Name: 열 Nanoimprinting 기술과 인간의 내 피 식민지 형성 세포의 응답의 심사에 의해 그라데이션 Nanopattern의 제조 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 24 s
Description: 학습하세요 열 나노임프린팅 기술로 그라데이션 나노패턴을 제조하고 인간 내피 전구세포의 반응을 분석하는 방법을. 이 기법은 물리적 자극을 통한 세포 행동 연구에 활용됩니다.

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이 작품은 기본적인 과학 연구 프로그램을 통해 국가 연구 재단의 한국 (NRF)는 교육, 과학 및 기술 (MEST) [NRF-2015R1D1A1A01060397] 및 바이오 의료 기술 개발 자금에 의해 지원 되었다 과학기술부, 정보 통신 및 미래 계획 [NRF-2017M3A9C6029563]에 의해 투자 하는 NRF의 프로그램.

<ol><li>Dalby, M. J., Gadegaard, N., Oreffo, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+nanotopography+and+integrin-matrix+interactions+to+influence+stem+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+materials%22%5BJournal%5D)">Harnessing nanotopography and integrin-matrix interactions to influence stem cell fate.</a> Nature materials. 13 (6), 558-569 (2014).</li>
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<li>Naganuma, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relationship+between+cell+adhesion+force+activation+on+nano%2Fmicro-topographical+surfaces+and+temporal+dependence+of+cell+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">The relationship between cell adhesion force activation on nano/micro-topographical surfaces and temporal dependence of cell morphology.</a> Nanoscale. 9 (35), 13171-13186 (2017).</li>
<li>Han, J., Lin, K. H., Chew, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+regulation+of+focal+adesions+and+cortical+actin+by+matrix+nanotopography+in+3D+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physics%3A+Condensed+Matter%22%5BJournal%5D)">Study on the regulation of focal adesions and cortical actin by matrix nanotopography in 3D environment.</a> Journal of Physics: Condensed Matter. 29 (45), 455101(2017).</li>
<li>Liu, X., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+nano-biointerface+as+a+new+platform+for+guiding+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional nano-biointerface as a new platform for guiding cell fate.</a> Chemical Society Reviews. 43 (8), 2385-2401 (2014).</li>
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<li>Yim, E. K., Darling, E. M., Kulangara, K., Guilak, F., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotopography-induced+changes+in+focal+adhesions%2C+cytoskeletal+organization%2C+and+mechanical+properties+of+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Nanotopography-induced changes in focal adhesions, cytoskeletal organization, and mechanical properties of human mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 31 (6), 1299-1306 (2010).</li>
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<li>Nakayama, K. H., Surya, V. N., Gole, M., Walker, T. W., Yang, W., Lai, E. S., Ostrowski, M. A., Fuller, G. G., Dunn, A. R., Huang, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+patterning+of+extracellular+matrix+alters+endothelial+function+under+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+letters%22%5BJournal%5D)">Nanoscale patterning of extracellular matrix alters endothelial function under shear stress.</a> Nano letters. 16 (1), 410-419 (2015).</li>
<li>Bettinger, C. J., Zhang, Z., Gerecht, S., Borenstein, J. T., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+in+vitro+capillary+tube+formation+by+substrate+nanotopography%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+materials%22%5BJournal%5D)">Enhancement of in vitro capillary tube formation by substrate nanotopography.</a> Advanced materials. 20 (1), 99-103 (2008).</li>
<li>Katz, B. Z., Zamir, E., Bershadsky, A., Kam, Z., Yamada, K. M., Geiger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+state+of+the+extracellular+matrix+regulates+the+structure+and+molecular+composition+of+cell-matrix+adhesions%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+biology+of+the+cell%22%5BJournal%5D)">Physical state of the extracellular matrix regulates the structure and molecular composition of cell-matrix adhesions.</a> Molecular biology of the cell. 11 (3), 1047-1060 (2000).</li>
<li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function+and+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function and dysfunction.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li>
<li>Tajima, S., Chu, J., Li, S., Komvopoulos, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+endothelial+cell+adhesion%2C+spreading%2C+and+cytoskeleton+on+low-density+polyethylene+by+nanotopography+and+surface+chemistry+modification+induced+by+argon+plasma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of endothelial cell adhesion, spreading, and cytoskeleton on low-density polyethylene by nanotopography and surface chemistry modification induced by argon plasma treatment.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 84 (3), 828-836 (2008).</li>
