Name: 식 세포에서 세포내 복제에 대 한의 진 균 abscessus 독성 마커의 식별 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: 배우세요 Mycobacterium abscessus의 식세포 내 생존 메커니즘을 Acanthamoeba castellani 모델에서 전사체 분석과 트랜스포존 돌연변이 라이브러리 스크리닝으로 연구하는 방법을. 이 기법은 백신 개발을 위한 치료 표적을 식별하는 데 활용됩니다.

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우리는 크게 돌연변이의 귀중 한 선물에 대 한 홍보 E.J. 루빈 (하버드의과 대학, 보스톤, 미국)를 인정 도서관과 원고의 교정에 대 한 닥터 벤 마샬 (의 학부, 사우스 햄튼 대학, 영국). 우리가 크게 그들의 재정 지원 (RF20150501377)에 대 한 낭 성 섬유 증 "Vaincre 라 Mucoviscidose" 및 "L'Association 그레고리 Lemarchal" 프랑스 환자 협회를 인정합니다. 우리 또한 감사 국립 기관 연구 (ANR 프로그램 DIMIVYR (ANR-13-BSV3-0007-01)), 그리고 지구의 Ile-de-France (도메인 d'Intérêt Majeur 외관 Infectieuses 동부 표준시 Emergentes) V.L m 박사 후 친목을 자금. L. L.는에서 박사 동료는 "Ministère de L'Enseignement Supérieur 동부 표준시 드 라 Recherche".

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<li>Bakala N'Goma, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycobacterium+abscessus+phospholipase+C+expression+is+induced+during+coculture+within+amoebae+and+enhances+M.+abscessus+virulence+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Mycobacterium abscessus phospholipase C expression is induced during coculture within amoebae and enhances M. abscessus virulence in mice.</a> Infection and Immunity. 83 (2), 780-791 (2015).</li>
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M. abscessus 동작은 RGM2에 속하는 다른 mycobacteria 보다 M. 결핵 등 병원 성 SGM의 행동에 훨씬 더 비슷합니다. SGM의 pathogenicity에 핵심 요소 생존 또는 심지어 대 식 세포와 같은 항 원 제시 세포와 수지상 세포 내에서 증식 하는 능력입니다.
M. abscessus 진 핵 phagocytic 세포 내에서 살아남기 위해 그것의 게놈14 의 전체 순서에 의해 표시 된 대로 특정 게놈 장점을 인수 했다. M. abscessus 의 게놈 빠르게 진화 하 고 될 표시 되었습니다 그리고 많은 최근 매우 플라스틱 prophages 등 새로운 유전자15삽입 시퀀스를 소개 했다. M. abscessus M. 결핵에 비해 독성에 ...

