Name: Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: 배우세요 마우스 대동맥류 모델에서 혈관 조영술을 이용한 정량적 마이크로 CT 분석 방법을. 방사선 불투과성 실리콘 고무 관류 기법으로 혈관 직경을 정밀 측정하여 혈관 생물학 연구에 활용할 수 있습니다.

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우리는 방사선 영상으로 그의 지원에 대 한 마크 스미스에 게 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 NIH T32 그랜트 심혈 관 질환 (보아), 미국 심장 협회 (SMC), 및 NIH R35 그랜트 (DKS)에서 학 제 연구에 지원 됩니다.

처리 하는 동물에 대 한 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 메릴랜드, 볼티모어 (동물 프로토콜 번호 0116024)에 의해 승인 되었고 AAALAC 국제 표준에 따라 실시.
1입니다. 시 약의 준비
<ol><li>
헤 파 린
	<ol>
<li>희석 250 µ L 1000의 U/mL 헤 파 린 황산 50 ml의 인산 염 버퍼 5 U/mL의 최종 농도 수 있도록 염 분.</li>
		<li>따뜻한는 heparinized (5 U/mL) 인산 염 버퍼 식 염 수, 37 ° c 설정 물 욕조에 맥 관 구조에 혈액 대체 하 게 됩니다</li>
		<li>필요한 튜브를 연결 하 여 압력 제어 펌프를 준비 하 고 2 빈 10 mL 주사기, heparinized 염 분 버퍼에 대 한 1 및 대비 에이전트에 대 한 1.</li>
		<li>버퍼링 따뜻한 heparinized 인산 염으로 튜브와 압력 펌프의 배관에서 공기 방울을 제거.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
대비 에이전트 참고: 참조 하십시오 테이블의 자료 를 대비 에이전트 키트 성분.<ol>
<li>희석제 비율 1:6 염료를 달성 하는 희석제와 함께 색소 화합물을 혼합.</li>
		<li>사용 (단계 2.3.12), 직전 200 µ L 희석된 색소 화합물의 약 각 5 mL 수를 경화제와 혼합 그들 잘 볼륨 (4%)를 추가 합니다. 참고: 제조업체 보고 작업 시간은 40 분입니다. 실리콘 고무 대비 에이전트 시작으로 치료 대리인의 추가 후에 20 분을 유해 하, 그것은 그것의 주입 직전 솔루션을 준비 하는 것이 중요.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
BAPN 식 수
	<ol>
<li>3 g/L (문학에서 설명한 프로토콜에서 적응)9,,1617의 최종 농도 만들려고 식용 수에 있는 β-aminopropionitrile (BAPN)을 분해.</li>
		<li>일단 그들이 마이크로-중부 대 한 관류의 시간까지 나이의 4 주 쥐의 그룹에 포함 하는 BAPN 식 수 관리</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 수술
<ol><li>
동물 준비
	<ol>
<li>쥐 나이의 3 주에 유아, 12 h 빛/12 h 어두운 주기에, 그들을 유지 하 고 그들을 먹 여 표준 설치류 차 우. BAPN 대우 그룹에 대 한 16-26 주 광고 libitum갓된 BAPN 식 수를 관리 합니다. 표준 음주와 제어 동물 물 광고 libitum제공 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
마 취 기술 참고: CT 분석, 다음 절차에서는 이전 24 시간 수행 됩니다. 수술 절차는 사후 intracardiac 관류에 대 한 표본 준비를 제정 했다.<ol>
<li>100% O2 와 3 %isoflurane 정밀 기화 기를 통해 전달 유도 탱크를 통해 마 취 유도. 마 취 유도 후는 isoflurane 중단 하 고 O2챔버를 플러시. 2-2.5 %isoflurane 1 L/min 코 콘을 통해 O2 의 마 취를 유지 합니다.</li>
		<li>직원을 보호 하기 위해 폐기물 가스 흡착에 대 한 목탄 폐품을 유도 챔버와는 안 면을 첨부 합니다. 유해 자극 (발가락 핀치)에 대 한 응답이 있다는 것을 입증 함으로써 적절 한 마 취 비행기를 확인 합니다.</li>
		<li>수술 트레이 및 필요한 수술 악기의 구성 요원 필드를 준비 합니다.</li>
		<li>동물 수술 필드에 전송 하 고 등 쪽 recumbency에 위치.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 기술
	<ol>
<li>가 위를 사용 하 여, 피부 및 연 조직 overlying 흉 골까지 연장 sternal 노치를 음모 관절 사이에서 피부와 부드러운 조직 통해 중간 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>가 위를 사용 하 여 흉 강 입력 칼 과정에서 격 막에 구멍을 만듭니다.</li>
		<li>가 위를 사용 하 여 양측 복 부 가슴 벽의 격 막 해 부.</li>
		<li>바로 sternal 국경에서 흉 골에서 늑 골을 분리 하는 늑 골 연골을 통해 잘라.</li>