<li>Mohiuddin, M., Pan, H. A., Hung, Y. C., Huang, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+growth+and+inflammatory+response+of+macrophages+and+foam+cells+with+nanotopography%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+research+letters%22%5BJournal%5D)">Control of growth and inflammatory response of macrophages and foam cells with nanotopography.</a> Nanoscale research letters. 7 (1), 394(2012).</li>
<li>Kyle, D. J., Oikonomou, A., Hill, E., Bayat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+functional+evaluation+of+biomimetic+silicone+surfaces+with+hierarchical+micro%2Fnano-topographical+features+demonstrates+favourable+in+vitro+foreign+body+response+of+breast-derived+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Development and functional evaluation of biomimetic silicone surfaces with hierarchical micro/nano-topographical features demonstrates favourable in vitro foreign body response of breast-derived fibroblasts.</a> Biomaterials. 52, 88-102 (2015).</li>
<li>Seo, H. R., Joo, H. J., Kim, D. H., Cui, L. H., Choi, S. C., Kim, J. H., Cho, S. W., Lee, K. B., Lim, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanopillar+Surface+Topology+Promotes+Cardiomyocyte+Differentiation+through+Cofilin-Mediated+Cytoskeleton+Rearrangement%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Applied+Materials+%26+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Nanopillar Surface Topology Promotes Cardiomyocyte Differentiation through Cofilin-Mediated Cytoskeleton Rearrangement.</a> ACS Applied Materials & Interfaces. 9 (20), 16803-16812 (2017).</li>
<li>Hwang, J. H., Lee, D. H., Byun, M. R., Kim, A. R., Kim, K. M., Park, J. I., Oh, H. T., Hwang, E. S., Lee, K. B., Hong, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotopological+plate+stimulates+osteogenic+differentiation+through+TAZ+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Nanotopological plate stimulates osteogenic differentiation through TAZ activation.</a> Scientific Reports. 7 (1), 3632(2017).</li>
<li>Bae, D., Moon, S. H., Park, B. G., Park, S. J., Jung, T., Kim, J. S., Lee, K. B., Chung, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotopographical+control+for+maintaining+undifferentiated+human+embryonic+stem+cell+colonies+in+feeder+free+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Nanotopographical control for maintaining undifferentiated human embryonic stem cell colonies in feeder free conditions.</a> Biomaterials. 35 (3), 916-928 (2014).</li>
<li>Cui, L. H., Joo, H. J., Kim, D. H., Seo, H. R., Kim, J. S., Choi, S. C., Huang, L. H., Na, J. E., Lim, I. R., Kim, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulation+of+the+response+of+human+endothelial+colony-forming+cells+by+focal+adhesion+assembly+using+gradient+nanopattern+plates%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Manipulation of the response of human endothelial colony-forming cells by focal adhesion assembly using gradient nanopattern plates.</a> Acta biomaterialia. 65, 272-282 (2017).</li>
<li>Lee, W., Park, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porous+anodic+aluminum+oxide%3A+anodization+and+templated+synthesis+of+functional+nanostructures%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+reviews%22%5BJournal%5D)">Porous anodic aluminum oxide: anodization and templated synthesis of functional nanostructures.</a> Chemical reviews. 114 (15), 7487-7556 (2014).</li>
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<li>Zaraska, L., Sulka, G. D., Jaskuła, M. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0257897209008780">The effect of n-alcohols on porous anodic alumina formed by self-organized two-step anodizing of aluminum in phosphoric acid.</a> Surface and Coatings Technology. 204 (11), 1729-1737 (2010).</li>
<li>Yang, K. Y., Kim, J. W., Byeon, K. J., Lee, H. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0167931707002134">Selective deposition of the silver nano-particles using patterned the hydrophobic self-assembled monolayer patterns and zero-residual nano-imprint lithography.</a> Microelectronic engineering. 84 (5), 1552-1555 (2007).</li>
<li>Park, B. G., Lee, W., Kim, J. S., Lee, K. B. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0927775710004504">Superhydrophobic fabrication of anodic aluminum oxide with durable and pitch-controlled nanostructure.</a> Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. 370 (1), 15-19 (2010).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

