Name: 해양 모델-따개 비 Balanus improvisus 경작 및 유전자 발현 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 47 s
Description: 배우세요 해양 모델 Balanus improvisus의 연중 경작 및 유전자 발현 분석 방법을. 이 기술은 삼투압 조절 및 방오 연구에 활용되며 고품질 RNA 추출이 가능합니다.

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이 연구는 그랜트 2017-04559 스웨덴 연구 위원회 (VR)과 EU 지원된 프로젝트 해안가에서 앤 더 스 Blomberg에 의해 지원 되었다. 특히, 자란 시설의 설립, 년간, 지원 되었습니다 교부 금에 의해 R. 존슨은 당을 다음 자금 지원 기관에서: SSF (스웨덴 전략 연구 재단) 해양 과학 프로그램 및 기술 및 MISTRA 해양 페인트 프로그램을 통해입니다. 켄트 Berntsson는 culturingfacility를 설정 하는 초기 단계에서 쓸모 있었다. 추가 해양 진화 생물학 (www.cemeb.science.gu.se)에서 왔다 자란 시설 설립을 위한 자금, 스웨덴 연구 위원회 FORMAS와 VR에서 Linnaeus 교부 금에 의해 지원.

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저자는 선언할 수 없다.

Tjärnö 해양 연구소 (스웨덴)에서 따개 비 문화 20 년 이상를 실행 하 고 많은 다른 연구 분야에서 연구를 위해 사용 되었습니다. 30 과학 논문 출판 되었습니다 antifouling13,22, 유체역학23, 화학 생태학24연구를 포함 하 여 지난 년 동안 자란 시스템을 활용, 기후 변화16 ,5, 진화 생물학 및 분자 생물학2.
실험실 환경 (개인 야생 인구를 대표 하지 않을 수 있습니다)에 더 적응은 특정 개인의 선택을 방지 하려면 필드에서 매년 새로운 broodstock를 수집 하는 것이 좋습니다. 또한, 정상적인 년 동안 성인 사망률의 50-80%는 대략 이후 매년, 문화를 젊 어지게 하는 좋은 연습 이기도 합니다. 그러나, 목표는 타고 난된 라인 하거나 실험 진화의 연구를 설정 하 여, 실험실 reared 가족만 사용할 수 있습니다.
Tjärnö 해양 연구소에서 패널 B. improvisus 를 수집 하는 좋은 시간은 그 당시에 바다에서 cyprid 애벌레의 좋은 공급 6 월-8 월입니다. 따개 비 정착이 시작 될 때 참조를 수동으로 제거 하는 다른 패널 주간 정착 B. improvisus (예를 들어, 홍합, tunicates, 이끼, 또, nemerteans/tubeworms, 및 다른 따개 비 종) 보다 종에서 확인 된 패널 (예를들면, 칫 솔로). Tjärnö, 주위 3 얕은-물 따개 비 종 존재 (B. improvisus, Semibalanus balanoides, Balanus crenatus)이 있다. 그러나, B. improvisus 7 월-8 월 동안 지배적인 부드러운 하드 표면 fouler 이다. S. balanoides 의 정착 기간 이른 봄 동안 있으며 주로 자연 기판 (예:, 돌)을 좋아한다. B. crenatus 패널에 낮은 숫자는 여름 동안 발생할 수 있습니다.
그것은 또한 특정 특성으로 특정 linages를 설립 하는 경우에 필수적인 것입니다, 교양된 cyprids에서 또는 실험 진화의 연구에 새로운 성인 따개 비 세대 시작 가능. 어른 들의 새로운 세대를 시작 하는 가장 편리한 방법은 실험실에서 열가 소성 패널에 cyprids 정착 하는 것입니다. 실험적 치료 또는 노출 필드에 새로 정착된 cyprids이이 패널을 사용할 수 또한. 비상의 경우, 하나는 근처 사이트에서 (예를 들어, Tjärnö 해양 연구소의 경우 Idefjorden) B. improvisus 는 일반적인 바위에 성인을 사용할 수도 있습니다. 이러한 이미 설정 된 성인 따라서 쟁반에 배치 되는 패널에 성인으로 서 동일한 방식에서으로 처리 되며 시스템을 통해 흐름 통해 먹이. 흐름 세포 barnacles25패널 설정 또한 사용할 수 있습니다. 이들은 플랑크톤에는 cyprids 정착 하지 않는, 애벌레에 대 한 유일한 타협 표면으로 패널 측에 그물과 흐름을 통해 챔버.
장기적인 작동 따개 비 문화 등 모든 생활 단계를 설정 하기 위한 중요 한 몇 가지 단계가 있습니다. 문화 B. improvisus 에 사용 되는 메서드는, 훌륭한 정도, 또한 free-swimming, planktotrophic 애벌레와 다른 해양 무척 추 동물에 적용. 자란 절차 일부 종족은 이미 잘 설명 되어 있습니다 (예를 들면, 파란 홍합, 굴의 다른 종에 대 한)26, 다른 해양 무척 추 동물에는 그들의 일생에 걸친 장기 문화의 몇 가지 예만 주기. 문화 barnacles (B. amphitrite)를 최초의 성공적인 시도의 하나 Rittschof 그 외 여러분 에 의해 수행 됐다 15. 장기 재정 및 개인 자원 시설 재배는 따개 비를 설정 하기 전에 장소에 있어야 한다. 올해의이 종류의 유지 관리-따개 비의 주위 문화 적어도 한 사람 작업 하프 타임 필요 합니다. 미래 자동화 미세27의 경작 주로 생산 라인에 몇 가지 단계에 대 한 몇 가지 가능성이 있을 수 있습니다. 또한, 성공 하기 위해서는, 높은-품질 바닷물의 다량에 접근이 필수적입니다. Microalgae, Artemia, barnacles의 경작 어떤 특정 안전 절차는 포함 되지 않습니다. 그러나, 일부 antifouling 물질 또는 독성 화학 물질의 특별 한 조치를 할 수 있습니다.
패널은 오염에 대 한 주에 여러 번 체크 했다. 문화에서 사용 하는 해 수 Tjärnö 해양 연구소 밖에 서 요금 피에 40 m 깊이에서 펌핑 하 고 실험실 물 시스템에 들어가기 전에 2 개의 모래 필터를 통해 전달 했다. 경우 물 필터링 했다, 문화에 더 많은 오염 될 수 있습니다. 암 및 다른 무척 추 동물 (예를 들어, stolon 건물 또과 육 식 nemerteans)는 필드에서 바닷물의 공급을 통해 시스템을 입력 하는에서 문화에 패널을 정기적으로 청소 필수적 이다. 예를 들어 아무 애벌레도 불구 하 고 생산 하는 경우 잘 먹이 달리 문화 되었습니다 사실 있을 것 양호한 상태로, 짝짓기를 억제 하기 위해 표시 되는 nemerteans의 문제일 수 있습니다. 당연히, 많은 Tjärnö 해양 연구소에서 문화에 오염 생물의 스웨덴 서해안에 대 한 특정 되었고 오염 생물의 유행 되며 다른 지역에서 도전의 더 많은 것. 스웨덴의 서해안에는 패널에 다른 따개 비 종에 의해 오염 데 보통 아니다. 때때로, S. balanoides 의 설립 발견 되었습니다, 하지만 이것은 매우 한계 문제 (가장, 한 S. balanoides 오염 물질 10000 B. improvisus 샘플에 대 한). 종 오염의 부족 대부분 여름 동안 때 larvaefrom B. improvisus 매우 지배 했다 새로운 문화를 확립 하 정권에 의존 했다. 또한, 또한 있었다 패널에 B. improvisus 의 맑은 농축 이기 때문에이 종 부드러운 표면13에 대 한 선택적.
