Name: 양육 및 조사 연구에 대 한 Eristalis tenax Hoverflies의 유지 보수 장기 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-19T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: 학습하세요 Eristalis tenax 수컷파리의 장기 양육 및 관리 방법을 통해 행동 및 신경 메커니즘 연구를 수행하는 표준화된 실험실 프로토콜을 확립하는 방법을.

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우리 실험실에서 연구 현재 호주 연구 위원회 (아크, DP170100008 및 DP180100144), 미국 공군 사무실의 과학적 연구 (AFOSR, FA9550-15-1-0188), 및 Stiftelsen 올레 Engkvist Byggmästare에 의해 자금 지원 (2016/348). 꽃등에과 주식, Cederholms Lantbruk 및 C M & T L 그린 & 아들 소 배설물 hoverflies, 그들의 농장에 대 한 개발을 연구소의 멤버 과거 감사 그리고 애들레이드와 웁살라 식물원 컬렉션에 대 한 허가 및 지속적인 지원입니다.

1. 설정 포로 E. tenax 식민지
<ol><li>성숙한 애벌레 (단계 1.2)의 컬렉션을 통해 식민지를 설정 또는 양자 택일로 무료 비행 hoverflies (1.3 단계)의 컬렉션을 통해.</li>
	<li>
성숙한 애벌레의 컬렉션
	<ol>
<li>두 번째 수집 하 고 3 번째 가축 농장에서 비료 구 덩이에서 애벌레 탈피. 참고: 성숙한 애벌레는 그들의 철새 단계의 시작 하는 동안 찾을 쉬운 pupate를 어두운 건조 한 환경을 적극적으로 찾고. 이 비료 구 덩이 축축한 비료는 짚의 다량을 포함 하는 건조 지역에 가까운 테두리 하 경향이 있다. 우리는 웁살라, 스웨덴 근처 가축 농장에서 사용 권한에서 수집.</li>
		<li>후면 소 배설물에 성숙한 애벌레 단계 3.2에 설명 된 대로.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
야생 Hoverflies의 컬렉션
	<ol>
<li>필드, 식물원 및 공원에서 보통 있는 그물 세공에 의해 야생 hoverflies를 수집 꽃 식물의 풍부가 있다. 참고: 우리는 포함의 세 애들레이드 식물원, 웁살라, 스웨덴에 걸쳐 다양 한 공원과 식물원에서 Myponga, 사우스 오스트레일리아 그리고 낙농 여러 위치에서 사용 권한에서 수집.</li>
		<li>2 단계에에서 설명 된 대로 하우스 필드 hoverflies 수집.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Hoverflies의 주택 및 장기적인 유지 관리
<ol><li>Hoverflies 그룹 20의 또는, 30 cm x 45 cm 비닐 봉지 또는 감 금 소는 곤충 하우스 (25 cm x 25 cm x 25 cm) 더 큰 그룹에 대 한.</li>
	<li>음식을 제공 하 고 광고 libitum, 여러 촉촉한 코 튼 볼 위에 꿀벌 꽃가루와 2-3 mL 꿀의 10-20 곡물의 형태로 물. 참고: 비닐 봉지에 주택, 중요 하다 면 볼은 촉촉한 지나치게 포화, 가방 안에 물의 어떤 축적 생존 율에 해로운 될 수 있습니다. 반대로, 곤충 기르는 장에 주택, 메쉬 면 발생에 중요 한 증발에 대 한 수 있습니다. 목화 공을 따라서 얕은 용기에 배치 해야 하 고 완전히 포화 되.<ol>
<li>실 온에서 6 시간에 대 한 피드 hoverflies을 남겨 주세요.</li>
		<li>8-10 ° C에 냉장고에서 그들의 주택에 음식과 물을 함께 hoverflies를 배치 하 고 완전 한 어둠 속에서 계속. 참고: 최대 절전 모드, 감소 된 활동 및 신진 대사 속도의 상태가 hoverflies를 하면 어둠 속에서 8-10 ° C에서 hoverflies를 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>3-4 일 마다 냉장고, 따라서 깨고 인공 동 면을 하 고 먹이 발생 손질에서 hoverflies를 제거 합니다.<ol>
<li>새로운 플라스틱 가방이 나 신선한 음식과 물과 깨끗 한 곤충 케이지 hoverflies 전송. 이 전송 하거나 작은 숫자의 또는 phototaxis, 더 큰 숫자를 사용 하 여 수동으로 수행할 수 있습니다.</li>
		<li>Phototaxis를 활용 하려면 이전에 깨끗 한 곤충 케이지를 가입, 이스케이프 하지 않고 둘 사이 자유롭게 이동 하는 hoverflies에 대 한 개방을 있는지 확인 합니다. 불투명 원단으로 오래 된 곤충 케이지를 커버. hoverflies와 깨끗 한 곤충으로 빛을 향해 이동 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>피드와 6 h에 대 한 실 온에서 신랑 hoverflies를 수 있습니다.</li>
