Name: Bronchoalveolar 게 Exosomes Lipopolysaccharide 유도 정화 조 폐 상해에 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: 배우세요 LPS 유도 급성 폐 손상 마우스 모델에서 엑소좀의 염증 반응 역할을 규명하는 방법입니다. 기관지폐포세척액에서 엑소좀을 분리하고 상피세포와 공배양하여 세포 간 소통을 연구할 수 있습니다.

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저자는 관심 없음 충돌 선언 하 고 있다.

전체 프로토콜에는 패 혈 증 유도의 첫날 및 동물, 및 마우스 BALF exosomes 절연에 대 한 두 번째 날에서 발 액체의 절연을 포함 하 여 2 일 필요 합니다. 모든 절차를 검토 하 고 기관 동물 관리 및 사용 위원회 애틀랜타 VA 의료 센터에 의해 승인 되었습니다.
1. 마우스 급성 패 혈 증 폐 상해 모델
<ol><li>사용 6-8 주-오래 된 남성 야생-타입 C57BL/6J 마우스 (20-22 g 중량) 동물에 대 한 모델, 그리고 무 균 기술 및 장비를 사용 하 여 모든 절차를 수행 합니다. 오토 클레이 브 집게와가 위 121 ° c.에 20 분을 포함 한 모든 수술 기구</li>
	<li>임의로 실험에 쥐 및 제어 그룹을 배포 합니다. 외과 보드에 쥐를 제 지. 복 경로 의해 대장균 lipopolysaccharide (LPS, 15 mg/kg)와 쥐를 취급 합니다. 개별 몸 무게에 따라 적절 한 LPS 복용량 마우스, 당 0.1 mL PBS에 희석 다음 LPS 솔루션 27 G 바늘 1 mL 주사기를 사용 하 여 주입 하 고 주입 제어 동물 PBS의 해당 볼륨.</li>
	<li>동물 BSL2 시설, 적절 한 실내 온도에서 깨끗 한 케이지로 구성 되어 마우스를 유지.</li>
	<li>24 h 후, CO2 흡입 된 마우스를 안락사.</li>
	<li>마우스 목의 중앙에 수술 영역을 선택 합니다. 작은 절 개 (약 5 m m), 고 기도 노출까지 무딘 집게를 사용 하 여 기도에 대 한 액세스에 대 한 근육을 부드럽게 분리 합니다.</li>
	<li>27 G 바늘으로 마우스 발 액체 10 mL의 멸 균 주사기를 철회. 첫째, 부드럽게, 기관지에 바늘을 삽입 및 기도, 살 균 PBS의 1 mL를 천천히 주입 다음 3 mL 일회용 주사기에 27g 바늘으로 BALF 그릴. 완료 되 면 절차, 주사기와 바늘 biohazard sharps 컨테이너에서 삭제 합니다.</li>
	<li>앞에서 설명한 Chauret 그 외 여러분 에 의해 이산화 염소와 수술 도구를 치료 27, 121 ° c.에 20 분 동안 압력가 마로 소독 하 여 모든 수술 기구를 소독</li>
</ol>2. Exosomes 절연 직렬 울트라-원심 분리 및 특성
<ol><li>15 mL 원뿔 튜브에 마우스 발 액체를 수집 합니다. 치경 세포, 4 ° c.에 1000 g에서 10 분 원심 분리기 샘플 수확</li>
	<li>새로운 15 mL 원뿔 튜브에는 상쾌한 전송 후 원심 4000 x g 세포 파편을 제거 하 4 ° C에서 30 분에 대 한 샘플.</li>
	<li>Ultracentrifuge 튜브에 더 큰 세포 입자를 제거 하 4 ° C에서 10000 x g에서 60 분 동안 원심 분리기 샘플 상쾌한을 수집 합니다.</li>
	<li>새로운 원뿔 관에는 상쾌한 전송 다음 0.2 µ m 주사기-남아 있는 더 큰 입자를 제거 하려면 필터를 통해 샘플을 필터링 합니다.</li>
	<li>Ultracentrifuge 튜브에서 샘플을 수집 하 고 튜브를 균형. 샘플은 exosomes 펠 렛을 4 ° C에서 140000 x g에서 2 h에 대 한 원심 참고: exosomes의 크기는 20-200 nm을 다릅니다. 0.2 µ m 필터는 이상의 200는 더 큰 입자를 제거 사용 nm 크기에서.</li>
