독 독 소 암살자 버그와 다른 Heteropteran 곤충에서 수확

암살자 벌레는 독을 사용하여 먹이를 마비시키고 미리 소화시키는 곤충 그룹입니다. 그러나 동물의 독이 새로운 의약품, 살충제 및 과학 도구로 관심을 끌고 있음에도 불구하고 동물의 독이 생산하는 독소는 거의 완전히 규명되지 않았습니다. 그 이유 중 하나는 암살자 벌레가 거미와 전갈과 같은 상징적인 독이 있는 절지동물에 비해 덜 알려져 있기 때문입니다.

또 다른 이유는 최근까지도 독소를 채취하는 방법에 대한 정보가 거의 없었기 때문입니다. 이 영상에서는 연구자들이 암살벌레의 독독 독소와 거대 물고기를 죽이는 물벌레와 같은 관련 곤충을 성공적으로 채취할 수 있는 방법을 제시합니다. 프로토콜 1은 전기 자극으로 독을 채취하는 방법을 설명합니다.

먼저 적절한 곤충을 수집합니다. 성충과 큰 애벌레는 함께 일하기 가장 쉽습니다. 먹이를 먹은 후 2일에서 7일 후에 벌레를 사용하는 것이 이상적이며, 곤충이 독을 축적했지만 굶주리지 않도록 하는 것이 좋습니다.

끝에 전극이 있는 집게를 준비하고 전기 공급 장치에 연결합니다. 이상적으로 이 공급 장치는 5Hz에서 5밀리초 펄스를 전달할 수 있는 전기 자극기여야 합니다. 작거나 큰 버그에 대해 각각 15볼트와 25볼트 사이의 피크 전압을 사용합니다.

전기 자극기를 사용할 수 없는 경우 5-12볼트의 정전압을 사용하십시오. 고무 밴드와 폼 플랫폼을 사용하여 곤충을 제지하십시오. 곤충의 주둥이를 수집 튜브에 넣습니다.

P200 피펫 튜브는 대부분의 암살자 벌레에 이상적입니다. 선택적으로, 독을 최대한 회수하기 위해 수확하기 전에 팁에 소량의 물을 추가할 수 있습니다. 전극에 전도성 젤을 바르고 전원 공급 장치를 켠 다음 전기 핀셋을 곤충에 적용합니다.

주둥이에서 독 배출을 모니터링하면서 다양한 접촉점을 실험해 보십시오. 자가 단백질 분해 소화를 피하기 위해 독을 영하의 온도에 보관하십시오. 더 이상 독이 나오지 않을 때까지 새 피펫 튜브로 전기 자극을 반복합니다.

프로토콜 2는 방어 반응을 유발하여 독을 채취하는 방법을 설명합니다. 위에서 설명한 대로 버그를 준비하고 억제하여 주둥이를 수집 팁에 삽입합니다. 동물을 다치게 하지 않고 방어 반응을 유발하기 위해 벌레를 부드럽게 괴롭힙니다.

때로는 단순히 동물을 제지하거나 주둥이를 채취 튜브에 삽입하는 것만으로도 주둥이에서 독이 배출되는 방어 반응을 유발할 수 있습니다. 그렇지 않은 경우 동물의 흉부, 다리, 복부, 특히 더듬이를 부드럽게 만져 독을 끌어냅니다. 프로토콜 3에서는 이 기사의 서면 형식으로, 방어적으로 독을 뱉는 종으로부터 독을 채취하는 방법도 설명합니다.

프로토콜 4는 해부를 통해 독샘에서 직접 독을 채취하는 방법을 설명합니다. 10분 동안 이산화탄소에 노출시켜 동물을 마취시킵니다. 독샘에 구멍을 뚫지 않고 곤충을 억제하기 위해 뒤쪽 복부에 세 개의 핀을 삽입하십시오.

미니어처 메스를 사용하여 복부 복부 표면의 짧은 정중선 절개를 자릅니다. 소형 가위를 사용하여 전방 방향의 정중선을 머리까지 연장하고 외골격만 절단하고 내부 구조를 손상시키지 않도록 주의하십시오. 내부 구조를 노출시키려면 정중선 절개부에서 곤충 측면까지 여러 개의 측면 절단을 만듭니다.