속 진 균 종 무해 마저 유기 체에서 주요 인간 병원 체에 이르기까지 포함 되어 있습니다. 결핵균, 진 균 marinum 진 균 ulcerans 등 잘 알려진 병원 성 종 느린 성장의 하위 그룹에 속하는 mycobacteria (SGM). 반면, 급속 한 성장 비율 mycobacteria (RGM) 한 천 매체에 7 일 이내에 보이는 식민지를 형성 하는 그들의 기능에 의해 특징입니다. RGM 그룹 이상 180 종, 비 병원 성 마저 mycobacteria 주로 구성 되어 있습니다. RGM 그들의 호스트와 상호 작용에 대 한 연구는 주로 진 균 smegmatis 에 초점을 맞춘을 이러한 mycobacteria 대 식 세포의 살 균 작용에 의해 빠르게 제거 됩니다 설명.
진 균 abscessus 병원 성 인 간에 게는 드문 RGM 중 하나 이며 다양 한 피부 및 연 조직 감염에서 폐와 전파 감염에 이르기까지 감염에 대 한 책임입니다. M. abscessus 가 간주, 진 균 avium, 함께 낭 성 섬유 증 환자1주 mycobacterial 병원 체.
M. abscessus 에 수행 하는 다양 한 학문이 진이 균은 세포내 병원 체, 세포와 폐에 RGM에서 일반적으로 관찰 되지 않는 피부 섬유 아 세포의 살 균 응답 살아남을 수 있는 처럼 동작 표시 2 , 3 , 4. M. abscessus 게놈 분석 환경 미생물 토양 접촉에서 일반적으로 발견 하는 대사 경로 확인 했다, 식물 및 수 중 환경, 무료 amoebae는 종종 제시5. 그들은 또한 M. abscessus 수집 수 유전 교환에 유리한 틈새에서 수평 한 유전자 이동에 의하여 아마 인수 마저 및 비 병원 성 RGM에 없는 여러 가지 독성 유전자에 어우러진 시연 했다 다양 한 아메바 내성 박테리아입니다.
실험적으로, 첫 번째 눈에 띄는 결과 중 하나는 M. 결핵6에 관해서는 뿐만 아니라 세포에서 세포내 성장의 M. abscessus 관찰 했다. M. abscessus 또한 phagosome apoptosis, autophagy, 감염2에 세포질 저항의 세 가지 필수적인 메커니즘 산성화 저항. 그것은 심지어 M. abscessus 는 phagosome cytosol, 세균성 곱하기2를 선호 수 있습니다 더 많은 영양분이 풍부한 환경 간의 즉각적인 통신을 설정할 수가 표시 되었습니다. 아주 작은 게놈 장점 M. abscessus 소유 또는 세포내 환경에서 생존을 허용 하는 인수에 대 한 알려져 있다. 아메바 coculture 진 균 massiliense7,8로 많은 새로운 아메바 내성 세균의 분리를 허용 하는 효율적인 방법입니다. Amoebae 내에서 증식 하는 능력의 M. abscessus4증가 독성 부여 수 쥐에 M. abscessus 에의 aerosolization 모델에 관찰 되었다. 1 개의 가설은 이다 M. abscessus phagocytic 세포, 다른 비 병원 성 RGM 다른에서 살아남기 위해이 환경 내에서 발생 하는 유전 특성을 개발 했다. 이러한 인수 능력을 확산과 인간의 호스트의 독성 부탁 수 있습니다.
이 보고서에는 도구와 amoebae 환경에서 살아남으려면 M. abscessus 에 수 여 하는 게놈 장점 강조 하는 방법을 설명 합니다. 이 목적에 대 한 M. abscessus transposon 돌연변이의 심사는 처음 설명, Acanthamoeba castellanii 유형 변형, 세포 성장에 대 한 돌연변이 결함 식별 수 있는에. 대 식 세포에서 두 번째 심사는이 결함 인간의 호스트에서 지속 되는지 확인 하, 또한 보고 됩니다. 둘째, 이해 하는 메커니즘은 M. abscessus phagocytic 생활 적응에 무력화 세포 및 동물의 호스트, 특별히 M. abscessus 에 대 한 적응 방법에에서 그것의 독성은 증가 개발, 공동 문화 후 amoebae 존재 하는 내부 amoebal 박테리아에서 총 RNA 추출 허용. 결과적으로, 세포내 생명에 필요한 M. abscessus 유전자의 포괄적인 보기 개발 되었다.