죽은 성인 barnacles 제거에 필수적 이다입니다. 빈 껍질 패널에 남아 있습니다, 그들은 모두 Artemia nauplii 뿐만 아니라 다양 한 오염 종족에 대 한 대피 소 될 수 있습니다. 또한, 그것은 죽은 개인 개인, 아마 분해 동안 독성 화합물의 출시와 함께 이웃의 영향을 발견 되었습니다. 성인 사망률의 추가적인 결과 일부 개인 남아 있을 것입니다 혼자와 너무 멀리 떨어져 (비록 barnacles의 크기에 관하여 동물의 세계에서 가장 긴 성 기를가지고) 짝짓기 있도록 다른 성인에서 이다28. 이러한 개인 생존 하지만 애벌레에 대 한 비 생산적 이다. 그러나, 이러한 고독한 성인 개인 베이스 플레이트를 해치지 않고 부드럽게 제거 될 수 있다 고 짝짓기 수 있도록 다른 사람에 가까이 수평으로 배치. Barnacles 또한 각 성인 한 패널을 배치 하 여 성관계 수 있습니다 하지만 십자가 발생할 수 있도록 충분히 가까이. 이 방법에서는, 유전 라인 생산된14될 수 있습니다.
그것은 높은 품질의 사료를 생산 하 고 피드 문화 거의 매일 중요입니다. 심지어 며칠 음식 없이 애벌레의 감소 릴리스에서 발생할 수 있습니다. 식단 구성의 이전 테스트 규조류는 성장과 따개 비 nauplii의 생존을 위해 필수적으로 나타났습니다. 몇몇 규조류 종으로 적절 한 것을 먹이, 비록 작은 또는 독방 셀 (직경에서 10 μ m) nauplii의 섭취 할 수 있습니다. S. marinoi, C. 단순, T. pseudonana 종 모두 B. improvisus nauplii, 물론 육성 하기 쉬운 적절 한 피드 수를 입증 해야 합니다. 또한, 피드 품질은 기 하 급수적으로 성장 하는 조류에 대 한 일반적으로 더 높은. 그것은 또한 알려졌다 규조류 B. amphitrite15의 생산적인 문화 구축을 위한 필수적입니다. 규조류의 중요성의 이론은 그들은 독특한 지방산 프로필 있고 특히 높은 불포화 20:5 지방산29풍부 이다. 그것은 보였다 그 특정 지방산 굴 애벌레30의 성공적인 개발을 위해 중요 하다.
년 동안, 따개 비 문화에 해로운 질병의 아무 incidences 되었습니다. 굴과 홍합, 같은 많은 상업적인 무척 추 동물 강포한에서 질병 보다 일반적 이며 매우 해로울 수 있습니다. 바이러스의 해로운 효과 또한 강포한 인구에서 보고 되었습니다. 프랑스에서 네이티브 굴 포르투갈 굴 Crassostrea angulata 1925 년에 대체 되었다 그러나이 종 197031주위는 iridovirus에 의해 전 멸 했다. 더 최근에, 태평양 굴 Crassostrea giga 문화, 전세계에 ostreid herpesvirus 132연관 될 것으로 보인다에서 대규모 사망 이벤트 되었습니다. 병원 균, 박테리아, 또는 바이러스 barnacles에 보고 지금까지 출판 되었습니다. 그러나, B. improvisus에 지속적인 게놈 프로젝트, 바이러스 시퀀스에 발견 했다 (Alm Rosenblad 그 외 여러분, 게시 되지 않은 데이터) 하지만 질병의 증 후에 아무 명백한 링크와 함께. 항생제의 혼합물; 세균 감염의 위험을 최소화 하기 위해 문화에 적용 된 이전 그러나,이 절차는 현재 중단 하 고 지금까지,이 모든 오염 문제를 발생 했습니다.
해 수 (위에서 설명한)로 열을 하는 경우 과열 문화 생산 라인에서 가장 심각한 위험이 있을 수 있습니다. 그것은, 물론, 센서 및 적절 한 경고 시스템 사용 (예를 들어, 책임 있는 사람에 게 전자 메일 이나 텍스트 메시지를 보내는) 될 수 있지만, 과열에 대하여 보호 어렵다. 과거에 이런이 종류의 성인 문화에 상당한 살인에 이어지고 있다. 이 과정의 엄청난 하 고 시간과 비용의 장기 투자를 망칠 수 있습니다. 특히, 타고 난된 유전자 라인 설립 되었습니다 경우 치명적인 것입니다. 같은 라인의 장 수를 보장, 실수로 손실 로부터 그들을 보호 하는 barnacles cryopreservation 방법론을 개발 하는 것이 좋습니다 것입니다. 그것은 태평양 굴에서 애벌레 아래로 고정 하 고 부분적인 성공33으로 부활 수 있습니다 보고 되었습니다. Cryobanking 다양 한 종34의 유전 자원 보존에 유용한 도구가 되었습니다. B. amphitrite 에서 심지어 nauplii 냉동35, 생존을 위해 보고 하 고 냉동 다운 개인의 20% 성공적으로 cyprids36로 metamorphosed 발견 됐다. 그러나, 문화의 장기적인 지속 가능성에 대 한 동결을 적용 지금까지 채택 되지 않았습니다, 하지만이 실제로 선택 된 라인;의 유지 관리를 위해 필요한 것 이 강력한 해양 modelsystem에 B. improvisus 를 단단히 구축 하는 중요 한 단계 것입니다.
여기, 프로토콜 B. improvisus (즉, cirri, 소마, 및 벽난로)의 성인에서 다양 한 조직에의 해 부에 대 한 제시 했다. 그러나, 그것은 다른 조직 또한 추출 될 수 있다 강조 한다. 예를 들어, 막 베이스 종 Tetraclita japonica formosana 의 외부 및 내부 맨 틀 사이의 부드러운 조직 되어 신중 하 게 절연과 RNA 추출 및 유전자 식37의 RNA seq 분석에 사용. 여기에 설명 된 개요 최적화 된 추출 프로토콜 시작 물자의 최소한의 금액에서 시퀀싱에 대 한 높은-품질 RNA의 충분 한 양을 제공 한다. 첫째, 균질 튜브에 직접 개별 애벌레의 컬렉션 1 개의 관에서 다른 쪽으로 전송 하는 동안 손실을 최소화합니다. 또한, 여러 가지 방법 중 테스트, RNA의 측면에서 가장 효율적인 얻을 것을 입증 하는 세라믹 구슬 및 무결성, 쥡니다 또는 유 봉 균질에 비해 균질. 유전자 발현 또는 게놈 실험 계획, 하나는 명심 barnacles에 높은 유전 변이의 도전 이상 B. improvisus에 대 한 있다. 따개 비 범위에서 3-5%, 지역 (Alm Rosenblad 그 외 여러분, 게시 되지 않은 데이터) 코딩에 유전적 다양성이 있다. 이것, 물론, 정량 분석에 대 한 프라이 머의 디자인에 특정 요구를 두고, 지역을 식별 및 사용 뇌관에 대 한 일관 된 식 결과 betweenbatches를 얻기 위하여 어디에 더 보존. 대상 유전자에 대 한 보존된 지역 처럼 aquaporins Na + K + ATPases, 개인의 수백을 포함 하는 cyprids의 인구에서 가져온 RNA-seq 데이터에서이 유전자의 순서 가변성을 공부 하 여 확인할 수 있습니다. 게놈 분석 DNA 샘플링 됩니다. 그러나, B. improvisus 에서 양질의 DNA를 얻는 전하실 수 있습니다21.
결론적으로, 설립된 따개 비 문화 다양 한 실험 연구에에서 도움이 될 입증 되었습니다. 특히, 모든 년 주위 애벌레 생산 수를 자연스럽 게 발생 산란 기간에 제한 되지 않고 실험을 실시 ( B. improvisus, 이것은 여름 동안). 취득된 애벌레는 실험 연구, 게놈 전체 transcriptome 연구 뿐만 아니라 정착 분석, 동작 분석, 특정 유전자에 대 한 표현 연구 등의 다양 한 세트를 수행 하기 위해 사용할 수 있습니다.

