슐린 주사기, 복강내 주사용 29G x 1/2"</td><td>BD</td><td>7629</td><td>주사기</td></tr></tbody></table>

retroductal 나노 murine submandibular 동맥에 주입

Retroductal Nanoparticle Injection to the Murine Submandibular Gland

침 샘 치료의 두 가지 일반적인 목표는 조직 장애 중 다음의 예방 및 치료 면역 또는 방사선 상해. 로컬 침 샘에 생리 활성 화합물을 함으로써, 큰 조직 농도 조직의 관리 대 안전 하 게 구현할 수 있습니다. 또한, 대상 조직에서 물자의 여분 선 축적 효과 수 극적으로 감소 될. 이와 관련, retroductal 주사 침 샘 생물학과 이상 조사를 위해 널리 사용 되는 방법입니다. Retroductal 관리 성장 요인, 일차 전지, adenoviral 벡터, 그리고 작은 분자 약물의 상해의 설정에서 기능을 지원 하기 위해 표시 되었습니다. 우리는 이전 조사를 다음과 같은 기능을 유지 하기 위해 주입 retroductally 나노 siRNA 전략의 효능을 보여주었다. 여기, 왓슨의 덕트를 통해 murine submandibular 동맥에 나노 소재를 관리 하는 매우 효과적이 고 재현 방법에 대 한 자세한 (그림 1). 우리 구강 접근을 설명 하 고 더 관측 절차에 걸쳐 품질 검사로 재직 cannulate와 튼의 덕트, 하는 데 필요한 단계를 개요.

Retroductal 주입 murine SMG (그림 1)에 NPs를 관리를 사용할 수 있습니다. 여기, 우리는 50 µ g PSMA NPs 텍사스 레드 fluorophore와 함께 표시를 제공 합니다.
마우스의 적절 한 배치는 손쉬운 액세스와 입 (그림 2A-B)의 바닥의 시각화 수 있습니다. Submandibular papillae 혀 아래 두 살 돌출으로 식별 됩니다. (그림 2C) cannulation 및 아트로핀 주사, 주사기 튜브 submandibular 용의자 (그림 2D)에 배치할 수 있습니다.
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Submandibular 동맥을 지역 약물 전달 및 새로운 치료제의 개발에 대 한 이해 침 샘 생물학에서입니다. 선물이 배달 정확성과 실험의 재현성을 향상 시키는 업데이트 및 상세한 retroductal 주입 프로토콜. 여기에 소개 하는 응용 프로그램은 고분자 나노 입자의 배달.

Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입

Two common goals of salivary gland therapeutics are prevention and cure of tissue dysfunction following either autoimmune or radiation injury. By locally ...