<table><tbody><tr><td>><재료/장비의 이름</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24-well plates</td><td>Thermofisher</td><td>11874235</td><td></td></tr><tr><td>96-well plates</td><td>Thermofisher</td><td>10687551</td><td></td></tr><tr><td>Beadbeater&nbsp;</td><td>Bertin</td><td>Precellys 24</td><td></td></tr><tr><td>Bioanalyzer</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Genepulser Xcell</td><td>Biorad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop 분광 광도계 2000</td><td>Thermofisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>QuBit 형광측정기</td><td>Thermofisher</td><td>Q33226</td><td></td></tr><tr><td>지르코늄 비드/실리카 비드</td><td>Biospec products</td><td>11079101Z</td><td>비드</td></tr><tr><td>시약/세포의 이름</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acanthamoeba&nbsp; 카스텔라니&nbsp; </td><td>ATCC</td><td>30010</td><td>균주</td></tr><tr><td>아미카신&nbsp;</td><td>Mylan</td><td>150927-A</td><td>분말</td></tr><tr><td>B-메르캅토에탄올&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250</td><td>솔루션</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1016</td><td>>93% 과립형 무수</td></tr><tr><td>클로로포름;</td><td>Fluka</td><td>25666</td><td>용액</td></tr><tr><td>ClaI 효소</td><td>New England Biolabs</td><td>R0197S</td><td>효소</td></tr><tr><td>Columbia agar&nbsp;</td><td>Biomerieux</td><td>43041</td><td>90 mm</td></tr><tr><td>D-글루코스</td><td>시그마-알드리치</td><td>G8270&nbsp;</td><td>가루</td></tr><tr><td>DMEM&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>11500596</td><td>배지</td></tr><tr><td>DNase 및 RNase 무료 물&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>10977-035</td><td>솔루션</td></tr><tr><td>E.&nbsp; coli 전기 유능&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>18265017</td><td>박테리아</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4884</td><td>분말</td></tr><tr><td>Escherichia coli&nbsp; </td><td>임상 분리</td><td>개인 재고</td><td>박테리아</td></tr><tr><td>Fe(NH4)2(SO4)-6H20&nbsp;</td><td>EMS</td><td>15505-40</td><td>황산염 용액 4% 수</td></tr><tr><td>성 태아 송아지 혈청</td><td>Gibco</td><td>10270</td><td>혈청</td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>시그마-알드리치</td><td>G5516</td><td>용액</td></tr><tr><td>구아니듐 티오시아네이트&nbsp;</td><td>Euromedex</td><td>EU0046-D</td><td>분말</td></tr><tr><td>이소프로판올&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516</td><td>솔루션</td></tr><tr><td>J774.2 대식 세포</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>J774.2</td><td>균주</td></tr><tr><td>카나마이신&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60615</td><td>분말</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>Monobasic, 무수</td></tr><tr><td>LB 액체 매체&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>12795-027</td><td>분말</td></tr><tr><td>Lysozyme</td><td>Roche</td><td>10837059001</td><td>분말</td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Labosi</td><td>M275</td><td></td></tr><tr><td>pur Microbank TM (비드가 있는 cryotubes)</td><td>Pro-Lab 진단</td><td>PL.170/M</td><td></td></tr><tr><td>Middlebrook 7H11 매체</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0428</td><td>분말</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9 매체</td><td>Thermofisher</td><td>11753473</td><td>분말</td></tr><tr><td>M&uuml; ller-Hinton 한천</td><td>Biorad</td><td>3563901</td><td>분말</td></tr><tr><td>N-Lauryl-sarcosine</td><td>Merck</td><td>S37700 416</td><td>분말</td></tr><tr><td>Na2HPO4-7H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9390</td><td>98-102%</td></tr><tr><td>Phenol/chloroforme&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>77617</td><td>용액</td></tr><tr><td>Proteinase K</td><td>Thermofisher</td><td>EO0491</td><td>분말</td></tr><tr><td>프로테오스 펩톤</td><td>BD</td><td>211684</td><td>동물 조직의 효소 분해</td></tr><tr><td>pUC19 플라스미드</td><td>New England Biolabs</td><td>54357</td><td>플라스미드</td></tr><tr><td>SDS&nbsp; 20%</td><td>Biorad</td><td>1610418</td><td>용액</td></tr><tr><td>구연산나트륨</td><td>Calbiochem</td><td>567446</td><td>분말</td></tr><tr><td>Thiourea</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>88810</td><td>분말</td></tr><tr><td>Tris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>154563</td><td>분말</td></tr><tr><td>Trizol&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>12044977</td><td>솔루션</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1754&nbsp;</td><td>용액</td></tr><tr><td>효모 추출물&nbsp;</td><td>BD</td><td>212750</td><td></td></tr><tr><td>Kit</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AMBION DNase 키트&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>10792877</td><td>키트</td></tr><tr><td>DNA Agilent Chip</td><td>Agilent</td><td>5067-1504</td><td>키트</td></tr><tr><td>GeneJET Plasmid Miniprep 키트&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>K0503</td><td>키트</td></tr><tr><td>PureLink PCR 정제 키트</td><td>Invitrogen</td><td>K310001</td><td>키트</td></tr><tr><td>Quant-It" 분석 키트</td><td>Thermofisher</td><td>Q33140/Q32884</td><td>키트</td></tr><tr><td>T4 DNA 리가제&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>Y90001</td><td>키트</td></tr>, <tr><td>TruSeq Stranded RNA LT 준비 키트</td><td>, Illumina</td><td>15032611</td><td>키트</td></tr></tbody></table>

