Name: 난소 조직 문화 현상을 마우스 난소에서 시각화 하 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-19T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 30 s
Description: 배우세요 마우스 난소 조직 배양을 통해 난포 발달과 난포 위축을 실시간으로 관찰하는 방법을. 이 기술은 생식 건강 연구와 난소 생물학 이해에 활용됩니다.

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박사 Naojiro 미나미 (교토대학)는 Oog1pro3.9 마우스를 제공 하는 감사 합니다. 이 연구는 JSP (KAKENHI # JP15H06275)와 닛토 재단에 의해 지원 되었다.

마우스는 23 ± 1 ° C 12 h 빛/12 h 어두운 사이클 환경 제어 실에서 보관 되어 있었다. 동물 보호 프로토콜 및 실험 아이치 의과대학에서 동물 실험에 대 한 지침에 따라 실시 했다 고 현 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인 했다.
1입니다. 배양 및 요리 준비
<ol><li>기본적인 문화 매체를 준비 하려면 추가 태아 둔감 한 혈 청 (FBS, 5 %v / v), FSH (100 mIU/mL), LH (10 mU/mL), 그리고 페니실린-스 (페니실린, 100 U/mL; 스, 100 mg/mL) 최소 필수 중간 알파 (MEM-알파)을 50 mL 튜브에 혼합. 참고: 필요한 문화 미디어의 총 볼륨 실험, 사이 다르지만 문화 매체의 1 mL는 3.5 c m 유리 하단 문화 요리에 일반적으로 충분 합니다.</li>
	<li>3.5 c m 유리 하단 문화 요리에 혼합된 문화 매체의 1 mL aliquots를 부 어 하 고 요리에 장소 30 mm 셀 문화 삽입을 설정 합니다. 미리 따뜻한 미디어와 인큐베이터 (5% CO2 와 37 ° C)에서 요리.</li>
</ol>2입니다. 난소 조직 준비
<ol><li>미리 따뜻한 인산 염 (PBS) (−) 및 메모리-알파 5 %FBS, 100 U/mL 페니실린 그리고 인큐베이터 (5% CO2 와 37 ° C)에서 100 mg/mL 스 버퍼링. 참고: 약 3 mL 난소 당 aliquots PBS (−)의 사용에 대 한 충분 한 난소 해 동안 되며 MEM-알파의 1 mL aliquots는 3.5 cm 요리에서 단일 난소의 일시적인 저장을 위해 충분 한.</li>
	<li>
4 주 오래 된 여성 (후 암 연구소 라는) ICR 마우스에서 난소를 소비 세와 손질가 위 핀셋 입체 현미경을 사용 하 여 난소를 둘러싼 조직. 예약 문화 매체의 제거 난소 (단계 2.1 참조) 사용까지.
	<ol>
<li>필터 종이에 단일 난소 적신 장소는 PBS (−)에 미리 예 열 (단계 2.1 참조)와 입체 현미경 톰 블레이드를 사용 하 여 4 조각으로 조각. 참고: 4 주 오래 된 ICR 생쥐의 난소는 지름 약 2 m m. 조각의 수; 난소 크기에 따라 달라 집니다. 그러나, 약 500 µ m 두꺼운 조각 적절 한 뿌리 관찰에 대 한 허용 (500 m m 보다 두꺼운 조각, 조직 투명도 감소; 500 m m 보다 얇은 조각, 많은 antral 낭은 깨진 손실).</li>
		<li>해 부, 후 슬라이스 난소 표본 3.5 cm 요리 (단계 2.1 참조) 미리 데워 진된 문화 매체에 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 난소 조직 문화
<ol><li>난소 조직에 셀 문화 삽입 슬라이스 난소 조직 될 것입니다 약 0.5 µ L 당 문화 매체의 삭제는 micropipette를 사용 하 여 설정.</li>
	<li>문화 매체 핀셋을 사용 하 여 셀 문화 삽입에의 한 방울으로 각 슬라이스 견본을 놓습니다.</li>
	<li>37 ° c.에 5% CO2 난소 조직 문화</li>