		<li>(근처 칼 과정) 흉 골의 끝에 잘 hemostatic 클램프를 적용 하 고 이동 하는 hemostat cranially 마우스의 머리 위에 배치 됩니다. 이 thymus과 심장, 심 혼 및 중대 한 배 추가 조작에 대 한 노출에서 흉 골을 철회 합니다.</li>
		<li>급격히 심장 및 흉 벽 사이 어떤 부착 해 부.</li>
		<li>미리 로드 버퍼 heparinized 인산 염 (5 U/mL)의 10 mL 주사기에 27-게이지 IV 카 테 테 르 바늘을 연결 하 고 압력 펌프의 튜브에서 공기 방울을 제거 하려면 해당 버퍼와 함께 모든 튜빙을 채우기.</li>
		<li>유체 라인에 거품으로 액체를 준비 하는 동안 주의 작은 혈관의 작성을 방해 수 있습니다. 이 최종 영상에 아티팩트를 소개 하 고 완전 충전에 필요한 볼륨을 변경 절단 선박의 누출에 대비 에이전트를 발생할 것입니다 동물 준비 하는 동안 손상 된 혈관의 수를 제한 합니다.</li>
		<li>왼쪽된 심 실 직각 클램프와 안정 27 게이지 바늘으로 찔린 합니다. 우 심 실 또는 헤 파 린 솔루션 및 혈액을 배출 하는 열 등 한 베 나 카바 incise 즉시. 참고: 헤 파 린은 동물의 죽음 후에 혈관 응고에서 혈액을 방지 하기 위해 항 응고 제로 사용 됩니다.</li>
		<li>2 mL/분 단일 주사기 펌프를 사용 하 여 일정 한 속도로 동물 perfuse Note는 기관의 표시 창백. 정 맥 순환에서 배출 하는 perfusate는 혈액 (약 5-6 mL)의 무료 때까지 관류를 계속 합니다. 펌프를 중지 합니다.</li>
		<li>10 mL 주사기, 좌 심 실에 바늘의 위치를 방해 하지 않도록 주의 복용에서 IV 카 테 테 르 튜브를 분리 합니다.</li>
		<li>즉시 전체 exsanguination 후 5 mL aliquots에 대비 에이전트 솔루션을 분리 하 고이 이번에 경화제를 추가 (단계 1.2 참조). 그들을 잘 섞는다. 10 mL 주사기로 대비 에이전트 믹스의 5 mL을 인출 하 고 그것으로 동물을 perfuse.</li>
		<li>혈관 (동맥 및 정 맥)의 완전 한 작성에 대 한 정 맥 솔루션 종료 볼 수 있다 때 과거 시점 주입을 계속 합니다. 관상 동맥, 폐 동맥, 소장과 간 맥 관 구조에 캐스팅 에이전트의 시각화를 포함 하 여 성공적인 관류의 흔적을 찾고 있습니다.</li>
		<li>대비 에이전트는 실 온에서 약 20 분 후 치료할 것 이다. 치료, 시 필요에 따라 개별 기관, 수확 하 고 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린에 고정. 샘플 마이크로-CT 검사 다음 날에 사용 되지 않는 경우 전체 시체를 수정 합니다. 시체 사용 될 연속적인 일 하는 경우 금속 쟁반에 그들을 놓고 밤새 치료 4 ° C에서 냉장고에 넣어.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 마이크로-CT 스캔 및 매개 변수
참고: 특정 이미지 수집 매개 변수 사용에 기계에 의존 될 것입니다.
<ol><li>관류 55 kVp, 150 µ A의 전류, 2.19, 시스템 확대 요인 및 CCD 카메라 픽셀 범주화 요소 2의 x 선 관 전압을 사용 하 여 마이크로 CT 스캐너를 사용 하 여 다음 날 각 마우스의 계산 된 x 선 단층 촬영 이미지를 취득 합니다. 이 29 µ m의 효과적인 픽셀 크기를 생성합니다.<ol>
<li>마이크로-CT 스캐너 테이블에 부정사 마우스 시체를 얻을 정찰 x-선 검사.</li>
		<li>대동맥의 전체 길이 이미지를 몸통에 57.4 m m (축) x 37.1 m m (transaxial)의 보기의 탐지기 분야 초점.</li>
		<li>2도 및 투영 2800 ms의 당 한 번의 회전 증가와 180 이미지 계획을 취득 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수정 된 Feldkamp 알고리즘;를 사용 하 여 이미지를 재구성 재건된 복 크기는 29 µ m3 x 29 x 29 (슬라이스 두께 = 29 µ m) 여기 사용 하는 소프트웨어에 대 한 복합 3D 시각화 플러그인을 사용 하 여.</li>
</ol>4. 후 처리 및 렌더링
<ol><li>적절 한 소프트웨어를 사용 하 여 DICOM 형식으로 CT 데이터를 변환 합니다.</li>
	<li>동맥 류 존재 여부를 식별 하기 위해 이미지를 분석 합니다. 하강 하는 흉부 대동맥, 대동맥 아치의 넓은 시점에서 부 축 직경을 측정 하 고 복 부 대동맥 앞18 (그림 1)에서 설명한. 참고: 우리의 연구에서 이미지 분석 되었다 2 명의 독립적인 관찰자 (1 눈) 동맥 류 존재 여부를 확인 하는 DICOM 뷰어를 이용 하 여. 부 축 직경 대동맥 아치, 앞에서 설명한19 (그림 1)으로 흉부 대동맥, 그리고 복 부 대동맥을 내림차순의 가장 넓은 지점에서 측정 되었다. BAPN 치료 쥐의 비 aneurysmal 동맥 세그먼트 설립 나이 일치 하는 컨트롤 값으로 정상적인 혈관 직경을 의미 합니다.</li>
	<li>동맥 류는 대동맥 직경 보다 큰 50% 기준 직경의 세그먼트의 지역화 된 또는 확산 팽창으로 정의 됩니다. 위의 측정에 따라이 찾습니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

