Name: Pilocarpine 자극 다음 통해 murine 침 기능 평가 분류 한 방사선 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: 학습하세요 필로카르핀 자극을 이용한 murine 침샘 기능 평가 방법으로, 기관절개술과 침 수집 및 침새 절제 기술을 포함합니다. 이 프로토콜은 구강 건조증과 침 과다분비 연구에 활용됩니다.

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이 간행물에 보고 된 연구는 국립 연구소의 치과 Craniofacial 연구 (NIDCR)와 보너스 번호 R56 DE025098, UG3 DE027695, 및 CA206296 F30 국립 보건원의 국립 암 연구소 (NCI)에 의해 지원 되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임 이며 반드시 국립 보건원의 공식 의견을 대표 하지 않는다. 이 작품 또한 NSF DMR 1206219와 IADR 혁신 구강 케어 상 (2016)에 의해 지원 되었다.
우리는 박사에 리 마루야마와 앤드류 Hollomon 타 액 컬렉션과 함께 그들의 도움에 감사 하 고 싶습니다. 우리는 동맥 해 부와 그의 지원에 대 한 페이 Lun Weng 감사 하 고 싶습니다. 우리는 매튜 잉 그림 준비에 그의 원조에 대 한 감사 하 고 싶습니다. 우리는이 논문의 중요 한 읽기 박사 Elaine Smolock, 에밀리 우 감사 하 고 싶습니다.