	<li>2 일 마다 신선한 미리 따뜻하게 매체와 문화 매체를 교체 합니다. 참고: 4 주 오래 된 ICR 마우스에서 난소 섹션의 문화에 대 한 중간 변경 내용에 대 한 일정은 그림 1에 표시 됩니다.<ol>
<li>LH 큰 파도 재현 하려면 (그림 1) 4 일 마다 100 mU/mL FSH 및 LH 12 h를 포함 하는 매체와 교양된 4 주 오래 된 ICR 마우스 난소를 취급 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 현미경 이미지 교양된 난소의
<ol><li>교양된 난소 조직 세포 문화 삽입에 준수는 때 1 일 후 이미징 시작 하 고 시간 점 사이 충분 한 뿌리 성장 수 있도록 24 시간 간격 또는 거꾸로 confocal 현미경 분석을 수행. 참고: Confocal 현미경 검사 법은 거꾸로 현미경 관찰 전체 교양된 난소 여 포에 대 한 우수.</li>
</ol>5. 시간 경과 영상 교양된 난소의
<ol><li>
레이저 농도 및 노출 시간, 이미징 시스템 (표 1)를 포함 하 여 시간 경과 이미징 조건 최적화.
	<ol>
<li>치료 및 제어 그룹으로 사용 하기 위해 단일 마우스에서 쌍된 난소 견본을 선택 합니다. 레이저 농도 노출 시간 (표 1) 최고의 이미지를 달성 하기 위해 변화 한다.</li>
		<li>각 문화 조건 하에서 여 포 성장 뿌리 지역 24 시간 간격 제어 샘플의 이미지와 시간 경과 영상 샘플 (6 단계 참조)를 측정 하 여 비교 합니다. 동시에, 각 난소 세트에서 ovulated oocytes의 수를 계산 하 고 최적의 시간 경과 이미징 조건을 선택 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>30 분 간격으로 결정된 조건 (표 1)에서 시간 경과 이미징 시스템을 사용 하 여 이미지를 캡처하십시오.</li>
</ol>6. 여 포 성장 분석
<ol><li>
여 포 개발 분석, ImageJ 소프트웨어 (http://resbweb.nih.gov/ij/)를 사용 하 여 캡처한 이미지에 뿌리 영역을 측정 합니다.
	<ol>
<li>처음에, 도구 모음에서 "분석" 아래 "비율 설정"을 클릭 하 여 이미지의 규모를 설정 합니다. "알려진 거리"와 "픽셀에서 거리"의 빈 필드에는 캡처된 이미지와 픽셀의 해당 번호의 측면 길이 각각 입력 합니다.</li>
		<li>도구 모음에서 "자유 재량"를 클릭 하 고 캡처된 밝은 필드 이미지에 낭 개요.</li>
		<li>도구 모음에서 "분석"에서 "측정"을 클릭 합니다. 참고: 다른 측정 데이터를 원하는 경우 "측정" "분석" 아래에서 설정 도구 모음을 클릭 하 고 목록에서 적절 한 확인란.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. 유전자 변형 쥐를 사용 하 여 여 포 개발의 분석
<ol><li>출생 후 일 0과 4 (P0, P4) 여성 유전자 변형 쥐를 포함 하는 transgenes Oog1pro3.9 및 R26-H2B-mCherr, 그리고 삽입에서 문화에 설명 된 대로 단계 1.1-3.2, 하지 않습니다 제외 하 고 슬라이스는 P0, P4 난소에서 난소를 수집 합니다.</li>
	<li>매 2 일 37 ° C에서 5% CO2 를 포함 하는 인큐베이터에서 3.5 cm 요리에 신선 하 고, 미리 데워 진 매체와 문화 매체를 교체 합니다. 참고: P0, P4 난소의 문화 매체에서 LH의 농도 수 일정 남아 있다 P0, P4 쥐에 LH 서 지 발생 하지 않기 때문에.</li>
	<li>교양된 P4 난소 (표 1)에 AcGFP1 양성 주 낭을 시각화 하기 위해 현미경을 설정 합니다. 참고:만 원시 및 기본 모 공은 P4 여성 마우스 난소에 존재 한다.</li>
	<li>교양된 P0 Oog1pro3.9의 이미지를 캡처 / 30 분 간격R26-H2B-mCherry 유전자 변형 쥐 난소 P4 난소 (단계 5.2 참조)에 사용 되는 설정을 사용 하 여.</li>
	<li>추적 하 고 분석 하는 AcGFP1 및 H2B mCHerry 신호를 사용 하 여 여 포 개발.</li>
</ol>