마이크로-CT 영상 동물 모델에서 혈관 병 리의 매우 상세 하 고 3 차원 개조를 제공 하기 위해 사용할 수 있습니다. 혈관 내 대비 향상 된 미디어의 사용을 통해 향상 된 비 부드러운 조직, 혈관, 루멘 등 그는 강화에서 분화 수 있다. 레이저 도플러, microangiography, 자기 공명 혈관, confocal, 또는 두 광자 현미경으로 조직학 혈관 침대를 평가 하기 위해 사용 될 수 있습니다, 그리고 그들은 일반적으로 연구의 제한 된 영역에 초점 및 2 차원 평가로 제한 됩니다. 마이크로-CT 기본 신생 혈관 생물학의 이해에 도움이 될 수 있습니다 혈관 구조의 상세한 이미지를 얻기의 비용 효율적인 수단을 제공 합니다. 작은 동물을 이미징의 추가 방법에는 vivo에서 마이크로-CT 및 디지털 감산 혈관 포함 됩니다. 마찬가지로 여기서 설명 하는 기술, 마이크로-CT vivo에서 해상도 증가 시킬 exogenous 대비 에이전트에 의존 합니다. Fenestra VC 및 Isovue-370는...

대동맥 해 부의 발생률은1년 당 100000 당 3 경우. 대동맥 해 부 및 aneurysmal 계정 10000 죽음에 대 한 미국에서 매년, 서방 국가2에 있는 모든 죽음의 1-2%. 대동맥 해 부 생리 압력에서 대동맥 벽의 층을 통해 혈액의 전파와 그릇의 내 층에 눈물에 의해 시작 됩니다. 높은 환자 펄스 압력 해 부 및 합병증의 발생률이 증가와 연결 됩니다. 증가 벽 전단 응력 선도 동맥 형성3,4대동맥 벽 확장 연결 됩니다. 대동맥 해 부의 결과 두뇌, 신장, 대변, 및 사지, 만성 동맥 류, 파열, 또는 죽음5,,67의 형성을 포함 하 여 먼 장기에 혈액 흐름의 폐색을 포함 합니다.
현재, 개시 및 대동맥 동맥 류 및 해의 진행에 관련 된 생화학과 세포 프로세스 여전히 제대로 이해 하 고. 대동맥 동맥 류 및 해 부 재현 동물 모델은 그들의 병 태 생리학을 이해 하는 열쇠입니다. Β-aminopropionitrile (BAPN)은 lysyl 산화 효소 억제제, 엘라 스 틴과 콜라겐의 교차 연결을 방지 하 고 혈관 벽 세포 외 매트릭스와의 biomechanical 무결성6의 구조를 크게 변경 표시 되었습니다, 8. BAPN로 치료 하는 설치류 대동맥 동맥 및 해 부9,10의 일반적인 동물 모델 활용 되어 있다.
혈관 이미징 형식 혈관 병 리를 확인 하 고, 선박 patency 확인 평가 기관 관류에 있습니다. 최근, 마이크로 계산 된 단층 촬영 (마이크로 CT)은 쥐와 유사 하 게 치수가 재 진된 동물의 맥 관 구조를 공부 하 이용 되었습니다. Intraluminal 혈액은 본질적으로 비교적 radiolucent 뼈와 달리 단층에 의해 혈관의 축 이미징, 제한 됩니다. 그러나 혈관 내 조 영제와 결합 하면,, 마이크로-CT 수 있습니다 매크로 해부학 혈관 병 리11연구를 위한 동물 vasculatures의 상세한 3 차원 복원을.
선택한 대비 에이전트는 방사선 불 투과성 실리콘 고무 리드 크롬과 리드를 포함 하는 ( 테이블의 자료를 참조). 촉매의 면 전에 서 관류, 시 신속 하 게 견고 하 게 캐스팅 배경 조직 달리 높은 방사선 불 투과성는 맥 관 구조를 만드는 혈관의 매크로 해부학 아키텍처에 최소한의 변경으로 맥 관 구조를 형성 하는 경우 radiographically 검사. 이 대비 에이전트 처리를 쉽게 하 고 조직 저하와 자주 관련 혈관 캐스트 부식 된 파손으로 인해 선박 손실 방지 때문에 유리 하다. 그것은 최소한의 수축12치료, 혈관 혈액의 허가 특허 유지 하 고는 동물 매크로-맥 관 구조 비 생존 실험에의 한 정확한 평가 대 한 허용. 이전 작업은 성공적으로 동물 연구의 다양 한 방사선 불 투과성 실리콘 고무-대비를 사용 했다. 특히, 관상, 사, 태 반, 그리고 대뇌 순환11,12,13,,1415 머릿속에 적용 표시 되었습니다. 이 논문에서 우리 세부 양적 마이크로-코네티컷에 의해 마우스 모델에서 대동맥 병 리 BAPN 유도 하 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 오픈 왼쪽 심 실 펑크의 방법론

<table><tbody><tr><td>Microfil</td><td>Flow Tech, Inc</td><td>MV-122</td><td>우리는 노란색을 사용하며 원하는대로 다른 색상을 주문할 수 있습니다. 키트에는 MV-Compound, MV-Diluent 및 MV-Curing Agent가 포함되어 있습니다.</td></tr><tr><td>헤파린(1000 U/mL)</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>25021-400-10</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>Vet One, MWI</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>3-아미노프로피오니트릴 푸마르산염</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3134</td><td></td></tr><tr><td>단일 주사기 펌프</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-831-200</td><td></td></tr><tr><td>27-게이지 두피 정맥 세트 바늘</td><td>Exel Int</td><td>26709</td><td>27G x 3/4", 12" 튜브</td></tr><tr><td>Inveon Micro-CT 스캐너</td><td>Siemens Medical Solutions</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osirix MD</td><td>Pimxmeo SARL</td><td></td><td>버전 8.0.2</td></tr><tr><td>Inveon Research Workplace</td><td>Siemens Medical Solutions</td><td></td><td>버전 4.2</td></tr><tr><td>설치류 차우</td><td>Harlan Teklad</td><td>2018sx</td><td></td></tr></tbody></table>

