Name: Clostridium Perfringens 독성 연구를 마 취 특정 병원 체 무료 닭에 합자 장 루프 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 21 s
Description: 배우세요 마취된 SPF 닭의 장 결찰 루프 수술법으로 Clostridium perfringens 독성을 비교 분석하는 방법입니다. 이 기술은 동물 실험 수를 크게 줄이면서 장내 병원체 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 작품 대학교 드 몬트리올의 수의학의 학부에서 가금류 연구 (M. Boulianne)에 자에 의해 지원 되었다. 박사 Boulianne 및 부모 모델 개발. 박사 Boulianne 및 부모는 수술을 수행. 박사 화상 마 취 프로토콜을 개발에 도움. 박사 부모 비디오를 편집 하 고 원고를 썼다. Drs 번즈, 원고를 편집 하는 Desrochers 및 Boulianne.

라이브 동물 사용과 모든 절차의 학부의 수의학, 대학교 드 몬트리올 윤리 위원회에 의해 승인 되었다 (CÉUA, '위원회 회의 d' éthique 드 데 동물 ').
1입니다. 수술 전 고려 사항
<ol><li>10 주 오래 된 수술에 대 한 특정 병원 체 자유롭게 (SPF) 레그 닭을 선택 합니다. 참고: 자신의 체중 1.0과 1.2 k g 사이 여야 합니다.</li>
	<li>피드를 빈 창 자 절차 이전 12 h를 철회 한다.</li>
	<li>수술 전에 전신 마 취에 의해 확인 하는 프로토콜을 다음에서 닭을 놓습니다. Premedicate 각 치킨 midazolam의 근육 주사 (IM)으로 수술 하기 전에 15 분 1 mg/kg 및 butorphanol 4 mg/kg. 반복, 모든 4 h butorphanol 주사 4 mg/kg IM 또는 호흡 패턴 변화와 주파수 마 취 동안 증가 하는 경우. 전신 마 취에 대 한 모든 절차 동안, 1.5와 intratracheal 튜브 2.5% 농도에서 isoflurane를 관리 합니다. 참고: 진정 및 진통에 대 한 premedication의 사용으로 그들은 것입니다 크게 마 취의 깊이 향상, 필요한 모든 절차 동안, 마 취약의 수량을 줄일 뿐 아니라 통증 수준을 제어 하는 연구원을 가능 하 게 좋습니다.</li>
	<li>체온, 심장 박동 및 심전도 (ECG), 호흡 속도 리듬, 산소 포화, 만료 된 이산화탄소 (CO2)과 신경학 적 반사를 기록 하 여 마 취를 모니터링 합니다. 참고: 모든 절차를 통해 이러한 매개 변수를 모니터링 하는 사람이 할당 되어야 합니다.</li>
	<li>수술 절차를 통해 무 균 원칙을 따릅니다. 외과 의사와 보조 외과 의사 드레스 멸 균 가운, 장갑, 마스크와 보호 고글 기관 수술 프로토콜에 따라 확인 합니다. 외과 의사 손톱과 각 손가락 표면에 중점을 두고 팔꿈치까지 액체 gluconate 임신 살 균 브러시와 손을 스크럽 확인 합니다.</li>
	<li>살 균 제와 수술 기구를 소독.</li>
</ol>2. 외과 사이트 준비
<ol><li>첫째, 수동으로 부드러운 견인 복 부에서 깃털 제거 합니다.</li>
	<li>브러시로 액체 gluconate 세제 임신 불 임 수술 사이트 스크럽. 부드럽게 센터에 다시 오는 없이 5 분의 총 접촉 시간에 대 한 밖으로 센터에서 피부를 문질러.</li>
	<li>액체 gluconate 솔루션와 이소프로필 알코올 살 균 gauzes를 사용 하 여 외과 사이트에 3 다른 구절을 수행 합니다. 참고: 통과 수술 사이트에 소독 되지 않은 지역에서 오염을 피하기 위하여 국경에 외과 사이트의 중간에서 시작 해야 합니다.</li>