식 세포에서 세포내 복제에 대 한의 진 균 abscessus 독성 마커의 식별

Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes

인간 대 식 세포에 의해 식 균 작용을 저항 하는 기능 및 이러한 셀 안에 번 식 능력은 다른 마저 mycobacteria에서 진 균 abscessus 차별화. 이러한 독성 특성 기본 구조 폐 질환, 낭 성 섬유 증, 기관지 확장 증, 결핵 등으로 취약 한 호스트에서 특히 병원 성 M. abscessus 를 렌더링합니다. 어떻게 환자 M. abscessus 감염 될 불분명 남아 있습니다. 많은 mycobacteria 달리 M. abscessus 환경에서 찾을 수 없습니다 하지만 amoebae, M. abscessus에 대 한 잠재적인 저수지를 나타내는 환경 식 세포 안에 있는 수 있습니다. 실제로, M. abscessus amoebal 식 균 작용에 저항 이며 내 아메바 인생 감염의 실험 모델에서 M. abscessus 독성을 증가 것으로 보인다. 그러나, 약간 그 자체에 M. abscessus 독성에 대 한 알려져 있다. M. abscessus 세포내 생활 이점이 부여 하는 유전자를 해독, M. abscessus transposon 돌연변이 라이브러리의 심사는 개발 되었다. 병렬로 amoebae 공동 문화 후 세포내 Mycobacteria에서 RNA 추출의 방법 개발 되었다. 이 메서드는 검증 되었고 전체 M. abscessus 의 시퀀싱을 허용 세포; 내부 transcriptomes 처음으로, 세포내 생활에 적응 하는 M. abscessus 에 글로벌 보기를 제공합니다. 두 방법 모두 인간의 기도 식민지로 M. abscessus 있도록 M. abscessus 독성 요인에 대 한 통찰력 주세요.

M. abscessus 저항 하 고 대 식 세포와 같은 amoebae 환경 원생 동물의 살 균 응답을 탈출 하는 기능이 있다. M. abscessus 는 악성에 게 쥐4독성 요인을 amoebae, 접촉 성장 될 때 표현 한다. 이러한 방법의 첫 번째 목적은 M. abscessus 그것의 생존 및 곱셈 amoebae 내에 존재 하는 유전자를 확인 했다.
이 위해, M. abscessus subsp. massiliense, 테네시 배달9, 여의 돌연변이 라이브러리 amoebae이 감쇠 성장 돌연변이 식별 하기 위해 앞 공동 문화에 따라 상영 세포내 환경 (<strong class="xfi...

여기, 선물이 식-진 균 abscessus 상호 작용을 공부 하는 두 개의 프로토콜: 세균 세포내 결핍 및 RNA에서 세균 세포내 transcriptome 결정 transposon 돌연변이 라이브러리의 심사 시퀀싱. 두 방법 모두 게놈 장점과 transcriptomic 적응 세포내 박테리아 체력 향상에 대 한 통찰력을 제공 합니다.

What differentiates Mycobacterium abscessus from other saprophytic mycobacteria is the ability to resist phagocytosis by human macrophages and the ability ...