Barnacles는 고착 성인 해양 갑각류 그리고 free-swimming, planktonic 애벌레. 대부분 1, 200 종의 barnacles의 얕은 물에 서식 하 고 많은 종종 낮은 염 분에 노출 되는. 1 종, (B. improvisus), Balanus (Amphibalanus) improvises 베이 따개 비 거의 민물 용납 수 고 찰스 다윈 우루과이1리오 데 라 플라타의 강어귀에서 작은 개울에서이 종 설명. 극단적인 관용 tolow 염 분은 B. improvisus osmoregulatory 메커니즘2,3의 연구에 대 한 특히 적합 모델. 이 따개 비 소금기 조건을 선호 하지만 약 1.6 psu에서 salinities와 함께 바다에 살고 있는 수 40 psu4로 높은. 그것은 소금기 있는 발트 해에서 발견 하는 유일한 따개 비 종입니다. B. improvisus 은 미국 대륙의 동해에서 발생 한 것으로 생각 하지만 오늘 발견 된다 분산으로 인해 전세계 배송5. 그것 주요 오염 유기 체와 바위, jetties와 보트 선체에 일반적으로 발견 되 고 따라서 해양 고 소금기 있는 물6,7건축에 미생물 파울 링의 메커니즘을 이해 하기 위한 일반적인 관심의.
마찬가지로 다른 대부분 barnacles, B. improvisus 는 십자가;와 자웅 동체 복제는 길쭉한 성 기 및 내부 수정을 사용 하 여 인접 개인 사이 짝짓기를 통해 발생 합니다. 생식 기간은 주로 5 월에서 9 월입니다. B. improvisus 는 7 원양 애벌레 단계 (6 nauplii 한 cyprid 단계8다음). Nauplius 애벌레 free-swimming 이며 비 먹이 cyprid 유 충으로 탈피 하기 전에 몇 주까지 물 열에 피드로 수정 란 해치. cyprid 정착에 적합 한 사이트를 찾을 수 여러 단서를 사용 하 고 무 청소년 따개 비9로 변 태를 겪 습. 종은 실험실에서 경작 될 수 있으며 바다 (실험실 문화에서 2-3 년)에 1-2 년의 수명이 있다. 평균, B. improvisus (최대 약 20 m m)로 지름 10 m m를 성장 하 고 (비록 그것은 붐비는 조건 하에서 키가 성장할 수 있는) 약 6 mm의 최대 높이 도달. 종 수 쉘 접시의 방사형 패턴된 석탄 기지와 tergal 접시1,10의 모양 부드러운 석도 껍질 (흰색 또는 회색 빛이 나)으로 식별.
따개 비 B. improvisus 를 위한 osmoregulation, 분자 및 생리 적 메커니즘 뿐 아니라 생태 상호 작용 및 진화 결과에 초점을 맞춘 연구 모델로 여러 유리한 특징 있다. 그것은 또한 널리 antifouling 연구과 메커니즘 관련된7,11,,1213특히 생물학, 정착의 조사에 대 한 모델로 사용 됩니다. 그러나, 자연 계절 산란 연구 cyprid 애벌레의 예측할 수 없는 공급을 생성합니다. 1 년 내내 그것의 전체 수명 주기를 통해이 따개 비를 문화 능력은, 그러므로, 분자와 기계 론 적인 연구의 다양 한 형식을 사용할 수 있도록 하는 주요 자산. 또한, 전세계 해양/소금기 있는 바닷물의 존재 필드와 실험 연구의 조합 수 있습니다. 제어 번 식도 장기 자란14, 알려진된 혈통의 가족을 만들 수 있습니다 그리고 몇 개월의 세대 시간 장기 실험적인 발전을 허용할 수 있습니다. 또한 있다 초안 게놈 및 여러 transcriptomes 사용할 수 있는, 그리고 이러한 리소스 여러 유전자 (예를들면, osmoregulation에 있는 중요성의 유전자)2,3의 복제에 대 한 사용 되었습니다.
이 프로토콜의 목표 고 성인 또는 애벌레의이 유기 체에 유전자 표현 연구를 수행 하기 위해 연중 따개 비 B. improvisus 의 문화를 유지 하는 방법을 설명 하는 것입니다. Rittschof 외. 15 는 짧게 barnacles nauplii의 출시에서 Balanus amphitrite종족에 대 한 cyprids의 타협을 경작 하는 방법을 설명 합니다. 프로토콜 B. improvisus Tjärnö 해양 연구소 (스웨덴)의 모든-1 년-라운드 경작에 대 한 적응 되었습니다 및 생산 라인의 모든 단계에 대 한 자세한 설명이 나와 있는, 따개 비의 양육 및 생산을 포함 하 여 애벌레, 뿐만 아니라 성인과 애벌레에 대 한 피드 관리. 완전 한 절차의 개요 그림 1을 참조 하십시오. 자란 시스템을 사용 하 여 몇 가지 일반적인 실험 설정 함께 exemplified 이며 나+의 기능 유전체학 연구에 /K+ ATPase 그리고 aquaporins elucidating osmoregulation2, 그들의 가능한 기능 3. 그것은 때로는 필수적인 특정 조직에서 유전자 발현을 검토 하 고 따개 비 해 부의 기초의 일부 적용 됩니다. 높은-품질 바닷물의 좋은 공급, B. improvisus, 따개 비 그리고 다른 잠재적으로 많은 종의 경작 가능 해야 세계 해양 연구소.