	<li>닭고기에 메 마른 외과 용 드 레이프를 놓습니다.</li>
</ol>3. 복 부 구멍에서 작은 창 자를 추출
<ol><li>외과 용 드 레이프가 위로 외과 사이트의 피부 노출에 incise.</li>
	<li>메스 칼 날 #3 ' L' 모양의 낮은 중간 절 개를 수행 하 여 피부를 incise.<ol>
<li>첫 번째 절 개 흉 골에 꼬리 1 cm를 시작 하 고 마지막 1 cm는 cloaca 두개골에서.</li>
		<li>첫 번째 절 개에 수직인 두 번째 절 개를 수행 합니다. 첫 번째 절 개의 꼬리 끝에서 시작 하 고 골반 라인을 따라 복 부의 왼쪽에 5 cm를 계속. 참고:이 오프닝 플랩 내장의 쉽게 추출 수 있도록 만들어집니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수술이 위, 복 막 및 복 부 구멍을 열고 같은 'L' 모양 패턴으로 복 부 근육을 잘라. 참고:이 공기 낭을 노출 합니다. 창 자는 이러한 구조 아래 있습니다. 공기 주 머 니 나 gauzes 건조와 절차를 통해 가능한 파열을 피하기 위해 멸 균 식 염 수 0.85% 포화와 습도 해야 합니다.</li>
	<li>삽입 시 시 해 spay 왼쪽된 복 부 벽을 따라 복 부 구멍에 연결 하 고 복 부 공기 낭 주위에 방법을 작동.</li>
	<li>부드럽게 내장 exteriorize와 수술 필드에 이것을 밖으로 확산. 참고: 내장 자주 절차를 통해 메 마른 염 분 0.9%를 분사 하 여 습도 유지 합니다. 또한, 멸 균 식 염 수와 습도 gauzes 건조를 피하기 위해 창에 배치할 수 있습니다.</li>
	<li>건조 멸 균 거 즈를 사용 하 여 내장을 공장 노출 수동 견인에 의해 작은 창 자 밖으로 조심 스럽게 잡아 당겨. 참고: Mesenteric 선박 허약한이 고 과도 한 긴장 그들 장 허 혈 성 병 변으로 이어질 수 있습니다 그리고 절차의 결과 크게 손상 파열 될 수 있습니다.</li>
</ol>4입니다. 장 루프의 제작
<ol><li>루프 제 1의 창조입니다.<ol>
<li>장소는 polyglactin multifilament 합성 흡수 소재 주요 mesenteric 혈관의 합자를 피 함으로써 인접 공장에서 간단한 합자.</li>
		<li>장소는 원심 합자 인접 합자에서 2 cm. 참고: 간단한 합자 multifilament 봉합 사 물자로 만든 연금술 세그먼트를 만드는 창 자를 따라 배치 됩니다. 스키마 (그림 1) 모든 합자의 위치를 설명합니다. 인접 하 고 원심 합자 구분 2 cm 루프에 의하여 이루어져 있다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Interloop 제 1의 창조입니다.<ol>
<li>장소는 간단한 합자 aborally 루프 no.1의 원심 합자를 0.5 c m. 참고: 연속 루프, 사이 있다 interloops 1 cm, 즉 세그먼트는 루프 간의 물리적 분리를 만들기. 아마 다른 하나의 루프에서 교차 오염에의 가능한 위험 감소, 간단한 합자 interloop (0.5 cm 2 인접 루프의 원심 및 인접 합자)를 가운데 배치 됩니다. 이 인접 한 루프의 합자를 도달 하는 루프에서 가능한 유출 된 오염 물질의 위험을 줄일 수 있습니다. 이 세그먼트는 필수 되지 않습니다 하지만 교차 오염의 위험을 줄일 것 이다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>후속 루프와 interloops의 창조입니다.<ol>