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 aortopathy의 양적 마이크로 ct 분석

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

대동맥 동맥 류 및 해 부 상당한 병 적 상태와 사망률은 인구에 연결 되어 있으며 매우 치명적일 수 있다. 대동맥 질환의 동물 모델 존재는 맥 관 구조의 이미징 vivo에서 제한 되었습니다. 최근 몇 년 동안, 미세 전산화 단층 촬영 (마이크로 CT) 모두 크고 작은 혈관 이미징에 대 한 기본 양식 적임 떠오르고 있다 vivo에서 및 전 비보. 함께 관 주조 방법, 주파수 및 C57/Bl6 마우스 β-aminopropionitrile 치료에 대동맥 병 리의 분포 특성 마이크로-CT를 사용 성공적으로 했습니다. 이 방법의 기술적 한계 가난한 동물 준비, 선박 크기 정량화에 대 한 적절 한 방법론의 응용 프로그램 및 비-이 절차의 생존에 의해 소개 하는 관류의 품질에 변화를 포함 합니다. 이 문서는 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 aortopathy의 양적 특성에 대 한 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 방법론을 자세히 설명합니다. 대동맥 병 리를 시각화, 뿐만 아니라 다른 혈관 침대에 vivo에서 또는 혈관 침대 제거 사후 조사이 메서드를 사용할 수 있습니다.

이 프로토콜을 평가 하기 위해 20 남성 성인 쥐, 혼합된 배경으로 앞에서 설명한19 의 그리고 20-30 주 나이, 또는 BAPN 치료 없이 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무 끼얹는다 했다 ( 테이블의 자료를 참조 ) 위에 상세한 프로토콜을 사용 하 여. 그들은 수술 다음 날에 마이크로-CT 검사 (그림 1 및 그림 2). 비교 그룹 중 쥐의 년에서 상당한 차이가 있었다.
작은 축 직경 다음이 쥐에 정량 했다. BAPN 치료 쥐에 오름차순 대동맥의 평균 직경은 치료 나이 일치 하는 컨트롤의 그것 보다 훨씬 더 큰 (1.43 ± 0.56 m m ...