	<li>음식과 그들의 주택에 완전 한 암흑에서 8-10 ° C에서 냉장고에 물 hoverflies를 반환 합니다. 이 hoverflies의 인공 절전 재개.</li>
	<li>계속 그들의 포로의 기간에 대 한 건강 및 hoverflies의 장 수를 보장 하기 위해 최대 절전 모드, 모든 3-4 일의 순환 끊기.</li>
</ol>3. 실험실 Rearing E. tenax 의
<ol><li>후면 성숙한 애벌레 가축 농장 (3.2 단계)에서 수집 하거나 또는 후방 벗 야생 잡힌된 여성 (단계 3.3)에 의해 누워 계란.</li>
	<li>
실험실의 가축 농장에서 성숙한 애벌레 양육
	<ol>
<li>장소 애벌레 30 L 양동이에 가축 농장에서 암소 두 엄에서 수집.</li>
		<li>큰 상자 또는 가방 (50-60 L의 최소 볼륨) 내에서 성숙한 애벌레를 포함 하는 물통을 양동이의 가장자리의 높이까지 20-30 L 나무 부스러기를 장소. 참고: 3rd 탈피 애벌레 나무 부스러기에 크롤 링 하 고 pupate를 수 있습니다.</li>
		<li>따라서 애벌레도 어떤 신흥 hoverflies 피할 수 있도록 상자 또는 가방을 통해 드러 워 진 수 있도록 천장에서 이중 계층된 모기장을 끊지. 참고: 조치로, 이중 면 끈끈한 테이프를 사용할 수 있는 모든 탈출 애벌레 붙어 얻을 것 이다 그리고이 테이프에 pupate는 설치를 둘러싸고. 만약 그들이, 일수로 전에 번데기를 제거 합니다.</li>
		<li>집 애벌레와 번데기 상 온 (21.5 ± 2.5 ° C), 그리고 근무 시간 동안 룸 조명으로 간접 햇빛 중에 노출 또는 어두운 빛: 12 h 12 h의 빛: 다크 사이클에서 유지. 참고: 24 시간 빛에 노출 생존 율에 해로운 될 수 있습니다. 가축 농장 pupation 시간에서 수집 된 애벌레에 대 한 컬렉션의 시간에 그들의 성숙에 따라 컬렉션 후에 1-20 일에서 달라 집니다.</li>
		<li>음식 및 물 거 모기 내에서 인클로저 (준비 단계 2.2에서)으로 예상된 일수로 날짜 이전 net 2-3 일 마다 교체. 일수로는 pupation 후 7-10 일 발생 합니다.</li>
		<li>신흥 주택 2 단계에에서 설명 된 대로에 그들을 배치 하기 전에 실 온에서 6 시간에 대 한 피드를 hoverflies 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
실험실 양육의 계란 벗 야생 잡힌 여성에 의해
	<ol>
<li>꽃등에과 주택을 달걀, 주택 (2 단계), 변경 하기 전에 그리고 냉장고에 그들을 반환 하기 전에 확인 하십시오. 야생 벗 여성에 의해 산란 실 온에서 모두 8-10 ° C에서 발생합니다.<ol>
<li>100 m m x 20 m m 수돗물의 70 mL를 포함 하는 배양 접시에에서 계란을 놓고 부 화 발생, 산란 후 보통 2-3 일 때까지 실내 온도에 유지.</li>
		</ol>
</li>
		<li>장소에는 신선한 토끼 배설물의 1 L와 수돗물 1 리터에 포함 된 2.3 L 물통에 애벌레 부 화.<ol>
<li>2-3 일 마다 슬러리를 확인 하 고 3rd 탈피 애벌레 등장 하기 전에 슬러리를 건조 하지 않습니다 보장 하기 위해 필요에 따라 추가 수돗물을 추가.</li>
		</ol>
</li>
		<li>양동이, 토끼 배설물 슬러리 큰 상자 (최소 볼륨 30 L)에서 애벌레를 포함 된 위치 20 L 나무 부스러기의 포함. 나무 부스러기는 양동이의 가장자리의 높이 확인 합니다. 참고: 3rd 탈피 애벌레 나무 부스러기에 크롤 링 하 고 pupate를 수 있습니다.<ol>
<li>이중 계층된 모기장 애벌레도 어떤 신흥 hoverflies 피할 수 있도록 상자를 놓습니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>집 애벌레와 번데기 상 온 (21.5 ± 2.5 ° C), 그리고 근무 시간 동안 룸 조명으로 간접 햇빛 중에 노출 또는 어두운 빛: 12 h 12 h의 빛: 다크 사이클에서 유지. 참고: 24 시간 빛에 노출 생존 율에 해로운 될 수 있습니다.</li>
		<li>Pupation 15-20 일 후 발생 하는 것을 기대 합니다. Pupae를 수집 하 고 거기 eclose에 hoverflies 수 있도록 곤충 장에 배치.</li>
		<li>제공 음식 및 물 (준비 단계 2.2에서) 예상된 일수로 날짜 이전-일수로 pupation-후 6-10 일을 발생 하 고 2-3 일 마다 교체 됩니다.</li>
		<li>2 단계에서에서 설명한 대로 주택에 그들을 배치 하기 전에 실 온에서 6 시간에 대 한 피드 hoverflies 신흥 수 있습니다. 참고: 모두 애벌레의 pupation와 번데기의 일수로 지연 될 수 있습니다 저장 하 여 8-10 ° c.에 어둠 속에서 이 위해 토끼 배설물 슬러리에 나무 부스러기에 pupae 애벌레를 저장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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저자는 공개 없다.