<li>4.1 및 4.2 원하는 루프의 수를 단계를 반복 합니다. 참고:이 실험에서 9 루프와 8 interloops 창조 되었다. 총 길이 26 cm를 도달 했다. 연구에 따라 루프의 수를 조정할 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 루프에 Clostridium perfringens 긴장의 주입
<ol><li>루프 1 호에 병원 체는 무 균 주사기와 바늘 26 G 주사. 부드럽게 45 ° 각도로 내장의 antimesenteric 쪽에 바늘을 삽입 합니다. 참고:이 실험에서 0.2 mL의 두뇌 심 혼 주입 (BHI) 1 x 106 CFU (콜로 니 형성 단위) C. perfringens 의 중간 로그 성장 단계에 포함 된 각 루프에 주입 했다. 5 다른 긴장 5 다른 루프에 주입 했다 고 아무 박테리아 (살 균 BHI), 교대로 반복 되는 병원 균 살 균 BHI 루프를 포함 하는 부정적인 제어 루프를 남은 4 주입 했다.</li>
	<li>5.1 모든 루프 삽입 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>부드럽게 공기 낭 아래 복 부 구멍의 지 면에서 장로 교체 합니다.</li>
</ol>6입니다. 복 부 구멍의 폐쇄
<ol><li>복 막과 복 부 근육의 봉합입니다.<ol>
<li>Polyglactin multifilament 합성 흡수 소재를 사용 하 여 간단한 연속 봉합 패턴으로 복 막 및 복 부 근육 (단계 3.3에서에서 만든) 골반을 따라 봉합.</li>
		<li>복 막과 흉 골에서 복 부 근육은 cloaca 봉합 (단계 3.3에서. polyglactin multifilament 합성 흡수 소재를 사용 하 여 간단한 연속 봉합 패턴으로.</li>
	</ol>
</li>
	<li>피부 봉합입니다.<ol>
<li>polyglactin을 사용 하 여 multifilament 합성 재료와 간단한 연속 봉합 패턴 단계 3.2에서 골반을 따라 피부 절 개를 닫습니다.</li>
		<li>Using 동일한 multifilament 합자 재료와 간단한 연속 봉합 패턴, 3.2 단계에서 만든 cloaca 흉 골에서 피부 절 개를 닫습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7입니다. 결론
<ol><li>수술 절차 후 감염 시간 동안 동물 통증을 최소화 하기 위해 진통제의 적절 한 사용과 일반 마 취에서 닭을 유지. 적절 한 마 취 수준 보장 하기 위해 마 취 모니터링을 계속 합니다.</li>
	<li>원하는 감염 시간 후 전신 마 취하에 자 궁 경부 전위에 의해 닭 고통 없이 안락사. 참고:이 절차에 대 한 C. perfringens 병원 성 긴장으로 미세한 병 변의 유도 하기 위해 필요한 시간 7 h 했다.</li>
	<li>메스 블레이드 #3, 0.5 cm 1 cm 긴 루프 섹션을 잘라내어 10% 포 르 말린 고정 숙박 및 추가 histopathological 분석에.</li>
	<li>같은 메스 칼 날 나머지 루프 섹션을 잘라내어 그들의 유전 특성에 대 한 각 루프 추가 bacteriologic 분석에서 C. perfringens 종자의 격리에 대 한 살 균 microcentrifuge 튜브에.</li>
	<li>모든 루프 사이 메스 블레이드를 변경 하 여 모든 루프에 대 한 단계 7.2와 7.3 단계를 반복 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