아래에 설명 된 모든 vivo에서 절차는 로체스터, 로체스터의 대학에서 동물 자원에 대학 위원회에 의해 승인 되었다. NY입니다.
1입니다. 준비
<ol><li>분석 균형을 사용 하 여, pilocarpine의 20 밀리 그램 무게. Microcentrifuge 튜브에서 메 마른 염 분 2 mL에 녹. 참고: pilocarpine 빛에 민감한 이며 시간이 지남에 따라 활동을 잃는다, 때문에이 솔루션 주입의 날 준비와 있어야 관리까지 빛 으로부터 보호 합니다.</li>
	<li>분석 균형을 사용 하 여, 무게 고 모든 컬렉션 튜브와 유리 모 세관을 식별 합니다. 컬렉션 튜브와 유리 모 세관의 수 생쥐의 수를 일치 해야 합니다.</li>
</ol>2입니다. tracheostomy
<ol><li>C57/BL6 마우스 사용 하 여 분석 균형 무게.</li>
	<li>29G x ½"바늘 0.5 mL 주사기를 사용 하 여, 100 mg/kg 케 타 민 고 10 mg/kg xylazine의 intraperitoneally 주입 된 살 균 염 분 솔루션 마우스 anesthetize. 마우스 이상에 응답 자극 (즉 페달 철수 반사의 부재), 일반적으로 주입 다음 5 ~ 10 분 이내 발생 하는 경우 다음 단계로 진행 합니다.</li>
	<li>솜 밀고 주걱에 윤활제를 분배 후 부드럽게 눈에 적용 하 고 무대에서 부정사 위치에 마우스를 놓습니다. 마 취 동물 따뜻한 표면에 유지 되어야 한다. 참고: 모든 단계는 상 온에서 수행 됩니다.</li>
	<li>보안 코, 팔, 다리 및 꼬리 수술 테이프를 사용 하 여 단계를.</li>
	<li>깨끗 하 고 젖은 알코올 지우기와 목. 참고:이 입력 이후 절에서 모피를 방지 도움이 됩니다.</li>
	<li>집게와 복 부 중간 목 피부를 올리는, 작은, 표면 커트 해가 위를 사용 하 여 확인 합니다. 오프닝으로는 위를 안내 하 고 천천히 피하 조직 비행기를 분리 하는 블레이드를 엽니다.</li>
	<li>입 아래 1cm를 잘라 신중 하 게 발생 하는 피부를 유지.</li>
	<li>첫 번째 컷의 열 등 하 고 우량한 측면에 두 개의 측면 절 개를 확인 합니다. 집게를 사용 하 여 부드럽게 반영 멀리 머리 및 목 구조에 액세스할 수 있도록 피부.</li>
	<li>8 X 확대 해 현미경을 사용 하 여 시각화 submandibular 동맥 (중간: 그림 1).</li>
	<li>기도 overlying 4 infrahyoid (스트랩) 근육을 노출 하는 땀 샘을 리프트 부드럽게 미세 집게를 사용 하 여. 찢 어 또는 주변 맥 관 구조 또는 배설 덕트 방해 하지 마십시오.</li>
	<li>둘 이상의 마우스에서 타 액을 수집 하는 경우 계속 하기 전에 단계 2.1-2.10 각 마우스를 반복 합니다. 참고:이 절차를 수행할 수 있습니다 안전 하 게에 5 쥐까지 동시에.</li>
	<li>작은 해가 위, 가능한 중간 선 가까이 머물면서 스트랩 근육의 중간 부분을 제거 합니다. 기도 시각화 하 고 절차 동안 방식의 스트랩 근육을 유지 하는 필요한 만큼만 잘라. 상당한 출혈을 보조 볼륨 고갈 경우 pilocarpine 됩니다 효과적으로 분 비를 유도 하기 때문에 어떤 가까운 선박 nicking 하지 마십시오.</li>
	<li>기도에서 결박 근육을 반영 합니다.</li>
	<li>갑 상선, 기관지, 후 두를 시각화 합니다. 기관 조직 overlying의 명확한 인지 확인 합니다.</li>
	<li>게는 가로 절 개 기도에 열 등/후부 작은 해가 위를 사용 하 여 갑 상선. 특허 및 액체의 명확한 기도 인지 확인 합니다.</li>