이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

이 방법은 혈관 질환의 다양한 동물 모델에서 혈관 크기가 어떻게 영향을 받는지 결정하는 것과 같은 혈관 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 마이크로 CT를 통해 생체 내 및 생체 외 모두에서 크고 작은 혈관의 상세한 이미지를 얻을 수 있어 정확하게 정량화할 수 있다는 것입니다. CT 분석 24시간 전에 수술 절차를 수행하여 사후 심장 내 압출을 위해 검체를 준비합니다.마취를 위해 3%의 이소플루란을 사용하고 숯 제거제를 사용해야 합니다. 그런 다음 안면 마스크에서 2-2.5%의 이소플루란으로 마취를 유지하고 분당 1리터의 산소가 있는 청소부에 부착합니다. 수술을 시작하기 전에 발가락 꼬집기를 수행하여 페달 반사가 없는지 확인하십시오.그런 다음 기구 등이 있는 작업 필드를 설정합니다. 다음으로, 동물을 등쪽에 누운 자세로 놓고 팔다리를 고정합니다. 이제 가위를 사용하여 치골 교감과 흉골 노치 사이의 흉골 위의 피부와 연조직을 통해 정중선을 절개합니다.다음으로, 가위를 사용하여 xiphoid 과정에서 횡격막에 구멍을 만들어 흉강으로 들어갑니다. 그런 다음 가위를 사용하여 복부 흉벽의 횡격막을 양측으로 절개합니다. 늑연골을 잘라 오른쪽 흉골 경계의 흉골과 갈비뼈를 분리합니다.이제 xiphoid 돌기 근처의 흉골 끝에 미세한 지혈 클램프를 적용하고 지혈을 두개골로 움직여 마우스 머리 위에 위치하도록 합니다. 그런 다음 심장과 흉벽 사이의 부착물을 날카롭게 해부한다. 동물 준비 중에 손상된 혈관의 수를 제한하면 절단된 혈관에서 조영제가 누출되어 완전한 충전에 필요한 부피가 변경되고 최종 이미징에 아티팩트가 유입됩니다.이제 27 게이지 IV 카테터 바늘을 10ml의 헤파린 처리된 PBS가 사전 로드된 주사기에 연결하고 모든 튜브에 버퍼를 채워 모든 기포를 제거합니다. 라인에서 모든 거품을 제거하는 것이 필수적입니다. 그런 다음 즉시 우심실 또는 하대정맥을 절개하여 헤파린 용액과 혈액을 배출합니다.계속 진행하려면 캐뉼라를 사용하여 클램프로 고정된 좌심실을 뚫습니다. 주사기 펌프를 사용하여 분당 2밀리리터의 일정한 농도로 풍성한 양을 수행합니다. 장기가 눈에 띄게 희게 해야 합니다.몇 분 안에 정맥의 순환에 혈액이 없어질 것입니다. 그런 다음 펌프를 멈추고 주사기에서 카테터 튜브를 분리하되 카테터 바늘을 움직이지 마십시오. 이제 조영제 용액을 5ml 분취량으로 분리하고 경화제를 첨가한 후 잘 혼합합니다.그런 다음 혼합물 5ml를 10ml 주사기에 넣고 분당 2ml의 일정하게 조영제를 동물에게 주입합니다. 주조제가 동물에서 나오는 것을 볼 수 있는 지점을 지나 주입을 계속하십시오. 조영제는 20분 안에 경화됩니다.경화가 완료되면 관심 기관을 적출하여 10% 중성 완충 포르말린으로 고정합니다. 