	<li>삭제는 supernatants 부드럽게 합니다. 100 µ L PBS 또는 세포 솔루션 및 전송 exosomes 샘플 1.5 mL 튜브에 펠 릿을 녹이 고 사용까지-80 ° C에서 저장. 참고: 전송 전자 현미경은 고립 된 exosomes를 확인 것이 좋습니다.</li>
	<li>프로토콜28처리 표준 편 샘플을 따릅니다. 전송 전자 현미경 검사 법, 그리고 촬영할, 눈금 200 막대를 사용 하 여 exosomes 샘플을 분석 nm.</li>
</ol>3. 미르와 공연 미르-q-RT-PCR의 준비
참고: 미르-q-RT-PCR miRNAs의 식 수준 분석 하는 것이 좋습니다.
<ol><li>표준 miRNAs 격리 프로토콜에 따라 고 정화 RNAs의 동일한 금액을 사용 하 여 단일 가닥 반전 녹음 방송24에 확인.</li>
	<li>발 액체에서 exosomal 예측에 관한 레벨을 감지 하는 표준 실시간 PCR 프로토콜을 따릅니다. 미르-155, 미르-146a, 그리고 U6 SnRNA 특정 실시간 PCR 뇌관을 사용 합니다. PCR 반응 정량 PCR 장치를 실행 하 고 내부 통제 U6 snRNA에 식 값을 정상화. 참고: 각 그룹 triplicate 샘플24이루어져 있다.</li>
</ol>4. Exosomes 라벨 및 정화
<ol><li>1.5 mL 폴 리 프로필 렌 튜브에 100 µ L 정지 솔루션 exosomes 펠 릿을 일시 중지 다음 정지 솔루션의 100 µ L로 다른 튜브에 exosomes 염료의 0.4 µ L를 추가 합니다.</li>
	<li>신속 하 게 염료 솔루션 exosomes 솔루션에 추가 하 고 pipetting으로 철저 하 게 혼합. 실 온에서 5 분에 대 한 샘플을 계속, 빛 으로부터 보호 합니다.</li>
	<li>한 exosome 스핀 열 차입 1.5 mL 튜브에 넣어. Exosome 스핀 열 센터 솔루션 혼합물을 전송 합니다.</li>
	<li>실 온에서 800 x g 2 분에 대 한 열을 회전 합니다.</li>
	<li>열을 삭제 하 고 사용까지-20 ° C에서 eluted 샘플을 저장 합니다.</li>
</ol>5. 받는 사람 세포에 의해 Exosomes의 유효성 검사
<ol><li>1 x 104 8 잘 챔버 슬라이드에 37 ° C, 5% CO2에 문화 세포 MLE 12 /cell 씨앗</li>
	<li>셀에 10 µ L 형광 표시 된 exosomes를 추가 합니다. 1 h 37 ° c.에 품 어</li>
	<li>문화 미디어와 PBS 가진 세포를 씻어 다음 실 온에서 10 분 동안 1 %paraformaldehyde 셀을 수정.</li>
	<li>DAPI와 마운트 중간에 슬라이드를 탑재 합니다.</li>
	<li>형광 현미경을 통해 샘플을 분석 하 고 이미지, 40 배 확대.</li>
</ol>6. Exosomes와 받는 사람 세포 사이 상호 작용의 확인
<ol><li>시드 2 x 105 MLE12/잘 적절 한 문화 매체, 및 37 ° C, 5% CO2에 문화 세포를 포함 하는 12-잘 문화 접시.</li>
	<li>MLE12 셀에 마우스 발 액체에서 20 µ g exosomes를 추가 하 고 실험적인 그룹 당 복제 설정.</li>
	<li>24 h 후 PBS로 세포를 세척 하 고 잘으로 600 µ L 세포의 용 해 버퍼를 추가. 부드럽게 접시를 흔들어 하 고 피펫으로 1.5 mL 튜브에 세포 샘플을 수집 합니다.</li>
	<li>표준 총 RNA 격리 프로토콜 및 cDNA 반전 녹음 방송 프로토콜 따라, 단일 가닥 cDNA 반전 녹음 방송29를 완료.</li>
	<li>받는 사람 셀29에 mRNA 표현 레벨을 감지 하는 표준 실시간 PCR 프로토콜을 따릅니다. TNF-α, 일리노이 대 한 특정 실시간 PCR 뇌관을 사용 하 여-6, 그리고 조 1. PCR 반응 정량 PCR 장치를 실행 하 고 내부 제어 GAPDH 식 값 정상화. 참고: 각 그룹 triplicate 샘플 구성 됩니다.</li>
</ol>