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<li>Ohinata, Y., Sano, M., Shigeta, M., Yamanaka, K., Saitou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comprehensive%2C+non-invasive+visualization+of+primordial+germ+cell+development+in+mice+by+the+Prdm1-mVenus+and+Dppa3-ECFP+double+transgenic+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">A comprehensive, non-invasive visualization of primordial germ cell development in mice by the Prdm1-mVenus and Dppa3-ECFP double transgenic reporter.</a> Reproduction. 136 (4), 503-514 (2008).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

이 연구에서 우리는 마우스 난소의 여 포 개발을 공부 하는 두 가지 새로운 방법 개발. 첫 번째 방법은 포함 한다 여 포 개발의 분석 뒤 슬라이스 난소 성인 쥐 조직의 문화 그리고 생식 샘 자극 호르몬 독립 단계 초기 여 포 개발을 시각화 하 시간 경과 화상 진 찰의 사용을 포함 하는 두 번째. 이전에 우리 여 포 개발8,9, 백혈병 금지 요인 및 호르몬의 효과 평가 하기 위해 현재 난소 조직 문화 방법을 사용 하 고 그들의 효과 집중력과 뿌리 단 다 보여주었다. 현재 연구에서 전시 하는 난소 조직 뿌리 역학,이 모델을 사용 하 여 난소 여 포 개발 메커니즘의 분석을 더 보증 슬라이스.
5 주 이상의 쥐에서 난소에 신체 lutea의 현미경 관찰을 방해 하는 포함 되어 있습니다. 따라서, 4 주 된 마우스 난소 여 포 개발 및 배 란의 관찰에 대 한 선호는 하 고 이후의 늦은 ...

여성 마우스 난소 포함 몇 천 포1, 그리고 주기적인 배 란 각 발 정기 주기에서 약 10 oocytes를 성숙. 낭 여러 발달 단계로 분류 됩니다: 원시, 기본, 보조, antral, 및 각 oocyte 둘러싸고 granulosa 세포 층의 형태에 따라 Graafian 낭. 대부분 원시 낭은 휴면, 그들 중 일부는 활성화 하 고 각 발 정기 주기2주 낭으로 성장. 보조 소 낭 모양 단계 후 여 포 개발은 주로 gonadotropins, follicular 자극 호르몬 (FSH)과 황 호르몬 (LH)에 의해 규제 됩니다. 그러나, 원시 및 기본 모 근 개발 생식 샘 자극 호르몬, 독립적 이며 이러한 단계를 제어 하는 규제 메커니즘 남아 제대로 inderstood3,,45. 성장 인자와 호르몬, 원시 및 기본 여 포 여 포6,7간의 상호 작용에 의해 통제 된다. 따라서, 우리가 마우스 난소 조직, 뿌리 역동성의 분석을 수행 하 고 난소 조직 문화8,,910을 사용 하 여 관련된 규제 메커니즘을 조사 합니다.
여기, 두 개의 난소 조직 문화 모델 방법을 소개합니다. 첫 번째 follicular 분야의 측정에 의해 여 포 개발 분석 하 사용 되 고 두 번째는 유전자 변형 마우스 보조 뿌리 단계로 원시에서 초기 여 포 개발 하는 동안 규제 메커니즘을 연구 하는 데 사용 됩니다. 여 포 개발 분석, 우리가 주로 사용 4 주 오래 된 여성 쥐의 난소 낭의 쉽게 시각화를 허용 하기 때문에. 정기 배 란 및 모델 vivo에서 여 포 개발 유도, 우리 LH 서 지 및 관찰된 배 란, 여 포는이 폐쇄 증, 및 조직 배양 조건에서 estradiol의 분 비를 재현. 교양된 난소의 이미지 체포 되었다, 그리고 여 포 개발 프로세스 follicular 지역 변경 내용을 추적 하 여 분석 되었다. 그러나, 밝은 분야 현미경 검사 법 분석, 원시 및 초기 기본 모 공 사이의 구별 불분명 했다. 따라서, 우리 작은 낭을 감지 하 고 원시, 기본, 사이 구별 하는 방법을 개발 하 고 보조 뿌리에 배양 난소 조직을 사용 하 여 Oogenesin1 (Oog1) pro3. 9 그리고 0와 4 일 탄생11후 R26-H2B-mCherry 유전자 변형 쥐 난소. Oog1 식 oocytes에서 감지 감수 분열, 입국 후 고 주 낭 교양된 난소 조직의11 시간 경과 이미지를 사용 하 여 원시에서 전환의 관찰 수 있도록 뿌리 발달로 점차 증가 ,12. 형태학 상 방법을 휴면 원시 낭13,14,,1516활성화 요인 연구에 사용 되었습니다, 하지만 난소에 생리 여 포 개발은 관찰 하기 어려운 다양 한 요인의 효과 유지 새롭거나. 현재 문화 방법 실시간으로 분석 대상 요소의이 부족을 해결 하기 위해 설계 되었습니다.
현재 연구에서 우리가 follicular 개발 시간 경과 화상 진 찰 방법을 사용 하 여 추적 하 고 여 포 개발 과정 특징. 우리의 소설 메서드는 전례 없는 난소의 생리학을 조사 하기 위한 도구를 제공 합니다.

