2018년 5월 27일
회전 운동 정량화 시스템 (REQS) 초파리 melanogaster 동물에 의해 수행 활동의 금액을 동시에 측정 하는 동안 회전 운동을 유도할 수 있다. 여기, 선물이 회전 운동 치료는 REQS.를 사용 하 여 발생 하는 동물의 활동 수준을 측정 하는 방법을 자세히 설명 하 여 포인트 프로토콜
이 방법은 운동 생물학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다., 예를 들어 다른 연령의 동물에 대한 운동 반응이 어떻게 다른지, 그리고 어떤 유전 경로가 운동 반응을 제어하는지와 같은. 이 기술의 가장 큰 장점은 연구자들이 처음으로 회전 유도 운동을 수행하는 파리의 활동을 실시간으로 측정할 수 있다는 것입니다. 이 절차를 시연하는 사람은 제 연구실의 대학원생인 Louis Patrick Watanabe입니다.
계획된 실험에 앞서, 실험을 위해 통제된 각 자손을 수집할 수 있도록 수컷과 암컷 파리의 교배를 설정합니다. 시작하려면 8개의 유리 표본 튜브에 바이알당 10개의 마취된 테스트 플라이를 로드합니다. 표준 실험 그룹은 각 성별의 파리 10마리로 구성된 10개의 바이알로 구성됩니다.
바이알을 REQS에 로드하려면 바이알을 앞쪽에서 활동 모니터의 슬롯에 삽입하십시오. 그런 다음 바이알에 두 번째 캡을 놓고 바이알을 중앙에 놓고 필요에 따라 O-링을 움직입니다. REQS를 제어된 환경 조건을 위한 인큐베이터에 보관합니다.
진행하기 전에 동물이 이 인큐베이터에서 한 시간 동안 마취에서 회복할 때까지 기다립니다. 8시간 이상의 분석의 경우, 튜브의 한쪽 끝에 매우 단단히 부착된 식품이 들어 있는 바이알을 사용할 수 있습니다. 순응 기간이 끝나면 장치의 전원을 켜서 회전을 시작합니다.
속도를 4RPM과 같은 원하는 속도로 조정합니다. 튜브가 적절하게 배치된 경우 바닥 표면에 접촉해서는 안 됩니다. 일반적인 분석의 경우, 소프트웨어를 시작하고 원하는 시간(예: 음식 없이 바이알을 사용하는 경우 2시간) 동안 활동을 기록하기만 하면 됩니다.
시작하면 소프트웨어가 자동으로 데이터를 텍스트 파일에 저장합니다. 소프트웨어에서 녹색 연결 표시등은 소프트웨어가 데이터를 수집하고 있음을 나타냅니다. 녹음 빈도는 Preferences 탭에서 조정할 수 있습니다.
일반적으로 5분 간격이 사용됩니다. 분석하는 동안 동물은 방해에 매우 민감하고 증가된 활동으로 반응할 가능성이 높으므로 인큐베이터를 열지 마십시오. 분석이 끝나면 소프트웨어를 닫아 데이터 수집을 종료한 다음 REQS를 끄고 튜브를 검사합니다.
운동 기간 동안 발생한 모든 사망 사고를 기록해 두십시오. 일반적으로 2시간 동안 4RPM은 건강한 균주에 치명적이지 않습니다. 마지막으로, 이산화탄소로 파리를 마취하여 바이알을 내립니다.
데이터 파일은 모든 통계 패키지를 사용하여 분석할 수 있습니다. 모든 위치에 대해 활동 점수가 0으로 기록되는 시점이 있는 경우 이러한 시점 동안 연결이 끊어진 것입니다. 끊어진 부분이 발생하면 테이프를 사용하여 회전하는 전화 잭으로 이어지는 연결을 안정화합니다.
유전적으로 구별되는 4개의 초파리 계통을 설명된 프로토콜을 사용하여 REQS로 분석했습니다. 각 그룹은 10개의 바이알로 나뉜 100마리의 파리로 구성되었습니다. 평균 활성은 4RPM으로 수행된 2시간 분석 동안 5분 빈으로 계산되었습니다.
4가지 유전자형 간의 평균 운동 활동은 모두 유의하게 달랐지만, 처녀 수컷과 처녀 암컷 파리 사이에는 유의미한 차이가 발견되지 않았으므로 이 분석에서 해당 데이터를 함께 제시합니다. 개발 후 이 기술은 운동 유전학 분야의 연구자들이 초파리 멜라노가스터의 다양한 운동 반응을 탐구하고 운동이 동물 행동 및 생리학에 미치는 영향을 연구할 수 있는 길을 열었습니다. 이 절차에 따라 신체 성분 분석, 스트레스 테스트 및 체력 테스트와 같은 다른 방법을 사용하여 운동 치료가 동물에 미치는 영향에 관한 추가 질문에 답할 수 있습니다.
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회전 운동 정량화 시스템(REQS)은 회전을 통해 초파리의 운동을 유도하고 활동 수준을 측정합니다. 이 프로토콜은 회전 운동 치료를 받는 파리의 활동을 평가하는 상세한 접근 방법을 제공합니다.
Quantifying exercise-induced activity in Drosophila melanogaster using the Rotating Exercise Quantification System (REQS) enables precise measurement of behavioral phenotypes relevant to genetic and physiological studies. This capability supports early-stage target validation and mechanistic de-risking in discovery pipelines focused on exercise biology, metabolic regulation, and behavioral genetics. Standardized, quantitative outputs from REQS facilitate cross-strain and cross-condition comparisons, enhancing predictive confidence for translational research.
The REQS method integrates into the early discovery continuum, bridging genetic manipulation, behavioral phenotyping, and preclinical model development in exercise biology and related fields.