<ol><li>Rubenfeld, G. D., Herridge, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+outcomes+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and outcomes of acute lung injury.</a> Chest. 131, 554-562 (2007).</li>
<li>Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+manipulated+mouse+models+of+lung+disease%3A+potential+and+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Lung+cellular+and+molecular+physiology%22%5BJournal%5D)">Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L485-L497 (2012).</li>
<li>Han, S., Mallampalli, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%3A+from+mechanism+to+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome: from mechanism to translation.</a> Journal of immunology. , Baltimore, Md. 855-860 (1950).</li>
<li>Aeffner, F., Bolon, B., Davis, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Models+of+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome%3A+A+Review+of+Analytical+Approaches%2C+Pathologic+Features%2C+and+Common+Measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+pathology%22%5BJournal%5D)">Mouse Models of Acute Respiratory Distress Syndrome: A Review of Analytical Approaches, Pathologic Features, and Common Measurements.</a> Toxicologic pathology. 43, 1074-1092 (2015).</li>
<li>Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Lung+cellular+and+molecular+physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lung injury.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L379-L399 (2008).</li>
<li>Terrasini, N., Lionetti, V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28328650">Exosomes in Critical Illness.</a> Critical care medicine. , (2017).</li>
<li>Fujita, Y., Kadota, T., Araya, J., Ochiya, T., Kuwano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Vesicles%3A+New+Players+in+Lung+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+cell+and+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. , (2017).</li>
<li>Kubo, H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28684288">Extracellular Vesicles in Lung Disease.</a> Chest. 153, 210-216 (2018).</li>
<li>Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+widespread+regulation+of+microRNA+biogenesis%2C+function+and+decay%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay.</a> Nature reviews. Genetics. 11, 597-610 (2010).</li>
<li>Bartel, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNAs%3A+target+recognition+and+regulatory+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">MicroRNAs: target recognition and regulatory functions.</a> Cell. 136, 215-233 (2009).</li>
<li>Fanini, F., Fabbri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CANCER-DERIVED+EXOSOMIC+microRNAs+SHAPE+THE+IMMUNE+SYSTEM+WITHIN+THE+TUMOR+MICROENVIRONMENT%3A+STATE+OF+THE+ART%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+cell+%26+developmental+biology%22%5BJournal%5D)">CANCER-DERIVED EXOSOMIC microRNAs SHAPE THE IMMUNE SYSTEM WITHIN THE TUMOR MICROENVIRONMENT: STATE OF THE ART.</a> Seminars in cell & developmental biology. , (2016).</li>
<li>Agarwal, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental%2C+Systems%2C+and+Computational+Approaches+to+Understanding+the+MicroRNA-Mediated+Reparative+Potential+of+Cardiac+Progenitor+Cell-Derived+Exosomes+From+Pediatric+Patients%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Experimental, Systems, and Computational Approaches to Understanding the MicroRNA-Mediated Reparative Potential of Cardiac Progenitor Cell-Derived Exosomes From Pediatric Patients.</a> Circulation research. 120, 701-712 (2017).</li>
<li>Prattichizzo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microRNAs+and+endothelial+hyperglycaemic+memory%3A+a+therapeutic+opportunity%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2C+obesity+%26+metabolism%22%5BJournal%5D)">Extracellular microRNAs and endothelial hyperglycaemic memory: a therapeutic opportunity?</a> Diabetes, obesity & metabolism. 18, 855-867 (2016).</li>
<li>Huang-Doran, I., Zhang, C. Y., Vidal-Puig, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Vesicles%3A+Novel+Mediators+of+Cell+Communication+In+Metabolic+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+endocrinology+and+metabolism%3A+TEM%22%5BJournal%5D)">Extracellular Vesicles: Novel Mediators of Cell Communication In Metabolic Disease.</a> Trends in endocrinology and metabolism: TEM. 28, 3-18 (2017).</li>
<li>Khalyfa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+Plasma+Extracellular+Microvesicle+MicroRNA+Cargo+and+Endothelial+Dysfunction+in+Children+with+Obstructive+Sleep+Apnea%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+and+critical+care+medicine%22%5BJournal%5D)">Circulating Plasma Extracellular Microvesicle MicroRNA Cargo and Endothelial Dysfunction in Children with Obstructive Sleep Apnea.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 194, 1116-1126 (2016).</li>
<li>Thomou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adipose-derived+circulating+miRNAs+regulate+gene+expression+in+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Adipose-derived circulating miRNAs regulate gene expression in other tissues.</a> Nature. 542, 450-455 (2017).</li>
<li>Gregson, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+Exosomal+RNA+Profiles+in+Bronchoalveolar+Lavage+from+Lung+Transplants+with+Acute+Rejection%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+and+critical+care+medicine%22%5BJournal%5D)">Altered Exosomal RNA Profiles in Bronchoalveolar Lavage from Lung Transplants with Acute Rejection.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 192, 1490-1503 (2015).</li>
<li>Valadi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-mediated+transfer+of+mRNAs+and+microRNAs+is+a+novel+mechanism+of+genetic+exchange+between+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells.</a> Nature cell biology. 9, 654-659 (2007).</li>
<li>Doxaki, C., Kampranis, S. C., Eliopoulos, A. G., Spilianakis, C., Tsatsanis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+Regulation+of+miR-155+and+miR-146a+Genes+during+Induction+of+Endotoxin+Tolerance+in+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology%22%5BJournal%5D)">Coordinated Regulation of miR-155 and miR-146a Genes during Induction of Endotoxin Tolerance in Macrophages.</a> Journal of immunology. , Baltimore, Md. 5750-5761 (2015).</li>