Clostridium perfringens Clostridium 남과 어울리지 않 는, 등 다양 한 장 병원 체로 인 한 질병의 병 인 호스트 병원 체 상호 작용을 공부 하 고 수많은 종에 창 자 루프 모델 설명 되었습니다. 살 모 넬 라 enterica7,,913,,1415. 그것은 또한 점 막 면역 응답16, 장 병원 체11 배설 세균성 독 소를 중화 하 고10 장 질병을 방지 하기 위해 백신 후보자를 평가 하는 항 체의 효능을 분석 하 사용 되었다 . 그러나, ...

인간과 동물에 영향을 미치는 전염병 연구 동물 모델의 사용 규제 정교를 방지 하거나 질병1치료 전략으로 특정 조건 또한의 병 독성 요인 평가에서 중앙 도구입니다. 동물 모델을 사용 하 여 다양 한 질병 연구의 수많은 장점에도 불구 하 고이 연습에 대하여 윤리적인 관심사는 발생 하는. 연구팀은 중요 하 고 유효한 결과 가져오는 동안 동물 사용을 최소화 해야 합니다. 3 Rs 원칙 (대체, 감소 및 수정)의 개념은 복지 문제 같은 재판에서 해결 했다 보장 하기 위해 정교 했다. 닭 괴 사 성 장 염 연구, 치킨 모델 vivo에서 병 인, 예방, 및이 조건2,3,,45의 치료를 조사 하는 데 사용 됩니다. C. perfringens 들고 NetB 독 소6, 등 특정 독성 요인의 병원 성 긴장 닭7에서 괴 사 성 장 염을 일으킬 관리 됩니다. 교체 원리가 이다, 따라서, 이러한 독성 요인으로 중요 한 다른 동물 종에 되지 않을 수도 있습니다 이러한 경우에 달성 하기 어렵습니다. 대부분 닭에서 괴 사 성 장 염에 대 한 위험 요소, coccidiosis 등의 조합을 사용 하 여 모델과의 C. perfringens2. 의 많은 수를 포함 하는 국물 문화 gavage 뒤 괴 사 성 장 염을 유발 하는 다이어트를 변경 이러한 모델에 많은 닭, 질병을 유발 한다 고 사망률 같은 재판8, 따라서 동물 연구에서 감소와 상세 원칙에 대 한 우려를 제기에 중요할 수 있습니다.
장 합자 루프 모델 원리 감소 및 구체화 장내 병원 균에 의해 유도 된 질병의 연구에 대 한 바람직한 대안입니다. 이 모델에서 '루프' 라는 장 세그먼트 병원 체는 혼자9 주입 될 수 있는 독립적이 고 밀폐 구획을 형성 하는 창 자를 따라 또는 백신 후보자 등 다른 분자와 연자를 배치 하 여 만들어집니다. 10 , 11. 관심의 병원 체 장 세포와 가까운 접촉에 배치 되 고 몇 시간 후 감염 시간, 장 샘플 추가 분석을 위해 재기 될 수 있다. 이 같은 동물에서 여러 치료 및 제어 그룹의 사용을 수 있습니다. 그룹 간의 차별의 힘을 증가 하 고 구강 재판에 비해 필요한 닭의 수를 감소, 반복된 측정 모델 통계 분석을 수행할 수 있습니다. 또한, 수술 절차와 후속 감염 시간 연속 전신 마 취 및 진통, 따라서 동물 고통 최소화에서 수행 됩니다. 폐쇄 루프 ligations 호스트 숫자를 줄이고 동물 연구에서 더 인간적 시스템을 만들기 위한 이상적인 서식 파일입니다.
장 합자 루프 모델 송아지, 토끼 및 쥐2,9, 등 다양 한 종에 잘 설명 되어 있지만 제대로 닭7에 설명 된. 이 수술 모델의 최적의 사용에 대 한 적절 한 기술과 실행 장 무결성에 손상을 피하기 위해 합자 장 루프의 창조를 위해 필수적입니다. 이 원고의 목표 치킨 모델에 여러 장 루프의 생성에서 단계 메서드를 설명 하는 것입니다. 이 기술은 정확한 절차는 프로젝트의 성공을 위해 필수적으로 외과 의사의 기술과 경험에 의해 제한 됩니다.

<table><tbody><tr><td>EZ-Scrub 747</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td></td><td>4% 클로르헥시딘 글루코네이트 세제 함침 멸균 브러시. 사용 가능한 카탈로그 번호가 없습니다. 웹 주소: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes&nbsp;</td></tr><tr><td>이소프로필 알코올 70% USP 4 L</td><td>상업용 이소프로필 알코올</td><td>P016IP70</td><td>웹 주소: http://www.comalc.com/products/</td></tr> <tr><td>Chlorexidine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>282227-1G</td><td>클로르헥시딘 글루코네이트 용액은 4%로 희석해야 합니다. 웹 주소: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ obChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2Z WQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE</td></tr><tr><td>수술용 드레이프 스몰 (27 인치 x 24 인치) with 3 x 6 inch 창호</td><td>수의학 전문 제품</td><td>32724</td><td>웹 주소: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog. detail&productgroup_id=15</td></tr><tr><td>메스 블레이드 #3</td><td>Swann-Morton</td><td>301</td><td>웹 주소: https://www.swann-morton.com/product/16.php</td></tr><tr><td>멸균 식염수 NaCl 0.9%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8776-100ML</td><td>웹 주소: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&region=CA</td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Ethicon</td><td>D9003</td><td>Polyglactin 다중 필라멘트 흡수성 봉합사 재료. 웹 주소: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture</td></tr><tr><td>주사기 1ml(26G 바늘</td><td>포함) Becton Dickinson and Company</td><td>329652</td><td>웹 주소: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes</td></tr><tr><td>Brain Heart Infusion</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1104930500</td><td>웹 주소: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&region=CA&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1</td></tr><tr><td>Eppendorf tube</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9661-500EA</td><td>마이크로 원심분리기 튜브. 웹 주소 : http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ obChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh 30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE</td></tr><tr><td>포르말린 용액, 완충 중성, 10 %</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>HT501128-4L</td><td>비율 조직 : 1의 포르말린 : 적절한 고정을위한 10. 웹 주소: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&region=CA</td></tr><tr><td>Clostridium perfringens strains</td><td>Universit&eacute; de Montr&eacute; al, Chaire en recherche avicole</td><td>N/A</td><td>각 실험실에 특화되어 있으며, 해당 저자에게 요청 시 제공됩니다</td></tr></tbody></table>.