우리의 기술 (그림 1)를 사용 하 여 hoverflies 실험실에서 1 년 이상의 기간 동안 유지 하 고 되었습니다 포로397 개월 후 행동 실험에서 성공적으로 사용. 실제로, 그것은 보인다 어긋나 요, 더 자연 스러운 환경에 있는 hoverflies를 유지 하는 경우에 12 h 빛: 12에서 h 어두운 조건, 실내 온도에, 실질적으로 감소 그들의 수명이 2-3 개월. E. tenax 1 년 이상에 대 한 우리의 인공 동 면 주기에서는 이전 보다 훨씬 오래 유지 (77 일33, 4 개월9, 18 주30) 다른 프로토콜을 사용 하 여 시도 합니다. 이 증가 수명에 영향을 미치는 주요 요소는 아마 8-10 ° c.에 인공 최대 절전 모드를 사용 하 여 최대 절전 모드를 주기적으로 해제 하 여 모든 3-4 일 (2 단계, 그림 1), 우리 허용 hoverflies 모두 공급 하 고 자기 신랑, 따라서 유지 하 고 영양 상태는 hoverflies의 웰빙 무게 (에서 관찰 된 증가 의해 입증 그림 4)와 (그림 3및 참조39) 포로에서 오랜 기간 후에 운동 활동에 변화가. 실제로, 인공 동 면에서 실패 하는 시도의 문학에서 보고서는 사망률 증가 몰드9의 존재 하는 최대 절전 모드 주기를 휴식 하지 않습니다.
또한, 음식 근원으로 꽃가루의 제공으로 문학에 걸쳐 몇 가지 논쟁이 있다. 몇몇 종이 꿀벌 꽃가루는 충분 하 고, 산란을 위해 특별히 고만 건조 또는 참으로 신선한 꽃가루의 제공은 적당 한9,29국가. 우리의 연구 결과 나타냅니다 꿀벌 꽃가루 벌 꿀와 물으로를 보완 하 여 우리 장 수 및 포로, 남녀 (그림 4)와 산란에서 여전히 발생 하는 체중의 증가와 오랜 기간 후에 산란 참조 여성 포로39이상 5 개월 후. 이 증가 된 장 수 모든 생활 단계에서 hoverflies의 동작을 공부 수 있습니다.
필드에서 여성 hoverflies 계절 최대 절전 모드 전에 수정 된 하 고 생식 diapause, 정자 저장 및 oocytes 봄28까지 저 개발, 유지에 남아. 주어진 전형적인 여성은 60 일29에 3000 알을 낳고, 이러한 계란의 양육은 따라서 우리의 포로 인구를 증가 하는 신속 하 고 효율적인 방법. 그러나, 최대 절전 모드 후 oocyte 개발 이어질 요인의 우리의 현재 이해는 제한 됩니다. 온도, 습도, 빛의 강도 및 영양 상태 모두 생식 diapause28,40제어 역할으로 제안 되었습니다. 이러한 요인의 실험적인 조작 산란 타이밍 및 속도의 더 큰 지배 될 수 있습니다.
마찬가지로, 우리는 성공적으로 지연, 애벌레의 발전 뿐만 아니라, pupae, 일수로 2 주 동안, 8-10 ° C에서 어둠 속에 저장 하 여 생존을 더 이상 수 있지만. 치유30 때 번데기 온도 10 ° c 25 ° C에서 삭제 되었다 최대 37 일의 번데기 기간 증가 보고 하는 사실, 이러한 전략을 고용 하 고 계란의 생산 및 pupae의 개발 지연 포로 인구의 인구 통계의 큰 조작에 대 한 수 것입니다.
공급의 시간적 일관성 큰 수확량 보다 우리의 요구 사항에 대 한 훨씬 더 큰 중요성은,이 온실에서 수 분 등 다른 용도 위해 더 중요 한 수 있습니다. 우리는 토끼 배설물 우리의 기술을 사용 하 여, 우리가 있어 163 ± 34 eclosed hoverflies 계란 (N = 3)의 각 클러치에서 발견. 우리는 전형적인 여성 낳는 최대 200 달걀40,이 크게 영향을 미치는 애벌레 성장9로 연루 되어 어느 감소 인구 과잉 그리고 음식 경쟁 하거나 온도 조정 하 여이 수확량을 증가 수 있습니다. ,31,,4041. 그러나, 미디어의 기초 크게 수익률32영향 징후가입니다. 또한, 다른 척추 동물29,30,,3142에서 배설물, 반대로 토끼 배설물은 상대적으로 냄새 무료, 식민지 정상적인 실험실 조건 하에서 지켜질 수 있도록 없이 추가 환기에 대 한 필요 합니다. 미디어, 애벌레의 밀도 감소 또는 추가 영양 효 모, 같은 보충으로 아마 충분 한 수율31,32, 를 완벽 하 게 최적화 하는 20-25 ° C, 사이 일정 한 온도 유지 40.
자유롭게 비행 hoverflies, 또는 유전으로 다양 한 포로 인구를 유지의 충분 한 번호를 수집의 실용성은 모두 허무 하 고 소규모 연구 프로젝트에 대 한 제한 시간. 따라서, 야생 성관계 여성의 자손을 양육 하 고 성숙한 애벌레7, 수확 하 여 공급을 보충 연구에서 E. tenax 의 항시 이용에 대 한 가장 실용적인 옵션을 수 있습니다. 이러한 메서드는 컬렉션 발생할 수 있는, 두 성인 hoverflies의 장 수를 보장에 대 한 필요가 있다 고 모든 계란을 양육 하 여 계절에 제한으로 벗 여성을 캡처한.