<table><tbody><tr><td>인간 뇌하수체의 난포 자극 호르몬</td><td>SIGMA</td><td>F4021</td><td></td></tr><tr><td>말 뇌하수체의 윤기 호르몬</td><td>SIGMA</td><td>L9773</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신 용액</td><td>Wako Pure Chemical</td><td>Industries 168-23191</td><td></td></tr><tr><td>MEM a, GlutaMax, 뉴클레오티드 없음</td><td>Thermo Fisher</td><td>32561037</td><td></td></tr><tr><td>유리 바닥 접시</td><td>MatTek</td><td>P35G-0-10-C</td><td>35mm 접시, No. 0 커버슬립, 10mm 유리 직경</td></tr><tr><td>밀리셀 세포 배양 인서트</td><td>Merck Millipore</td><td>PICM0RG50</td><td>직경: 315mm, 기공 크기: 0.4mm, 재질: 친수성 PTTE</td></tr><tr><td>3.5cm 세포 배양 접시</td><td>Greiner Bio-one</td><td>627160</td><td></td></tr><tr><td>50ml / 원심분리기 튜브(트리플 씰 캡 포함</td>) <td>IWAKI</td><td>2345-050</td><td></td></tr><tr><td>로우 프로파일 일회용 블레이드 819</td><td>라이카</td><td>14035838925</td><td></td></tr><tr><td>LSM 710</td><td>칼 자이스</td><td></td><td>컨포칼 현미경</td></tr><tr><td>CellVoyager, CV1000</td><td>요코가와 전기 주식회사</td><td></td><td>타임랩스 이미징</td></tr><tr><td>BZ-X700</td><td>KEYENCE</td><td>타임랩스 이미징</td><td></td></tr></tbody></table>

난소 조직 문화 현상을 마우스 난소에서 시각화 하

Ovarian Tissue Culture to Visualize Phenomena in Mouse Ovary

포유류 암컷은 정기적으로 각 발 정기 주기 동안 oocytes의 거의 일정 한 수 배 란. 이러한 규칙과 주기 유지, 규정 hypothalamic-뇌 하 수 체-gonadal 축 수준 및 난소에서 난 포 개발에 발생 합니다. 활성 연구에도 불구 하 고 여러 단계 휴면 원시 여 포 활성화에서 배 란을 및 각 소 낭 모양 단계에서 다른 규제 복잡성 때문에 여 포 개발 메커니즘이 명확 하지 않다. 여 포 발달의 기계 장치 그리고 발 정기 주기 낭의 역학 조사, 우리는 관찰 하는 현미경을 사용 하 여 여 포 개발 하는 데 사용할 수 있는 마우스 난소 조직 문화 모델을 개발 했다. 체계적인 여 포 개발, 정기 배 란 및 여 포가 폐쇄 증 모두 재생 될 수 있다 경작된 난소 모델에 그리고 문화 조건을 실험적으로 변조 될 수 있습니다. 여기, 우리 여 포 개발의 규제 메커니즘 및 다른 난소 현상의 연구에서이 방법의 유용성을 보여 줍니다.

그림 1 난소 조직 문화 중 미디어에서 변경에 대 한 프로토콜을 보여 줍니다. 이 프로그램, 4 주 된 ICR 마우스 난소 배양 되었고 24 시간 간격으로 confocal 현미경 검사 법 (그림 2)를 사용 하 여 몇 군데. 3 주 동안 난소 조직의 문화, 동안 가장 antral 및 보조 모 공 여 포가 폐쇄 증으로 전락 했다 고 일부 ovulated (그림 2D 및 표 2) 했다. ImageJ (그림 3)를 사용 하 여 여 포 분야의 분석, 일부 낭 각 LH 서 지 주기 (그림 3B 와 보충 영화 1<...