생리성 병원체의 돌연변이 도서관 검열 및 전사 연구는 호스트 내부에서 살아남기 위하여 이용되는 관심있는 병원체의 게놈 그리고 규정 적응에 관하여 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이러한 기술의 주요 장점은 대규모 조사 기술이며 세포 내 수명에 대한 적응에 대한 객관적인 통찰력을 제공한다는 것입니다. 이 기술의 의미는 백신 치료를 위한 잠재적인 표적에 통찰력을 줌으로써 이 질병에 연관되는 Mycobacterium 농양의 치료로 확장됩니다.75 평방 센티미터 조직 배양 플라스크에서 펩톤 효모 포도당 배지의 30 밀리리터에서 아메바 아칸타모에바 카스텔라니 또는 Ac를 배양하여 시작합니다. 1시간 후에 25 밀리리터 파이펫을 사용하여 상체를 제거하고 세척당 탄소 또는 질소없이 Ac 버퍼 10 밀리리터로 세포를 세 번 씻습니다. 마지막 세척 후, 플라스크 의 바닥에서 아메바를 하나의 격렬한 흔들림으로 분리하고 팔콘 튜브에서 세포를 5회 10일 원당 5개의 아메배 농도로 조정한다.96웰 플레이트에서 잘 당 4 개의 아메배에 5 번 10 번 시드. 부동 아메바 트로포 -zoites 우물에 부착 할 수 있도록, 흔들리지 않고 1 시간 동안 섭씨 32도에 접시를 배치합니다. 한편, 얼음에 박테리아를 따뜻하게하고, 배양의 끝에 각각 잘 해동 박테리아의 다섯 마이크로 리터를 추가합니다.섭씨 32도에서 1.5시간 후에는 연기를 후지 아래 멸균된 금속 트레이에 멸균 거즈 더미에 접시를 뒤집어 서판을 버리십시오. 잘 세 번 씻어 200 마이크로 리터의 신선한 Ac 중간 개당. 마지막 세척 후, 2 시간 동안 남아있는 세포 외 균진을 제거하기 위해, 잘 당 amikacin으로 보충 신선한 매체의 20 마이크로 리터와 공동 배양.그 다음에는 신선한 Ac 매체에 세 번의 세 가지 세가지 세정이 이어졌습니다. 그런 다음, 매질의 200 마이크로리터를 첨가하고, 신선한 아키카신으로 보충한 다음, 7개의 열 불활성 에슈리치아 대장균 균에 5회 10회 첨가하였다. 48시간 후, 10마이크로리터의 10마이크로리터를 음파10% 나트륨 으로 세포로 리세우하고, 섭씨 32도에서 30분 동안, 5%의 양피를 함유한 컬럼비아 아가 플레이트에 용액5마이크로리터를 퍼뜨리고 있다.또한 각 낙하시에 멸균 수의 25 마이크로 리터를 추가하여 lysates를 희석. 모든 용하가 도금되면 플라스틱 파라핀 필름으로 접시를 밀봉하고 37도에서 3 ~ 4 일 동안 문화를 배양하십시오. 식민지가 접시에 나타날 때, 문화를 촬영하고 세균 성 식민지의 가장 낮은 수의 예금에 의해 세포 내 성장을 위해 손상된 돌연변이를 식별합니다.세포 내 진균 RNA 추출을 위해, 먼저 120 RPM에서 50 밀리리터 튜브에서 중간 기하급수적인 단계로 글리세롤과 포도당으로 보충된 7H9 배지에서 M.농양을 성장시다. 배양의 끝에서, 세척당 Ac 버퍼10 밀리리터로 박테리아를 두 번 세척하고 O.D.600을 측정하여 박테리아 농도를 추정한다. 다음으로, 8개의 진균에 8.5배 10번을 추가하여 8.5배 10배, 6개의 아메배에 10밀리리터의 신선한 Ac 배지를 1시간 동안 30도, RPM 80°C로 첨가한다.인큐베이션의 끝에서, 원심 분리에 의해 세포를 수확하고, 동일한 원심 분리 조건하에서 세척 당 신선한 Ac 버퍼의 10 밀리리터에 펠릿을 세 번 세척. 그런 다음 세포 외 균을 제거하기 위해 amikacin으로 보충 된 신선한 Ac 버퍼의 10 밀리리터에서 세포를 다시 중단하고 30 섭씨 및 80 RPM에서 4 시간 동안 세포를 배양한 다음 신선한 Ac 버퍼에서 두 개의 세서히를 넣습니다. 마지막 세척 후, 감염된 아메배는 3밀리리터의 4밀리리터로 다시 중단하여 베타 메르카토에탄올 280마이크로리터로 보충하여 10분 동안 얼음에 아메배를 방해합니다.인큐베이션의 끝에서, 세포 용액을 원심분리하여 방출된 세포내 박테리아를 펠릿으로 만들고, 감기 용액 3의 1밀리리터에서 세균성 펠릿을 다시 중단한다. 시료를 만들었을 수도 있는 아메바 RNA 또는 프로테아제로 오염을 피하기 위해 모든 상체를 제거하는 것이 중요합니다. 방출된 박테리아를 두 번째 원심분리로 수확하고 추출 버퍼의 1밀리리터에서 펠릿을 다시 중단합니다.그런 다음 음의 80도에서 24 시간 동안 배양하십시오. 진균용액을 지르코늄 구슬을 포함하는 2개의 밀리리터 나사 튜브로 500 마이크로리터 그라데이션 마크까지 옮기고, RNA syn 활성화 및 세포 용해를 용이하게 하기 위해 음수 80도에서 24시간 동안 튜브를 저장한다. 분석 당일, 얼음에 샘플을 해동하고, 25초 동안 6000 RPM에서 2라운드 균질화로 세포를 용해시키고, 그 다음에 6000 RPM에서 20초 동안 1라운드 균질화됩니다.각 균일화 라운드 사이에 RNA 분해를 피하기 위해 얼음에 샘플을 1분 동안 식힙니다. 제3차 균질화 후, 얼음에 샘플을 20분 간 식히고, 각 튜브에 이소아밀 알코올로 희석된 클로로폼 200마이크로리터를 첨가한다. 1 분 동안 소용돌이, 다음 원심 분리 샘플을, 음의 20섭씨에서 2 ~ 3 시간 배양에 대한 수성 단계에 감기 이소 프로파놀의 0.8 밀리리터를 추가합니다.인큐베이션의 끝에서, 원심 분리시 샘플을 다시, 혼합하지 않고 차가운 70 %의 마이크로 리터의 500 마이크로 리터에 펠릿을 세척. 그런 다음 원심 분리로 에탄올을 즉시 제거합니다. 원심 농축기에서 펠릿을 건조시키기 위한 상퍼를 흡인하고, DNA/RNA 가 없는 물의 100마이크로리터에서 펠릿을 다시 중단한다.입증된 바와 같이 균균 MRNA 추출은 영양소와 미네랄의 공급원, 또는 저산소 또는 산성 환경에 제한되는 환경에 대응하는 역할에 따라 유전자를 그룹화하여 유도및 억압된 유전자 가족의 평가를 허용합니다. 산화 및 질산 스트레스에 대한 저항성, 또는 환경 아메바에 대한 응답으로 독성 요인의 발현. 그 절차를 시도하는 동안, 배치 효과를 피하기 위해 동시에 제어 및 감염된 샘플의 배양 및 RNA 절연을 수행하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라, 듀얼 RNA 염기서열 분석 같은 다른 방법은 호스트 병원체 상호 작용에 대 한 추가 질문에 대답 하기 위해 미리 형성 될 수 있습니다. 개발 후, 이 기술은 아메바 호스트 모형에 있는 진균 독성을 향해 미생물학의 필드에 있는 연구원을 위한 도로를 포장했습니다. 아메바와 함께 일하는 것은 절차에 설명된 단계를 따르지 않으면 아메배가 낭종으로 변할 수 있으므로 매우 위험할 수 있다는 것을 잊지 마십시오.