Hoverflies는 비행 동작1, 기본 모션 비전2, 수 분 효율3,4, 신경 메커니즘을 포함 한 과학적 질문의 범위를 조사 하는 유용한 모델 급부상 5 , 6 그리고 미생물 면역7. 그러나, 일부 dipteran 같은 다른 모델, 초파리8, 반대 연구소 과학 연구에 사용 하기 위해 hoverflies의 양육에 대 한 표준화 된 프로토콜 없습니다 있습니다. 실제로, 현재 문학 꽃등에과 Eristalis tenax사육 방법에 설명 합니다, 경우에 이들 중 많은 작물 수 분, 유기 폐기물, 또는 해 부 학문의 바이오-저하에 대 한 hoverflies의 대량 재배에 대 한 개발은 9 , 10 , 11. 따라서, 그들은 인구의 유전 적당을 유지 하면서 건강 한 강력한 hoverflies의 일관 된 공급을 제공 하는 쉬운 프로토콜에 대 한 필요성을 해결 하지 않는.
꿀벌과 땅벌, 다음 hoverflies는 가장 중요 한 야생, 일반 pollinator 그룹12,13중 하나입니다. 약 6000 꽃등에과 종 전세계14,15, 스웨덴16 에 75 속에 300 이상 종 그리고 인도17,,1819에 69 속에서 이상의 300 종 있다. 예를 들어 농업으로 중요 한 마멀레이드 꽃등에과 Episyrphus balteatus 과 무인 항공기 비행, 우리가 여기에, 초점 Eristalis tenax, 유럽, 아메리카 및 아시아6,16에서 발견 되 17,18,19,20,21,22,23,,2425. Hoverflies도 하루 종일 일년 내내 동등 하 게 활성화 되지 않습니다. 실제로, 시즌, 그리고 일 뿐만 아니라 빛의 강도, 변동 시간 뿐만 아니라 온도, 습도, 바람 속도 영향을 hoverflies26,27의 활동 패턴. 필드에서 Eristalis 는 지중해 기후11, 년 중 언제 든 지 찾을 수 있습니다 하지만 활성 hoverflies의 숫자는 겨울에 훨씬 낮은. 반대로 추운 온대 기후에서 Eristalis 겨울 동안 동 면 하 고 적극적으로 행동 하는 3 월2810 월을 통해 주위에서 필드에 찾을 수 없습니다.
자유롭게 비행 hoverflies 필드에 연명 하 여 수집할 수 있습니다. 실제로, 온대성 기후에서 그들은에서 발견에서 가장 풍부는 중반 늦은 아침에 진정 화창한 여름 및가을26,27에 걸쳐 끝에. 또는, 둘째 E. tenax 애벌레를 성숙 또는 세 번째 탈피를 식별 및 힙을 배설물과 같은 유기 물질을 부패 또는 유기적으 오염 된 스트림10,11에서 수확 수 있습니다. 실제로, 출판된 기술 연구소 E. tenax 의 양육에 대 한 모든 기반 식물 또는 배설물 문제9,10,29, 의 일부 양식을 통해 유기적으 오염 된 물에서 애벌레를 양육 30 , 31 , 32 , 그러나 33., 애벌레 컬렉션 시즌에 의해 제한 됩니다 고만 가능한 컬렉션 도구입니다 늦 봄에 서가을11의 시작. 또한, 애벌레의 풍부는 영향을 현지 날씨 패턴, 주위 온도의 변화에에서 산란 하 고 애벌레의 개발 속도9,28의 두 발생에 영향을 미칠 수 있습니다.
따라서, 실험실 내에서 계란과 애벌레를 양육 하 여 hoverflies의 건강 주식을 유지 하는 전략 실험 계절 이나 현지 날씨 이벤트에 관계 없이 연중 실시 수는 보장 하기 위해 필요 합니다. 중요 한 것은, 여기에서 설명 하는 기술만 야생 성관계 여성에서 hoverflies를 낳습니다. 이것은 Francuski, 외에 의해 연구로 서 중요 한 10 실험실의 유전적 다양성 인구 hoverflies의 사육, 원래 120 성숙한 애벌레에서 설립, 발견 급속 하 게 잃었다. 그들은 그러므로이 필요가 이러한 보충, 또는 심지어 완전히 다시 설정, 필드 수집 개인과 각 봄10상업 작물 수 분 목적을 위해 사용 될 식민지에 있는 유전적 다양성을 유지 하는 것을 제안 했다.
비전, 또는 다른 감각 구애와 짝짓기에 사용에 대 한 작업, 따라서 좋습니다 다시 식민지를 설정 하거나 필드 수집 개인 식민지를 정기적으로 보충 하 여 유전적 다양성을 유지. 이 성적 선택에 영향을 미치는 유전적 부동 인구의 중요 합니다. 실제로, 야생, 남성 hoverflies에서 식별 하 고 적합 한 동료를 요격으로34그들의 영토 방어 하 여 권리를 짝짓기에 대 한 다른 남성과 경쟁 해야 합니다. 이 과정 통해 최고의 비전 및 공간 주의 남성은 짝짓기에 가장 성공 가능성이 이러한 특성의 다음 세대에 따라서 전달 됩니다. 이러한 지속적인 프로세스의 결과 효과, 부분적으로, hoverflies35,36의 시각적 통로에 성적인 dimorphisms의 존재에 의해 입증 됩니다. 포로에서 남성 하지 않은 분야에서 성공적인 짝짓기를 같은 장애물: 첫째, 암컷은 쉽게 사용할 수, 그리고 작은, 밀폐 된 인클로저 영토 행동, 다른 짝짓기 액세스를 억제 하기 위해 행동의 효과 부정 하는 둘째 경쟁 한 남성 초파리 melanogaster, 성적 선택의 실험적인 제거 전체 바디 크기, 고환 크기와 정자 생산37, 남자의 감소 속도 감소와 포로 인구에 큰 영향을 보여줘 왔다 구애 행동38 따라서, 포로 breeding 프로그램, 성적 선택의 어떤 고려 사항 없이 모두 비주얼 및 동작 연구 이후에 실시에 심대한 영향을 있을 수 있습니다.