</ol>3. 타 액 컬렉션
<ol><li>입과 각도 해 부 무대 아래로 근처 테이프 제거 (45 °, cranially) 타 액 흐름을 지원 하기 위해.</li>
	<li>29G x ½"바늘 0.5 mL 주사기를 사용 하 여, 100 mg/kg의 총계 복용량에 대 한 10 µ L/g 몸 무게 pilocarpine의 복 주사를 수행 합니다.</li>
	<li>타이머를 시작 합니다. 여러 생쥐를 먹이 지, 신속 하 게 이동 하 여 및 보조 나머지 마우스를 동시에 주입 함으로써 리드 타임을 줄일.</li>
	<li>표준 집게를 사용 하 여, 모 세관 튜브 액세스에 대 한 입을 엽니다.</li>
	<li>타 액의 구슬을 입에 관찰 되 면 선단부 수집 관 해 단계 (사전 무게 두 튜브) 아래 위치에 배치와 함께 액체에 모 세관 튜브의 근 위 끝을 놓습니다. 참고: C57/BL6 여성 쥐에 있는 나이의 6-10 주 심한 타 액 분 비 발생 합니다 pilocarpine 주입의 2 분 이내.</li>
	<li>경우 타 액은 건물 입에 하지 튜브를 통해 흐르는, 이전 단계를 다시 시도 합니다. 튜브 입구를 저지할 수 있는 점 막 표면에 직접 배치 되지 않습니다 확인 하십시오.</li>
	<li>Pilocarpine 자극 다음 12 분의 총에 대 한 타 액을 수집 합니다. stoma 명확 남아 확인 하십시오. 참고: 증가 해 일 볼륨 및 분 비 물 (침, 오 줌, 배설물)은 보통이 시간 동안.</li>
	<li>마우스는 침 함수를 우울 하 게 하는 경우 (예., 부상 또는 개입), P200 micropipette를 사용 하 여 컬렉션 튜브를 입에서 나머지 액체를 전송. 여러 마우스에서 수집 하는 경우 팁 변경 됩니다 확인 합니다.</li>
	<li>기록 수집된 타 액 플러스 튜브 pilocarpine 주사 후 12 분의 무게.</li>
</ol>4. 동맥 해 부
<ol><li>CO2 안락사로 마우스를 안락사 (동물의 안락사에 AVMA 지침에 설명 된 대로: 2013 판) 이어서 thoracotomy, 머리와 목의 구조를 보존 하도록. 이러한 이유로, 안락사의 방법으로 자 궁 경부 전위를 하지 마십시오.</li>
	<li>무대에서 부정사 위치에 마우스를 놓습니다. 기도 (그림 1)을 통해 원래 사이트에 샘을 재조 정할.</li>
	<li>8 배 확대, 아래 해 현미경을 사용 하 여 시각화 주요 동맥: PG, SMG, SLG. 해 부 동안 동맥을 구별 하는 PG는 확산, SMG와 SLG 측면 거짓말 식별 합니다. 참고: 경우 PG, 해 부 한다 이렇게 먼저 이상 정의 하 고 가장 찢 길 것 이기 때문에.</li>
	<li>기본 구조에서 당기고 집게와 PG의 꼬리를 잡고 하 고 부드럽게 해 부가 위와 PG의 머리를 절단 하기 전에 긴장을 적용 합니다.</li>
	<li>위반 주변 SMGs 집게를 사용 하 여 캡슐. 부드럽게 왼쪽 및 오른쪽 SMG를 구분 합니다.</li>
	<li>집게를 사용 하 여 준수 nonglandular 조직에서 서울시의 등 쪽 부분을 무료.</li>
	<li>집게와 긴장 된 왓슨의 덕트 절단가 위 해 부와 덕트 여 목에서 서울시를 제거 합니다.</li>
	<li>부드럽게 집게를 사용 하 여 서울시에서는 SLG를 구분 합니다. 참고:는 SLG는 SMG의 superolateral 부분에는.</li>
	<li>분석 균형을 사용 하 여, SMG 무게 기록.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

