Name: 자기 공명 영상 유효성 검사에 대 한 지방 물 환영: 유연 하 고 확장 가능한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-07T13:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: 학습하세요 지방-물 팬텀 제작 프로토콜을 통해 자기공명영상 정량 분석을 최적화하는 방법을. 이 기법은 고지방 조직 영상 연구에 비용 효율적인 솔루션을 제공합니다.

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이 연구는 국립 보건원 (NIH)과 국립 연구소의 당뇨병과 소화와 신장 질병 (NIDDK) 제공 했다에 대 한 지원 자금 / NIH R01-DK-105371. 우리 지방 물 가상 창조에 박사 Houchun (해리) Hu를 조언과 제안을 위한 감사합니다.

1. 워크스테이션 및 자료 준비
<ol><li>모든 실험실 안전 규칙을 준수 합니다. 눈 보호와 장갑을 착용 하십시오. 시 약의 각각에 대 한 물질 안전 데이터 시트 읽기 사용 하 고 적절 한 예방 조치를 취해야. 재료 및 장비 목록, 화학 처리 절차와 유리 주의 검토 합니다. 주의:이 프로토콜에는 높은 온도에서 열판의 사용을 해야합니다. 주의 사용 하 고 상호 작용 컨테이너 덥고는 열판의 표면을 만지지 마십시오 내 열 장갑 착용.</li>
	<li>작업을 취소 하 고 살 균 제와 표면 청소. 손 씻고 하 고 장갑 넣어.</li>
	<li>모든 악기와 오염의 잠재적 위험을 줄이기 위해 하는 팬텀의 장 수를 증가 모든 유리 항아리의 내부를 소독. 참고: 팬텀 며칠 이상 사용 될 경우 정기적으로 세균성 성장을 방지 하기 위해 에탄올과 완성 된 팬텀의 표면 청소.</li>
</ol>2. 준비 물 솔루션
<ol><li>물 솔루션에 대 한 작업 영역을 준비 합니다. 벤치에는 다음과 같은 재료와 장비를 위치: 실린더, 400ml 비 커, 볶음 바, 규모, 2 x 무게 보트, 주걱, 바늘, 증류수, 가돌리늄-diethylenetriaminepentacetate (DTPA) 대비 에이전트, 2 x 1.0 mL 주사기를 졸업 수용 성 계면 활성 제, 한 천, 그리고 나트륨 benzoate입니다. 참고: 함께 또는 바늘 없는 주사기를 사용할 수 있습니다. 그러나, 바늘을 사용 하 여 측정의 정확성을 향상 되며 내용을 물 또는 오일 솔루션에 추가 되는 때 튄 방지.</li>
	<li>장소 400ml 비 커에 저 어 바. 100 또는 200 mL 졸업 실린더를 사용 하 여 증류수의 300 mL를 측정 하는 비 커에 물을 부 어. 열판에 비 커를 놓고 100 rpm의 저 율으로 90 ° C로 설정 합니다. 참고: 높은 온도 빠른 결과 달성 하기 위해이 프로토콜에 사용 됩니다. 솔루션은 오랜 기간에 대 한는 열판에 남아 있지, 때문에 세트 포인트 온도 열판에 대 한 솔루션의 온도 반영 하지 않습니다.</li>
	<li>보정된 규모를 사용 하 여 무게 보트로 나트륨 benzoate의 0.30 g을 측정. 나트륨 benzoate 물 솔루션에 추가 합니다.</li>
	<li>주사기를 사용 하 여 수용 성 계면의 0.6 mL를 측정. 없음 기포는 다는 것을 확인 하십시오. 솔루션의 중심에 바늘 몇 밀리미터를 누른 천천히 비 커의 벽에 튄 피하기 위해 수용 성 계면 활성 제를 출시 합니다.</li>