우리는 여기 건강 한 hoverflies의 일관 된 공급을 제공 하는 간단 하 고 비용 효율적인 솔루션을 설명 합니다. 프로토콜은 유연 하 고 쉽게 다시 시작 및 연구의 요구에 따라 고급.

<table><tbody><tr><td>꿀벌 꽃가루</td><td>숲 슈퍼 식품</td><td></td><td>모든 브랜드의 꿀벌 꽃가루가 적합합니다</td></tr><tr><td>꿀</td><td>Bramwells</td><td></td><td>모든 브랜드의 액체 꿀이 적합합니다</td></tr><tr><td>토끼 배설물은</td><td></td><td></td><td>슬러리로 만든 암소 또는 돼지 분뇨로 대체 할 수 있습니다</td></tr><tr><td>BugDome</td><td>Australia 곤충학 용품</td><td>EM42222</td><td></td></tr><tr><td>비닐 봉지</td><td>Woolworths Homebrand</td><td></td><td></td></tr><tr><td>모기장</td><td>Clas Ohlson</td><td>34-1113</td><td></td></tr><tr><td>Cotton Balls</td><td>Woolworths Select</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fridge</td><td>Hisense</td><td></td><td>냉장고는 안정적인 8-10°C를 유지해야 합니다; 씨&nbsp;</td></tr><tr><td>양동이 (2-3L)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>대형 플라스틱 통 (30L)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>나무 부스러기</td><td>폴라드 톱밥 용품</td><td>맥시 플레이크 (75)&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>백 클립</td><td>IKEA</td><td>Bevara 303.391.70</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 (100mm x 20mm)</td><td>코닝</td><td>430167</td><td></td></tr></tbody></table>

양육 및 조사 연구에 대 한 eristalis tenax hoverflies의 유지 보수 장기

Rearing and Long-Term Maintenance of Eristalis tenax Hoverflies for Research Studies

약된 6000 종으로 전세계, hoverflies 길 들 여 진된 꿀벌을 대체 가루도 생태학적으로 중요 하다. 그러나, 그들은 또한 제어 된 실험실 설정에서 모션 비전 및 비행 역학 연구에 유용한 과학적 모델입니다. 애벌레는 유기적으 오염 된 물에서 개발, 그들은 투자를 조사 하 고 미생물 면역에 대 한 유용한 모델입니다. 발생 하는 대규모 상업 사육 농업에 대 한 이미, 과학적 연구에 대 한 포로 인구를 유지 하기 위한 표준화 된 프로토콜 없습니다 있습니다. 이것은 질량 기간 일관성, 안정적이 고 강력한 연중 자주 다른 연구 목적을 위해 필요에 따라 인구를 제공 하지 못할 수 있습니다 최대 수 분 동안 출력에 초점을 맞추고 상업 포로 사육 프로그램으로 중요 한. 따라서, 설정, 유지 및 포로 연구 인구를 새로 고침 하는 방법이 필요 합니다. 여기, 우리는 인공 동 면 주기, 영양 및 주택 요구 이외에 Eristalis tenax의 긴 기간 유지 보수에 대 한 활용 설명. 이러한 방법을 사용 하 여, 우리는 크게 증가 건강과 장 수의 E. tenax 이전 보고서에 비해의 포로 인구. 우리 또한 소규모 양육 방법 및 수율을 최적화 하 고 인구 인구 통계 조작에 대 한 옵션을 설명 합니다.

비주얼 및 동작 연구 ( 그림 1에서 요약) 건강 한 인구를 유지 하는 3 방향 전략을 개발 했습니다. 우리의 방법은 야생 (단계 1, 그림 1)에서 hoverflies의 컬렉션으로 시작합니다. 우리 실험실에서 hoverflies는 지 내게 곤충 감 금 소 또는 비닐 봉지, 인공 동 면 주기 (단계 2, 그림 1)에서 실질적으로 연장 그들의 수명. 증가 숫자, 야생 성관계 여성 (3 단계, 그림 1)에서 자손을 기르는 수 있습니다.
