High-Resolution Comparison of Bacterial Conjugation Frequencies

Masaki Shintani; Moriya Ohkuma; Kazuhide Kimbara

doi:10.3791/57812

JoVE Journal
Genetics

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JoVE Journal Genetics

High-Resolution Comparison of Bacterial Conjugation Frequencies

세균성 활용 주파수의 고해상도 비교

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05:18 min

January 10, 2019

DOI: 10.3791/57812-v

Masaki Shintani^1,2,3, Moriya Ohkuma³, Kazuhide Kimbara¹

¹Applied Chemistry and Biochemical Engineering Course, Department of Engineering, Graduate School of Integrated Science and Technology,Shizuoka University, ²Department of Bioscience, Graduated School of Science and Technology,Shizuoka University, ³Japan Collection of Microorganisms,RIKEN BioResource Research Center

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

우리가 활용 빈도, 얼마나 효율적으로 예측 하려면 높은 해상도에 차이 탐지 하기 위한 프로토콜을 설명 하는 다양 한 세균성 conjugative DNA 요소 다른 조건 하에서 동작을 이해 하는 목표로, 기증자 박테리아 활용을 시작합니다.

이 방법은 플라스미드 DNA가 다른 박테리아 사이에서 얼마나 자주 퍼질 수 있는지에 관하여 미생물학 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 배경을 줄임으로써 고해상도로 컨쥬게이션 주파수의 작은 차이를 감지할 수 있다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 대학원생인 야나기야 코스케가 될 것입니다.

가장 가능한 수로 컨쥬게이션 주파수를 계산하려면, 필터는 하룻밤 기증자 문화에서 1 밀리리터를 30°C에서 45분 동안 1밀리리터로 메이트합니다. 공동 문화가 인큐베이팅하는 동안, 기증자 루리아 국물에 삼중 도금에 대한 원래 기증자와 받는 문화를 연속적으로 희석, 또는 카나마이신, 또는 받는 사람 LB 플러스 30 섭씨에서 이틀 문화에 대한 겐타마이신 플레이트. 인큐베이션의 끝에서, 4중 세포 배양판에서 직렬 희석을 위해 카나마이신과 젠타마이신을 함유한 멸균 LB의 필터에 배양을 재연한다.

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