이 절차의 전반적인 목표는 나노 물질을 쥐의 턱밑샘에 직접 투여하는 것입니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 전신 순환을 우회하면서 턱밑샘에 화합물을 직접 전달한다는 것입니다. 이 기술의 의미는 두경부 악성 종양에 대한 방사선 치료 후 타액선 기능 장애 치료로 확장됩니다.일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 동물이 진정되는 동안 턱밑관을 찾아 캐뉼레이션하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 이 절차를 시작하려면 와이어가 삽입된 32게이지 두개내 카테터 튜브를 3cm 절단하여 장축으로 약 45도 경사진 끝을 형성합니다. 와이어가 튜브보다 1cm 이상 긴지 확인합니다.튜브에 비스듬한 가장자리를 만들면 덕트 캐뉼레이션이 쉬워집니다. 시술 중에 튜브가 구부러지면 새로운 경사진 모서리를 절단해야 합니다. 다음으로, 50마이크로리터의 PSMA 나노 입자 용액 또는 기타 주입 물질을 Hamilton 주사기에 로드합니다.주사 중 굴 외상의 가능성을 줄이려면 카테터 튜브를 주사기에 부착하고 데드 볼륨을 배출합니다. 주입 용액을 검사하여 나노 입자가 완전히 용매화되어 관 폐색을 방지하는지 확인합니다. 그런 다음 밀리리터당 0.1밀리그램으로 아트로핀 용액을 준비합니다.덕트 진입점을 시각화하려면 마취된 마우스를 사용자 지정 스테이지의 엎드린 위치에 놓습니다. 그런 다음 시술 중 건조를 방지하기 위해 눈에 연고를 바르십시오. 그런 다음 금속 빔에 상악 앞니를 고정하고 탄성 밴드를 사용하여 하악 앞니 뒤에 아래쪽으로 장력을 가합니다.해부 현미경 아래에 마우스를 정렬하여 턱의 바닥을 시각화합니다. 입을 넓히려면 맞춤형 곡선형 강철 견인기를 사용하여 협측 점막에 양측으로 장력을 가합니다. 턱밑 유두를 시각화하려면 뭉툭한 집게를 사용하여 혀를 잡고 입 바닥에서 부드럽게 들어 올립니다.혀와 협측 점막 사이에 솜 조각을 놓아 구강 내에서 추가 조작을 할 수 있도록 합니다. 관 캐뉼레이션 및 라인 배치를 수행하려면 와이어 삽입물로 카테터 튜브를 잡습니다. 캐뉼레이션 중 최적의 수동 제어를 위해 튜브를 겸자의 곡률에 맞추십시오.해부 현미경을 사용하여 집게와 와이어를 시야로 이동합니다. 와이어 삽입물을 사용하여 턱밑 유두의 기저부에 부드럽게 압력을 가하여 나중에 카테터 튜브가 쉽게 들어갈 수 있도록 작은 표재성 점막 천자를 만듭니다. 저항이 발생하면 날카로운 해부 가위로 튜브와 와이어가 삽입된 양쪽 모두에서 새로운 비스듬한 팁을 자릅니다.진입 후 탐침을 빼낸 다음 해부 현미경을 사용하여 천자 부위에 타액이 있는지 확인합니다. 그런 다음 튜브 내에서 탐침을 더 집어넣습니다. 출혈을 일으키거나 유관 무결성을 손상시킬 수 있는 탐침의 강렬하거나 갑작스러운 움직임을 피하십시오.주입 튜브가 Wharton의 덕트 개구부에 맞도록 하려면 견고한 가이드로 탐침이 포함된 튜브를 이전에 만든 구멍에 삽입하십시오. 배압이 덕트 폐쇄로 장기화되는 것을 방지하려면 튜브를 빼내십시오. 현미경으로 턱밑 유두에 구멍이 보이는지 확인합니다.눈에 띄는 출혈이 발생하면 탐침을 제거하고 반대쪽 턱밑 유두에 대한 절차를 다시 시도하십시오. 다음으로, 마우스를 움직이지 않고 킬로그램당 1mg의 아트로핀 용액을 복강내로 투여하여 시술 중 상승을 줄입니다. 그런 다음 5분에서 10분 정도 기다립니다.해부 현미경 아래에서 주사기 튜브를 오리피스에 삽입합니다. 저항이 발생하면 튜브에서 새로운 경사진 끝을 자르고 다시 시도하십시오. 튜브가 턱밑 유두 내에 자리를 잡으면 턱밑 유두로 천천히 3-5mm 전진합니다.그런 다음 집게에서 튜브를 분리합니다. 튜브와 턱밑 유두 사이의 밀봉을 개선하려면 1분 동안 거즈로 부드럽게 두드려 계면을 건조시킵니다. 건조하는 동안 튜브의 위치가 변경되지 않았는지 검사하십시오.이 절차에서는 분당 10 마이크로 리터의 속도로 재료를 주입합니다. 마우스가 진정 상태를 유지하고 고통의 징후를 보이지 않는지 확인하십시오. 주사 후 5분 동안 주사기 압력을 유지하여 Wharton의 관과 턱밑샘 내 물질 보유를 개선합니다.튜브가 관 구멍에서 나오지 않는지 확인하기 위해 주기적으로 턱밑 유두를 검사합니다. 사출 압력을 유지하면 후강 전달의 효과가 향상됩니다. 가는 집게를 사용하여 턱밑 유두에서 튜브를 잡고 부드럽게 빼냅니다.마우스를 무대에서 멀리 옮기기 전에 구강에서 견인기와 솜을 제거하십시오. 나노 입자 전달을 확인하기 위해 in vivo 이미징 시스템은 주입 1시간 후 마우스의 처리된 쪽으로 적색 형광 신호가 측면화되는 것을 보여줍니다. 그리고 이 이미지는 나노 입자 신호가 주입 후 24시간 후에 크게 감소했음을 보여줍니다.주사 후 24시간 동안 턱밑샘의 나노 입자 지속성을 확인하기 위해 형광 영상으로 절단하고 관찰했습니다. 여기에 표시된 것은 아쿠아포린 5 및 케리틴 5로 염색된 주입되지 않은 대조군 턱밑샘으로, 각각 분비 세포, 아시니 및 관 세포를 표시합니다. 후관 나노입자 주입 턱밑샘에서 아쿠아포린 5 염색과 케리틴 5 염색은 정상적인 분비선 형태와 아시니와 관 모두에서 흡수되는 나노 입자를 보여줍니다.이 기술을 마스터하면 제대로 수행하면 20분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 캐뉼라를 제거하거나 튜브와 턱밑 유두 사이에 만들어진 밀봉을 방해할 수 있는 외부 움직임을 피하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 턱밑샘에서 유전자 발현 또는 나노 물질 국소화를 평가하기 위해 면역 염색, RNA 추출 또는 유세포 분석과 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다.개발 후, 이 기술은 침샘 연구자들이 구강 건조증 예방을 위한 화합물을 선별하고 테스트할 수 있는 길을 열었습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 Wharton's duct의 캐뉼레이션을 통해 쥐 턱밑샘에 나노 물질을 직접 투여하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

retroductal-nanoparticle-injection-to-the-murine-submandibular-gland

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 cannulation을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 본 실험은 trypan 푸른 솔루션은이 기법을 효과적으로 타겟 선에 혼합을 제공하는 방법을 보여줍니다하고, 침샘의 재생을위한 잠재적인 약물 임상 / 세포 치료 등이 새로운 접근 방법의 신뢰성을 제안하는 다이로 사용됩니다.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