그런 다음 각 두 절단 사이의 복부 외골격을 다시 고정하여 내부 구조를 드러낼 수 있습니다. 벌레가 잠길 때까지 식염수를 사용하여 해부 트레이를 범람시켜 내부 구조가 떠오르고 더 쉽게 시각화할 수 있도록 합니다. 독샘은 소화관의 양쪽으로 뻗어 있는 반투명하고 길쭉한 구조로 나타납니다.

핀셋과 마이크로 가위를 사용하여 결합 및 신경 조직과 기관을 조심스럽게 제거하고 소화관이나 독샘이 파열되지 않도록 합니다. 주샘은 전방 및 후방 엽이 있고 문턱에서 만나는 두 개의 관이 있는 특징적인 구조로 인해 알아볼 수 있습니다. 암살자 벌레와 아마도 다른 이배새의 경우, 거의 모든 독소는 주요 분비선의 두 엽의 내강에 저장됩니다.

따라서 기관과 결합 조직에서 주샘을 분리한 후 문턱에서 이어지는 두 개의 관을 절단하고 주독샘을 채취할 수 있습니다. 부속샘도 필요한 경우, 일반적으로 장과 밀접하게 반대편에 있으며, 문턱에서 관을 추적하여 명확하게 식별할 수 있습니다. 어쨌든 땀샘을 조기에 부러뜨려 주변 식염수로 독을 잃지 않도록 주의하십시오.

주샘의 엽을 분리해야 하는 경우, 식염수에서 제거한 후 신속하게 이 작업을 수행하고 서면 원고의 4.6 및 4.7 단계에 설명된 대로 샘 내강의 내용물을 즉시 수확하십시오. 결과는 사용된 곤충의 정확한 하위 프로토콜과 종에 따라 달라집니다. 이 비디오에 제시된 첫 번째 및 두 번째 하위 프로토콜은 각각 전기 자극과 괴롭힘으로 독 독소를 수확하는 방법을 보여주었습니다.

이 두 가지 방법 모두 일반적으로 약 50-250밀리그램의 단백질과 효소, 기공 형성 독소 및 펩타이드를 포함한 100개 이상의 단백질 기반 성분을 포함하는 농축된 액체를 생성합니다. 이 두 프로토콜의 주요 장점은 빠르고 치명적이지 않으며 독이 선 조직에 의해 오염되지 않는다는 것입니다. 전기 자극 또는 괴롭힘에 의한 채취의 가장 큰 단점은 얻은 독의 선상 공급원을 알 수 없고 수확된 독의 단백질 함량이 프로토콜에 따라 다를 수 있다는 것입니다.

또한 전기 자극과 괴롭힘이 모든 포식성 종의 이배엽에 효과적인 것은 아닙니다. 마지막 하위 프로토콜에서는 충혈된 독샘을 해부하여 독소를 직접 채취하는 방법을 보여주었습니다. 이 기술은 또한 다양한 단백질의 칵테일을 생성하지만, 이 경우 독 독소가 선 조직으로 인해 일부 오염되었을 수 있습니다.

그러나 절개된 땀샘에서 독소를 채취하는 것의 장점은 기원의 선상(腸魘)칸막이가 정확히 알려져 있다는 것입니다. 결론적으로, 우리는 연구자들이 자신의 연구 질문에 적합한 채취 방법을 선택하도록 권장합니다. 예를 들어, 한 종 내에서 독 사용의 생물학에 대한 조사는 여러 채취 기술을 사용하는 것이 도움이 될 것입니다.

생물 탐사 연구의 경우, 특정 실험 설계에 따라 여러 종의 독을 채취하는 단일 방법이 더 경제적일 수 있습니다. 우리는 이 비디오와 함께 작성된 기사가 연구자들이 암살벌레 및 기타 이배목(heteropteran) 곤충의 구성, 생체 활성 및 진화를 이해하는 데 필요한 전제 조건인 독을 채취하는 데 도움이 되기를 바랍니다.