<li>Schulte, L. N., Westermann, A. J., Vogel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+activation+and+functional+specialization+of+miR-146+and+miR-155+in+innate+immune+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+acids+research%22%5BJournal%5D)">Differential activation and functional specialization of miR-146 and miR-155 in innate immune sensing.</a> Nucleic acids research. 41, 542-553 (2013).</li>
<li>Alexander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome-delivered+microRNAs+modulate+the+inflammatory+response+to+endotoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+communications%22%5BJournal%5D)">Exosome-delivered microRNAs modulate the inflammatory response to endotoxin.</a> Nature communications. 6, 7321(2015).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM-1+is+induced+in+tumor+associated+macrophages+by+cyclo-oxygenase+pathway+in+human+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">TREM-1 is induced in tumor associated macrophages by cyclo-oxygenase pathway in human non-small cell lung cancer.</a> PloS one. 9, e94241(2014).</li>
<li>Xu, R., Richards, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+In+Vitro+Co-Culture+Model+in+Anti-Cancer+Drug+Development+Cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Combinatorial+chemistry+%26+high+throughput+screening%22%5BJournal%5D)">Development of In Vitro Co-Culture Model in Anti-Cancer Drug Development Cascade.</a> Combinatorial chemistry & high throughput screening. 20, 451-457 (2017).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TREM-1-accentuated+lung+injury+via+miR-155+is+inhibited+by+LP17+nanomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Lung+cellular+and+molecular+physiology%22%5BJournal%5D)">TREM-1-accentuated lung injury via miR-155 is inhibited by LP17 nanomedicine.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. , L426-L438 (2016).</li>
<li>Sadikot, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-dose+dexamethasone+accentuates+nuclear+factor-kappa+b+activation+in+endotoxin-treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+and+critical+care+medicine%22%5BJournal%5D)">High-dose dexamethasone accentuates nuclear factor-kappa b activation in endotoxin-treated mice.</a> American journal of respiratory and critical care medicine. 164, 873-878 (2001).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Curcumin+mediated+epigenetic+modulation+inhibits+TREM-1+expression+in+response+to+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22The+international+journal+of+biochemistry+%26+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Curcumin mediated epigenetic modulation inhibits TREM-1 expression in response to lipopolysaccharide.</a> The international journal of biochemistry & cell biology. 44, 2032-2043 (2012).</li>
<li>Chauret, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorine+dioxide+inactivation+of+Cryptosporidium+parvum+oocysts+and+bacterial+spore+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+environmental+microbiology%22%5BJournal%5D)">Chlorine dioxide inactivation of Cryptosporidium parvum oocysts and bacterial spore indicators.</a> Applied and environmental microbiology. 67, 2993-3001 (2001).</li>
<li>Cizmar, P., Yuana, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+Characterization+of+Extracellular+Vesicles+by+Transmission+and+Cryo-Transmission+Electron+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Detection and Characterization of Extracellular Vesicles by Transmission and Cryo-Transmission Electron Microscopy.</a> Methods in molecular biology. , Clifton, N.J. 221-232 (2017).</li>
<li>Yuan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-related+proteins+prolong+macrophage+survival+through+induction+of+Triggering+receptor+expressed+on+myeloid+cells-1%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+reports%22%5BJournal%5D)">HIV-related proteins prolong macrophage survival through induction of Triggering receptor expressed on myeloid cells-1.</a> Scientific reports. 7, 42028(2017).</li>
<li>Jackson, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Mitochondrial+Transfer+in+Direct+Co-cultures+of+Human+Monocyte-derived+Macrophages+%28MDM%29+and+Mesenchymal+Stem+Cells+%28MSC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">Analysis of Mitochondrial Transfer in Direct Co-cultures of Human Monocyte-derived Macrophages (MDM) and Mesenchymal Stem Cells (MSC).</a> Bio-protocol. 7, (2017).</li>
<li>Fujita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+Vesicles%3A+New+Players+in+Lung+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+respiratory+cell+and+molecular+biology%22%5BJournal%5D)">Extracellular Vesicles: New Players in Lung Immunity.</a> American journal of respiratory cell and molecular biology. 17, 474-484 (2017).</li>
<li>Gunasekaran, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor-Derived+Exosomes+With+Lung+Self-Antigens+in+Human+Lung+Allograft+Rejection%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+transplantation+%3A+official+journal+of+the+American+Society+of+Transplantation+and+the+American+Society+of+Transplant+Surgeons%22%5BJournal%5D)">Donor-Derived Exosomes With Lung Self-Antigens in Human Lung Allograft Rejection.</a> American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons. 17, 474-484 (2017).</li>
<li>Kalra, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+proteomics+evaluation+of+plasma+exosome+isolation+techniques+and+assessment+of+the+stability+of+exosomes+in+normal+human+blood+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma.</a> Proteomics. 13, 3354-3364 (2013).</li>
<li>Baranyai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Exosomes+from+Blood+Plasma%3A+Qualitative+and+Quantitative+Comparison+of+Ultracentrifugation+and+Size+Exclusion+Chromatography+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Isolation of Exosomes from Blood Plasma: Qualitative and Quantitative Comparison of Ultracentrifugation and Size Exclusion Chromatography Methods.</a> PloS one. 10, e0145686(2015).</li>
<li>Nordin, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrafiltration+with+size-exclusion+liquid+chromatography+for+high+yield+isolation+of+extracellular+vesicles+preserving+intact+biophysical+and+functional+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%3A+nanotechnology%2C+biology%2C+and+medicine%22%5BJournal%5D)">Ultrafiltration with size-exclusion liquid chromatography for high yield isolation of extracellular vesicles preserving intact biophysical and functional properties.</a> Nanomedicine : nanotechnology, biology, and medicine. 11, 879-883 (2015).</li>
</ol>