<table><tbody><tr><td>Plexiglas (폴리 메틸 메타 크릴 레이트) 패널</td><td>플라스틱 produkter, Bromma, 스웨덴</td><td></td><td>투명 유리</td></tr><tr><td>1.5 L PET 병</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Artemia</td><td>INVE 양식, 벨기에</td><td></td><td>우리는 다른 회사를 테스트했습니다; 이것은 정말 최고의 것입니다</td></tr> <tr><td>Skeletonema marinoi (CCAP 변형 1077/5)</td> <td>CCAP (조류 및 원생 동물의 문화 컬렉션); 스코틀랜드&nbsp;</td><td>균주 1077 / 5</td><td></td></tr> <tr><td> Chaetoceros simplex var. gracilis (CCAP 균주 1085/3)</td> <td>CCAP (조류 및 원생 동물의 배양 수집); 스코틀랜드&nbsp;</td><td>스트레인 1085/3</td><td></td></tr><tr><td>Millipore 카트리지 필터 시스템</td><td>Millipore&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>공칭 기공 크기가 0.2 &micro인 카트리지; m</td><td>밀리포어&nbsp;</td><td>카트리지 CWSS01S03</td><td>대용량</td></tr><tr><td>폴리카보네이트 병</td><td>Nalgene</td><td></td><td>오토클레이브</td></tr><tr><td>가능한 RNA 나중</td><td>Qiagen</td><td>76106</td><td>&nbsp; RNA</td></tr><tr><td>TURBO DNA를 보존</td>하기 위한 고정 솔루션 <td>무료 키트 Invitrogen/Thermofisher Scientific&nbsp; &nbsp;</td><td>AM1907</td><td>DNAse 키트준비된 RNA에서 DNA를 제거하기 위한 키트</td></tr><tr><td>iScript cDNA 합성 키트</td><td>Biorad</td><td>1708890</td><td>cDNA 합성 키트</td></tr><tr><td>SYBR Green supermix</td><td>Biorad</td><td>1708880</td><td>Dye for QPCR</td></tr><tr><td>RNeasy minikit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td>RNA 추출 성인 또는 많은 cyprids의</td></tr><tr><td>연조직 균질화 CK 14, 2 ml 튜브</td><td>Precellys</td><td>KT03961-1-003.2</td><td>균질화를 위한 세라믹 비드</td></tr><tr><td>RNeasy 마이크로 키트</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td>RNA 소수의 사이프리드 추출</td></tr></tbody></table>

해양 모델-따개 비 balanus improvisus 경작 및 유전자 발현

The Barnacle Balanus improvisus as a Marine Model - Culturing and Gene Expression

Barnacles는 고착 성인 해양 갑각류 그리고 free-swimming, planktonic 애벌레. 따개 비 Balanus (Amphibalanus) improvisus 낮은 염 분에 극단적인 관용 때문에 특히 관련 osmoregulatory 메커니즘의 연구에 대 한 모델 이다. 그것은 또한 널리 antifouling 연구에 관하여 특히 생물학, 정착의 모델로 사용 됩니다. 그러나, 자연 계절 산란 연구 cyprid 애벌레의 예측할 수 없는 공급을 생성합니다. 프로토콜 개발 되었습니다 B. improvisus 의 모든 연중 재배 및 모든 상세한 설명 단계 생산 라인에 대 한 설명입니다 (즉, 패널, 컬렉션의 양육에 성인 문화의 설립 따개 비 애벌레, 그리고 성인과 애벌레에 대 한 피드 관리). 설명 또한 문제 해결에 제공 하 고 중요 한 매개 변수 (예를 들어, 오염 제거, 양질의 사료 생산, 필요한 인력 및 높은-품질 바닷물의 중요성)에 대해 설명 합니다. 자란 시스템에서 각 일괄 처리 극대로 대략 12000 nauplii 있고 주 당 거의 50000 애벌레까지 생성 될 수 있다 그래서 일주일에 4 개의 일괄 처리를 제공할 수 있습니다. 문화 B. improvisus 에 사용 되는 방법, 아마, 대부분은 또한 무료 swimminglarvae와 다른 해양 무척 추 동물에 적용입니다. 프로토콜은 다양 한 조직의 해 부에 대 한 유전자 발현에 대 한 연구에 대 한 높은-품질 RNA의 생산 뿐만 아니라 성인에서 되 게 됩니다. 그것은 또한 설명된 어떻게 교양된 성인 그리고 reared cyprids 다양 한 외부 요인에 관하여 유전자 발현을 조사 하기 위한 실험 설계에에서 이용 될 수 있다. 유전자 발현에서 교양된 barnacles의 사용은 나+의 가능한 osmoregulatory 역할의 연구와 함께 삽화가 /K+ ATPase 그리고 aquaporins.