우리는 야생 hoverflies의 광대 한 숫자를 잡는 시간 집중적인 노력, 때도 환경 조건이 유리한 나타났습니다. 반면, 가축 농장은 소스 (1 단계, 그림 1), 야생 hoverflies의 큰 숫자를 훨씬 더 효율적인 방법의 비료 구 덩이에서 수집 하는 최대 700 애벌레의 0.03 m3 에 우리와 함께 수확 성숙한 애벌레의 성공적인 양육 두 엄입니다. 또한, 후면 계란 캡처된 벗 여성에 의해 우리의 기술을 성공 (단계 3, 그림 1)을 입증 해야 합니다. 여성이 동안 지중해 기후 (애들레이드)에서 캡처하고 겨울 개월 누워 계란의 여러 배치 24 클러스터 20 주 동안에 19 여성에서 관찰 합니다. 이러한 계란 배치의 10 물, 모두의 비옥한 되었고 애벌레의 부 화에서 결과에 배치 했다. 애벌레의 3 그룹에이 지점을 넘어 촬영 했다 그리고 토끼 배설물 슬러리에 배치, 163 ± 결과 34 아니 관찰된 성별 바이어스 (그림 2)와 hoverflies을 등장 (평균 ± SD, N = 3).
이러한 실험실 reared hoverflies의 건강 무게의 비교 및 필드 캡처한 개인에 비해 여성 hoverflies의 운동 활동에 의해 결정 되었다. 일반 운동 활동 (LAMS), 운동 활동 모니터링 시스템을 사용 하 여 앞에서 설명한39평가 했다. 우리의 인공 동 면에서 감 금에서 4 개월 주기 후 실험실 reared 사이의 야생 잡힌된 hoverflies 무게 (그림 3A) 또는 (그림 3B) 활동에 중요 한 차이가 관찰 되었다. E. tenax 인공 최대 절전 모드 주기를 사용 하지 않고 실험실에 유지 되었다 우리 2.5-3 개월 (73 ± 5 명의 여성을 위해 7 일) 및 79 ± 11 남성에 대 한 일의 수명 장 수에 상당한 감소를 보았다. 인공 동 면에는 hoverflies 유지 했다 때 그들은 12 개월 초과 살 수 없었다.
또한, 긴 기간 유지 보수의, 우리의 설명된 방법을 사용 하 여 효과 reared 연구소 hoverflies의 남녀에 대 한 시간이 지남에 무게의 비교에 의해 평가 추가 했다. 그들의 남성 대응 (p &lt; 0.0001, 양방향 ANOVA, N = 12, 그림 4) 보다는 더 일관 되 게 무게 여성 남녀 모두에 대 한 4 개월의 기간 동안 체중에 상당한 증가 관찰 합니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig1.jpg"> 그림 1: 흐름 다이어그램 개요의 포로 인구는 건강의 유지 보수에 대 한 방법 E. tenax입니다. (1) 여기에 설명 된 절차는 소 배설물 (1.2 단계)에서 어느 성숙한 애벌레 또는 자유롭게 비행 hoverflies (1.3 단계)의 컬렉션으로 시작 합니다. (2)는 hoverflies 곤충 감 금 소 또는 비닐 봉지, 숫자에 의존에 보관 되어있습니다. 그들은 8-10 ° c, 3-4 일 마다 부서 지는 인공 동 면 사이클에 보관 됩니다. (3) 수집 된 애벌레는 그들의 소 배설물 (3.2 단계)에 보관 됩니다. 실험실에서 누워 계란 토끼 배설물 슬러리 (단계 3.3)에 배치 됩니다. 성숙에 도달, 3rd 탈피 애벌레 크롤 링 주변 톱 먼지에 어디에 그들은 pupate. 일수로 6-10 일 후 발생 하며 eclosed hoverflies 주택 (2 단계)에 배치 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57711/57711fig1large.jpg">이 파일을 다운로드 하려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig2v3.jpg"> 그림 2:   수와의 섹스 비율 E. tenax 성공적으로 개별 계란 배치에서 reared. 계란의 3 배치에서 발전 하는 E. tenax pupae에서 그 eclosed의 숫자 데이터 표시 우리의 실험실에 누워 있다. 계란 야생 암컷에 의해 마련 되었다. 데이터는 파리의 섹스에 대 한 색상. 비율에 상당한 차이가 있다.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig3v3.jpg"> 그림 3:   실험실에서 인구 건강의 평가 reared 및 필드 장기 포로 후 여성 hoverflies 수집. (A) reared 실험실 및 필드 사이의 무게 비교 인공 동 면 (N = 12)에서 감 금에서 4 개월 후 여성 hoverflies을 캡처. 실험실 reared의 (B) 활동 수준 및 분야는 인공 동 면에서 포로 4 개월 후 여성 hoverflies을 점령. Hoverflies' 운동 활동은 운동 하는 동안 적외선 광선을 깨고 그들에 의해 운전 하는 활동 시스템에 측정 했다. 로 이전, 우리는 두 번째에서 하루 종일 운전 하는 활동 모니터 시스템39 에 한낮 6.7 시간에 걸쳐 활동 평균 (N필드 잡= 9,실험실 rearedN = 12). 각 boxplot의 중앙 마크 표시 중간, 데이터, 및 수염의 상자 25일 75번째 백분위 수의 가장자리는 데이터의 최대 최소에서 연장.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57711/57711fig4v3.jpg"> 그림 4:   실험실의 무게에 긴 기간 유지 보수의 효과의 비교 reared 어느 섹스 hoverflies. 데이터는 인공 동 면에서 포로에 보관 하는 시간의 기능으로 꽃등에과 무게를 보여줍니다. 모든 hoverflies는 우리의 실험실 (각 데이터 요소에 N = 12)와 t에 누워 계란에서 reared 했다 = 0와 번데기 해칭의 시간, 포로에서 시간은 같은 동물의 나이. 각 boxplot의 중앙 마크 표시 중간, 데이터, 및 수염의 상자 25일 75번째백분위 수의 가장자리는 데이터의 최대 최소에서 연장.