identification-virulence-markers-mycobacterium-abscessus-for

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: 버넛, A. 외. 제브라피시 배아에서 마이코박테리아 아브스페서스 의 발병 및 분석 해독 및 영상화. J. Vis. 경험 (2015)이 영상은 형광 대식세포를 발현하고 형광성 Mycobacterium abscessus 거친 균주에 감염된 형질전환 제브라피시 배아를 사용하여 숙주-병원체 상호작용을 시각화하는 프로토콜을 시연합니다. 이 연구는 세포외 연결이 면역 회피를 가능하게 하여 박테리아 생존과 숙주 세포 손상을 촉진하는 방식을 밝혀냅니다.

마이코박테리움 abscessus에 감염된 제브라피시 배아에서 숙주-병원체 상호작용의 라이브 이미징

Source: Dubois, V., et al. Identification of Virulence Markers of Mycobacterium abscessus for Intracellular Replication in Phagocytes. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure of co-culturing amoebae with mutant bacterial strains to evaluate their intracellular survival and identify virulence markers through differences in colony counts.

Detecting Bacterial Virulence Using Amoeba as a Host System

이 동영상은 골수 유래 대식세포(BMM)에서 기생충의 세포 내 성장을 정량화하는 분석을 보여줍니다. 대식세포 세포는 각각 리슈마니아(Leishmania)의 운동성 및 비운동성 침습 단계(motile and non-motile invasive stages), 메타고리 전구세포(metacyclic promastigotes) 및 무산소세포(amastigotes)에 감염되어 있습니다. 기생충은 대식세포에 침입하여 기생 액포(parasitophorous vacuole)로 내면화되어 내부에서 증식합니다. 세포 내 기생충 성장은 대식세포와 기생충 핵을 형광 염색할 때 현미경을 사용하여 정량화합니다.