종종는 AAO의 제조 결함 균열, 모 공, 그리고 굽기의 불규칙 한 형태에서에서 겪고 있다. 이러한 결함에 대 한 주요 이유 알루 되 고 금속 기판의 자연과 전해질21의 저항력에 의해 강하게 영향을 전해 쇠 약을 이라고 합니다. 전해질의 저항력의 온도 따라 다르며, 전극에서 지속적으로 열 제거 이므로 이러한 높은 전압 아노다이징 조건에서 안정적으로 전해질의 locational 온도 유지 하기 위해 중요 한 포인트. 이 프로토콜에서 우리는 마스 다의 2 단계 양극22,23를 수정 하 여 AAO 금형 조작. 메 틸 알코올로 거의 절반 전해질을 대체 뿐만 아니라 전해질 낮은 온도에서 동결 하는 것을 방지 하지만 또한 아래쪽 공24의 증발에 의해 전극의 열을 빼앗아. 자력 교 반기 대신 오버 헤드 교 반기와 임 펠 러를 사용 하는 이유는 온도 제어...

최근, 표면 지형의 물리적 자극에 의해 세포의 응답 세포 공학1,2,,34의 분야에서 각광 되어 있다. 따라서, 더 많은 관심은 셀 첨부 파일 표면5에서 3 차원 nanostructures에 집중 되었습니다. Integrin은 세포의 표면 인식 장치, 메카노 변환6ECM의 마이크로-나노 구조에 의해 구동 하는 물리적 자극 전송으로 보고 되었습니다. 이 기계적인 자극 연락처 안내7 셀 동작을 조절 하 고 초점 유착 및 강성8셀 모양을 변경 하려면 cytoskeletal 개편을 유도 한다.
본문에서 인간의 내 피 조상 세포 (hEPCs) 주변 ECM9의 microenvironment와 밀접 하 게 상호 작용합니다. 이 혈액 흐름10에서 파생 된 전단 응력으로 ECM의 물리적 상태 특정 세포-매트릭스 접착 복잡 한 형성을 위한 중요 한 매개 역할을 나타냅니다. 그것은 표면 nanotopography hEPCs11 의 광범위 한 모 세관 튜브 네트워크의 생체 외에서 형성을 강화 하 고 역 기능 기질을 인식 하는 hEPCs를 가능 하 게 하 고 촉진 ECM/바이오 수용 성 요소가 시스템 결합을 보고합니다 상처 치유12,13. 그럼에도 불구 하 고, ECM과 hEPCs 사이의 관계는 명확 하 게 이해 되지 않습니다.
많은 연구 자들은 세포 반응과 다른 기판14,,1516에서 실제 신호 사이의 관계를 명확 하 게 하려고, 이러한 연구는 nanostructure의 고정된 크기에만 사용 또는 nanopatterns nanostructure 및 셀 동작의 크기 사이의 관계를 명료 하 게 하는 제한이 불규칙 한 준비. 여기에 문제 적당 한 도구는 nanostructure의 최적의 크기를 찾습니다 기존의 지루하고 반복적인 접근을 대체할 수 있는 세포 응답을 심사의 부족 이다. 따라서, 간단한 기술은 반복 없이 물리적 stimulations에 셀 반응 검사 필요 합니다.
여기, 우리는 우리의 이전 보고서17,,1819 에 그라데이션 nanopattern 있는 배열된 nanopillars의 직경은 점차적으로 증가 생산 하기 위해 사용 되는 방법을 설명 합니다. 또한, 우리는 또한 배양 세포에 물리적 자극의 효과 결정 하기 위해 그라데이션 nanopattern 접시에 hECFCs의 동작을 분석 하는 방법을 설명 합니다. 온화한 양극, 점진적 에칭, 그리고 반대로 고정 레이어 코팅 방법 그라데이션 AAO 금형 제작에 사용 되었다. 리소 그래피 기술을 각 인 열을 채택 하 여 동일한 폴리스 티 렌 그라데이션 nanopatterns는 비용 효율적이 고 손쉬운 방법으로 생산 되었다. 그라데이션 nanopatterns를 사용 하 여, 그것은 nanostructure의 크기는 셀 동작에 큰 영향을 실험 한 세트에 결정 가능 합니다. 우리는이 그라데이션 nanopattern 혈액 파생 된 hECFC 또는 다른 셀과 nanostructures의 다양 한 크기 간의 상호 작용 메커니즘을 이해에 도움이 될 것입니다 기대 합니다.