	<li>깨끗 한 주사기를 사용 하 여, 가돌리늄-DTPA 대조 대리인의 0.24 mL 측정 합니다. 2.4 단계에서 같은 기술을 사용 하 여 비 커에 추가. 참고: 가돌리늄-DTPA는 팬텀의 MRI 휴식 속성 그 관심의 조직에 맞게 조정 하는 데 사용 됩니다. 독자는 더 관심의 조직의 이완 속성에 맞게 추가 가돌리늄-DTPA의 볼륨을 조정할 수 있습니다.</li>
	<li>무게 보트로 한 천의 9.0 g을 측정 합니다. 물을 비 커에는 agar 주걱으로 천천히 숟가락.</li>
	<li>일단 모든 물 솔루션에 추가 된, 열판 온도 350 ° C를 증가 하 고 5-10 분은 한 천 녹 1100 rpm 속도 바 저 어.<ol>
<li>한 천 녹 인 경우를 확인 하려면 짧게는 열판에서 물 솔루션을 제거, 중지 교 반, 하 고 솔루션의 색상을 확인 하십시오. 클리어 (깃발 또는 덩어리)와 황색 또는 호박색 색깔에 녹은 한 천 이어야 한다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>천이 완전히 녹 인 후 주사기를 사용 하 여 또는 물 해결책의 약 3.5 mL 작은 유리병에 부 어. 테스트 솔루션 설정 하지 않습니다 또는 5-10 분 후 분리, 하는 경우는 agar 하지 녹아 있다. 열판 온도 350 ° C를 다시 증가 하 고 솔루션에 난방 계속.</li>
	<li>제대로 테스트 유리병 세트에 물 솔루션까지 단계 2.8 반복 합니다.</li>
	<li>50 ° C와 100 rpm에서 열판에 물 솔루션을 둡니다. 작업 공간을 청소 하 고 기름 솔루션에 대 한 준비.<ol>
<li>벤치에서 다음과 같은 자료를 제거: 규모, 체중 보트, 주걱, 바늘 (사용) 2 x 1.0 mL 주사기, 증류수, 가돌리늄-DTPA 대비 에이전트, 수용 성 계면 활성 제, 한 천, 및 나트륨 benzoate x 2.</li>
		<li>벤치에는 다음과 같은 재료와 장비를 위치: 400 mL 비 커 (깨끗 한), 바 (깨끗 한) 저 어, 2.0 mL 주사기 바늘, 땅콩 기름, 그리고 오일 수용 성 계면 활성 제와 함께.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 오일 솔루션
<ol><li>장소 깨끗 한 400ml 비 커에 새로운 저 어 바. 졸업된 실린더를 사용 하 여 땅콩 기름의 300 mL를 측정 하는 비이 커에 부 어. 물 솔루션을 포함 하는 비 커를 제거 하 고 오일 솔루션 비 커는 열판에 놓습니다. 1 분 동안 100 rpm의 저 어 속도 90 ° C로 설정 합니다. 참고: 땅콩 기름15인간 지방 조직 중성 지방에 비해 비슷한 핵 자기 공명 스펙트럼을가지고 있기 때문에 사용 됩니다.<ol>
<li>두지 마십시오 석유는 열판에 무인. 기름 너무 뜨겁게 연기를 시작 하는 경우는 열판에서 그것을 제거 하 고는 열판에 석유를 반환 하기 전에 온도 감소 시키십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>깨끗 한 주사기 오일 수용 성 계면 활성 제의 3.0 mL를 측정 합니다. 2.4 단계에서 설명한 동일한 기법을 사용 하 여, 비 커에 오일 수용 성 계면 활성 제를 추가 합니다. 150 ° C와 완전히 혼합 오일 솔루션을 5 분 동안 1100 rpm는 열판을 설정 합니다.</li>
	<li>열판에서 오일 솔루션 고 팬텀을 만들기 위한 준비 작업을 청소.<ol>
<li>벤치에서 다음과 같은 자료를 제거: 2.0 mL 주사기 바늘 (사용), 땅콩 기름, 그리고 오일 수용 성 계면 활성 제와 함께.</li>