B. improvisus의 성인 barnacles의 경작에 대 한 설명 절차 nauplius의 4 개의 일괄까지 애벌레 생산 수 있습니다 주당. 그것은 거의 매일 밤 nauplius 애벌레를 수집 가능한 것 하지만이 더 많은 사람과 인프라 필요 (는 broodstock에 많은 barnacles, 문화 것입니다 릴리스 애벌레 지속적으로). 애벌레 생산에 대 한 추가 제한 요소가 특히 규조류 Skeletonema에 관한 높은 품질의 공급 여부를 것 처럼 보인다. 극대, 자란 시스템에서 각 일괄 처리 약 12000 nauplii, 주 당 50000 nauplii까지 경작 될 수 있도록 구성 되어 있습니다. 그러나, 몇 주 수 있습니다 생산 10 배 적은 애벌레까지. 단일 성인 하루14, 1-2 성인 애벌레 각 일괄 처리에 대 한 발표는 즉 당 최대 7000 애벌레를 생성할 수 있습니다. 일주일, 내 수집된 nauplii의 약 70-90% 정착 분석 및 분자 연구에 사용할 수 있는 cyprids (극대로 대략 30000 cyprids / 주, 저조한)으로 개발할 것입니다.
그것은 배치, 사이 cyprid 기능에 변화가 있다는 것을 강조 했다 한다 그리고 일반적으로, 더 큰 변이 사이 일괄 처리 내에서 일괄 처리 보다 있다. 예를 들어 정착 성공 정착 분석 실험에서 30와 다른 일괄 처리에 대 한 70% 사이 다릅니다. 대부분, 이것은 다른 샘플링 기간 동안 애벌레를 방출 하는 성인의 특정 쌍 사이의 개별 유전자 변이 의해 발생 합니다. 그것은, 물론, 반복된 실험 (생물 복제) 결과 대 한 보다 일반적인 진술을 만들 수 있다면 다양 한 일괄 처리에서에서 cyprids를 포함 해야 것이 좋습니다. 일괄 배치 변화 적절 한 컨트롤과 유전자 표현 연구에 정규화를 적용 한다 실험적인 디자인에 요구를 넣습니다. 그러나, 몇 가지 통계 표준화 절차 구현 된 후에는 상당히 배치 사이 변이 감소, 일괄 처리의 일부 효과 일반적으로 여전히 명백한 (되지 않은 데이터).
제공 된 프로토콜에 따라 그것은, 평균, 500을 얻을 수 따개 비 (표 1)의 단계에 관계 없이 작은 20 cyprids에서 높은-품질 RNA의 ng. RNA의 품질은 일반적으로 (두 봉우리의 예상된 위치는 그림 4에 표시 된) 18와 28S 봉우리 사이의 비로 측정 됩니다. 그러나, barnacles 및 다른 많은 절지동물, 28S rRNA (분석 방법의 일환)으로 열 하면 분해 하 고 18 피크20함께 마이그레이션합니다. 이 때문에 거기에, 원칙, 하나 하나의 rRNA 피크 barnacles에 대 한 분석의이 종류에서. 이 테스트 (그림 4) 세라믹 구슬에 의해 균질 높은 무결성으로 RNA를 제공 하 고는, 따라서, 방법의 선택에서에서 분명 하다. RNA 샘플 (읽기, 수가,는 시퀀싱 하는 동안 멀티플렉싱의 수준에 따라) 당 70 백만 읽기의 평균 발생 금액 및 시퀀싱에 대 한 높은-품질 시퀀싱 라이브러리를 생성 하는 품질에 충분 하다. RNA의 금액 또한 많은 유전자의 cDNA 합성 및 정량 식 분석을 위해 충분 하다.
그림 5 에서는 aquaporins 나+의 정량 분석에서 결과 /K+ ATPase (NAK1) 결합 이체, 식 변화 변화 환경 단서2,3에 대 한 응답에서 조사 되었다. 긴 및 짧은 상대 식의 비교는 두 가지 짧은 NAK (그림 5A)에 관하여 낮은 염 분에 긴 NAK1 mRNA에 대 한 증가 하는 NAK1 쇼의 변종 결합. 따라서, 데이터 대체 접합는 긴 양식 낮은 염 분 조건에서 우위를 나타냅니다. Aquaporins, 경우 그것은 명백한 두 물 수송 paralogs AQP1 및 AQP2 차동 식 (그림 5B) 표시. 특히, 맨 틀 직물에서 그것은 명백한는 AQP1는 실질적으로 다운 낮은 salinities에 통제는 AQP2에 나타나지 않습니다. 대신, AQP2는 낮은 salinities, 그러나 soma에 약간 증가 식을 보여 줍니다. 이러한 결과 다른의 기능 역할의 조사에 대 한 기반을 제공 B. improvisus 이온 운송업 자 및 aquaporins 따개 비 osmoregulation에.
<img alt="해양 수명주기 다이어그램: DNA/RNA 샘플링, 무릎 배정에서 사이프리드 재배, 성충 정착 과정." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57825/57825fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1 : 전체 절차 및 성인 유전자 표현 연구에 대 한 RNA 추출 배양의 개요. 시작 하려면 새로운 문화, 위원회는 프레임에 연결 하 고 1-3 m 깊이에서 바다에 배포. 몇 주 후, 성인/청소년 패널 실험실에 쟁반에서 선반에 수직으로 배치 됩니다. 각 트레이 성인 약 40 패널을 보유 하고있다. 패널 당 약 100 성인, 총 ≈에 4000 성인 개인은 트레이 당 경작. 성인 barnacles Artemia 를 품고 고 지켜질 수 년-주위. Nauplius 애벌레는은 쟁반 을 통해 체질 필터링에서 일주일에 여러 번 수집. 수집 된 nauplii 양동이 물 욕조에 26 ° C에서 보관 하 고 먹이 microalgae로 전송 됩니다. 그들이 먹이 비 cyprids, 필터링 의해 수집으로 털 갈이 때까지 nauplii reared 있습니다. 새로운 패널의 정착 cyprids 패널, 중 년에 대 한 새로운 패널을 제공 하 여 실험실에서 설정할 수 있습니다-주변 문화 또는 변경 된 외부 조건 특정 실험 설정에 대 한 사용 될. RNA는 청소년/성인 실험의 끝에 또는 특정 시간 시점에서 다음 추출 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57825/57825fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="수생여과 실험; 장비 및 공정 단계; 침전물 분리 설정; 연구." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57825/57825fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> 그림 2 : 이미지의 자란 절차에서 몇 가지 중요 한 단계. (A)이이 이미지 패널 분야에서 새로운 인구를 수집 하기 위한 프레임을 보여 줍니다. (B)이이 이미지 랙 트레이에 배치 됩니다에 B. improvisus 의 성인 barnacles와 패널을 보여 줍니다. 