우리 동맥 상해 및 치료제 연구에 적용 될 수 있는 침 샘 기능을 평가 하기 위해 다단계 방법 제시. 우리의 절차 tracheostomy, 타 액, 수집과 동맥 해 부, 각각의 침 샘 생물학의 통합된 연구를 지원할 수 있는 실험적인 응용 프로그램은 포함 한다. 예를 들어 murine tracheostomy 구강 방해 절차 동안 일반 기도 관리를 위해 사용 되었습니다.
Pilocarpine에 필요한 적절 한 해 부 및 tracheal 절 개는 100 mg/kg에서 타 액 분 비를 자극. 또는, 감소 pilocarpine 투여 tracheostomy에 대 한 필요성을 피할 수 있는 고 타 액 분 비16의 경도 평가 따라서 사용 합니다.
이 프로토콜 녹화 뿐만 아니라 타 액 분 비, 추가 분석에 대 한 타 액을 수집 하는 정확 하 고 일관 된 방법을 제공 합니다. 이러한 연구에는 유동성, pr...

침 샘 장애 증후군 dysregulated 또는 장애인된 분 비 과잉 (sialorrhea) 또는 타 액1의 이용률 (xerostomia 및 hyposalivation)를 선도 포함 됩니다. 두 경우 모두에서 치료 개발2의 최종 목표를 향해 침 샘 생물학의 우리의 이해를 향상에 관심이 있다.
침 샘 매우 radiosensitive 기관, 그리고 종종 머리와 목 암 방사선 치료, 영구적인 구강 건조 증 (xerostomia)3,4로 이어지는 동안 손상 된. 그러나 달리 다른 radiosensitive 조직,, 침 샘 이직 률 상대적으로 낮은 이며 분 비 손실의 메커니즘은 불완전 하 게 이해5,6. 이 독특한 부상 설정에서 조직 재생과 radioprotection 전략 침 기능 평가 요구 한다. 실험적으로, murine 침 컬렉션은 방사선을 치료제 선 응답을 평가에 특히 유용한 도구입니다.
여기, 우리가 수행 및 pilocarpine, 강력한 muscarinic 주 작동 근7를 사용 하 여 자극된 타 액 분 비를 측정 하는 방법 제시. Pilocarpine 동맥 분 비8,9를 유도 하는 자율 신 경계를 자극. 이 테스트를 적절 하 게 완료 한 tracheostomy는 마우스는 절차를 통해 특허 기도 유지 하 고 질 식와 구강10에서 풀링된 분 비에서 소망의 위험을 줄이기 위해 필요 합니다.
이것은 3 개의 주요 침 샘의 제거에 culminating 터미널 절차: 귀 밑 (PG), submandibular (서울시), 그리고 삶의 (SLG). 기능 연구에 대 한 선 무게 기록 됩니다 하 고 타 액 측정11,,1213정상화에 자주 사용 됩니다. 이 데이터는 어떤 점에서 선 위축 예상된 결과14,15 는 방사선 연구에서 특히 중요 하다
어떻게 자극된 타 액 분 비에 관하여 문학에 있는 가변성 수행 되 고16보고 있다. 예를 들어 문학 범위 적어도 3 개의 크기 순서17,18,19,20,,2122,23내 pilocarpine 복용량. 여기, 메서드 실행, 뿐만 아니라 기술 (tracheostomy, 타 액, 수집과 동맥 해 부)으로 적응 될 수 있는 모듈형 플랫폼을 제공 하는 향상 된 재현성의 목적으로 최적화 된 높은 복용량 pilocarpine 프로토콜 선물이 필요합니다.
프로토콜 데모, 뿐만 아니라 우리는 서울시 지역에 분류 한 방사선 (6.85 Gy의 4 복용량) 다음 2 주에 타 액 흐름의 대표 기능 데이터를 포함 합니다.

<table><tbody><tr><td>필로 카르 핀 하이드로 클로라이드</td><td>시그마 알드리치</td><td>P6503</td><td>필로 카르 핀</td></tr><tr><td>학생 Vannas 봄 가위</td><td>미세 과학 도구</td><td>91500-9</td><td>기관 절개술 용 스프링 가위</td></tr><tr><td>멸균 식염수</td><td>Medline</td><td>RDI30296H</td><td>식염</td></tr>수 <tr><td>Dumont # 7 집게</td><td>미세 과학 도구</td><td>11274-20</td><td>곡선 집게</td></tr><tr><td>Dumont # 5 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td>스트레이트 집게</td></tr><tr><td>표준 패턴 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td>무딘 집게</td></tr><tr><td>Fine Scissors- 텅스텐 카바이드</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>해부 가위</td></tr><tr><td>Microhematocrit Heparinized Capillary Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>22362566</td><td>Capillary tubes</td></tr><tr><td>Lubricant Eye Ointment</td><td>Refresh</td><td>N/A</td><td>Refresh Lacri-Lube</td></tr><tr><td>Goat polyclonal anti-Nkcc1</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>SC-21545</td><td>Nkcc1 항체</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D1306</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>ver6.0</td><td>Statistical Software</td></tr><tr><td>Cotton tipped applicator</td><td>Medline</td><td>MDS202000</td><td>안연 도포구</td></tr><tr><td>0.5cc 인슐린 주사기, 복강내 주사용 29G x 1/2"</td><td>BD</td><td>7629</td><td>주사기</td></tr></tbody></table>

pilocarpine 자극 다음 통해 murine 침 기능 평가 분류 한 방사선

Murine Salivary Functional Assessment via Pilocarpine Stimulation Following Fractionated Radiation