이 작품은 버지니아 장점 검토 2I01BX001786 06A1 rs 자금에 의해 지원 되었다.

질병 마우스 모델은 특정 유전자의 생리 기능을 평가 하 고 실험2의 비용을 줄이기 위해 일반적으로 사용 됩니다. 설명 된 급성 패 혈 증 폐 상해 여기 아즈와 인간에서 선 동적인 응답을 싫어 하지. 이 모델은 관련 분자 병 인, 바이오 마커의 개발 조사 하 고 잠재적인 새로운 치료5를 테스트 합니다.
공동 문화 시스템은 RNA, DNA, 지질, 및 단백질 체 외 시스템23,30에 같은 생물 분자의 이동의 잠재적인 메커니즘을 조사 하는 맥락에서 vivo에서 학문에 대 한 관련. 이러한 플랫폼의 일부 기계적 이해의 평가 및 복잡 한 질병22,23에 대 한 치료의 개발에 큰 유...

알리와 아즈 생명이 형태의 약 1 백만 명 전세계에 영향을 미치는 비 cardiogenic 폐 부 종으로 인 한 심한 hypoxemia 호흡 실패는 매년1. 아즈의 병 인 폐 감염 또는 포부와 간접 모욕의 다양 한에서 직접 상해를 포함합니다. 그러나 지난 10 년간 아즈의 분자 병 인의 증가 이해 되었습니다, 그리고, 아즈에 대 한 특정 타겟된 치료는 아직 수 개발2,3.
심각한 폐 상해의 여러 동물 모델 실험 치료 인간 연구4,5번역에 대 한 다리를 제공 하는 개발 되었습니다. 일반적으로 사용 되는 모델의 올레 산, 박테리아, LPS, 및 bleomycin 로컬 설치 포함. 다른 접근 국 소 빈 혈 reperfusion, cecal 결 찰 빵 꾸, 기계 환기-유발 스트레치 부상, hyperoxia 또는 박테리아의 LPS5조직 관리 포함. 임상 가설을 테스트 하는 유용한 생물 학적 시스템을 제공 하는 이러한 모델 및 잠재적인 치료의 개발에 대 한. 인간의 아즈 시뮬레이션, 동물 모델 염증 및 폐에 장벽 기능에 결함을 가진 상피 그리고 내 피 세포에 급성 부상 재현 한다.
Exosomes 분자 내용이 포함, DNA, RNA, 단백질과 지질, 직경에서 20-200 nm와 막 소포 그리고 분자 구성 송금을 통해 조직 microenvironment에서 간 세포 커뮤니케이션을 촉진. Exosomes 여러 종류의 세포, 내 피 세포, 상피 세포, 평활 근 세포와 종양 세포 등에서 분 비 되 고 인간의 체액에 존재. 연구 나타냅니다 exosomes는 염증 성 질환, 전염 성 및 살 균 동안 잡담 stromal 세포와 면역 세포를 통제 하 고 그들의 비정상적인 릴리스 생리 기간 동안 다양 한 자연 및 실험적인 자극에 의해 통제 될 것으로 보인다 그리고 병 적인 프로세스6. 이러한 통신 네트워크 폐 질환의 병 인에 중요 한 역할을 재생할 수 있습니다 그리고 pathophysiological 진행7,8에 영향을 미칠 수 있습니다. 비 코딩 RNAs, miRNAs 조직과 체액, 플라즈마, 세라에 존재 하며 닢 레벨9,10에 mRNA 식 조절에 뉴클레오티드를로 18-22
Exosomes 패키지 miRNAs 차별화 및 여러 종류의 세포의 기능에 영향을 미칠 및 과도 한 수준의 다양 한 질병, 암, 폐 질환, 비만, 당뇨병 및 심혈 관 질환11를 포함 하 여와 관련 된 12,,1314,,1516. 받는 사람 세포와 exosomal miRNAs의 왕복으로 항목 수정 microenvironment17,18hemostasis 세포 커뮤니케이션을 촉진 한다. 심각한 폐 상해 여러 셀 형식 exosomes8통해 광범위 한 세포 통신 관련 된 복잡 한 프로세스입니다. 미르-155와 미르-146a 일반적인 transcriptional 규제 메커니즘을 공유 하 고 염증 반응과 면역 관용19,20을. 최근 연구는 모두 exosomal miRNAs 면역 세포21사이 였죠 통해 염증 반응을 조절 나타냅니다. 그러나, 밑에 치경 응답에 exosomal miRNAs의 modulatory 효과 분자 메커니즘 불분명 남아, 의심할 여 지 없이 잠재적인 임상 관련성 및 변환 의미 가치 추가 조사.
공동 문화 모델 염증과 암22,23같은 복잡 한 환경에서 특정 세포 유형의 상호 작용을 정의 하기 위해 채용 되 고 있다. 이러한 플랫폼 특히 면역 및 구조 셀에 대 한 세포 유형 사이 교차 하는 대화가 대체 전략을 제공 합니다.
내부 tracheal LPS의 aerosolized, 복 또는 조직의 관리 유도 실험 폐 상해24,,2526, 널리 사용 되 고 상피 그리고 내 피 침투성을 유도 하는 것으로 나타났습니다. 결함입니다. 여기 복 LPS 사용 하 여 마우스에 심각한 폐 상해의 정화 조 모델을 유도 하. LPS의 복 관리의 24 시간 이내 침투성 결함은 염증 세포의 모집과 폐에서 유도 된. 또한, 우리는 발에서 exosomes 포함 155 미르와 미르-146a, 그리고 발 액체에서 exosomes 프로 염증 성 cytokines 일리노이-6와 TNF-α를 포함 하 여 받는 사람 상피 세포에서 식 유도 보여줍니다. 이 데이터는 먼저 보여 그 exosomal miRNAs는 급성 패 혈 증 폐 상해의이 모델에 발에서 분 비.

<table><tbody><tr><td>지질다당류</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Escherichia coli 055:B5</td><td></td></tr><tr><td>PBS pH7.2(1X)</td><td>Life technologies</td><td>20012-027</td><td></td></tr><tr><td>mirVana miRNA 분리 키트</td><td>Thermo Fisher</td><td>449774</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan 유전자 발현 마스터 믹스</td><td>Thermo Fisher</td><td>4369016</td><td></td></tr><tr><td>mmu-miR-155 (002571) 프라이머</td><td>Thermo Fisher</td><td>4427975</td><td></td></tr><tr><td>has-miR-146a (000468) 프라이머</td><td>Thermo Fisher</td><td>4427975</td><td></td></tr><tr><td>U6snRNA 프라이머</td><td>Thermo Fisher</td><td>4427975</td><td></td></tr><tr><td>TNF-&alpha;( Mm00443258_m1 ) 프라이머</td><td>Thermo Fisher</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>IL-6 (Mm00446190_m1&nbsp; &nbsp; ) 프라이머</td><td>써모 피셔</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>ZO-1 (Mm00493699_m1&nbsp; )프라이머</td><td>Thermo Fisher</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>minimal essential medium (MEM)</td><td>Thermo Fisher</td><td>11095-072</td><td></td></tr><tr><td>Trysin-EDTA solution(0.05%)</td><td>Thermo Fisher</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Exosomes는 PKH67에서 PKH67 Green Fluorescent Cell linker Mini Kit으로 라벨링되었습니다.</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MINI67-1KT</td><td></td></tr><tr><td>엑소좀 스핀 컬럼 (MW3000)</td><td>Thermo Fisher</td><td>4484449</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Coulter Optima L-100XP 초원심분리기&nbsp;</td><td>벡크만 쿨터</td><td>L-100XP</td><td></td></tr><tr><td>초투명 원심분리기 튜브</td><td>벡크만 쿨터</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Applied Biosystems 7500 고속 실시간 PCR 시스템</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>투과 전자 현미경(TEM)</td><td>JEOL Ltd</td><td>120kV TEM</td><td></td></tr><tr><td>올림푸스 BX41 현미경</td><td>올림푸스</td><td>BX41</td><td></td></tr></tbody></table>