		<li>벤치에는 다음과 같은 재료와 장비를 위치: 250 mL 삼각 플라스 크, 저 체적 펫, 부피 피펫으로 홀더, 및 5 x 120 mL 유리 항아리 (깨끗 한), 바.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 팬텀 유제 만들기
<ol><li>물과 오일 솔루션에 대 한 체적 펫을 준비 합니다. 펫에 교차 오염을 방지 하기 위해 그들의 각각 솔루션 사용 될 해야 합니다.<ol>
<li>프로토콜에 사용 되는 볼륨에 피 펫의 크기와 일치. 예를 들어, 2 x 50 mL 체적 펫 (50 mL 물 솔루션 + 50 mL 오일 솔루션) 100 mL 팬텀 만들 대상 50% 지방의 FF 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>열판에 물 솔루션을 놓고는 열판 300 ° C와 1100 rpm으로 설정 합니다. 4-5 분 후 해제는 활동가.</li>
	<li>부피 피 펫을 사용 하 여, 부분적으로 솔루션의 소량 (5-10 mL)으로 피펫으로 작성 하 고 다시 비 커로 발표 하 여 물 솔루션 추출을 위한 준비 인지 확인 합니다. 경우 물 솔루션을 쉽게 제거 하 고 피펫으로 과도 한 나머지 없이 출시 될 수, 그렇지 않으면 다음 단계로 이동는 열판에 두고 고 다시 2-3 분에 합니다. 참고: 교 반 및/또는 가능한 한 자주 따뜻한 물 솔루션을 유지 하는 것이 좋습니다 그래서 물 솔루션의 구성 요소를 설정 하 고, 더 따르게 됩니다. 물 솔루션은 되지 예 열을 전송 하기 전에 자극 때문에 냉각 하는 때 응결 한 경향이 정확한 볼륨 측정 하이 매우 어려울 것 이다.</li>
	<li>신중 하 게 250 mL 삼각 플라스 크를 깨끗 한 볶음 바 추가. 열판에서 물 솔루션을가지고, 적절 한 볼륨 (표 2)를 측정 하 고 삼각 플라스 크에 그것을 전송.</li>
	<li>열판에 오일 솔루션을 놓고 90 ° C에서 및 1100 rpm 솔루션은 균질 되도록 설정 합니다. 1-2 분 후에 열판에서 오일 솔루션을 제거 하 고 삼각 플라스 크와 함께 그것을 대체 합니다.</li>
	<li>오일 솔루션 (표 2)의 적절 한 양을 측정 하 고 천천히 삼각 플라스 크에 물 솔루션에 추가 합니다.</li>
	<li>모든 오일 솔루션을 추가 300 ° C에 온도 증가 하 고 1100 rpm에서 감동 유지. 4-5 분 (저 어 바에서 소용돌이 있어야 함)에 대 한 결합 된 솔루션을 저 어. 유제는 백색, 크림 텍스처와 함께 해야 합니다.</li>
	<li>마그네틱 볶음 바 검색기를 사용 하 여 저 어 바 제거 하. 참고: 저 어 바 리트리버 모든 미래의 유화 액에서 저 어 막대를 제거를 사용 해야 합니다. 각각의 사용 사이 그것을 철저 하 게 청소.</li>
	<li>내 열 장갑을 사용 하 여 신중 하 게 깨끗 한 120 mL 유리 항아리에 삼각 플라스 크에 혼합물을 부 어. 천천히 냉각으로 혼합물에 거품을 방지 하기 위해 유리 항아리의 측면에 혼합물을 부 어.</li>
	<li>삼각 플라스 크와 저 어 바, 청소 하십시오 다음 반복 단계 4.2-4.8, 모든 유령 만들어집니다 때까지 물과 오일 솔루션의 금액을 조정. 참고: 유리를 청소 하기 전에 멋지다 다는 것을 확인 하십시오.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 연구 잠재적인 상충으로 해석 될 수 있는 어떤 상업적 또는 금융 관계의 부재에서 실시 되었다 선언 합니다.