<table><tbody><tr><td>과염소산 60%</td><td>대정화학& 금속</td><td>6512-4100</td><td></td></tr><tr><td>에틸 알코올, 절대 99.9 %</td> <td>대정 화학 & 금속</td><td>4118-4100</td><td></td></tr><tr><td>인산 85%</td><td>대정화학& 금속</td><td>6532-4400</td><td></td></tr><tr><td>메틸알코올 99.5%</td><td>대정화학& 금속</td><td>5558-4400</td><td></td></tr><tr><td>Chromium(VI) oxide</td><td>Daejung Chemicals & 금속</td><td>2558-4400</td><td></td></tr><tr><td>황산 95%</td><td>대정화학& 금속</td><td>7781-4100</td><td></td></tr><tr><td>과산화수소 30%</td><td>대정화학& 금속</td><td>4104-4400</td><td></td></tr><tr><td>n-헥산 95%</td><td>대정화학& 금속</td><td>4081-4400</td><td></td></tr><tr><td>톨루엔 99.5%</td><td>대정화학& 금속</td><td>: 8541-4400</td><td></td></tr> <tr><td>(heptadecafluoro-1,1,2,2, -tetrahydrodecyl) dimethylchlorosilane</td><td>Gelest</td><td>SIH5840.4</td><td>수분 민감성</td></tr><tr><td>메톡시노나 플루오로 부탄 99 %</td> <td>Sigma aldrich</td><td>464309</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 용액</td><td>Stemcell</td> <td># 4902</td><td></td></tr><tr><td>Gelatin</td><td>Sigma aldrich</td><td>G1890</td><td>단백질 코팅 용액</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>GE Heathcare</td><td>17-1440-03</td><td>친수성 다당류 용액</td></tr><tr><td>EGM-2MV</td><td>Lonza</td><td>CC-3202</td><td>내피 세포 확장 매체</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청</td><td>Gibco</td><td>12483-020</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드</td><td>시그마 알드리치</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>글루타르알데히드</td><td>시그마 알드리치</td><td>G5882-100ML</td><td></td></tr><tr><td>오스뮴 테트록사이드</td><td>시그마 알드리치</td><td>201030-1G</td><td></td></tr><tr><td>헥사메틸디실라잔</td><td>시그마 알드리치</td><td>440191</td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마 알드리치</td><td>X100-100ML</td><td>옥틸페놀 에톡실레이트&nbsp;</td></tr><tr><td>염소 세럼</td><td>Gibco</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>항인간 빈쿨린 1차 항체&nbsp;</td><td>Sigma aldrich</td><td>V9131</td><td></td></tr><tr><td>F-actin 프로브</td><td>분자 프로브</td><td>A12379</td><td>형광 결합 팔로이딘</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 결합 안티-마우스&nbsp; IgG 항체</td><td>분자 프로브</td><td>A11001</td><td>형광 접합 2차 항체&nbsp;</td></tr><tr><td>4',6-디아미디노-2-페닐린돌&nbsp;</td><td>Sigma aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>장착 매체</td><td>DAKO</td><td>S3023</td><td></td></tr><tr><td>Anti-human vWF primary antibody&nbsp;</td><td>DAKO</td><td>A0082</td><td></td></tr><tr><td>반인간&nbsp; CD144 1차 항체&nbsp;</td><td>BD 생명과학</td><td>#555661</td><td></td></tr><tr><td>Eponate 12&trade; 임베딩 키트, BDMA</td><td>Ted Pella</td><td>18012</td><td>에폭시 수지</td></tr><tr><td>우라닐 아세테이트, 25g</td><td>Ted Pella</td><td>19481</td><td></td></tr><tr><td>납 구연산염, 삼수화물, 10g</td><td>Ted Pella</td><td>19312</td><td></td></tr><tr><td>초순수 알루미늄 플레이트</td><td>Goodfellow</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>폴리스티렌 시트</td><td>Goodfellow</td><td>ST313120</td><td></td></tr><tr><td>8.0" 실리콘 웨이퍼</td><td>Siltron 포함</td><td>29-01024-03</td><td>단면 광택, 725 &마이크로; m 두께</td></tr><tr><td>의 진공 데시케이터, 4.4 L</td><td>Kartell</td><td>KA.230</td><td></td></tr><tr><td>진공 펌프</td><td>진공 청소기</td><td>V3. VOP100</td><td></td></tr><tr><td>전원 공급 장치</td><td>Unicorntech</td><td>UDP-3003</td><td></td></tr><tr><td>자기 교반기</td><td>Daihan Scientific</td><td>SL 벽지 </td><td></td>SMS03022</tr><tr><td>오버 헤드 교반기</td><td>Daihan scientific</td><td>HT120DX</td><td></td></tr><tr><td>Circulator</td><td>Daihan scientific</td><td>WCR-P12</td><td></td></tr><tr><td>선형 이동 단계</td><td>Zaber</td><td>A-LSQ300A-E01-KT07</td><td></td></tr><tr><td>앵글 브래킷, 90도</td><td>Zaber</td><td>AB90M</td><td>선형 이동 단계 PMP</td></tr><tr><td>forcep의 액세서리, 145mm</td><td>Vitlab</td><td>67995</td><td>비금속 핀셋</td></tr><tr><td>PTFE 비커, 250mL</td><td>Cowie</td><td>CW007.25</td><td></td></tr><tr><td>초음파 세척기</td><td>Branson</td><td>B2510MTH</td><td></td></tr><tr><td>PCB 절단기</td><td>Hozan 도구 산업용</td><td>K-110</td><td></td></tr><tr><td>나노 임프린트 장치</td><td>Nanonex</td><td>NX-2000</td><td></td></tr><tr><td>산소 플라즈마 발생기</td><td>Femto Science</td><td>CUTE</td><td></td></tr><tr><td>저온 살균기</td><td>Lowtem</td><td>Crystal 50</td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터</td><td>Panasonic</td><td>MCO-18AC</td><td></td></tr><tr><td>Confoal 레이저 스캐닝 현미경</td><td>Carl Zeiss</td><td>LSM700</td><td></td></tr><tr><td>주사 전자 현미경</td><td>JEOL</td><td>JSM6701</td><td></td></tr><tr><td>투과 전자 현미경</td><td>Hitachi</td><td>H-7500</td><td></td></tr></tbody></table>