bronchoalveolar 게 exosomes lipopolysaccharide 유도 정화 조 폐 상해에

Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury

심각한 폐 상해 (알리) 및 급성 호흡 곤란 증후군 (아즈)는 높은 질병 률 및 사망률을가지고 계속 해 서 폐 질환의 이질적인 그룹을 나타냅니다. 알리의 분자 병 인 되 고 더 나은 정의; 그러나, 질병의 복잡 한 특성으로 인해 분자 치료는 아직 개발. 여기 급성 패 혈 증 폐 상해의 lipopolysaccharide (LPS) 유도 마우스 모델 사용 하 여 exosomes 염증 반응에서의 역할의 윤곽을 그리 다. 이 모델을 사용 하 여, 쥐 복 LPS에 노출 되는 miRNA와 염증 반응 조절 cytokines 패키지 된 폐에서 Broncho 치경 게 (BAL) 액체에 exosomes 분 비는 보여줄 수 있었습니다. 추가 공동 문화 모델 시스템을 사용 하 여, 우리는 대 식 세포에서 풀어 놓인 exosomes 기관지 상피 세포에서 꽉 접합 단백질의 표현을 방해 보여. 이 결과 건의 염증 반응에 기여 하는 크로스 토크 1) exosomal 왕복을 통해 타고 난 면역 및 구조 세포 사이 및 구조상 방 벽 및 2) 타겟팅이 miRNAs의 치료 하는 새로운 플랫폼을 제공할 수 있습니다. 알리 고 아즈입니다.

정화 조 폐 상해를 유도, 쥐 복 LPS (15 mg/kg)로 대우 되었다. 그림 1A와 같이 LPS 관리의 24 시간 이내 neutrophilic 유입 폐에서 본 했다. 마우스 발 유체, 격리 및 정화 exosomes의 그려 했다. 형태학 BALF exosomes의 전자 전송 현미경 검사 법 (그림 1B)에 의해 확인 됐다.
선택적 프로-염증 성 miRNAs 미르-155와 미르-146a 표현 순화 exosomes에서 q-RT-PCR에 의해 감지 되었다. 미르-155와 미르-146a 식 수준 LPS, PBS (미르-155, 1 ± 0.16 대 11.6 ± 0.6, 미르-146a, 1 ± 0.12 대 13.5 ± 1.186) 제어 마우스 치료에 비해 치료 된 ...

복 LPS에 드러낸 쥐에는 miRNAs와 함께 패키지 된 Broncho-치경 게 (BAL) 액체에 exosomes 분 비. 공동 문화 시스템을 사용 하 여, 우리 보여줍니다 발 액체에서 발표 하는 exosomes 기관지 상피 세포에서 꽉 접합 단백질의 표현을 방해 폐 상해를 강조 하는 프로 염증 성 cytokines의 표현을 증가.

Bronchoalveolar 게 Exosomes Lipopolysaccharide 유도 정화 조 폐 상해에

Acute lung injury (ALI) and acute respiratory distress syndrome (ARDS) represent a heterogeneous group of lung diseases which continues to have a high ...

