Name: 피 펫 팁 드롭릿 미세 플랫폼 시드 셀에 대 한 메서드를 기반으로 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 배우세요 피펫 팁을 이용한 드롭릿 미세유체 장치에서 희귀 세포 캡슐화 방법을. PDMS 칩과 미세유체학을 활용하여 Jurkat T 세포 및 희귀 면역 세포의 효율적 캡슐화와 세포 간 상호작용을 연구할 수 있습니다.

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우리는 아인트호벤 공대 관대 한 지원에 대 한 감사합니다.

1. 3-입구입니다 (PDMS) 장치 제조
<ol><li>컨디셔닝 믹서에서 PDMS 자료의 40 g을 측정 컵 및 추가 PDMS 경화제 4 g 컵에서 기본 시 약을 신중 하 게, dropper를 사용 하 여.</li>
	<li>컨디셔닝 믹서의 소유자에 컵을 놓고 보유자와 컵의 총 무게를 측정 합니다. 컨디셔닝 믹서에 따라 원심 분리기 균형 무게의 가치를 설정 합니다.</li>
	<li>2 분 뒤에 2 분 2000 rpm에서 거품 드 2000 rpm 조절 믹서에 기본 및 경화 에이전트 믹스.</li>
	<li>약 100 m m 실리콘 웨이퍼의 동일한 크기 직경 알루미늄 보트를 준비 합니다. 성형 과정, 알루미늄 보트에서 복제본에 대 한 조작 실리콘 웨이퍼를 놓고 배양 접시에서이 설치를 넣어 (직경 120 m m, 높이 = = 20 m m). 참고: 페 트리 접시의 크기는 실리콘 웨이퍼의 크기에 따라 다릅니다.</li>
	<li>컵 홀더를 제거 하 고 실리콘 웨이퍼에 신중 하 게, 미리 치료 PDMS 혼합물 (잔을의 내용)를 부 어.</li>
	<li>모든 기포를 제거 하는 약 20 분 동안 desiccator에서 미리 치료 PDMS 혼합물과 실리콘 웨이퍼를 포함 하는 배양 접시를 놓습니다.</li>
	<li>20 분 후에 제거 될 수 있는 모든 나머지 기포 확인 페 트리 접시를 제거 합니다.</li>
	<li>오븐, 65 ° C, 3 h 이상에서 설정에 페 트리 접시를 놓습니다.</li>
	<li>3 h 후 페 트리 접시는 오븐에서 제거 하 고 실리콘 웨이퍼에서 치료 PDMS를 신중 하 게 껍질.</li>
	<li>칼 이나 메스를 사용 하 여 커트 라인을 따라 잘라 PDMS 장치. 후미와 1.2 m m 구멍을 뚫는 사용 하 여 각 장치의 콘센트에 구멍을 펀치. PDMS의 어떤 먼지 또는 잔여 조각을 제거를 스카치 테이프로 각 PDMS 장치를 청소 하십시오.<ol>
<li>선택적으로, 잔여 PDMS 조각을 제거 하는 질소로 불어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>소 프로 파 놀와 질소 건조 비누 물으로 청소 하 여 유리 슬라이드를 준비 합니다.</li>
	<li>깨끗 한 PDMS 장치는 플라즈마에 깨끗 한 유리 슬라이드와 함께 본드를 닫습니다 흐름 라인 아 셀. 다음 설정을 사용 하 여: 전력: 50 W, 시간: 45 s, 도련 지연 시간: 2 s, 공정 가스: 가스 1 (공기), 환기: 두 밸브, 제한 된 환기 시간: 60 s, 펌프 스핀 다운 시간: 10 s, 환기 유지 시간: 0 s, 가스 차단 시간: 1 s, 터보 펌프 사용 : 0. 다른 모든 가스 라인을 분리. 참고: 플라즈마 애 셔는 플라즈마의 브랜드에 따라 다를 수 있습니다 사용 되는 설정 아 셀 사용.</li>
	<li>준비 실 란 솔루션 silane (1 시간, 1 시간, 2 시간, 2 H-Perfluorooctyltriethoxysilane)의 50 µ L을 추가 하 여 플 루 오 르의 950 µ L 오일. 참고: Silane 독성이 있다. 증기 두건에서 운영 하십시오.</li>
	<li>테 플 론 튜브에 연결 되어 있는 주사기에 준비 실 란 솔루션을 그립니다.</li>