다음으로, 샘플이 마이크로 CT 스캔에 사용되지 않는 경우 전체 사체를 고정합니다. 그렇지 않으면 사체를 금속 쟁반에 놓고 섭씨 4도의 냉장고에 넣어 하룻밤 동안 경화시킵니다.다음 날에는 마이크로 CT 스캐너를 사용하여 각 마우스의 X선 컴퓨터 단층 촬영 이미지를 획득합니다. 스캐너 매개변수를 다음과 같이 설정하십시오. 55kV의 X선관 피크 전압, 150마이크로암페어의 전류, 2.19의 시스템 배율 계수 및 2의 CCD 카메라 픽셀 비닝 계수. 이 비닝 계수는 29미크론의 유효 픽셀 크기를 생성합니다.다음으로, 표준화된 접근 방식을 사용하여 동맥류를 식별하기 위해 이미지를 분석합니다. 세 위치의 가장 넓은 지점에서 단축 직경을 측정합니다. 대동맥궁(aortic arch), 하행 흉부 대동맥(descending thoracic aorta), 복부 대동맥(abdominal aorta)이 있습니다. 이상적으로는 두 명의 관찰자(그 중 한 명은 눈이 멀었습니다)가 각 이미지를 분석해야 합니다.측정값을 사용하여 동맥류를 기준 직경의 50%보다 큰 직경으로 대동맥 분절의 국소 또는 확산 확장으로 식별합니다. 배경이 혼합된 20-30주 된 수컷 성인 마우스 20마리를 BAPN 처리 여부에 관계없이 분석했습니다. 각각은 납 기반 방사선 불투과성 실리콘 고무로 풍부하게 사용되었습니다.BAPN을 투여한 마우스에서 상행 대동맥의 평균 직경은 치료하지 않은 연령 일치 대조군보다 유의하게 컸다. 동맥류가 있는 것으로 확인된 마우스의 데이터 포인트는 빨간색으로 표시되어 있습니다. 대조적으로, BAPN을 사용한 lysyl oxidase의 억제는 평균 하강 흉부에 유의한 영향을 미치지 않았으며, 이 처리는 복부 대동맥 직경에 영향을 미치지 않았습니다.동맥류는 치료되지 않은 그룹의 평균 직경의 1.5배로 정의되었습니다. 이 치료법은 이러한 정의에 따라 동맥류를 현저히 증가시킵니다. BAPN을 투여한 마우스의 동맥류는 대동맥에서만 확인되었으며, 대다수는 흉부 대동맥에서 확인되었습니다.이 비디오를 시청한 후에는 방사선 촬영을 위해 혈관 구조를 풍부하게 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 일단 마스터하면 풍부함과 이미지 분석이 제대로 수행되면 2시간 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 CT 영상 프로토콜은 방사선 직원의 도움을 받아 조정되어 개별 실험의 특정 목적에 맞게 이미지 획득을 최적화할 수 있다는 점을 기억하는 것이 중요합니다.

quantitative-micro-ct-analysis-aortopathy-mouse-model

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

조직화학적 및 면역조직화학적 분석과 결합된 대동맥동 및 상행 대동맥의 정밀 절단을 사용하여 마우스 모델에서 죽상경화성 병변을 정량화하고 특성화하는 절차를 설명합니다.