이 실험의 전반적인 목표는 LPS 유발 급성 패혈성 폐 손상 마우스 모델에서 염증 반응에서 엑소좀의 역할을 설명하는 것입니다. 따라서 이 방법은 급성 폐 손상 및 급성 호흡곤란 증후군에서 세포 교차 담화와 관련된 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 특히 엑소좀 셔틀링을 통한 폐포-마이크로 환경 내에서 세포 간 통신.이 기술의 가장 큰 장점은 급성 폐 손상을 입은 내독소 처리된 패혈성 마우스에서 유래한 고도로 정제된 기관지폐포 세척 엑소좀을 분리하고 특성화할 수 있다는 것입니다. 시연은 Zhihong Yuan 박사와 Chetna Bedi 박사입니다. 시작하려면 마우스당 0.1ml의 LPS 및 PBS가 있는 27게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 주사기를 로드하고 처음 6주에서 8주 된 수컷 C57 검은색 6J 마우스를 수동으로 구속합니다.LPS를 복강내로 전달하고 동물을 우리로 되돌립니다.24시간 후, 첫 번째 동물의 목 중앙을 5mm 절개하고 뭉툭한 집게를 사용하여 근육을 부드럽게 분리하여 기관을 노출시킵니다. 그런 다음 멸균 10ml 주사기에 부착된 27게이지 바늘을 기관에 부드럽게 삽입하고 멸균 PBS 1ml를 주입합니다.그런 다음 즉시 10ml 주사기를 새로운 27게이지 바늘이 장착된 3ml 주사기로 교체하십시오. 기관지폐포 세척액 또는 BOLF를 흡인하고 적절하게 표시된 15ml 원추형 튜브 위에 얼음 위에 BOLF를 추가합니다. 엑소좀을 분리하기 위해 BOLF 샘플을 원심분리하고 상층액을 새로운 15ml 튜브로 옮깁니다.샘플을 다시 원심분리하고 상층액을 울트라 원심분리 튜브로 옮겨 더 큰 세포 입자를 제거합니다. 상층액을 새 원뿔형 튜브로 옮기고 샘플을 0.2미크론 주사기 필터에 로드하여 남아 있는 더 큰 입자를 제거합니다. 여과된 샘플을 새로운 울트라 원심분리 튜브에 추가하여 엑소좀을 펠릿화합니다.상등액을 조심스럽게 버리고 튜브당 100마이크로리터의 PBS에 펠릿을 다시 현탁시킵니다. 그런 다음 엑소좀 샘플을 개별 1.5ml 튜브로 옮겨 영하 80도의 온도에서 보관합니다. 엑소좀을 정제하려면 검체당 100마이크로리터의 현탁액이 들어 있는 튜브 하나에 적절한 엑소좀 염료 0.4마이크로리터를 첨가하고 염료 튜브 하나하나에 해동된 엑소좀 검체 1개를 빠르게 추가합니다.엑소좀과 염료를 철저히 혼합하고 빛을 차단한 실온에서 5분 동안 샘플을 배양합니다. 배양이 끝나면 샘플당 하나의 엑소좀 스핀 컬럼을 1.5ml illusion tube에 넣고 엑소좀 용액을 각 스핀 컬럼의 중앙으로 옮깁니다. 그런 다음 샘플을 원심 분리하고 컬럼을 버리고 언급된 샘플을 섭씨 영하 20도에서 보관합니다.수용 세포의 엑소좀 흡수를 측정하기 위해 첫 번째 시드를 10배로 네 번째 마우스 폐 상피 12개 세포를 0.5 밀리리터의 배지에 넣고 8웰 챔버의 각 웰에 슬라이드하여 섭씨 37도에서 5%이산화탄소를 넣고 16시간 동안 배양합니다. 해동 후 각 웰에 정제된 형광 표지된 엑소좀 10마이크로리터를 첨가하고 세포 배양액을 1시간 동안 인큐베이터에 다시 넣습니다. 배양이 끝나면 PBS로 세포를 세척하고 실온에서 10분 동안 1% 파라포름알데히드로 각 공동 배양을 고정합니다.매체를 제거한 다음 DAPI가 보충된 매체로 슬라이드를 장착하고 40배 배율로 형광 현미경으로 샘플을 이미지화합니다. 수용 세포와의 엑소좀 상호작용을 확인하기 위해, 적절한 배양 배지가 들어 있는 12웰 배양 플레이트에 웰당 2ml의 배지에 10배 10배로 5번째 마우스 폐 상피 12 세포를 2회 파종하여 섭씨 37도에서 5%의 이산화탄소에서 2시간 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 실험군당 상피 세포 웰 3개에 엑소좀 20마이크로그램을 추가하고 세포를 인큐베이터로 되돌립니다.24시간 후 배지를 제거하고 PBS로 세포를 세척한 다음 부드럽게 흔들어 각 웰에 600마이크로리터의 용해 완충액을 추가합니다. 그런 다음 각 웰의 전체 내용물을 개별 1.5ml 튜브로 옮기고 표준 실시간 PCR 프로토콜에 따라 샘플을 분석합니다. LPS 투여 후 24시간 이내에 LPS 투여된 동물의 폐에서 호중구 유입이 관찰됩니다.방금 시연된 바와 같이 분리 및 정제 후, 패혈성 폐 손상 동물의 BOLF에 엑소좀이 존재하는지 투과 전자 현미경으로 확인할 수 있습니다. LPS를 투여한 동물의 기관지폐포 엑소좀에서 선별된 전염증성 마이크로 RNA의 발현은 PBS를 투여한 대조군 마우스에 비해 크게 증가했습니다. LPS 처리된 엑소좀은 마우스 세기관지 상피 세포에 흡수되며, 이는 1시간 동안 공동 배양 후 형광 염료 표지 엑소좀과 DAPI 표지 세포의 공동 국소화에서 입증되었습니다.LPS 투여된 동물의 엑소좀과 공동배양한 상피세포에서는 대조군 PBS 투여생의 엑소좀과 공동배양한 경우와 비교했을 때, 전염증성 매개체 발현이 유의하게 증가했습니다. 또한, LPS를 투여한 마우스의 엑소좀을 투여한 세포는 대조군에 비해 zonula occludens one의 현저한 약독화 발현을 보였는데, 이는 LPS 처리된 엑소좀 공동배양 후 세포의 무결성이 덜 온전함을 나타냅니다. LPS의 복강내 주사, 기관지폐포 세척 추출, 기관지폐포 세척에서 엑소좀 위임 등 모든 단계를 비교적 짧은 시간 내에 완료할 수 있습니다.이 절차에 따라 엑소좀 및 상피 세포 공동 배양과 같은 다른 방법을 수행하여 폐포 미세 환경에서 선천성 세포와 구조 세포 간의 교차 담화에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 엑소좀 셔틀링을 통한 선천성 면역 세포와 구조 세포 간의 교차 대화는 염증 반응과 구조적 장벽 파괴에 기여하며, 엑소좀 마이크로 RNA 표적화가 급성 폐 손상 및 급성 호흡곤란 증후군을 치료하기 위한 정상적인 플랫폼을 제공할 수 있음을 시사합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 생쥐에서 패혈성 폐 손상을 유도하는 방법, 생쥐에서 기관지폐포 세척액을 분리하는 방법, 세척액에서 엑소좀을 분리하는 방법, 세포 내 혼선을 조사하기 위해 공동 배양 모델을 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.LPS로 작업하는 것은 위험할 수 있으며 이 절차를 수행하는 동안 항상 적절한 개인 보호 장비를 착용하는 것과 같은 예방 조치를 취해야 한다는 것을 잊지 마십시오.