	<li>장치의 콘센트를 통해 준비 실 란 솔루션을 홍 조 하 여 장치를 salinize.</li>
	<li>오븐, 65 ° C, 30 분에서 설정에 장치를 넣습니다.</li>
	<li>오븐에서 salinized 장치를 제거 하 고 장치에서 초과 silane 불 기름으로 플러시.</li>
	<li>65 ° C, 접합 과정을 완료 하려면 적어도 1 시간에서 설정, 오븐에 다시 장치를 놓습니다. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
</ol>2. 무손실 셀 캡슐화
<ol><li>
셀 수확
	<ol>
<li>다시 1.0x106 셀/mL, 2.0x106 셀/mL, 4.0x106 셀/mL, 및 8.0x106 셀/mL;의 농도에서 로스웰 파크 기념 연구소 (RPMI) 매체에 Jurkat T 세포를 일시 중단 조 혈 혈 청 무료 문화 미디어 (예: X-VIVO 15) 1.3x106 셀/mL, 3.0x106 셀/mL, 및 13.0x106 셀/mL;의 농도에서 Pdc A549 세포에 Dulbecco의 수정이 글의 중간 (DMEM) 1.0x106 셀/mL의 농도에서. 참고: 셀과 셀의 농도의 형식 실험에 따라 달라질 수 있습니다. 셀 라벨도 할 수 있습니다 실험에 따라.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수성 작은 물방울 생성에 대 한 팁-로드
	<ol>
<li>계면 활성 제의 3 mL 불 오일의 2 개 mL를 추가 하 여 불 오일 3% 생체 계면 활성 제 혼합물을 준비 합니다. 참고: 불 기름에 추가 계면 활성 제의 농도 다른 인큐베이션 기간 동안 유제의 안정성을 결정 합니다. 계면 활성 제의 농도 특정 셀 형식에 사용 하는 미디어에 따라 다릅니다.</li>
		<li>주사기 (1 mL) 오일 위상 혼합물을 그립니다. 주사기에서 공기 방울을 제거 하 고 적절 한 길이의 테 플 론 튜브에 연결.</li>
		<li>주사기에 드로잉 생체 미네랄 오일에 의해 샘플 주사기를 준비 합니다. 기포를 제거 하 고 적절 한 길이의 테 플 론 튜브에 주사기를 연결.</li>
		<li>치료 PDMS 슬 래 브에서 5 mm의 직경을 가진 PDMS 플러그를 펀치. 참고: 치료 PDMS 슬 래 브 수 준비 단계 1.1 1.9를 사용 하 여. 일반 실리콘 웨이퍼를 사용 하 여 날조 된 실리콘 웨이퍼 대신.</li>
		<li>1mm 구멍을 뚫는와 플러그의 센터에 또 다른 구멍을 펀치.</li>
		<li>그것은 밀접 하 게 맞는 그런 큰 끝에서 200 µ L 피 펫 팁, 플러그를 삽입 합니다. 참고: 큰 샘플 볼륨을 더 큰 세포 1000 µ L 피 펫 팁을 사용 합니다. 1000 µ L 피 펫 팁, 5 m m와 7 m m 사이 배열 하는 직경의 플러그를 사용할 수 있습니다. 직경 5 m m, 약 400의 샘플 볼륨의 플러그와 µ L 피 펫 팁에서 발음 될 수 있다. 더 큰 직경의 플러그 사용된 (7mm) 인 경우에, 더 많은 샘플 볼륨 (약 900 µ L) 발음 수 있습니다.</li>
		<li>피 펫 팁에 삽입 된 PDMS 플러그에는 주사기에 연결 된 튜브를 삽입 합니다. 미네랄 오일 연결 된 피 펫 팁을 천천히 주사기 플런저를 밀어. 피 펫 팁에서 모든 잔여 공기를 밖으로 밀어.</li>
		<li>낮은 피 펫 팁, 샘플 솔루션에 주사기를 연결 하 고 약 150 µ L에 있는 샘플의 발음.</li>
		<li>2.2.4에 2.2.8 두 번째 샘플 주사기를 준비 단계 반복 합니다.</li>
		<li>신중 하 게 모든 3 개의 준비 된 주사기 주사기 펌프 장소.</li>
		<li>두 피 펫 팁, PDMS 칩의 2 개의 내부 후미에서 샘플 포함을 삽입 합니다. 외부 입구에 오일 위상 혼합물을 포함 하는 튜브를 삽입 합니다.</li>