clostridium perfringens 독성 연구를 마 취 특정 병원 체 무료 닭에 합자 장 루프 모델

A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence

괴 사 성 장 염은 다양 한 비보에 감염 모델을 사용 하 여 닭에 공부 했다. 대부분의 gavage 또는 Clostridium perfringens를 사용 하 여 피드를 통해 관리 predisposing 요소, coccidiosis, 다이어트, 등의 조합을 사용 합니다. 이러한 모델에서 독성 연구에 대 한 여러 C. perfringens 긴장의 비교는 많은 중요 한 결과 얻기 위해 호스트 필요 합니다. 연구의 과정에서 사망률 따라서 연구에서 동물 복지에 관한 윤리적 우려를 제기 하는 실험 모델에 따라 높은 수 있습니다. 적은 동물 공부 병 인, 아직 제공 하 고 통계적으로 중요 하 고 유효한 결과 요구 하는 새로운 감염 모델의 개발 연구에서 동물 사용 감소에 중요 하다. 쥐, 토끼, 송아지 등 다양 한 종에서 clostridial 감염 공부 하 장 합자 루프 모델 사용 되었습니다. 합자 루프 세그먼트를 만드는 수술 절차에 따라 C. perfringens 긴장 박테리아와 장 점 막 사이의 긴밀 한 접촉을 설정 하는 루프에 직접 주입 됩니다. 소장 및 luminal 내용을 샘플 몇 시간 후 절차의 종료에 찍힌다. 여러 세균성 긴장 따라서 실험에서 필수 과목의 수를 줄이고 각 동물에 주사 될 수 있습니다. 또한, 절차는 동물 통증을 줄이기 위해 전신 마 취 아래 수행 됩니다. 닭,이 모델을, 때문에 적은 동물 필요 없음 predisposing 요소, 질병을 유발 하는 데 필요한 통증 진통제에 의해 제어 됩니다 C. perfringens 스트레인 pathogenicity 비교할 구강 관리 보다 더 적절 한 것 . 장 합자 루프 모델은 닭에 제대로 설명 하 고 표준화의 최적의 사용을 위해 필수적 이다. 이 원고는 닭에 수많은 장 합자 루프를 만드는 데 필요한 모든 단계를 제공 하 고 유효한 결과 얻기 위해 중요 한 포인트에 대 한 정보를 제공.

9 장 루프와 8 interloops의 회로도 그림 1에 표시 됩니다. 이 모델에서는 총 9 루프와 8 interloops 간단한 합자 함께 만들어집니다. 2cm 근 합자에서 측정에 의해 인접 하 고 원심 합자 루프에 의하여 이루어져 있다. 두 개의 인접 한 루프는 1 cm의 interloop으로 구분 됩니다. 루프는 합자에서 누설에 의해 사이 상호 오염을의 가능한 위험을 감소, interloop 합자 원심 합자를 2 인접 루프의 인접 합자 중간 방식으로 배치 됩니다. 연구의 요구 사항에 따라 루프의 수를 조정할 수 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57523/57523fig1.jpg"> 그림 1: 합자 장 루...

여기 치킨 소장에서 '장 합자 루프'를 수술로 만들려고 프로토콜 선물이. 이 절차는 여러 Clostridium perfringens 긴장의 독성에서 제자리에 단일 호스트에서의 비교에 대 한 수 있습니다. 이 메서드는 현저 하 게 일반적으로 비슷한 vivo에서 실험에 필요한 닭의 수 감소.

Clostridium Perfringens 독성 연구를 마 취 특정 병원 체 무료 닭에 합자 장 루프 모델

Necrotic enteritis was studied in chickens using various in vivo infection models. Most of these use a combination of predisposing factors, such as ...