우리 지방 물 환영을 지방 조직 및 트리 글리세라이드 콘텐츠 비보를 계량 하는 데 사용 하는 의료 이미징 기술을 유효성 검사를 위해 적당 한 만드는 강력한 방법을 설명 합니다. 두 개의 저수지 (오일 솔루션)과 한 물 솔루션을 만들어 안정적인 유령 FF 값-50%를 초과 하는 값을 포함 하 여-다양 한 고가의 장비에 대 한 필요 없이 건설 되었다. 높은 FF 유령 (> 50%) 지방 정량화에 대 한 이미징 기술을 조직 또는 갈색 지방이 많은 직물5등 높은 FF 값 장기 올바른지 확인 하기 위해 유틸리티를 제공. FSF의 MRI 견적 잘 알려진된 FF 값와 상관 했다.
단일 열판 (이 프로토콜에서 설명)로 사용할 수 있는 경우에, 각 솔루션에서 열 유지의 물류 기본 관심사입니다. 가 열, 교 반 없이 물 솔루션 쿨 하 고 응결 하기 시작할 수 있습니다. 이 방지 하려면는 열판에 물 솔루션을 배치 (< 100 ° C ~ 10...

지방 조직 및 자기 공명 영상 (MRI) 등 영상 modalities를 사용 하 여 트리 글리세라이드 콘텐츠 측정에 관심 많은 분야에 걸쳐 확장 됩니다. 연구 분야 장기 및 조직 간1, 췌 장2, 골격 근육3등 백색과 갈색 지방 조직 창 고의 조사와 지질의 소성 스토리지를 포함합니다. 지방 정량화에 대 한 이러한 새로운 기술을 개발 되, 메서드는 이미징 매개 변수는 연구와 임상 응용 프로그램에 대 한 확인 필요 합니다.
유령, 조직 또는 기관, 실험 복제본 하 개발 하 고 검증 이미징 기법4낮은-비용, 유연 하며 제어 도구를 제공 합니다. 특히, 유령 지방 구성 하 고 볼륨 비율 또는 지방 분수 (FF) 임상 관심의 조직의 비교에서 물 생성할 수 있습니다. 임상, 조직 및 장기에 FF 값 넓게 변화할 수 있다: 갈색 지방 조직에서 FF 29.7%, 93.95; 사이 폭포 평균 간 steatosis 환자에서 FF는 18.1 ± 9.06; 1.6%와 22.27; 사이 2 형 당뇨병 범위에 대 한 위험이 성인에서 췌 장 FF 그리고 경우에 따라 사전 질병의 듀 켄 씨 근이 영양 증 환자 일부 근육8에 거의 90%의 FF 값 가질 수 있습니다.
지질과 같은 비 극 지 분자 물과 같은 극 지 분자의 구성 하는 솔루션에서 잘 분해 되지 않습니다, 때문에 높은 대상 FF와 안정적인 환영을 만드는 도전 남아 있습니다. 최대 FF에 대 한 50%, 많은 기존 방법은 사용할 수 있습니다 지방 물 환영9,10,,1112를 만들려고. 일반적으로 더 높은 FFs를 달성 하는 다른 메서드는 균질 화기 또는 초음파 셀 방해13,14등 고가의 장비를 필요 합니다. 이러한 기술은 높은 FF 유령에 대 한 로드맵을 제공, 장비 제약 조건 및 다양 한 양의 실험 내용 재현 하 고 강력한 지방 물 환영을 창조 하는 노력을 제한 합니다.
이러한 이전 기술을 따라 건물, 우리 FF 사용자 정의 범위 값 비용 효율적이 고 안정적인 지방 물 환영을 생성 하는 방법을 개발 했다. 이 프로토콜 세부 FF 값이 0%, 25%, 50%, 75% 및 100% 사용 하 여 단일 열판의 지방 환영의 5 x 100 mL를 만드는 데 필요한 단계. 그것은 쉽게 만들고 다양 한 볼륨 (10 ~ 200 mL) 지방 백분율 (0 ~ 100%)를 조정할 수 있습니다. 팬텀 기술의 효능 타당성 연구 비교 지방 물 MRI FF 값을 대상 FF 값에서 생성 된 환영에 평가 했다.