Hyposalivation는 Sjögren의 증후군 또는 주요 침 샘을 다음 방사선 상해의 면역 반응에서 일반적으로 관찰 된다. 이러한 경우에 질문은 질병 병 인 및 효과적인 개입에 관한 남아 있다. 침 샘의 기능 평가 허용 하는 최적화 기법 조사 전 선 생물학, 부전, 및 치료제에 대 한 소중한 있다. 여기, 우리가 pilocarpine 수행 하는 단계 접근 방식을 제시 tracheostomy 등 세 가지 주요 murine 침 샘의 해 부, 타 액 분 비를 자극. 우리는 또한 적절 한 murine 머리와 목 해부학이이 기술 중 액세스를 선발. 이 방식은 확장성, 따라서 작업 흐름의 효율성을 향상 시키는 여러 마우스를 동시에 처리 될 수 있도록 합니다. 우리는 각각의 추가 필드 내에서 응용 프로그램은이 방법의 재현성을 향상을 목표로. 타 액 컬렉션, 이외에 우리는 메트릭을 측정 하 고이 조직의 기능 능력을 정상화 논의. 대표적인 데이터 분류 한 방사선 (6.85 Gy의 4 복용량) 다음 2 주 우울된 침 샘 기능 submandibular 동맥에서 포함 되어 있습니다.

높은 복용량 pilocarpine 수행 자극 타 액 컬렉션, 그것은 흡 인을 방지 하기 위해 기도 유지 하는 것이 중요 또는 구강에 분 비 물에서 질 식. tracheostomy 회로도 (그림 1)를 제공 됩니다. Tracheal 절 개, 다음은 stoma 조직과 체액의 명확한 유지 되어야 합니다.
타 액 수집 중 모 세관 작용을 향상, 마우스 아래쪽 45 ° 각도에서 그들의 머리와 함께 위치 한다. 다음이 단계에서 수행할 수 있습니다 &gt; 1 마우스, 비록 5 마우스를 한 번에 (그림 2)를 초과 하는 권장 되지 않습니다. 컬렉션 완료 되 면, 튜브 증발 손실을 피하기 위해 신속 하 게 무게가 될 것이 좋습니다.
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선물이 murine tracheostomy 등 3 개의 주요 침 샘의 침 컬렉션을 수행 하는 자세한 접근.

Pilocarpine 자극 다음 통해 murine 침 기능 평가 분류 한 방사선

Hyposalivation is commonly observed in the autoimmune reaction of Sj&#246;gren's syndrome or following radiation injury to the major salivary glands. In ...