패널 약 2 cm 떨어져 배치 됩니다. (C)이이 이미지 패널과 왼쪽 먹이 탱크는 따개 비와 쟁반을 보여 줍니다. 각 트레이 체 nauplius 애벌레의 컬렉션에 대 한 배치는 콘센트가입니다. (D)이이 이미지 Artemia 생산 피드 성인 barnacles를 보여줍니다. (E)이 화면은 nauplii에 26 ° c 설정 물 욕조에 배치 하는 양동이의 양육 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57825/57825fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="따개비 해부도; 개골판, 껍질, 신체 세부 사항; 생물학적 연구." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57825/57825fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> 그림 3 : 성인 barnacles의 해 부에 초기 단계의 설명: 그것의 포탄에서 시체를 제거. 부드럽게 조리개를 통해 포 셉을 삽입 하 여 opercular 접시 중 하나는 (A) 잡아. 접시를 제거 하 고 동물을 노출 부드럽게 당겨. (B) 바로 아래는 cirri 소마 부분을 잡아서 동물 밖으로 당겨. (C)이이 패널 도토리 barnacles의 전반적인 구조를 보여 줍니다. 시체를 꺼내은 맨 틀 및 (난소)에서 잠재적으로 수정된 계란 포탄 구멍에 있어. 따개 비 해부학에 대 한 참고 (자세한 계정 참조 앤더슨)9: 벽 격판덮개는 따개 비의 안쪽, 경사와 함께, 그들은 형성 한다 화산 모양의 원추형. 개방, 조리개, 문, 또는 operculum, 조리개를 형성 두 opercular 판으로 덮여 있다. 도토리 barnacles 일반적으로 있다 층;에 단단히 붙어 석 기저 판 그러나, 일부 종의 barnacles이 석 플레이트 (예를 들면, S. balanoides) 부족합니다. Barnacles 음울 안료 맨 틀 (등 딱지)에서 외 골격을 분 비. 두 계층 맨 틀의 외부 표면은 석 회 질 맨 틀의 안쪽 표면은 하지 석 회화 되며 따라서 유연 하면서 엄격한 될. 조리개, 내부는 cirri은 끌어 넣어진된 위치에 존재 한다. 이들은 흉부 부속 barnacles 정지 먹이 기를 위해 사용 하는. 난소는 testes soma에 거짓말을 하는 동안에 따개 비의 기지에 가깝습니다. 이 수치는 Panova 그 외 여러분 에서 채택 되었습니다. 21 스프링 거에서 허가 함께 게시 되었습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57825/57825fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="형광 시간 대 강도 그래프, 방출 피크의 데이터 분석, 분광 연구." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57825/57825fig4.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> 그림 4 : 모 세관 젤 전기 이동 법에 의해 rRNA 무결성의 결정. RNA는 두 개의 서로 다른 균질 화 방법에 의해 준비 되었다: (A) 쥡니다 및 (B) 세라믹 구슬. 푸, y 축에 단위 형광 단위를 의미합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57825/57825fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="염도, pCO₂가 NKA-L1/NAK-S 발현에 미치는 영향을 비교하는 막대 차트; 조직에서의 아쿠아포린 발현." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57825/57825fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> 그림 5 : 유전자 발현에서 osmoregulation에 대 한 중요 한 유전자의 2 개의 다른 연구에서 결과 B. improvisus. (A)이이 패널 표시 차동 식 나+의 결합 이체의 정량에 의해 측정으로 /K+ ATPase NAK1 다양 한 salinities 및 pCO2 레벨3. 낮은 염 분 치료에 긴 isoform (NAK1 L)의 식 짧은 상대적인 증가 (ANOVA, P &lt; 0.001). (B)이이 패널 B. improvisus 의 성인 다양 한 salinities2에 그들의 노출 동안 aquaporins의 식을 보여줍니다. 정량은 말라 상대적인 aquaporin 식 수준을 결정 하 사용 되었다. 성인 개인 14 일 동안 3 다른 salinities (3, 20, 및 33 PSU)에서 인 큐베이 팅 했다. RNA 준비에 대 한 소마, cirri, 및 성인의 분리 되었다. 두 인물에서 오차 막대는 표준 편차를 나타냅니다. * *과 * * * 표시 레벨의 중요성 (ANOVA), 0.01, 0.001, 각각. 이러한 수치 린드 외 에서 수정 된 2 , 3. 두 인물 PLoS 하나에서 허가 함께 게시 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57825/57825fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>정착 단계</td>
			<td>RNA (ng)의 총 금액</td>
		</tr>
<tr>
<td>자유 수영</td>
			<td>512</td>
		</tr>
<tr>
<td>탐색: 주변 검색</td>
			<td>518</td>
		</tr>
<tr>
<td>연결 된 cyprid</td>
			<td>550</td>
		</tr>
<tr>
<td>새로 metamorphosed 청소년</td>
			<td>832</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1: RNA의 생산량. 이 표에서 RNA 준비 키트 20 cyprid 개인 합의 과정 중 여러 단계에서 수집 된의 풀에서 추출한 RNA 수량을 보여줍니다.