이 방법은 치킨 괴사 장염 연구의 분야에서 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 특정 클로스트리듐 퍼프린지균균의 독성을 비교하는 것과 같이 이 질병을 일으키는 긴장. 이 기술의 주요 장점은 유사한 앰비보어 실험에 일반적으로 필요한 닭의 수를 현저하게 줄이라는 것입니다.이 방법은 클로스트리디움 퍼프린지 균주의 독성 잠재력에 대한 통찰력을 제공 할 수 있지만 클로스트리듐 디피실 또는 살모넬라 장과 같은 다른 장 병원균에도 적용 될 수 있습니다. 일반적으로, 이 방법에 새로운 개별은 외과 적 절차가 특정 훈련을 필요로하고 봉합과 같은 기술을 습득 한 사람들에 의해 수행되어야하기 때문에 투쟁한다, 실험 전에 기술. 10주 된 특정 병원체 프리 레그혼 닭을 마취한 후 중요한 측정을 위해 모니터를 설치하고 부드러운 견인력으로 복부에서 깃털을 수동으로 제거하기 시작합니다.다음으로, 부드러운 강모 브러시로 클로레시딘 글루코네이트를 사용하여 수술 부위를 문질러보십시오. 코스를 뒤집지 않고 5분 동안 중앙에서 주변으로 피부를 부드럽게 문질러주세요. 그런 다음, 살균 거즈를 사용하여 클로르헤시딘 글루코네이트 용액과 이소프로필 알코올로 수술 부위에 세 개의 교대 통로를 수행합니다.다시 말하지만, 중앙에서 주변으로 이동한 다음 닭을 휘감습니다. 수술 부위 위에 드레이프를 열고 3번 메스로 L자형 로우미드라인 피부 절개를 하고, 흉골에 1센티미터 의 포옹을 시작하고, 1센티미터의 두개골에서 클로이차까지 끝납니다. 다음으로, 첫 번째 절개 끝에서 시작하여 두 번째 절개를 수행하여 첫 번째에 수직으로 L 자개를 계속하고 골반 라인을 따라 복부의 왼쪽에 5 센티미터를 계속합니다.이 개구부에서는 내장을 쉽게 추출할 수 있습니다. 다음으로 복강에 접근하기 위해 동일한 L자 모양 패턴을 사용하여 복막과 복부 근육을 엽니다. 공기 주머니가 노출되고 식염수 에 젖은 거즈를 사용하여 촉촉하게 유지해야합니다.다음으로, 왼쪽 복벽을 따라 복부 낭 주위의 후크를 작동시켜 복강에 스누크 스페이 후크를 삽입하여 내장을 추출합니다. 그런 다음, 마른 거즈를 사용하여, 부드럽게 제주를 노출장 외부화 계속. 창자를 펼치고 살린을 자주 살포하고 살린에 젖은 거즈로 덮어 촉촉하게 유지하십시오.과도한 긴장이 장 허혈성 병변으로 이어질 수 있는 장간 혈관을 파열시키고 절차의 결과를 크게 손상시킬 수 있기 때문에 장내를 꺼내는 동안 매우 부드러운 것이 중요합니다. 장내를 외형화한 후, 제주눔부터 창자에서 일련의 루프를 만든다. 각 루프는 다른 치료에 사용할 수 있습니다.근위 제주눔에서는 주요 막종 혈관의 합자를 피하면서 폴리글루타민 멀티필라멘트 합성 흡수성 물질로 간단한 합자를 배치한다. 다음으로, 첫 번째 루프를 완료하기 위해 근위 합자에서 2센티미터 떨어진 불강 합자를 배치합니다. 모든 근위 및 단면 합자 약 2센티미터 간격이어야 합니다.각 합자 쌍은 밀폐 세그먼트인 루프를 만듭니다. 다음으로 루프 사이에 인터루프 또는 창자 세그먼트를 만듭니다. 간단한 합자 반 센티미터를 첫 번째 루프의 단위 합자에 배치합니다.이 합자는 인터루프의 중간에 있으며 루프 간의 교차 오염이 감소합니다. 이제 인터루프 합자에서 반 센티미터 떨어진 다른 루프를 만드는 패턴을 계속 합니다. 여기서는 내장 26cm를 커버하는 9개의 루프와 8개의 인터루프가 만들어집니다.필요에 따라 루프 수를 조정할 수 있습니다. 다음으로 클로스트리디움 퍼프린지균의 균주를 루프에 주입하는 것을 진행합니다. 루프의 항-메젠트 측에, 45도 각도로 26 게이지 바늘을 사용하여 0.2 밀리리터의 BHI 용액을 주입하여 중간 성장 단계에서 100만 개의 콜로니 형성 단위를 함유한다.이 상황에서 9개의 루프가 있는 5개의 다른 균주는 차량만으로 주입된 개입 루프와 함께 교대루프에 주입됩니다. 병원균을 주입 한 후, 부드럽게 공기 낭 아래 복강의 등대 영역으로 내장을 교체. 