초파리 melanogaster 운동을 부드럽게 유도 위한 TreadWheel: 간격 훈련 프로토콜

이 방법은 운동과 같은 특정 생활 방식 중재가 특정 개인에게 도움이 될 수 있는지 여부를 결정하는 것과 같은 대사 연구 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 종종 이 방법을 처음 접하는 개체는 첫 번째 instar 단계에서 유충을 식별하는 데 어려움을 겪을 것입니다. 핵심은 알과 거의 같은 크기의 유충을 모으는 것입니다.

이 기술의 주요 장점은 많은 실험 조건과 유전자형에 걸쳐 운동의 영향을 평가하는 데 사용할 수 있다는 것입니다. 먼저 각 실험 그룹에 대한 산란 챔버를 조립합니다. 사과 주스 한천 접시에 효모 페이스트 한 덩어리를 바르고 접시를 6온스 플라스틱 병에 고정합니다.

사과 주스 한천 플레이트는 상점에서 구입한 사과 주스에 3% 한천 용액을 만들어 만듭니다. 그런 다음 35 x 10mm 접시를 벽 위로 3/4 정도 채웁니다. 효모 페이스트는 상점에서 구입한 활성 건조 효모와 효모 1g당 약 2ml의 증류수의 비율로 물과 혼합하여 만듭니다.

가스를 제거할 수 있도록 페이스트를 느슨하게 덮고 각 플레이트에 약 3mm 덩어리를 바릅니다. 폴리프로필렌으로 만든 병은 환기를 위해 작은 구멍을 준비해야 합니다. 챔버의 구성 요소를 준비한 후 성인의 로딩을 진행하십시오.

원하는 유전자형의 성체가 모두 병에 들어가면 병에 플레이트를 덮고 고무 밴드로 어셈블리를 고정합니다. 산란실을 위한 충분한 수의 성충 파리를 확보하려면 계획된 실험보다 몇 세대 전에 개체군 수를 늘리기 시작해야 할 것입니다. 이제 사과 주스 한천 플레이트를 하루에 두 번, 아침에 한 번, 저녁에 한 번 교체하십시오.

그런 다음 수집된 플레이트에서 12-24시간 동안 알이 첫 번째 instar 유충으로 자라도록 합니다. 이 유충을 모으려면 얇은 붓이나 유연하고 얇은 바늘과 손잡이로 만든 곡괭이를 사용하십시오. 각 실험 그룹마다 50마리의 첫 번째 instar 유충을 신선 식품 바이알로 옮기고 성충으로 발달하도록 합니다.

각 복제에 대해 충분한 유충을 수집할 수 있는지 확인하려면 필요한 수를 얻기 위해 유충을 효율적으로 수집할 수 있는 연구원이 있는지 확인하십시오. 번데기가 되면 먼저 작고 축축한 붓을 사용하여 번데기를 적셔 번데기를 수집합니다. 그런 다음 주걱으로 바이알 측면에서 번데기를 부드럽게 퍼냅니다.

번데기를 빈 바이알에 넣습니다. 그런 다음 eclosion에서 성인을 표준 식품 바이알로 옮깁니다. eclosion 1-5일 후, 성별에 따라 파리를 분리하고 각 성별을 실험 및 통제의 두 그룹으로 나눕니다.

성체는 바이알당 50마리로 유지합니다. 이틀에 한 번씩 파리에게 살아있는 효모가 든 신선한 바이알을 줍니다. 살아있는 효모 보충제 없이도 성인을 유지하는 것이 가능하지만, 우리는 성인이 보충제를 섭취할 때 더 나은 성과를 낸다는 것을 발견했습니다.

생효모 보충제는 연구자가 특정 연구 목표에 맞게 수정할 수 있는 변수입니다. 운동 장치는 가변 속도 모터로 구동되는 간단한 벨트 및 풀리 시스템을 사용합니다. 운동 장치를 사용하기 전에 장치에 부착된 바이알을 제거하고 전체 회전 시간이 15초가 되도록 전원 공급 장치를 사용하여 모터 속도를 보정하십시오.

회전 속도를 측정하려면 모터 덮개에 작은 붓을 부착하고 회전 브래킷 중 하나에 닿도록 브러시를 배치합니다. 그런 다음 분당 브러시와 브래킷의 접촉을 세어 회전 횟수를 측정합니다. 보정된 기계를 사용하여 운동 첫날(보통 월요일)을 진행하십시오.

바이알 플러그를 바이알에 밀어 넣습니다. 파리를 대조군 바이알에 1cm, 운동용 바이알에 6cm의 공간을 남겨둡니다. 이제 바이알을 클램프에 넣고 파리가 적응할 때까지 10분

운동 장치는 최대 48개의 바이알을 수용할 수 있습니다. 실내 온도는 여러 날에 걸친 시술 내내 일정하게 유지되어야 하며, 원하는 경우 운동 기구를 인큐베이터에 넣을 수 있습니다. 실험 설계는 일주일에 5일 연속 운동으로 구성됩니다.

각 운동일에는 운동과 휴식이 번갈아 가며 포함됩니다. 매일 운동 시간 중 하나에 5분이 추가되어 주 5일 근무 기간 동안 네 번의 운동 시간이 모두 5분씩 늘어납니다. 파리가 적응하면 첫 번째 운동 기간을 시작합니다.

15분 동안 기계를 가동합니다. 5분간의 기간 간 휴식 동안 바이알을 클램프에 그대로 둡니다. 네 번째 운동 주기를 마친 후 음식 바이알 플러그를 원래 위치로 되돌리고 파리를 인큐베이터로 되돌립니다.

트레드휠에서의 운동이 대사 형질에 영향을 미치는지 여부를 확인하기 위해 오레곤 R과 노란색 흰 파리의 트리글리세리드 저장을 측정하고 파리의 단백질 농도에 대해 정규화했습니다. 통계적 분석은 트리글리세리드 저장에 영향을 미치는 운동 상호 작용에 의한 중요한 유전자형을 밝혔습니다. 또한 수컷이 암컷보다 더 많은 트리글리세리드를 저장하는 성적으로 상당한 이형성 효과가 있었습니다.

암컷이 운동한 파리는 운동하지 않은 파리보다 트리글리세리드 수치가 현저히 낮았습니다. 이것은 남성에서는 관찰되지 않았습니다. 다음으로, 파리를 다양한 식단으로 사육하고, 운동 요법을 거친 다음, RING과 같은 음성 지오택시 분석에서 테스트했습니다.

암컷은 다른 치료법보다 고지방 식단으로 자랐을 때 훨씬 더 높게 상승했습니다. 남성의 경우, 운동은 정상적인 식단으로 자랐을 때만 등반을 향상시켰습니다. 고지방 다이어트는 효과가 없었다.

흥미롭게도, DGRP 153 라인의 여성이 정상적인 식단으로 자랐을 때 운동 후 등반 성능이 감소했습니다. 따라서 운동은 모든 유전자형에 대해 균일하게 긍정적인 개입이 아닐 수 있습니다. 이 절차에 따라 혈림프 포도당 분석 또는 수명 분석과 같은 다른 방법을 수행하여 운동이 제2형 당뇨병 또는 수명에 미치는 영향을 평가할 수 있습니다.

이 기술을 통해 유전학 및 신진대사 분야의 연구자들은 모델 유기체인 초파리에서 신진대사 건강을 유지하는 데 있어 운동의 역할을 탐구할 수 있습니다.