열 nanoimprinting 기술과 인간의 내 피 식민지 형성 세포의 응답의 심사에 의해 그라데이션 nanopattern의 제조

Fabrication of Gradient Nanopattern by Thermal Nanoimprinting Technique and Screening of the Response of Human Endothelial Colony-forming Cells

Nanotopography 다양 한 세포 외 매트릭스 (ECMs) 몸 주위에서 찾을 수 있습니다 그리고 세포 반응에 중요 한 규제 조치를 알려져 있습니다. 그러나,는 nanostructure의 크기와 적절 한 검사 도구의 부족으로 인하여 세포의 응답 사이의 관계를 결정 하기가 어렵습니다. 여기, 우리가 세포 응답의 조작에 대 한 재현 가능 하 고 비용 효율적인 그라데이션 nanopattern 번호판의 개발을 보여줍니다. 마스터 금형, 증가 직경 범위 [120-200 nm (GP 120/200), 200-280 nm (GP 200/280), 280-360 nm (GP 280/360)]의 nanopillars 그라데이션 nanopattern 접시로 양극 알루미늄 산화물 (AAO)을 사용 하 여 열 기술을 각 인에 의해 조작 했다. 이 그라데이션 nanopattern 번호판 nanotopography ECM에서의 다양 한 크기를 모방 하도록 설계 되었습니다 그리고 인간 내 피 식민지 형성 세포 (hECFCs)의 응답에 사용 되었다. 이 프로토콜에서 우리 세포 공학, 인간 주변 혈액에서 hECFCs를 재배 하 고 hECFCs nanopattern 접시에 배양의 기술에 대 한 그라데이션 nanopattern 번호판 조작의 단계별 절차를 설명 합니다.

그림 1 에서는 그들의 형식 및 위치에 따라 조작된 그라데이션 AAO 금형의 SEM 이미지. 그림 2 는 일반 둥근 nanopillars와 그라데이션 nanopattern 플레이트의 SEM 이미지 이며 그림 3 nanopillar 직경의 정량화 데이터. 표 1 조작된 nanopillars의 특성을 나열합니다.
그림 4A 혈액 파생 된 hECFCs의 재배의 계획을 보여 줍니다. 그림 4B 쇼 thecultivated hECFCs의 위상...

여기, 우리는 열 nanoimprinting 통해 그라데이션 nanopattern 판의 제조와는 nanostructures 인간의 내 피 조상 세포의 응답을 검사 하는 방법에 대 한 프로토콜을 제시. 설명 된 기술을 사용 하 여 물리적 자극에 의해 셀 동작을 조작할 수 있는 비 계를 생산 가능 하다.

열 Nanoimprinting 기술과 인간의 내 피 식민지 형성 세포의 응답의 심사에 의해 그라데이션 Nanopattern의 제조

Nanotopography can be found in various extracellular matrices (ECMs) around the body and is known to have important regulatory actions upon cellular ...