bronchoalveolar-lavage-exosomes-lipopolysaccharide-induced-septic

Research

연구

JoVE Journal

Genetics

유전학

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury in Mice for Exosome and Immune Analysis

병원균 감염에 대한 숙주 면역 반응은 긴밀하게 규제 과정이다. 생쥐의 리포 다당류 폐 노광 모델을 이용해서, 그 질병 병인과 관련된 복잡한 메커니즘은 고해상도 평가를 수행하는 것이 가능하다.

마우스의 호스트 면역 반응을 평가하기 위해 구인두 기관 내 PAMP 관리 및 폐포의 활용

우리는 급성 폐 손상을 모델링하기 위해, 분무에 의해 에어로졸 리포 폴리 사카 라이드에 도전하여 호중구 폐 염증을 유도하는 방법을 설명합니다. 또한, 폐 격리, 기관 삽관 및 기관지 세척액에 대한 기본적인 수술 기법도 설명되어 있습니다.

에어로졸 리포 폴리 사카 라이드를 사용하여 생성 폐 호중구하는 방법

마취 된 돼지의 폐 세척액으로 반복 인간 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS)의 주요면과 유사한 폐 손상을 유도한다. 이를 위해 폐 반복적으로 37 ℃에서 0.9 % 식염수를 세척한다. 프로토콜의 목표는 급성 호흡 곤란 증후군의 연구를위한 가스 교환 및 혈역학의 재현 완화이다.

급성 호흡 곤란 증후군의 모델로서 돼지의 세척에 의한 계면 활성제 고갈 (ARDS)

폐의 건강 상태는 폐의 세기관지에있는 면역 세포의 유형과 수에 의해 반영됩니다. 우리는 비 흡착성 세포와 쥐의 하부 호흡기에서 용해되는 요소를 분리하고 연구 할 수있는 기관지 폐포 세척 기술에 대해 설명합니다.

쥐 폐의 기관지 폐포 세척은 염증성 세포의 침윤을 분석하는

여기, 두 세포 외 기 격리 프로토콜, 한 원심 분리 및 밀도 그라데이션 원심 분리, extracellular 소포 murine bronchoalveolar 게 액체 샘플에서 분리 된 ultracentrifugation 설명 합니다. 두 방법으로 murine bronchoalveolar 게 액체에서 파생 된 세포 외 소포는 계량 하 고 특징.

Extracellular 소포 Murine Bronchoalveolar 게 유체는 한 원심 분리 기법을 사용 하 여에서 격리

여기에 제시된 단계별 절차는 직접적인 경포대당증 주입에 의해 마우스에서 급성 폐 손상을 유도하고 혈액 샘플, 기관지 정맥 세척액 및 폐 조직의 FACS 분석을 수행하기 위한 것이다. 최소 침습성, 간단한 취급, 좋은 재현성 및 질병 중증도의 적정은 이 접근법의 이점입니다.

직접 경포당증 주입에 의해 마우스에 있는 심각한 폐 상해를 유도하는

결합 된 오존과 세균성 내독신 노출 마우스는 호중구의 것을 포함하여 광범위한 세포 죽음을 보여줍니다. 우리는 세포 골격 라멜레포디아의 중단, 기관지 폐포 라베이지의 복잡한 V ATP synthase 서브유닛 β 및 혈관 스타틴의 세포 발현 증가, 폐 면역 반응 억제 및 지연 된 호중구 모집과 같은 세포 적응을 관찰했습니다.

결합 된 오존 과 LPS 유도 뮤린 급성 폐 부상 동안 폐 세포 적응 시각화

본 연구에서는 기본 후두경을 사용하여 쥐에서 ALI를 발달시키는 비침습적 기기관내 삽입 기법이 입증되어 LPS가 폐에 정밀히 전달되도록 합니다. LPS는 후두경을 이용한 기관내관 을 통해 주입됩니다. 폐 손상의 규모는 여러 시점에서 평가됩니다.

설치류에서 급성 폐 손상을 유도하기 위한 비침습적 기관내 지포폴리당(Lipopolysaccharide) 투여

이 프로토콜은 효과적으로 격리 갓 인간 융모 cytotrophoblasts에 siRNA를 형질 감염 microporation을 사용하여 이들 세포의 DNA 단백질 복합체를 식별하는 방법을 설명한다. 형질 감염된 세포는 웨스턴 블롯에 의해 모니터링 될 수 있고, EMSA는 4 일간의 배양 기간 동안 분석한다.

갓 고립 된 인간의 산모 Cytotrophoblasts에 siRNA를 형질 및 EMSA 분석

배우세요 LPS 유도 급성 폐 손상 마우스 모델에서 엑소좀의 염증 반응 역할을 규명하는 방법입니다. 기관지폐포세척액에서 엑소좀을 분리하고 상피세포와 공배양하여 세포 간 소통을 연구할 수 있습니다.

Bronchoalveolar 게 Exosomes Lipopolysaccharide 유도 정화 조 폐 상해에

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