<table><tbody><tr><td>증류수</td><td>아마존</td><td>B000P9BY38</td><td>수용액 기반</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>A1296-100G</td><td>겔화제</td></tr> 수용성 <tr><td>계면활성제</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>P1379-500ML</td><td>계면활성제/유화제</td></tr><tr><td>가돌리늄-DTPA 조영제</td><td>Bayer Healthcare</td><td>50419-0188-01</td><td>자기 공명 영상 조영제.</td></tr><tr><td>벤조산나트륨</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>71300-250G</td><td>방부제</td></tr><tr><td>땅콩 기름</td><td>Amazon</td><td>54782-LOU</td><td>오일 용액 기본</td></tr><tr><td>수용성 계면활성제</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>S6760-250ML</td><td>계면활성제/유화제</td></tr><tr><td>핫플레이트(교반기 포함</td>) <td>Fisher Scientific</td><td>07-770-152</td><td></td></tr><tr><td>교반 막대(달걀 모양)</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>Z127116-1EA</td><td></td></tr><tr><td>400 mL 비커</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>CLS1003400-48EA</td><td></td></tr><tr><td>250 mL Erlenmeyer 플라스크</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>CLS4450250-6EA</td><td></td></tr><tr><td>25 mL 유리 부피 측정 피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-650-2P</td><td>수량 = 2</td></tr><tr><td>50 mL 유리 용량 피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-650-2S</td><td>수량 = 2</td></tr><tr><td>75mL 유리 부피 측정 피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-650-2T</td><td>수량 = 2</td></tr><tr><td>3.0mL 주사기</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>Z248002-1PAK</td><td></td></tr><tr><td>1.0mL 주사기</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>Z230723-1PAK</td><td></td></tr><tr><td>주걱</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>S3897-1EA</td><td></td></tr><tr><td>스케일(100g x 0.01g 해상도)</td><td>아마존</td><td>AWS-100-BLK</td><td></td></tr><tr><td>무게 보트</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>Z740499-500EA</td><td></td></tr><tr><td>120 mL 유리 항아리</td><td>McMaster Carr Supply Co</td><td>3801T73</td><td></td></tr><tr><td>내열 장갑 (쌍)</td><td>Amazon</td><td>B075GX43MN</td><td></td></tr><tr><td>주사기 바늘</td><td>Sigma Aldrich Incorporated</td><td>Z192341-100EA</td><td></td></tr><tr><td>18" 스티어 바 retriver</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-513-70</td><td></td></tr><tr><td>1 드램 투명 유리 바이알</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-339-25B</td><td></td></tr></tbody></table>

자기 공명 영상 유효성 검사에 대 한 지방 물 환영: 유연 하 고 확장 가능한 프로토콜

Fat-Water Phantoms for Magnetic Resonance Imaging Validation: A Flexible and Scalable Protocol

이미지 adipose 조직에 새로운 기술 개발로 이러한 프로토콜의 유효성을 검사 하는 방법을 점점 더 중요 한 되 고 있다. 유령, 조직 또는 장기의, 실험적인 복제 저렴 한 비용, 유연한 솔루션을 제공 합니다. 그러나, 비싸고 특수 장비에 대 한 액세스를 하지 않고 높은 지방 분수와 안정적인 환영 건설 (예., > 갈색 지방 조직에서 본 등 50% 지방 분수 레벨) 지질 소수 성 특성으로 인해 어려울 수 있습니다. 이 작품의 0%, 25%, 50%, 75% 및 100% 기본 랩 공급 (열판, 비 커, 등)를 사용 하 여 쉽게 액세스할 수 있는 구성 요소 (증류수, 한 천, 수용 성 지방 분수와 5 x 100 mL 유령 개체를 만들기 위한 자세한, 저렴 한 비용 프로토콜 제공 계면 활성 제 나트륨 benzoate, 가돌리늄-diethylenetriaminepentacetate (DTPA) 대비 에이전트, 땅콩 기름을 오일 수용 성 계면 활성 제). 프로토콜; 유연 하 게 설계 되었다 그것은 다른 지방 분수와 다양 한 볼륨 유령 개체를 만드는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술을 사용 하 여 만든 유령 지방 분수 값 지방 물 자기 공명 영상에서 생성 된 환영에 대상 값을 비교 하는 타당성 연구에 평가 했다. 이 연구 나왔고 0.998의 색인 상관 계수 (95% 신뢰 구간: 0.972 1.00). 요약 하자면, 이러한 연구 임상 관련 조직 및 장기의 범위에 걸쳐 기법을 이미징 하는 지방 조직 유효성 검사에 대 한 지방 환영의 유틸리티를 보여 줍니다.

물 솔루션 제대로 준비 된 경우 솔루션의 소량 테스트 유리병 (그림 1, 왼쪽된)에서 신속 하 게 응결 한다. 솔루션 분리 (그림 1, 오른쪽), 솔루션 (3.8 프로토콜의 단계에서 설명) 하는 대로 다시 준비 한다. 유제 ( 그림 2, 왼쪽 및 오른쪽의 예제) 분리, 팬텀은 가능한 하 고 폐기 한다. 이 경우, 그것은 일반적으로 유제가 충분히 높은 온도 도달 하지 않았다 때문 에입니다.
성공적인 유령 군데 MRI를 통해 측정 될 수 있는 동질적인 혼합물을 형성 하기 위하여 응결 됩니다. (<strong class=...