이 기술의 주요 장점은 재현성이 높은 구배 패턴을 생성할 수 있고 기생충 관찰 구조에 대한 세포 반응을 스크리닝할 수 있다는 것입니다. 물리적 자극에 대한 관찰 반응은 아직 완전히 발견되지 않았습니다. 우리는 우리의 방법이 이러한 알려지지 않은 메커니즘을 밝히는 데 필수적인 도구가 될 것이라고 믿습니다.시작하려면 전해 연마 용액이 들어 있는 이중 재킷 비커를 순환기에 연결하고 온도를 섭씨 7도로 설정합니다. 온도가 섭씨 7도까지 떨어질 때까지 용액을 최소 30분 동안 저어줍니다. 초순수 알루미늄 판과 탄소 상대 전극을 악어 클립과 구리선을 사용하여 전해 연마 용액에 담그십시오.탄소 카운터 전극에서 알루미늄 플레이트의 위치를 서로 마주 보도록 조정합니다. 알루미늄 플레이트를 양극 단자에 연결하고 탄소 카운터 전극을 직류 전원 공급 장치의 음극 단자에 연결합니다. 20볼트의 전압을 가한 후 알루미늄 판은 거친 광택이 없는 표면에서 거울과 같은 은색 표면으로 바뀝니다.1차 아노다이징을 수행하려면 1리터의 전해질을 2리터 더블 재킷 비커에 붓습니다. 광택 처리된 알루미늄 판과 탄소 카운터 전극을 구리선의 악어 클립으로 용액에 담궈냈습니다. U자형 받침대에 수직 샤프트를 설치하십시오.금속 클램프를 사용하여 오버헤드 교반기와 임펠러를 부착합니다. 임펠러의 프로펠러를 두 전극의 하단 근처에 배치합니다. 오버헤드 교반의 회전 속도를 200rpm에서 300rpm 사이로 설정하고 195시간 동안 교반 시 16볼트의 전압을 적용합니다.1차 아노다이징 후 알루미늄 판의 색상이 은색에서 회색으로 변합니다. 알루미나 가려움증을 수행하려면 양극 산화 처리된 알루미늄 판을 에칭 용액에 담그십시오. 비커 상단을 알루미늄 호일로 밀봉하고 최소 10시간 동안 저어줍니다.에칭 단계에서 알루미늄 판의 색상이 회색에서 흰색으로 변합니다. 2차 아노다이징의 경우 1차 아노다이징과 동일한 실험 조건을 설정하고 다시 195볼트의 전압을 6시간 동안 적용합니다. 2차 아노다이징 후 알루미늄 판의 색상이 흰색에서 회색으로 다시 바뀝니다.그라디언트 기공 확장을 수행하려면 먼저 인산 용액이 들어 있는 이중 재킷 비커를 순환기에 연결하고 온도를 섭씨 30도로 설정합니다. 비커 옆에 선형 이동 스테이지를 수직으로 놓고 선형 스테이지의 이동 부분에 브래킷을 부착합니다. 선형 스테이지의 움직이는 부분을 홈 위치로 설정합니다.브래킷의 클립을 부착하고 양극 산화 처리된 알

fabrication-gradient-nanopattern-thermal-nanoimprinting-technique

Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

우리는 잘 정의된 microenvironment의 공간 및 시간적 그라디언트를 생성할 수있는 그라디언트 생성 microfluidic 장치의 microfabrication을위한 프로토콜을 설명합니다. 이 방법에서는, 그라디언트 생성 microfluidic 장치가 감독 셀 마이 그 레이션, embryogenesis, 상처 치유, 및 암 전이를 공부하는 데 사용할 수 있습니다.

세포 생물학을위한 그라디언트 생성 Microfluidic 장치

이 문서는 먼저 제대 정맥 내피 세포로부터 인간을 분리하기위한 절차를 설명하고 유동 조건 하에서 호중구 윤회를 검사하기 위해 이러한 세포를 사용하는 방법을 보여줍니다. 유리의 광학 특성을 가진 고분자로 만들어진 낮은 볼륨 흐름 챔버를 사용하여 희귀 세포 집단의 살아있는 세포 형광 이미징도 가능합니다.

흐름 조건에서 인간 제대 정맥 내피 세포 및 호중구 윤회의 연구에서 이들의 사용 격리

이 프로토콜에서는 모세관 힘 리소그래피를 사용하여 두 개의 별개의 고분자 재료로 만든 생체 모방 심장 세포 배양 하층의 제작을 보여줍니다.  설명된 방법은 in vitro 및 in vivo 응용 프로그램을 위해 거시적 심장 조직의 구조와 기능을 엔지니어링할 수 있는 확장 가능하고 비용 효율적인 기술을 제공합니다.