그런 다음 복강을 닫습니다.폴리글루타민 멀티필라멘트 합성 흡수성 물질을 사용하여 간단한 연속 봉합추 패턴으로 골반을 따라 복막과 복부 근육을 봉합합니다. 간단한 연속 봉합사를 사용하여 흉골에서 회고에 복막과 복부 근육을 봉합하여 계속하십시오. 다음으로, 폴리글루타민 멀티필라멘트 합성 소재와 심플한 연속 패턴을 사용하여 피부를 가까이에 봉합합니다.첫째, 골반을 따라 봉합한 다음 흉골에서 응고까지 봉합합니다. 절개를 닫은 후 감염 시간 동안 동물의 통증을 최소화하기 위해 진통제를 적절히 사용하여 전신 마취 하에 닭을 유지하십시오. 적절한 마취 수준을 보장하기 위해 마취 모니터링을 계속합니다.본 실험에서 7시간 과 같은 원하는 양의 감염 시간 후에 새를 안락사시키고 장 조직을 수집한다. 숫자 3 메스를 사용하여 반쪽에서 1센티미터 루프 섹션으로 잘라냅니다. 그런 다음, 하룻밤 고정 및 추가 조직 병리학 분석을 위해 섹션을 10 %의 포르말린으로 옮기.그런 다음 동일한 루프에서 동일한 메스 블레이드를 사용하여 루프의 나머지 부분을 잘라내고 박테리아의 분리를 위해 마이크로 융합 된 튜브로 조직을 전달하십시오. 매번 새 메스 블레이드를 사용하여 각 루프에 대해 이 절차를 반복합니다. 주입 후 7시간 후, 대조군 멸균 배지로 주입된 장 루프는 괴사가 없는 그대로 점막 브러시 테두리를 가집니다.세그먼트의 장 층의 온화한 혼잡은 드물지 않습니다. 병원체, 클로스트리듐 perfringens, 빌리 팁팁과 함께 주입 후 7시간 후, 팁을 둘러싼 괴사 진입 부위가 침식됩니다. 그리고 사악한 주변의 괴사 물질, 큰 막대 모양의 박테리아의 클러스터가있다.때때로 괴사는 가난한 절차 실행 때문이고 박테리아에 의해 생성된 병변으로 잘못 해석될 수 있습니다. 말할 줄 이같은 징후는 조직학 단면도에 박테리아가 없다는 것입니다. 또한, 근육층의 혈관은 혈관 혼잡을 나타내는 많은 퇴행성 적혈구의 축적에 의해 심하게 팽창된다.이것은 가능성이 창자에 과도 한 물리적 긴장을 할 리그 했다 계각 된 막연한 혈관에 의해 발생 했다. 허혈성 루프는 외과 적 시술 중에 현미경으로 쉽게 식별 할 수 있습니다. 합자 후 몇 분 후 심한 혈관 혼잡에 따라, 세로사는 정상적인 분홍색 붉은 색칠 대신 어두운 파란색이 될 것입니다.이 비디오를 시청한 후에는 장에 합자를 배치하여 닭 모델에 여러 장 루프를 만드는 방법에 대해 잘 이해해야 합니다. 일단 감염 시간을 제외하고 외과 적 절차를 마스터하면 제대로 수행될 경우 3 시간 이내에 수행 할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안, 고통을 통제하고 수술 부분 및 감염 시간을 따르는 것을 포함하여 모든 절차 도중 생명 징후를 감시하기 위하여 깊은 마취의 밑에 닭을 유지하는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이러한 절차 나 세균 성 격리 와 같은 그들의 방법에 따라, PCR에 의한 유전자 검출과 같은 직선 식별은 초기 주입 된 병원체의 회복 및 식별과 같은 외부 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다. 이 개발 후,이 기술은 클로스트리듐 의 분야에서 연구원을위한 방법을 포장 은 닭에서 괴사 원염을 탐구하는 병인을 perfringens. 살아있는 동물과 함께 일하는 것은 매우 가변적 일 수 있다는 것을 잊지 마십시오.그리고 닭의 지속적인 마취 모니터링과 같은 예방 조치는 항상이 절차를 수행하는 동안 수행해야합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 양의 회장에서 '창자 고리'를 catheterizing위한 새로운 수술 방법을 설명합니다. 일단 동물이 수술에서 회복하고 항생제와 진통제를 통과해야 여러 치료는 카테터를 통해 루프에서 직접 입금하실 수 있습니다.