이 절차의 전반적인 목표는 필로카르핀 자극에 의한 쥐의 타액 기능을 평가하는 것입니다. 이 방법은 타액선 기능 장애의 자연사를 이해하고 잠재적인 중재의 효능을 테스트하는 데 적용할 수 있습니다. 당사의 프로토콜은 쥐 기관 절개술, 타액 채취 및 분비선 해부를 포함한 모듈식 기술 플랫폼을 제공합니다.임상적으로 이 기법은 구강 건조 또는 타액의 과잉 생산을 평가하는 연구에 시사하는 바가 있습니다. 또한 기도 관리가 필요한 다른 구강 내 절차에도 적용할 수 있습니다. 이 프로토콜을 처음 배우는 사람들은 기관절개술과 분비선 절제술이 어렵다는 것을 알 수 있습니다.이 비디오가 적절한 분비선 분리 기술과 관련 해부학을 배우는 데 도움이 되기를 바랍니다. 분석 저울을 사용하여 필로카르핀 20mg의 무게를 잰 다음 2ml의 멸균 식염수에 용해시킵니다. 필로카르핀 용액은 사용 당일에 신선하게 만들어야 합니다.다음으로, 절차를 위해 모든 수집 용기의 무게를 측정하고 마우스의 무게를 측정하여 정확하게 투여합니다. C57 블랙 6 변형을 사용하십시오. 마우스를 마취하고 발가락 꼬집기로 마취를 확인한 후 솜 끝이 있는 어플리케이터를 사용하여 안과 연고를 바르고 마우스를 누운 상태로 놓습니다.그런 다음 수술용 테이프로 팔다리, 코, 꼬리를 고정합니다. 그런 다음 알코올 물티슈를 사용하여 목을 닦고 적십니다. 이제 집게를 사용하여 복부 정중선 목을 꼬집고 가위로 작고 표면적으로 자릅니다.그런 다음 가위를 구멍으로 안내하고 칼날을 피하로 천천히 열어 조직 면을 분리합니다. 피부를 들어 올린 상태에서 입 아래 1cm를 조심스럽게 자릅니다. 그런 다음 첫 번째 절개보다 아래쪽과 위쪽에 두 개의 측면 절개를 만듭니다.이제 집게를 사용하여 피부를 부드럽게 당겨 머리와 목의 해부학적 구조에 접근합니다. 해부 현미경을 사용하여 8배 배율로 진행합니다. 가는 집게를 사용하여 턱밑샘을 부드럽게 들어 올려 기관 위에 있는 4개의 인프라히오이드 근육을 노출시킵니다.주변 혈관 또는 배설관을 찢거나 방해하지 마십시오. 한 마리 이상의 쥐에서 타액을 채취하는 경우 진행하기 전에 이 시점까지 모든 마우스를 준비하십시오. 한 사람이 최대 5마리의 마우스를 동시에 처리할 수 있습니다.이제 수술을 계속하려면 작은 절개 가위를 사용하여 정중선 가까이에 유지하면서 스트랩 근육의 내측 부분을 제거합니다. 기관이 보일 수 있을 만큼만 근육을 제거하고 근육이 절차를 방해하지 않도록 합니다. 스트랩 근육을 절개할 때 주변 혈관에 흠집이 나지 않도록 하는 것이 특히 중요합니다.흠집은 출혈에 이차적으로 부피 고갈을 유발할 수 있으며, 따라서 필로카르핀은 타액 분비 유도에 효과적이지 않습니다. 계속 진행하려면 스트랩 근육을 기관에서 멀리 반사하여 후두, 기관 및 갑상선을 시각화합니다. 기관이 위에 있는 조직에서 떨어져 있는지 확인합니다.마지막으로 갑상선보다 아래쪽인 기관을 메스가 아닌 작은 절개 가위를 사용하여 수평으로 절개합니다. 이 기도가 특허를 받았고 액체가 없는지 확인하십시오. 타액 채취를 위해서는 먼저 입 근처의 테이프를 제거한 다음 해부 단계를 45도로 기울여 타액의 흐름을 두개골로 유도합니다.다음으로, 29게이지 1/2인치 바늘이 달린 0.5ml 주사기를 사용하여 복강내 필로카르핀 주사를 투여합니다. 그런 다음 타이머를 시작합니다. 여러 개의 마우스를 주입하는 경우 보조자의 도움을 받아 신속하게 작업하십시오.