따개 비 (Amphibalanus) Balanus improvisus osmoregulation 및 antifouling 공부에 대 한 모델입니다. 그러나, 자연 계절 산란 cyprid 애벌레의 예측할 수 없는 공급을 생성합니다. 여기, B. improvisus 의 모든-1 년-라운드 경작에 대 한 프로토콜 설명, 애벌레의 생산을 포함 합니다. 유전자 표현 연구에 교양된 barnacles의 사용을 보여 줍니다.

해양 모델-따개 비 Balanus improvisus 경작 및 유전자 발현

Barnacles are marine crustaceans with a sessile adult and free-swimming, planktonic larvae. The barnacle Balanus (Amphibalanus) improvisus is particularly ...

배양 시설은 유충 생태학, 생물 오염 및 진화 생물학의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 보다 구체적으로, 유충 정착 중 수용체-리간드 상호 작용, 새로운 방오 기술 개발, 삼투압 조절에 관여하는 유전자의 진화 및 기능에 대한 연구에 사용할 수 있습니다. 이 모델 유기체의 주요 장점은 따개비 Balanus improvisus가 튼튼하고 일년 내내 번식하며 상대적으로 생성 시간이 짧다는 것입니다.이 방법은 따개비 배양에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 다른 해양 생물의 배양에도 적용할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 사람들은 좋은 해수 공급, 고품질 사료의 강력한 생산, 배양물을 청소하고 먹이를 주는 데 지속적으로 참석하는 것과 같이 성공에 중요한 많은 세부 사항으로 인해 어려움을 겪을 것입니다. 따개비를 다루는 기술자이자 연구원인 Martin Ogemark와 Anna-Lisa Wrange가 절차를 시연할 것입니다.시작하려면 여러 개의 투명 열가소성 패널을 수용할 수 있는 프레임을 설정합니다. 각 패널의 상단 모서리에 두 개의 구멍을 뚫고 케이블 타이를 사용하여 패널을 프레임에 부착합니다. 성인 따개비를 수집하려면 잔잔한 물에서 1-3 미터 깊이에 패널을 수직으로 배치하십시오.따개비가 가라앉고 지름 5mm까지 자라도록 한 후 패널을 실험실로 가져옵니다. 그런 다음 폴리에틸렌 트레이에 밀링된 홈이 있는 스탠드에 패널을 수직으로 놓습니다. 먼저 무독성 방수 테이프를 사용하여 5개의 패널을 함께 테이프로 붙여서 상단이 열린 큐브를 만듭니다.큐브를 작은 쟁반에 넣고 바닷물로 채웁니다. 다음으로, 큐브 맨 위에 약 200개의 사이프리드를 추가합니다. 이틀에 한 번씩 어린 따개비에게 100ml의 스켈레레마 마리노이(Skeletonema marinoi)를 먹이십시오.2-3주가 지나면, 큐브의 패널에는 지름이 최소 5mm 이상인 어린 동물이 포함되어야 합니다. 큐브를 분리하고 패널을 흐르는 바닷물이 있는 트레이로 이동합니다. Artemia nauplii를 수확하려면 먼저 폭기 펌프를 끄고 병을 어둡게 한 다음 병 아래쪽을 10 분 동안 비춥니다.부화한 아르테미아 나우플리는 빛을 향해 헤엄칠 것입니다. 부화하지 않은 낭종은 바닥으로 가라앉고 낭종 껍질은 위로 떠오릅니다. 하단의 클램프를 열고 수영하는 Artemia nauplii의 조밀 한 개체군으로 중간 분획을 수집합니다.성인 따개비로 패널을 청소하려면 담수를 부드럽게 뿌리고 부드러운 칫솔로 오염물을 제거하십시오. 따개비가 없는 트레이와 뜨거운 담수로 튜브를 청소하십시오. 다음으로, 오버플로 포트가 있는 폴리에틸렌 트레이에 체를 놓습니다.하룻밤 사이에 체에 정착하는 따개비 유충을 모으십시오. 그런 다음 여과된 바닷물 20리터와 규조류 미세조류 혼합물 1리터를 양동이에 채워 50, 밀리리터당 000개의 규조류 밀도를 만듭니다. 이전에 수집 한 따개비 nauplii를 결정화 접시에 옮기고 측면에서 접시를 비춥니다.그런 다음 피펫을 사용하여 빛을 향해 헤엄치는 nauplii를 모아 다른 접시로 옮깁니다. 계산을 위해 nauplii를 여과된 바닷물 1리터가 들어 있는 비커로 옮깁니다. 다음으로 이전에 준비된 양동이에 1리터의 나우플리를 추가합니다.3일 후 90마이크로미터 체를 사용하여 따개비 nauplii를 채취한 다음 양동이를 청소하고 여과된 바닷물로 채우고 새로운 규조류 사료와 따개비 nauplii를 추가합니다. 2-3일 더 배양한 후 160마이크로미터 체 위에 320마이크로미터 체를 사용하여 탈피되지 않은 따개비 nauplii를 사이프리드에서 분리합니다. 미세조류 배양을 위해 4개의 4리터 병을 설정한 후 병을 평방 미터당 50-100마이크로몰의 강도로 빛에 놓습니다.사료에 사용할 수 있을 만큼 충분히 밀도가 높을 때 배양물을 수확합니다. 먼저, 몸집이 큰 개체를 선택하고 해부 전 이틀 동안 음식을 먹지 마십시오. 그런 다음 칫솔로 따개비 껍질을 청소하고 물로 헹구어 환경에 존재하는 다른 종의 오염을 최소화합니다.해부를 위해 평평한 표면에 개별 따개비를 놓고 tergal plate와 scutal plate 사이에 한 쌍의 집게 끝을 삽입합니다. 접시 하나를 잡고 부드럽게 당겨 제거합니다. 다음으로 집게를 사용하여 권운을 잡고 따개비를 똑바로 잡아당깁니다.마지막으로, 절개된 따개비를 96% 에탄올 또는 RNA 안정화 용액에 직접 넣어 고정합니다. 여기에 설명된 프로토콜을 사용하면 일주일 안에 최대 4개의 따개비 nauplius 유충을 생산할 수 있습니다. 최대로, 배양 시스템의 각 배치는 약 12, 000 nauplii로 구성되며, 이는 주당 최대 50, 000 nauplii를 배양할 수 있음을 의미합니다.일주일 안에, 수집된 nauplii의 70-90%는 사이프리드로 발전하여 주당 약 30, 000개의 사이프리드를 산출합니다. 평균 500 나노그램의 고품질 RNA는 정착 단계에 관계없이 20개의 개별 사이프리드에서 얻어졌습니다. 따개비에서 28S rRNA는 가열되면 분해됩니다.세라믹 비드에 의한 균질화는 RNA에 가장 높은 무결성을 제공하여 따개비와 절지동물 조직을 처리하는 데 선호되는 방법입니다. qPCR 분석을 사용하여 NAK1 mRNA의 긴 변이체와 낮은 염도가 짧은 NAK에 비해 2배 증가한 것이 관찰되었습니다. 이것은 긴 형태가 낮은 염도 조건에서 우세하다는 것을 나타냅니다.따개비 문화와 관련된 다양한 단계를 마스터하려면 몇 주간의 교육이 필요합니다. 이 절차를 시도하는 동안 배양 워크플로우의 모든 단계에서 오염을 최소화하는 것이 특히 중요합니다. 개발 후 이 배양 기술은 따개비 생태학, 생리학 및 분자 생물학에 대한 더 나은 이해를 제공하는 데 중요한 역할을 했습니다.또한 따개비 Balanus improvisus를 강력한 해양 모델 시스템으로 만드는 데 중요한 초석입니다.