이 절차의 전체 목표 설정, 유지 및 연구 설정에서 Eristalis tenax 의 포로 인구를 새로 것입니다.

양육 및 조사 연구에 대 한 Eristalis tenax Hoverflies의 유지 보수 장기

With an estimated 6000 species worldwide, hoverflies are ecologically important as alternative pollinators to domesticated honeybees. However, they are ...

이러한 절차의 전반적인 목표는 실험실 환경에서 Eristalis tenax의 포획된 개체군을 설정, 유지 및 갱신하는 것입니다. 이 방법을 사용하면 꽃등에, Eristalis tenax의 장기적인 유지 보수가 가능합니다. 호버플라이는 파리의 행동, 수분 효율, 모션 비전의 기저에 있는 신경 메커니즘을 포함한 다양한 과학적 질문을 조사하는 데 유용한 모델로 부상하고 있습니다.유럽에서는 이미 농업을 위한 대규모 상업적 사육이 이루어지고 있지만, 과학적 연구를 위한 포획 개체군을 유지하기 위한 표준화된 프로토콜은 없습니다. 우리의 방법을 사용하여 Eristalis tenax는 사육 상태에서 1년 이상 성공적으로 유지될 수 있으며, 알과 수집된 유충을 모두 사육하여 사육된 개체군을 형성하거나 새로 고칠 수 있습니다. 포획 군체를 시작하려면 성충 꽃등에벌레 또는 성숙한 유충을 수집해야 합니다.두 번째와 세 번째 instar 유충은 소 농장의 분뇨 구덩이에서 발견되었습니다. 그들은 번데기가 될 어둡고 건조한 환경을 적극적으로 찾고 있기 때문에 이주 단계가 시작될 때 가장 쉽게 찾을 수 있습니다. 이것은 축축한 분뇨가 많은 양의 짚이 들어있는 건조한 지역에 가까운 분뇨 구덩이의 경계 근처에있는 경향이 있습니다.수집된 유충은 실험실에서 성충으로 키울 수 있습니다. 성인 꽃등에파리는 일반적으로 꽃이 피는 식물이 풍부한 식물원과 공원에서 들판의 그물로 수집할 수 있습니다. 꽃등에파리는 예를 들어 꽃을 먹거나 햇볕을 쬐고 있을 때와 같이 정지해 있을 때 가장 쉽게 잡을 수 있습니다.곤충 케이지 또는 비닐 봉지를 하우징으로 사용해야 합니다. 이것은 수용되는 파리의 수에 따라 다릅니다. 가방에는 20마리 미만의 꽃등에파리를 보관할 수 있지만 20마리 이상은 곤충 케이지에 보관해야 합니다.파리는 꿀벌 꽃가루와 꿀을 섞어 축축한 솜뭉치 위에 올려 먹습니다. 면봉을 담그고 여분의 액체를 제거한 다음 그 위에 꿀과 꿀벌 꽃가루를 놓습니다. 비닐 봉지에 담은 경우 솜뭉치가 촉촉하지만 너무 포화되지 않는 것이 중요하며, 봉지 내부에 물이 쌓이면 생존율에 해로울 수 있습니다.반대로, 곤충 케이지에 수용하는 경우 메쉬 측면이 상당한 증발을 허용합니다. 따라서 면봉은 얕은 용기에 넣을 수 있으며 과도한 건조를 방지하기 위해 완전히 포화시켜야 합니다. 꽃등에파리가 실온에서 최소 4시간 동안 먹이를 먹게 한 후, 섭씨 8도에서 10도의 냉장고에 넣고 완전한 어둠 속에 보관했습니다.이 온도 범위는 인공 동면을 유도합니다. 수명을 보장하기 위해 우리의 프로토콜은 인공 동면을 깨고 꽃등에가 먹이를 먹고 그루밍할 수 있도록 하는 것과 관련된 엄격한 유지 관리 루틴을 요구합니다. 3-4일에 한 번씩, 꽃등에파리를 실온으로 옮겨 새 비닐 봉지나 깨끗한 곤충 우리에 옮겨 넣고 신선한 음식과 물을 제공한 다음 6-8시간 동안 실온에 보관했습니다.이를 통해 먹이를 주는 것과 그루밍을 모두 할 수 있었습니다. 호버플라이의 전송은 여기에서 시연된 것처럼 작은 숫자에 대해 수동으로 수행되거나 더 큰 숫자에 대해 phototaxis를 사용하여 수행되었습니다. 이 단계는 냉장고에서 꽃등에를 꺼낸 후 처음 몇 분 이내에 수행하는 것이 이상적이며, 여전히 최대 절전 모드 상태에 있고 다루기가 훨씬 쉽기 때문입니다.Eristalis tenax의 광전술 반응을 활용하고 많은 수의 꽃등에파리를 효율적으로 이동시키려면 먼저 오래된 케이지를 새롭고 깨끗한 곤충 케이지에 연결하고 신선한 음식을 준비하여 케이지 안에 넣으십시오. 두 개의 케이지를 함께 클립으로 고정하면서 꽃등에가 기어 다닐 수 있는 충분한 공간이 있는지 확인합니다. 오래된 케이지를 불투명한 천으로 덮고 측면에 밀어 넣고 빛이 스며들지 않도록 주의하십시오.