그런 다음 표준 집게를 사용하여 입을 벌리고 모세혈관을 제자리에 놓습니다. 몇 분 안에 침 구슬이 형성되어야 합니다. 모세혈관의 한쪽 끝을 타액에 넣고 다른 쪽 끝을 해부 단계 아래에 위치한 수집 튜브에 넣습니다.필요에 따라 튜브의 위치를 조정하여 타액을 추출합니다. 점액이 흡입구를 막을 수 있으므로 점막 조직과의 접촉을 피하십시오. 주사 시점부터 12분 동안 타액을 모으십시오.장(요)루는 전체적으로 투명해야 합니다. 마우스에 침 기능이 저하된 경우 P200 마이크로피펫을 사용하여 입에서 수집 튜브로 액체를 전달합니다. 항상 각 마우스에 다른 튜브나 팁을 사용하십시오.모든 수집을 완료한 후 수집 용기의 무게를 다시 측정합니다. 이산화탄소 질식으로 마우스를 안락사시킨 후 조심스럽게 개흉술을 하고 마우스를 누운 자세로 해부 현미경 스테이지에 놓습니다. 그런 다음 원래 수술 부위에서 땀샘의 위치를 변경합니다.8배 확대 하에서 주요 땀샘, PG, SMG 및 SLG를 시각화합니다. PG는 확산되며 SMG 및 SLG 측면에 배치됩니다. PG를 먼저 해부합니다.집게로 PG의 꼬리를 잡고 기본 구조에서 당겨 빼냅니다. 부드러운 장력으로 만든 다음 해부 가위로 PG의 머리를 자릅니다. 다음으로, 집게로 기관단총을 둘러싼 캡슐을 부수십시오.그런 다음 왼쪽과 오른쪽 기관단총을 부드럽게 분리합니다. 다음으로, 주변의 비선 조직에서 SMG의 등쪽 측면을 제거합니다. SMG를 제거하려면 집게로 Wharton의 덕트를 조이고 해부 가위로 덕트를 자릅니다.SLG는 SMG의 상측면 측면에 있습니다. 두 땀샘을 분리하려면 별도의 집게로 각각을 잡고 땀샘 사이의 조직 평면에 하나의 타인을 배치합니다. 그런 다음 천천히 긴장을 조성하면 두 땀샘이 점차 분리됩니다.선조직을 분리한 후 즉시 채취 혈관의 무게를 다시 측정합니다. 분석을 위한 양성 대조군으로, 마우스 SMG에 방사선을 조사하고 대조군과 비교했습니다. 6.85 회색에서 4분획을 방사선 조사한 지 2주 후, 타액 기능이 현저히 감소했다.총 타액 분비와 분비선 습윤 중량으로 정상화된 분비물 모두 타액 기능 능력이 감소한 것으로 나타나 분석의 민감도를 입증했습니다. 다음으로 기관단총을 해부했습니다. 그들은 고정, 절단 및 염색 될 수 있습니다.헤마톡실린(Hematoxylin)과 에오신 염색(eosin staining)을 사용하여 필로카르핀 자극이 있거나 없는 전체 구조를 비교했습니다. 또한, 조직은 막 나트륨-염화칼륨 수송체인 NKCC1에 대해 면역 염색되었습니다. 두 염색 모두에서 조직은 필로카르핀 자극에 관계없이 유사한 세포 형태를 보였습니다.이 비디오를 시청한 후에는 필로카르핀 자극으로 쥐의 타액 기능을 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 일단 숙달되면 이 전체 기술을 한 시간 이내에 완료할 수 있습니다. 이 방법을 통해 타액 연구자는 전체 타액을 수집하여 샘 기능을 정량화하고 세 가지 주요 타액선을 깨끗하고 재현성 있게 분리할 수 있습니다.특히 두 개 이상의 마우스로 이 절차를 시도하는 동안 빠르게 움직이고 올바른 시점에서 타액 수집을 종료하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라 전체 타액에서 구성 및 효소 활성을 결정할 수 있으며, 선 조직은 조직학 또는 면역 염색을 위해 처리할 수 있습니다.