난소 조직 문화 여 포 개발, 배 란, 그리고 여 포가 폐쇄 증의 모델로 사용할 수 있습니다 하 고 동적 난소 프로세스의 규제 메커니즘을 나타냅니다.

Mammalian females periodically ovulate an almost constant number of oocytes during each estrus cycle. To sustain such regularity and periodicity, ...

이 방법은 난포 발달, 여포 폐쇄증 및 작동에 대한 난소 연구 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 관찰을 위해 통제된 배양 조건에서 난소 현상을 실시간으로 재현할 수 있다는 것입니다. 생후 4주 된 암 연구소(Institute of Cancer Research) 쥐의 난소를 배양하기 위해 준비하려면: 가위와 핀셋을 사용하여 실체 현미경으로 난소의 주변 조직을 잘라내고 청소된 난소를 신선한 배양 배지 접시에 넣습니다.모든 난소를 다듬고 나면 개별 난소를 섭씨 37도의 PBS로 적신 여과지 조각으로 옮기고 마이크로톰 블레이드를 사용하여 각 난소를 네 조각으로 자릅니다. 슬라이스를 섭씨 37도의 3.5cm 접시에 옮기고 마이크로피펫을 사용하여 약 0.5마이크로미터의 배양 배지 방울을 난소 조직 절편당 하나의 세포 배양 삽입물에 추가합니다. 두 번째 3.5cm 유리 바닥 세포 배양 접시에 1mm의 배지가 들어 있습니다.핀셋을 사용하여 하나의 조직 표본을 각 액적에 옮기고 플레이트를 세포 배양 인큐베이터에 넣습니다.접시의 상등액을 2일에 한 번씩 섭씨 37도의 신선한 배양 배지로 교체하고 4일에 한 번씩 12시간 동안 FSH 및 LH 밀리리터당 100밀리단위로 난소를 처리합니다. 이미징 세션 사이에 충분한 난포 성장을 허용하기 위해 배양 하루 후 24시간마다 배양된 난소 이미징을 시작합니다. 적절한 실험 조건에서 타임 랩스 이미징 시스템을 사용하여 30분 간격으로 이미지를 캡처합니다. 난소 여포 발달을 분석하려면:ImageJ에서 이미지를 열고 분석 메뉴를 열어 스케일 설정을 선택합니다.캡처된 이미지의 측면 길이와 해당 픽셀 수를 각각 known distance(알려진 거리) 및 distance in pixels(픽셀 단위의 거리) 필드에 입력합니다. 그런 다음 자유형 도구를 사용하여 모낭의 윤곽을 그리고 측정을 클릭합니다. 3주간의 난소 조직 절편 배양 기간 동안 대부분의 전방과 이차 여포는 여포 폐쇄증에 의해 퇴화되고 일부는 배란됩니다.일부 여포는 각 LH 서지 주기 동안 그룹으로 발달합니다. 배란 시기와 배란된 난모세포의 수는 마우스 난소마다 다르지만, 배양된 난소의 배란은 주로 각 LH 급증 후 48시간 이내에 발생합니다. 모든 배란된 난모세포가 배란 후 첫 번째 극성체를 방출하는 것은 아닙니다.원시 여포와 원발성 여포는 출생 후 4일째 마우스 난소에 동시에 존재합니다. 반면, 원시 여포만 출생 후 0일 난소에 존재합니다. 그러나 일차 여포는 입증된 바와 같이 배양 30-40시간 후에 배양된 출생 후 0일 난소에서 검출될 수 있습니다.원시 및 원발성 여포는 또한 과립층 세포의 mCherry 양성 핵에 의해 mCherry 형질전환 동물로부터 분리된 배양된 난소에서 구별될 수 있습니다. 난소 절편 배양에서 여포 단계를 추적할 수 있습니다. 저는 이 기술이 생식 기술 분야의 연구자들이 불임 치료를 위한 새로운 기술을 탐구할 수 있는 길을 열어주기를 바랍니다.

ovarian-tissue-culture-to-visualize-phenomena-in-mouse-ovary

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

그들의 입체적인 맥락에서 정상 세포의 문화 세포 변형 및 tumorigenesis에 필요한 초기 이벤트를 연구하는 다른 방법을 나타냅니다. 이 방법은 난소암 형성 초기에 이벤트를 연구 정상 난소와 oviductal 세포를 성장하는 데 사용됩니다.