Ruminants에 창자 루프 Catheterization

인간 패혈증 연구에 유용한 도구로 cecal 내고 주사의 마우스 모델입니다.

Cecal 내고의 찔린 절차

패혈증은 미생물 감염으로 인한 전신 염증 반응 증후군을 참조하고, cecal 내고 주사 (CLP)을 되나 수술 기법에 의한 시뮬레이션이 될 수 있습니다. 여기 치료 대리인을위한 약초를 구분할 CLP 유발 동물 모델을 사용하는 방법을 설명합니다.

소설 허벌 요법을 평가하는 패혈증의 동물 모델의 사용

출처: 윈스턴, J. A. 외 임상적으로 중요한 Clostridium difficile 균주 R20291의 Cefoperazone 처리 마우스 모델.  J. Vis. 경험 (2016)이 영상은 항생제 사전 처리된 쥐에게 클로스트리듐 디피실 포자를 접종하여 병원 및 숙주 반응 연구를 위한 쥐 감염 모델을 구축하는 절차를 시연합니다.

클로스트리듐 디피실 감염의 마우스 모델 구축

이 비디오는 마우스 모델의 장 투과성을 연구하기 위한 회장 루프 모델의 생성을 보여줍니다. 이 방법은 상피 장벽 기능과 그에 따른 면역 반응을 이해하기 위한 라이브 모델을 제공합니다.

마우스 회장 루프 모델: 마우스의 장 투과성을 연구하기 위한 수술 모델

이 비디오에서는 마우스 근위 결장 루프 또는 pcLoop 세그먼트를 생성하는 수술 절차를 설명한 다음 장 상피 투과성을 연구하기 위해 세그먼트에 형광 마커를 내강 내 주입하는 방법을 설명합니다.

Mouse Proximal Colon loop Model의 생성: 내강내 주사 후 혈청 내 형광 마커를 검출하여 근위 결장 루프를 생성하고 장 투과성을 측정하는 수술 절차

Citrobacter rodentium 감염이 장의 세균 감염을 공부뿐만 아니라 마우스의 면역 반응 및 대장염를 개최 할 수있는 중요한 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 장벽 무결성, 병원체 부하와 손쥐 전염성 대장염에 대한 병원체 및 호스트 공헌의 철저한 특성을 허용하는 조직 학적 손상의 측정을 설명합니다.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; 마우스 모델 : 감염성 대장염에 대한 공부 병원체 및 호스트 기부

실험 패혈증은 맹장 결찰과 천자 (CLP) 방법을 사용하여 마우스에서 유발 될 수있다. CLP - 유도 패혈증의 컨텍스트에서 생체에 autophagy를 평가하는 현재의 프로토콜이 여기에 제시된다 : (GFP) - LC3 마우스를 사용 autophagy에 측정을위한 프로토콜, 및 전자 현미경에 의해 autophagosome 형성을 측정하기위한 프로토콜.

맹장 결찰 및 마우스에서 autophagy에 공부를 모델로 패혈증 관통 유도

Dysregulated 장 상피 장벽 기능 및 면역 반응은 생리적인 모형의 부족 때문에 제대로 조사되지 않는 선동적인 장 질병의 특징입니다. 여기서는 생체 내 점막 투과성 및 백혈구 모집을 연구하기 위해 잘 혈관화되고 외부화된 장 세그먼트를 사용하는 마우스 장 루프 모델을 설명합니다.

표준화된 장 루프 모델을 사용하여 마우스에서 장 투과성 및 호중구 환전 이동의 기능 평가

이 프로토콜은 패혈증의 마우스 모델에서 맹장 결찰 및 천자 (CLP)의 수술 세부 사항을 제시합니다. CLP는 패혈증의 동물 모델을 만들기 위해 가장 널리 사용되는 기술 중 하나입니다. 따라서 신뢰할 수 있는 연구 결과를 얻으려면 표준화된 CLP 프로토콜이 필요합니다.

패혈증의 맹장 결찰 및 천자 유도 마우스 모델에서 신뢰할 수 있는 바이오마커의 평가

우리는 장 조작을 통해 생성된 수술 후 장폐색의 쥐 모델을 설명합니다. 위장 통과 기능, 병리학적 변화 및 면역 세포 활성화는 수술 후 24시간 후에 평가되었습니다.

수술 후 장폐색 쥐 모델

배우세요 마취된 SPF 닭의 장 결찰 루프 수술법으로 Clostridium perfringens 독성을 비교 분석하는 방법입니다. 이 기술은 동물 실험 수를 크게 줄이면서 장내 병원체 연구에 활용할 수 있습니다.

Clostridium Perfringens 독성 연구를 마 취 특정 병원 체 무료 닭에 합자 장 루프 모델

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