쥐의 대동맥 부비동의 동맥 경화 병변의 정량 분석​​ 및 특성

초음파 이미징 생쥐에서 흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류의 luminal 크기를 결정 하는 일반적인 형식 되고있다. 이 프로토콜 생쥐에서 상승 하 고 복 부 대동맥의 안정적이 고 재현 가능한 2 차원 초음파 이미지 절차를 설명 합니다.

흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류 크기를 결정 하는 쥐에서의 초음파 이미징

죽상 동맥 경화증의 뮤린 모형은 분자 수준에 병원성 통로를 조사하기 위하여 유용한 공구입니다, 그러나 병변 발달의 표준화한 정량화가 요구됩니다. 이 프로토콜은 대동맥 근, 대동맥 아치 및 brachiocephalic 동맥을 포함하여 주요 동맥 혈관에 있는 병변 크기를 결정하기 위하여 최적화된 방법을 기술합니다.

마우스에서 동맥 경화증의 정량화

우리는 마우스에 있는 강력한 내림차순 흉부 대동맥류를 일관되게 유도하는 외과 프로토콜을 기술합니다. 절차는 왼쪽 흉부 절제술, 흉부 대동맥 노출, 대동맥 벽에 돼지 췌장 엘라스타제에 담근 스폰지의 배치를 포함한다.

국소 엘라스타아제의 뮤린 외과 모델은 내림차순 흉부 대동맥류를 유도

이 원고는 복부 대동맥류의 마우스 모델에 발광 직경, 펄스 전파 속도, dtensibility 및 방사형 변형을 측정하기 위해 고주파 초음파 이미징을 사용하기위한 상세한 프로토콜을 설명합니다.

복부 대동맥류 마우스 모델에서 맥박 전파 속도, 감도 및 변형률 측정

본 프로토콜은 마우스에서 적외선 복부 대동맥의 출현에 엘라스타제의 직접 적용을 통해 엘라스타아제 유도 AAA 모델에 대한 표준화된 수술 방법을 기술한다.

엘라스타제의 혈관주위 적용에 의해 유도된 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 AAA의 병리학적 특징과 분자 메커니즘을 연구하기 위해 인산칼슘 유발 복부 대동맥류(AAA) 마우스 모델을 설명합니다.

인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델

이 원고는 염화칼슘과 엘라스타제를 사용하여 생쥐 복부 대동맥류 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시하고 이전 모델링 방법의 장점을 결합합니다. 이 모델은 복부 대동맥류의 기저에 있는 병태생리학적 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration에 의한 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 엘라스타제를 대동맥에 직접 적용하고 음용수를 통해 ß-아미노프로피오니트릴을 투여하는 조합을 통해 마우스의 진행성 복부 대동맥류를 모델링하는 체계적인 외과적 접근 방식을 설명합니다.

국소 엘라스타제와 구강 ß-아미노프로피오니트릴의 조합에 의한 마우스의 고급 복부 대동맥류 모델링

이 프로토콜은 마우스의 흉부 대동맥 박리 유도를 위한 상세한 단계별 절차를 제공합니다. 구체적으로, 여기에는 β-아미노프로피오니트릴 및 안지오텐신 II의 필요한 용량의 정확한 계산, 삼투압 펌프 충전 절차 및 삼투압 펌프의 주입 기술이 포함됩니다.

경구용 β-아미노프로피오니트릴 및 피하 안지오텐신 II 주입에 의해 유도된 흉부 대동맥 박리의 쥐 모델

이 프로토콜은 면역 감작 성분을 포함한 AAA 모델로서, 엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제 적용을 사용하여 C57BL/6 마우스에서 복부 대동맥류(AAA)를 반복 가능하고 신뢰할 수 있게 유도하는 방법을 제공합니다.

엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제를 이용한 쥐 복부 대동맥류 모델의 신뢰성 높은 생성

배우세요 마우스 대동맥류 모델에서 혈관 조영술을 이용한 정량적 마이크로 CT 분석 방법을. 방사선 불투과성 실리콘 고무 관류 기법으로 혈관 직경을 정밀 측정하여 혈관 생물학 연구에 활용할 수 있습니다.

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

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