난소와 Oviducts의 3 차원 조직 문화 알긴산의 Hydrogels

이 프로토콜은 신생아 마우스와 사춘기 쥐에서 개별 난소에서 난소를 사용하여, 마우스 난소 조직의 주요 문화 / 공동 문화를 설명합니다. 배양 기술은 난소에 외인성 제제의 효과의 조사를 가능하게하여 생리 고도로 개발을 지원하고, 난포 사이의 상호 작용.

문화 공동 문화 마우스의 난소와 난소

여기, 선물이 직렬 구분 없이 교양된 난소 젊은 쥐의 모 낭을 계량 하는 프로토콜. 전체 기관 면역 형광 및 조직 삭제를 사용 하 여, 실제 단면 광 단면으로 대체 됩니다. 샘플 준비 및 시각화의이 방법은 기관 무결성을 유지 하 고 특정 셀의 자동화 된 정량화를 용이 하 게.

전체 산 면역 형광 및 교양된 마우스 난소의 여 포 정량화

소 난소 피질의 체외 문화와 난소 미세 환경에 대한 영양 계단 단계 식단의 효과가 제시됩니다. 난소 피질 조각7 일 동안 배양 하 고 스테로이드, 사이토 카인, 그리고 여포 단계 평가 되었다. 계단 단계 다이어트 치료는 문화에서 여포 진행의 결과로 증가 스테로이드 발생했다.

소 난소 피질 조직 배양

여기에서는 전체 탑재 면역 염색, 다중 광자 현미경 검사, 3D 시각화 및 분석을 사용하여 정량적 및 정성적 분석을 위해 전체 난소를 이미징하는 데 최적화된 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 독성학, 임상 진단 및 난소 기능의 게놈 분석에 적용 할 수있는 높은 처리량, 신뢰성 및 반복 가능한 처리를 수용합니다.

전체 난소 면역 형광, 클리어링 및 마우스에서 난소 예비의 정량적 3D 분석을위한 다중 광자 현미경 검사

우리는 기질이 풍부한 난소 분획에서 마우스 난소 체세포를 분리하고, 스캐폴드 없는 접근법을 사용하여 마우스 난소 체세포 오가노이드를 생성하는 방법을 설명합니다.

난소 미세환경 탐구: 마우스 난소 체세포의 분리, 2D 배양 및 오가노이드 배양 방법

여기에서는 해마 발달 중 특정 유전자의 조절 메커니즘을 조사하는 도구를 제공하는 프로토콜을 제시합니다. 자궁외 전기천공법(ex utero electroporation) 및 유기형 절편 배양을 사용하면 단세포에서 관심 유전자의 발현을 상향 및 하향 조절하고 발달 과정에서 이들의 운명을 따를 수 있습니다.

마우스 해마 조직의 예 자궁 Electroporation에와 Organotypic 슬라이스 문화

이 프로토콜의 목표는 loss-을 설명하고 이득의 trophectoderm 및 착상 마우스 배아의 내부 세포 덩어리 분화에 이르게 무대 특정 수용체​​로 neogenin 확인할 적용 기능 방법입니다.

착상 전의 마우스 배아의 초기 세포 운명 결정 요인을 조사 할 Loss- 및 이득 -의 - 기능 접근

이 연구는 현미경 관찰을위한 whole-mount tissue preparation에 이어 유방 지방 패드 이식을 통한 혈관 내피 줄기 세포 (VESCs)의 증식, 분화 및 혈관 형성 가능성을 평가하는 새로운 접근법을 보여줍니다. 생체 내에서 VESC의 행동을 조사하기위한 혈통 추적 전략도 제시된다.

혈관 내피 줄기 세포의 혈관 생성을 시각화하기위한 유방 팻 패드 이식 기술

여기, 우리는 공 촛점 현미경을 사용하여 마우스 보조 입천장 융합의 라이브 영상을위한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 다양한 형광 기자 마우스 라인과 기계적 통찰력을위한 경로 억제제와 함께 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 다른 발달 시스템의 라이브 이미징에 적용 할 수 있습니다.

Mouse Secondary Palate Fusion의 라이브 이미징

배우세요 마우스 난소 조직 배양을 통해 난포 발달과 난포 위축을 실시간으로 관찰하는 방법을. 이 기술은 생식 건강 연구와 난소 생물학 이해에 활용됩니다.

난소 조직 문화 현상을 마우스 난소에서 시각화 하

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