대식세포에서 기생충의 세포 내 성장을 정량화하기 위한 In vitro 분석

우리는 endomembrane 파열을 추적하는 방법을 설명하면 세포 내 박테리아에 의해...

액포 파열의 단일 세포 측정은 세포 내 병원균에 의해 발생

대 식세포는 긴 타고난 및 적응 면역 반응의 중요한 구성 요소로 인식되고있다. 대식 세포와 미생물 사이의 상호 작용의 진화 유전 적, 생화학 적 측면에 관한 지식의 최근의 폭발은 대 식세포에 과학적인 관심을 갱신했다. 이 문서에서는 마우스 골수에서 대식 세포를 구별하는 방법을 설명합니다.

뼈 대식 세포 생산에게 골수 유래

광학적으로 투명한 제브라피시 배아는 병원성 미생물과 선천성 면역 세포 간의 상호 작용을 실시간으로 연구하고 시각화하는 데 널리 사용됩니다. 형광 이미징과 결합된 Mycobacterium abscessus의 미세 주입은 제브라피시 배아의 탯줄 형성과 같은 필수 병원성 특징을 면밀히 조사하는 데 사용됩니다.

영상 병인과의 Cording를 해독하고<em&gt; 미코 농양</em&gt; Zebrafish의 배아에서

여기 살 모 넬 라 typhimurium의 격리에 대 한 간단 하 고 빠른 방법 설명-비타민 b 복합체와 streptavidin 박테리아를 코팅 하 여 세포에서 phagosomes를 포함 하.

살 모 넬 라 typhimurium의 절연-대 식 세포에서 Phagosomes를 포함 하

모든 병원 성 Leishmania 종 있으며 그들의 척추 호스트의 세포 내부 복제. 여기, 선물이 Leishmania, 세포내 성장 속도의 정확한 정량화 다음으로 문화 murine 골 수 유래 세포를 감염 하는 프로토콜. 이 메서드는 호스트 병원 체 상호 작용 및 Leishmania 독성에 영향을 미치는 개별 요소를 공부 하는 데 유용.

대 식 세포 안의 세포내 성장의 정량화는 빠르고 Leishmania 기생충의 독성을 평가 하기 위한 신뢰할 수 있는 방법

우리 둘 다 생체 외에서 그리고 vivo에서 감염 분석 호스트 인코딩 요인의 활동을 분석 하는 데 사용할 수 있습니다 설명 합니다.

셀룰러 및 Organismic 수준 호스트 응답 세균성 병원 체 프로브를 사용 하 여

생쥐는 일반적으로 Mycobacterium abscessus에 의한 감염에 내성이 있으며, 이는 폐 감염에 대해 절실히 필요한 항생제의 발견 및 개발을 복잡하게 만듭니다. 여기에서는 면역 능력이 있는 마우스에서 지속적인 감염을 전달하는 것으로 나타난 접종 준비 및 기관 내 감염 방법에 대해 설명합니다.

면역 능력이 있는 마우스를 기관내로 접종하기 위한 한천 비드 내장 마이코박테리움 농양의 제조

여기서는 BSL-2 승인 마이코박테리움 결핵 증의 감쇠 체내 영상 프로토콜을 제시합니다. 영구 폐 창을 이용한 쥐 폐 내 스트레스. 이 접근법은 동일한 폐 미세환경 내에서 세균 위치, 혈관 역학, 대식세포 흡수 등 초기 숙주-병원체 상호작용의 종단적 단일 세포 분해 분석을 가능하게 합니다.

초기 혈관 내 감염 중 쥐 폐에서 희석된 위영양성 결핵 균의 생명체 내 영상

배우세요 Mycobacterium abscessus의 식세포 내 생존 메커니즘을 Acanthamoeba castellani 모델에서 전사체 분석과 트랜스포존 돌연변이 라이브러리 스크리닝으로 연구하는 방법을. 이 기법은 백신 개발을 위한 치료 표적을 식별하는 데 활용됩니다.

식 세포에서 세포내 복제에 대 한의 진 균 abscessus 독성 마커의 식별

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