이 작품의 목적은 다양 한 지방 백분율 및 볼륨 유령 생산 하는 사용자 지정할 수 있는 실용적인 지방 물 팬텀을 만들기 위한 프로토콜을 설명 하기 위해.

As new techniques are developed to image adipose tissue, methods to validate such protocols are becoming increasingly important. Phantoms, experimental ...

이 방법은 지방 분획이 많은 조직의 정량적 지방-수분 상상을 위해 자기 공명 영상 시퀀스 및 시퀀스 매개변수를 최적화하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 비교적 저렴한 비용으로 구입할 수 있는 일반적으로 사용 가능한 실험실 용품을 사용하여 수행할 수 있다는 것입니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 지질의 소수성 특성으로 인해 지방 분율이 50% 이상인 안정적인 팬텀을 만드는 것이 어렵기 때문에 어려움을 겪을 것입니다.물 용액을 준비하려면 먼저 400ml 비커에 교반 막대를 넣습니다. 그런 다음 100 또는 200 밀리리터 눈금 실린더를 사용하여 300 밀리리터의 증류수를 측정하고 물을 비커에 붓습니다. 비커를 핫 플레이트에 놓고 90RPM의 교반 속도로 섭씨 100도로 설정합니다.보정된 저울을 사용하여 계량 보트에 0.30g의 안식향산나트륨을 측정합니다. 수용액에 안식향산나트륨을 첨가합니다. 다음으로, 주사기를 사용하여 0.6 밀리리터의 수용성 계면활성제를 측정합니다.기포가 없는지 확인하십시오. 용액 중앙에서 바늘을 몇 밀리리터 정도 잡고 비커 벽에 튄 자국이 없도록 수용성 계면활성제를 천천히 방출합니다. 깨끗한 주사기를 사용하여 가돌리늄 DTPA 조영제 0.24ml를 측정합니다.같은 기술을 사용하여 비커에 추가하십시오. 그런 다음 주걱으로 한천 9.0g을 물과 함께 비커에 천천히 숟가락으로 떠냅니다. 물 용액에 모든 것이 추가되면 핫플레이트 온도를 섭씨 350도로 높이고 막대 속도를 1100RPM으로 5-10분 동안 저어 한천을 녹입니다.한천이 녹았는지 확인하려면 핫플레이트에서 수용액을 잠시 제거하고 교반을 멈추고 용액의 색상을 확인하십시오. 녹은 한천은 투명하고 노란색 또는 호박색이어야 합니다. 한천이 완전히 녹으면 뜨거운 곳에서 수용액 비커를 제거하고 약 3.5ml의 수용액을 1드람 바이알에 붓습니다.솔루션을 확인하여 명확하고 동질적인지 확인하십시오. 수용액을 섭씨 50도 및 100RPM의 뜨거운 곳에 두십시오. 작업 공간을 청소하고 오일 용액을 준비합니다.땅콩 기름은 트리글리세라이드 및 인간 지방 조직에 비해 유사한 핵 자기 공명 스펙트럼을 가지고 있기 때문에 오일 용액에 사용됩니다. 깨끗한 400ml 비커에 새 교반 막대를 넣습니다. 눈금이 매겨진 실린더를 사용하여 땅콩 기름 300ml를 측정하고 비커에 붓습니다.수액이 들어 있는 비커를 제거하고 오일 용액 비커를 핫 플레이트에 놓습니다. 1분 동안 100RPM의 저어주기로 핫플레이트를 섭씨 90도로 설정합니다. 핫플레이트의 오일을 방치하지 마십시오.깨끗한 주사기로 수용성 계면활성제 3.0ml를 측정합니다. 이전과 동일한 기술을 사용하여 비커에 수용성 계면활성제를 첨가합니다. 핫 플레이트를 섭씨 150도, 1100RPM으로 5분 동안 설정하여 오일 용액을 완전히 혼합합니다.뜨거운 곳에서 오일 용액을 제거하고 팬텀을 만들 준비를 위해 작업 공간을 청소하십시오. 