꽃등에파리는 빛을 향해 깨끗한 곤충 우리로 빠르게 이동합니다. 산란은 냉장고 또는 실온에서 수유 시간에 발생할 수 있습니다. 달걀이 확인되면 즉시 수돗물과 함께 작은 페트리 접시에 넣으십시오.알은 일반적으로 2-3일에 걸쳐 부화합니다. 새로 부화한 첫 번째 instar 유충 사이에서 움직임이 매우 분명할 것입니다. 움직임은 또한 알이 사육 환경으로 옮겨질 준비가 되었다는 표시입니다.부화한 알은 토끼 배설물과 물이 섞인 슬러리로 옮겨야 합니다. 슬러리를 만들려면 사용 후 쉽게 폐기할 수 있도록 양동이에 비닐 봉지를 깔아줍니다. 4분의 3은 안감이 있는 양동이에 토끼 배설물로 채웁니다.양동이가 거의 가득 찰 때까지 남은 공간에 물을 붓습니다. 슬러리는 혼합물이 여전히 촉촉한지 확인하기 위해 2-3일마다 점검해야 합니다. 혼합물이 건조해 보이면 슬러리에 추가 수돗물을 채웁니다.나무 부스러기로 채워진 더 큰 플라스틱 통 안에 양동이를 넣으십시오. 나무 부스러기는 양동이를 완전히 둘러싸고 가장자리까지 확장되어야 하므로 세 번째 instar 유충이 톱밥 속으로 기어 들어가 번데기가 될 수 있습니다. 이제 새로 부화한 첫 번째 인스타 유충을 옮길 준비가 되었습니다.이 작업이 완료되면 유충이나 새로 등장하는 꽃등에가 탈출하는 것을 방지하기 위해 이중으로 된 모기장으로 설정을 덮으십시오. Eristalis tenax 유충은 일반적으로 쥐 꼬리 구더기로 알려져 있습니다. 이것은 뒤쪽 끝에 꼬리와 같은 구조 때문입니다.이것은 실제로 사이펀이라고 하는 특수 호흡관입니다. 이것은 몸 길이의 몇 배로 확장되어 유충이 완전히 잠긴 상태에서도 공기를 호흡할 수 있도록 할 수 있습니다. 표면을 뚫는 사이펀 또는 가끔 상단에서 먹이를 먹는 유충은 종종 슬러리 내에서 볼 수 있습니다.또한 슬러리의 일관성에 변화가 있습니다. 이것은 유충이 발달하여 토끼 배설물 혼합물의 분해를 도왔기 때문입니다. 우리는 또한 세 번째 instar 유충이 번데기를 위해 슬러리에서 기어 나와 나무 부스러기로 기어 들어가고 있다는 명백한 징후를 볼 수 있습니다.이것은 양동이 가장자리에 많은 흔적이 보이고 나무 부스러기가 크게 변색되어 있기 때문에 분명합니다. 우리는 새로 부화한 유충을 슬러리에 넣은 후 15일에서 20일 후에 이러한 변화를 볼 수 있을 것으로 예상합니다. 이러한 징후는 번데기를 찾기 시작할 때라는 좋은 표시입니다.양동이를 제거하고 번데기를 제거하는 나무 부스러기를 체로 치십시오. 번데기를 나무 부스러기가 있는 마른 용기에 넣은 다음 음식과 물이 있는 곤충 우리에 넣습니다. 번데기가 된 지 6일에서 10일 이내에 부화가 일어나고 새로 출현하는 꽃등에를 볼 수 있습니다.부화 시 날개가 완전히 작동하지 않습니다. 그러나 몇 시간 안에 날개가 펼쳐지고 마를 것입니다. 꽃등에파리는 곧 날 수 있게 될 것입니다.일단 이런 일이 일어나고 새로 태어난 성체가 최소 6시간 동안 먹이를 주고 털을 손질한 후, 음식과 물이 있는 깨끗한 집에 넣고 냉장고에 넣어 인공 동면 주기를 유도할 수 있습니다. 포획된 임신한 암컷이 낳은 알을 기르는 우리의 기술은 세 개의 알을 사육하여 성공적인 것으로 입증되었으며, 그 결과 평균 163마리 플러스 마이너스 33.65마리가 관찰된 성별 편견 없이 출현했습니다. 이 실험실에서 사육된 꽃등에파리의 건강은 들판에서 포획된 개체와 비교하여 암컷 꽃등에의 체중과 운동 활동을 비교하여 결정되었습니다.실험실에서 사육된 꽃등에와 야생에서 포획된 꽃등에파리 사이에 체중이나 활동량에 큰 차이는 관찰되지 않았습니다. 또한, 우리가 설명한 방법을 사용한 장기 유지 관리의 효과는 실험실에서 사육된 꽃등에파리의 암수 모두에 대한 시간 경과에 따른 체중 비교를 통해 추가로 평가되었습니다. 우리는 남녀 모두 4개월 동안 체중이 크게 증가한 것을 관찰했으며, 여성이 남성보다 지속적으로 체중이 더 많이 나가는 것을 관찰했습니다.우리는 성체 꽃등에파리를 포획하여 성공적으로 유지하고, 소 농장에서 성숙한 유충을 수확하고, 야생 짝짓기 암컷의 자손을 양육함으로써 시각 및 행동 연구를 위해 건강한 개체군을 유지하는 3방향 전략을 개발했습니다.

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