이 비디오는 마우스 유선의 관으로 주입 혼합물을 전달하는 관내 주사 기술에 대해 설명합니다.

Intraductal Injection: 마우스 유선의 관으로 주입 혼합물을 전달하기

이 비디오는 인간 환자의 타액선에 치료 약물을 투여하는 초음파 유도 주사 기술을 보여줍니다.

인간의 타액선에 치료 약물의 초음파 유도 주입

마우스 유방 동맥에 수성 시약의 비 침습성 췌관 전달을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 방법은 특히 유방 덕트를 대상으로 유 방 땀 샘의 젖꼭지로 지역화 주입을 활용합니다. 이 기술은 siRNA를, 화학 요법 제와 작은 분자를 포함한 화합물의 다양한 적응할 수있다.

마우스 유선 화 된 약물 전달을위한 췌관 주입

림프절은 면역 반응을 조율하고 백신을 위한 중요한 표적인 면역 조직입니다. 생체 재료는 더 나은 표적 림프절을 위해 채택되고 항원 또는 유수품의 전달을 통제하기 위하여 채택되었습니다. 이 논문은 이러한 아이디어를 결합하여 생체 적합성 폴리머 입자를 림프절에 주입하는 기술을 설명합니다.

생분해성 폴리머 입자의 림프절 내 주입

두경부 방사선 요법의 주요 부작용인 타액선 기능 저하로 환자의 삶의 질을 떨어뜨립니다. 동물 모델에서 새로운 치료법의 효능을 입증하는 것은 임상 전환 전에 전제 조건입니다. 이 프로토콜은 쥐의 턱밑샘에 대한 후향 투여 및 국소 방사선 조사에 대해 설명합니다.

타액 기능 저하의 쥐 모델에서 Retroductal 턱밑 글 랜드 점적 및 현지화 된 분획 조사

우리는 수술 노출 하 고 안정화 murine submandibular 침 샘 intravital 이미징 똑바로 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 머리와 목 지역 쥐 및 다른 작은 설치류의 다른 전 동맥에 쉽게 적응 합니다.

똑바로 Intravital 현미경 Murine Submandibular 침 샘의 준비

타액선은 유전자 치료를 위한 조직 표적 사이트로서, 특히 유전자 전달에 의한 예방 접종 영역에서 제안되었다. 역행 마루드 주입을 활용한 비인간 영장류 모델에서 유전자 전달을 시연합니다.

벡터 유전자 전달을 위한 비인간 영장류에서 스텐센의 덕트를 통한 역행 파로티드 글랜드 주입

본 프로토콜에서, 턱밑샘(SMG)의 내피 장벽 기능은 이광자 레이저 스캐닝 현미경 하에 생체 내에서 시험 동물 모델의 각 정맥에 상이한 분자 가중 형광 추적자를 주입함으로써 평가되었다.

생체 내 마우스 턱밑샘의 혈관 투과성 검출

면역형광 이미징은 복잡하고 시간에 따라 달라지는 생물학적 과정을 단 한 번의 스냅샷으로 관찰할 수 있는 능력에 제약을 받습니다. 이 연구는 정밀하게 절단된 쥐의 턱밑샘 절편에 대해 수행된 실시간 이미징 접근 방식을 간략하게 설명합니다. 이 접근법을 통해 항상성 중 세포-세포 상호 작용과 재생 및 복구 과정을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

Ex vivo Live Cell Imaging을 통한 타액선의 세포 간 상호 작용 조사

여기에서는 동물 모델에서 RNA 올리고머를 운반하는 자성 산화철 나노입자를 전이성 유방암으로 생체 내 전달하기 위한 프로토콜을 설명하여 발암성 핵산의 치료적 침묵을 위한 임상적으로 실행 가능한 접근 방식을 제공합니다.

Murine Breast Cancer Metastases의 나노약물 축적 모니터링

배우세요 생쥐 턱밑샘에 나노입자를 직접 주입하는 방법을. 32게이지 카테터를 이용한 역관주사 기법으로 전신 순환을 우회하여 정확한 약물 전달이 가능합니다. 이 방법은 방사선 치료 후 구강건조증 연구에 활용됩니다.

Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입

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