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amphipod Parhyale의 hawaiensis 갑각류 발생학 및 비교 절지 동물의 개발과 진화 연구를위한 유망한 모델 생물이다. 이 프로토콜은 Parhyale의 초기 분열 단계의 배아에서 단일 할구를 수동으로 제거하는 방법을 설명합니다.

Amphipod 갑각류의 여덟 세포 배아에서 단일 셀의 절제<em&gt; Parhyale hawaiensis</em

morphant 배아를 생성하는 방법은 발달 메커니즘과 유전자 규제 네트워크를 연구하는 것이 필수적이다. 바다 스타 Patiria miniata는 이러한 연구에 대한 새로운 모델 시스템입니다. 여기서 우리는 배아의 문화를, 배우자를 얻기 생산을위한 프로토콜,이 종 접합자의 빠른 미세 주입을 제시한다.

의 미세 주입을위한 방법 Patiria의 minata 접합자

우리는 창고 기의 미 수정 난자에 여기 mRNA의 주입 후 형광 단백질의 강력하고 효율적인 표현을보고합니다. 이 기초 척색에 미세 주입 기술의 개발은,이 새로운 모델 시스템에서 기술 혁신을 광범위한 생체 내 이미징 및 유전자 특이 조작을 포함하여있는 길을 만들어 줄 것입니다.

형광 단백질의 발현에 창고 기 미 수정 난자에 mRNA의 주입에 의한

이 프로토콜의 목표는 전체 마운트 현장 교잡 및 후속 사전 및 사후 교잡 처리를 준비하기 위해 Lymnaea stagnalis 배아 및 유충의 고처리량 캡슐화 해제를 위한 일련의 방법을 사용자에게 제공하는 것입니다.

전체 산<em&gt; 현장에서</em복족류 연체 동물 용&gt; 하이브리드 방법<em&gt; Lymnaea의 stagnalis</em

여기에서는 자포동물(cnidarian anthozoan) 모델인 Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis에서 재생을 유도하고 모니터링하는 방법을 보여줍니다.  형태학적 병기 결정 시스템을 사용하여 재생을 절단하고 분류하는 방법을 보여주며, 이 시스템을 사용하여 폴립 구조 재생에서 자가포식에 대한 요구 사항을 밝힙니다.

작은 별 말미의 반구 Physa에서 전체 폴립 재생을 유도 Nematostella의 vectensis

이 프로토콜의 목표 성인 산호 샘플 파라핀에 포함 되 고 유리 슬라이드에 구분에 교 잡 현장에서 수행 하는 것입니다. 이것은 파라핀 끼워 넣어진 조직에서 RNA 방지 감지 프로브의 공간 표현을 시각화 하는 데 사용 하는 질적 방법입니다.

제자리에서 파라핀 포함 성인 산호 샘플에 대 한 교 잡 기술

이 프로토콜의 목표는 배아를 희생하지 않고  위도 동안 말미잘 성충을 유전자 형화하는것입니다.

초기 개발 중 바다 말미잘의 지질 형질이

돌리올리다 게겐바우리종을 포함한 돌리올리드는 전 세계적으로 생산적인 아대륙 선반 시스템에서 발견되는 생태학적 중요성의 작은 젤라틴 해양 동물플랑크톤이다. 이 섬세한 유기체를 배양하는 어려움은 그들의 조사를 제한합니다. 본 연구에서는 돌리올리야게겐바우리(doliolid Dolioletta gegenbauri)를수집, 사육 및 유지하기 위한 재배 접근법을 설명합니다.

실험 연구를 위한 해양 펠라기 투니케이트 돌리오레타 게겐바우리 재배 (울자닌 1884)

이 논문은 복족류 Crepidula fornicata 의 유충 배양 방법을 소량의 실험실 규모 시스템과 현장에 배치할 수 있는 주변 해수 중우주 시스템에서 제시합니다.

Slipper Limpet, Crepidula fornicata의 유충의 실험실 및 현장 배양

이 연구는 낭포성 섬유증 폐 환경을 반영하는 녹농균 유전자 발현을 평가하기 위해 응집체 다미생물 생물막 모델을 개발하고 RNA 추출 프로토콜을 최적화하기 위한 프레임워크를 설명합니다. 응용 분야에는 항균 효과 평가 및 낭포성 섬유증과 관련된 조건에서 항생제 대안 연구가 포함됩니다.

감염 관련 유전자 발현을 연구하기 위한 낭포성 섬유증 응집체 생물막 모델

이 연구는 담수 사과 달팽이( Pomacea canaliculata)의 안정적인 돌연변이 계통을 생성하고 유지하는 워크플로우를 개발했습니다. 프로토콜에는 접합자 채취, CRISPR/Cas9 시스템 구성 요소를 통한 미세 주입을 통한 게놈 편집, 배아의 난자 배 양, 그리고 통제된 교배 후 유전자형 분석이 포함됩니다.

황금 사과 달팽이 Pomacea canaliculata: 접합자에서 안정적인 돌연변이 계통까지의 이야기

배우세요 해양 모델 Balanus improvisus의 연중 경작 및 유전자 발현 분석 방법을. 이 기술은 삼투압 조절 및 방오 연구에 활용되며 고품질 RNA 추출이 가능합니다.

해양 모델-따개 비 Balanus improvisus 경작 및 유전자 발현

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