팬텀 에멀젼을 만들려면 오일 및 물 용액에 대한 부피 측정 피펫을 준비합니다. 부피 측정 피펫은 교차 오염을 방지하기 위해 각 용액에만 사용해야 합니다.피펫의 크기를 프로토콜에서 사용 중인 부피와 일치시킵니다. 예를 들어, 50ml 부피 측정 피펫 2개를 사용하여 목표 지방 분율이 50%지방인 100ml 팬텀을 생성합니다. 핫플레이트에 수용액을 놓고 핫플레이트를 섭씨 300도 및 1100RPM으로 설정합니다.4-5분 후 교반을 끕니다. 체적 피펫을 사용하여 피펫에 소량의 용액을 부분적으로 채우고 비커로 다시 방출하여 물 용액을 추출할 준비가 되었는지 확인합니다. 피펫에 과도한 잔여물 없이 수용액을 쉽게 제거하고 방출할 수 있는 경우 다음 단계로 이동합니다.그렇지 않으면 핫 플레이트에 그대로 두고 2-3분 후에 다시 확인하십시오. 이제 250ml 삼각 플라스크에 깨끗한 교반 막대를 조심스럽게 추가합니다. 핫 플레이트에서 물 용액을 제거하고 적절한 부피를 측정한 다음 삼각 플라스크로 옮깁니다.오일 용액을 핫 플레이트에 놓고 섭씨 90도 및 1100RPM으로 설정하여 용액이 균질한지 확인합니다. 1-2분 후 핫 플레이트에서 오일 용액을 제거하고 삼각 플라스크로 교체합니다. 적절한 양의 오일 용액을 측정하고 삼각 플라스크에 물 용액을 천천히 첨가합니다.이제 에멀젼을 만드는 이전 단계가 효과가 있었는지 확인할 수 있습니다. 모든 오일 용액이 추가되면 온도를 섭씨 300도까지 높이고 4-5분 동안 1100RPM으로 교반을 유지합니다. 교반 막대에서 소용돌이가 있어야 합니다.에멀젼은 크림 같은 질감의 흰색이어야 합니다. 이제 마그네틱 교반 막대 리트리버로 교반 막대를 제거합니다. 내열 장갑을 사용하여 삼각 플라스크의 혼합물을 깨끗한 120ml 유리병에 조심스럽게 붓습니다.혼합물이 냉각될 때 혼합물에 거품이 생기지 않도록 혼합물을 유리병 측면에 천천히 붓습니다. 삼각 플라스크와 교반 막대를 세척한 후 모든 팬텀이 생성될 때까지 물과 오일 용액의 양을 조정하여 이 단계를 반복합니다. 성공적인 팬텀은 응고되어 균일한 혼합물을 형성하며, 이는 자기 공명 영상(MRI)을 통해 이미지화하고 측정할 수 있습니다.여기에 표시된 것은 0%25%50%75% 및 100%양성자 밀도 지방 신호 분율의 지방 분율 또는 자기 공명 영상에서 얻은 FSF 맵으로 구성된 팬텀의 약간의 색상 차이에 대한 그림으로, 목표 지방 함량과 유사한 균일한 FSF 측정을 나타냅니다. 높은 일치 상관 계수와 회귀선의 95% 신뢰 대역 내에 동일선이 포함되어 있다는 것은 MRI로 관찰된 평균 FSF 값이 뚱뚱한 물 팬텀에서 알려진 FF 값과 크게 다르지 않다는 것을 시사합니다. 우리는 인간 갈색 지방 조직에 대한 연구를 위해 자체 고지방 분획 팬텀을 만들려고 시도했을 때 이 방법에 대한 아이디어를 처음 얻었으며, 문헌에 설명된 많은 방법이 불완전하게 설명되어 있거나 값비싼 장비가 필요하다는 것을 발견했습니다.이 비디오를 시청한 후에는 지방 분율이 50%보다 큰 팬텀을 만드는 방법을 잘 알게 될 것입니다.이 절차를 시도하는 동안 에멀젼에 사용될 기름과 물 용액의 양을 정확하게 측정하는 것이 중요합니다. 이것은 비율이 궁극적으로 팬텀의 지방 분율을 결정하기 때문에 중요합니다.

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연구

JoVE Journal

Medicine

의학

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