심장 조직 공학을위한 모세관 력 리소그래피

라이브 셀 마이그레이션 연구에 대한 현미경 챔버의 접착제 및 가용성 그라디언트의 조립 방법이 설명되어 있습니다. 엔지니어링 환경 솔루션 기울기와 antifouling 표면과 접착제 트랙을 결합하기 때문에 하나가지도 단서의 상대적 중요성을 확인할 수 있습니다.

형광 현미경과 영상 셀 마이그레이션을위한 접착제 및 가용성식이 그라디언트를 만들기

우리는 스텐실 인쇄 및 석판뿐만 아니라 미세하게 패턴에 대한 배양 세포에 방법을 통해 micropattern과 나노 다공성 금 박막에 대한 기술을보고합니다. 또한, 우리는 물질과 주사 전자 및 형광 현미경 기술을 이용하여 배양 된 세포의 형태를 특성화하는 이미지 분석 방법을 설명합니다.

세포 물질의 상호 작용 연구를위한 나노 기공 골드 패턴의 미세

우리는 수성 환경에서 골격 표면의 세포 친화도를 수정하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 이산화 티타늄 광촉매를 이용하여 광조사된 영역에서 유기 필름을 분해합니다. 우리는 그것이 현장 및 현장 모두에서 스캐폴딩 단백질의 미세 도메인을 생성하는 데 사용될 수 있음을 보여줍니다.

산화 티타늄을 사용하여 수성 환경에서 단백질과 세포를 포토 패터닝<sub&gt; 2</sub&gt; 광촉매

이 문서는 조직 공학에 대 한 셀 정렬을 조절 하는 동심 셀-라덴 히드로에 연속 되지 않은 그라데이션 정적 긴장을 제공 하는 간단한 방법을 소개 합니다.

그라데이션 변형 칩 셀 라덴 히드로에 자극 세포 행동에 대 한

세포 거동의 나노 지형학적 조절을 연구하기 위해 작은 나노 패턴 주형에서 넓은 면적의 나노 패턴 기판을 생산하는 프로토콜이 제시됩니다.

셀 동작의 Nanotopographical 변조를위한 나노 패턴 기판 사용 스티치 기법을 확장

화학적 및 산소 구배의 제어는 세포 배양에 필수적입니다. 이 논문은 세포 이동 연구를 위한 화학적 및 산소 구배의 조합을 안정적으로 생성할 수 있는 폴리디메틸실록산-폴리카보네이트(PDMS-PC) 미세유체 장치를 보고하며, 이는 정교한 기기 없이 생물학 실험실에서 실용적으로 활용할 수 있습니다.

셀 마이그레이션 연구에서 수직 화학 산소 그라디언트에 대한 폴리 디메틸 실록산 - 폴리 카보네이트 미세 유체 장치

이 문서에서는 물리와 화학의 높은 처리량 조작 신호 세포 microenvironments vivo에서 흉내 낸 고을 다중화 인공 세포 MicroEnvironment (MACME) 배열 준비 하 상세한 방법론 단일 셀 프로 파일링 인간 만능 줄기 세포 (hPSCs)를 위한 최적의 휴대폰 환경을 식별 합니다.

멀티플렉스 인공 세포 MicroEnvironment 배열의 제작

당사는 VOP(vessels-on-a-plate)라고 하는 3D 바이오프린팅 기술을 사용하여 표준 6웰 플레이트에서 유연한 크기와 원하는 패턴을 가진 혈관 채널의 고처리량 생산을 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 플랫폼은 손상된 내피와 관련된 질환에 대한 치료법 개발을 발전시킬 수 있는 잠재력을 가지고 있습니다.

크기 및 패턴 유연성을 갖춘 표준 six-well plates의 혈관 투과성을 모델링하기 위한 High-throughput Bioprinting 방법

학습하세요 열 나노임프린팅 기술로 그라데이션 나노패턴을 제조하고 인간 내피 전구세포의 반응을 분석하는 방법을. 이 기법은 물리적 자극을 통한 세포 행동 연구에 활용됩니다.

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