murine-salivary-functional-assessment-via-pilocarpine-stimulation

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 cannulation을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 본 실험은 trypan 푸른 솔루션은이 기법을 효과적으로 타겟 선에 혼합을 제공하는 방법을 보여줍니다하고, 침샘의 재생을위한 잠재적인 약물 임상 / 세포 치료 등이 새로운 접근 방법의 신뢰성을 제안하는 다이로 사용됩니다.

와튼의 덕트를 통해 마우스 턱밑 침샘의 Cannulation

성인 태생 포유류의 신경 세포의 기능은 조사의 활성 영역 남아있다. 이온화 방사선은 새로운 뉴런의 탄생을 억제한다. 컴퓨터 단층 촬영 유도 초점 조사 (CFIR)를 사용하여, 특정 신경 전구 인구 입체 해부 타겟팅 이제 성인 신경의 기능적인 역할을 평가하기 위해 사용될 수있다.

초점 방사선 억제와 성인 시상 하부의 신경 발생의 기능 심문

두경부 방사선 요법의 주요 부작용인 타액선 기능 저하로 환자의 삶의 질을 떨어뜨립니다. 동물 모델에서 새로운 치료법의 효능을 입증하는 것은 임상 전환 전에 전제 조건입니다. 이 프로토콜은 쥐의 턱밑샘에 대한 후향 투여 및 국소 방사선 조사에 대해 설명합니다.

타액 기능 저하의 쥐 모델에서 Retroductal 턱밑 글 랜드 점적 및 현지화 된 분획 조사

우리 쥐 피로와 같은 동작을 유도하는 대상 주변 조사를 사용하는 방법을 설명한다. 선택한 비 살상 조사 선량은 자발적 휠 실행 활동 주일간 감소로 이어집니다.

주변 방사선 조사에 의해 유도 된 피로의 마우스 모델

침 샘 hypofunction는 자가 면역 질환과 방사선 치료의 빈번한 결과 이다. 이러한 질병 마우스 모델에서 침 샘 기능의 재현 평가 기술 도전 이다. 여기, 쥐에 타 액 생산의 정확 하 고 재현 가능한 측정을 위한 간단한 방법을 설명 합니다.

쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법

Submandibular 동맥을 지역 약물 전달 및 새로운 치료제의 개발에 대 한 이해 침 샘 생물학에서입니다. 선물이 배달 정확성과 실험의 재현성을 향상 시키는 업데이트 및 상세한 retroductal 주입 프로토콜. 여기에 소개 하는 응용 프로그램은 고분자 나노 입자의 배달.

Retroductal 나노 Murine Submandibular 동맥에 주입

3 차원 유기 typic 문화권을 사용 하 여 타 액 선의 형태학 및 기능적인 마커를 시각화 하는 것은 방사선을 따르는 조직 손상의 기계 장치에 새로운 통찰력을 제공할 수 있습니다. 여기에서 설명 하는 프로토콜은 이온화 방사선에 노출 되기 전에 섹션, 문화, 방사선, 얼룩 및 이미지 50-90 μ m 두께의 타 액 선 섹션에 관한 것 이다.

하 악 및 파 타 액 땀 샘에서 유기 유형 배양의 방사선 치료는 생체 내 특성의 핵심

면역형광 이미징은 복잡하고 시간에 따라 달라지는 생물학적 과정을 단 한 번의 스냅샷으로 관찰할 수 있는 능력에 제약을 받습니다. 이 연구는 정밀하게 절단된 쥐의 턱밑샘 절편에 대해 수행된 실시간 이미징 접근 방식을 간략하게 설명합니다. 이 접근법을 통해 항상성 중 세포-세포 상호 작용과 재생 및 복구 과정을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

Ex vivo Live Cell Imaging을 통한 타액선의 세포 간 상호 작용 조사

여기서는 뇌졸중 후 기관절개술 환자의 혈관성 침낭 치료를 위해 초음파 지도 하에 화염 침술을 분비선 또는 근육층에 적용하는 프로토콜을 제시합니다.

기관절개술 환자의 설류증 치료를 위한 초음파 유도 화염침술

앞부분 구획 근육에 신경근육학 전기 자극을 murine 모델 (NMES), 안전하고 저렴한 임상 양상은 설명되어 있습니다. 이 모델은 마우스로 타겟 및 특정 근육의 수축을 도출하도록 의도하기위한 목적으로 즉시 사용할 임상 장치 수정의 장점이 있습니다.

신경근육학 전기적 자극에 의​​해 근육 트레이닝의 Murine 모델

학습하세요 필로카르핀 자극을 이용한 murine 침샘 기능 평가 방법으로, 기관절개술과 침 수집 및 침새 절제 기술을 포함합니다. 이 프로토콜은 구강 건조증과 침 과다분비 연구에 활용됩니다.

Pilocarpine 자극 다음 통해 murine 침 기능 평가 분류 한 방사선

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