		<li>주사기 펌프에 흐름 율의 값을 다음과 같이 설정: 연속 단계 솔루션: 600 µ L/h, 셀 샘플: 100 µ L/h, 각각. 입력 하 고 주사기의 크기를 설정 합니다. 참고: 설정이 달라 집니다 직경 주사기의 유형을 기반으로 합니다.</li>
		<li>장치의 외부 채널을 통해 장치 및 오일 단계의 내부 채널을 통해 샘플 솔루션을 펌프를 시작 합니다.</li>
		<li>방울 방울 형성은 안정 때 수집 시작 콘센트에 적절 한 길이의 튜브에 연결 합니다. 컬렉션의 시간 실험에 따라 다릅니다.</li>
		<li>잠금 튜브에 방울을 수집 합니다. 수집 된 방울 위에 (혈 청) 없이 RPMI 매체의 200 µ L을 추가 하 고 샘플을 품 어. : 보육 수집된 방울의 시간 변화에 따라 실험. 방울 흐름 cytometry 기반 분석 또는 격리 유제를 끊어서 작은 물방울에서 셀을 검색 한 후 수행 하는 경우 잠금 튜브에 수집 됩니다. 실험에서 물방울 현미경 분석 해야 하는 경우 유리 챔버에 물방울을 수집 가능 하다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
에멀젼과 셀 흐름 cytometric 분석을 위한 검색
	<ol>
<li>20%를 준비 1 시간, 1 시간, 2 시간, 2 시간-퍼플-1-octanol (PFO) 솔루션 (v/v) flourinated 기름의 10 mL에서 PFO의 2 개 mL를 추가 하 여 불 기름에.</li>
		<li>주사기를 사용 하 여 작은 물방울을 포함 하는 컬렉션 튜브의 아래쪽에서 초과 석유를 제거 합니다.</li>
		<li>유제 휴식과 수성 단계에 캡슐화 된 셀을 해제 유제를 20 %PFO 솔루션의 100 µ L를 추가 합니다. 버튼을 누르고 잠시 혼합. 이 시점에서 소용돌이 하지 마십시오. 1-2 분 동안 품 어. 참고: 추가 PFO의 양을 생산 하는 작은 물방울의 수량에 따라 달라 집니다. 기름 층은 완전히 해산 될 때까지 계속 추가 PFO 추가. PFO이 있는 셀에 대 한 독성과 세포 죽음 증가 너무 높은 PFO 농도 또는 PFO 너무 긴 인큐베이션 이어질 수도 명심에서 하십시오.</li>
		<li>회전 30에 대 한 가장 낮은 가능한 rcf에 곧 솔루션 s.</li>
		<li>100 mL 찬 Phosphate-Buffered 염 분 (PBS) 솔루션 2% 보완 준비 태아 종 아리 혈 청 (FCS) 98 ml PBS의 FCS (2 mL).</li>
		<li>원심 분리 후 즉시 수성 분수의 550 µ L 플라스틱 하 고 준비 단계 2.3.5에서에서 차가운 PBS 솔루션 2 %FCS 보충의 500 µ L를 포함 하는 새로운 잠금 튜브에 그것을 전송. 어떤 잔여 기름 하자 새로운 잠금 튜브의 바닥에 싱크.</li>
		<li>어떤 잔여 기름 발음 하지 않고 신중 하 게,이 잠금 튜브에서 세포를 포함 하는 수성 단계의 950 µ L 발음 하 고 새로운 잠금 튜브에 솔루션을 전송.</li>
		<li>10 분에 대 한 새로운 잠금 튜브에 셀 아래로 회전 합니다.</li>
		<li>2.3.5 단계에서 준비 다시 차가운 PBS 솔루션 2 %FCS 보충의 300 µ L에 셀을 일시 중단 합니다. 참고: 셀 수 또한 다시 일시 중지 미디어 실험에 따라 다른 적합 한 솔루션. 셀, cytometry 사용 하 여 분석용 실험에 따라 얼룩.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 셀 페어링
<ol><li>
셀 수확 및 얼룩
	<ol>
<li>Jurkat T 세포, 문화 플라스 크, 고 5 분 동안 1500 rpm에서 셀 아래로 회전.</li>
		<li>상쾌한을 제거 하 고 다시 1 mL 1.0x106 셀/mL의 농도를 PBS에서에서 1.0x106 셀을 일시 중단 합니다. 추가 PBS 세포 수에 따라 다릅니다.</li>
		<li>3.1.1 3.1.2에 동일한 셀 농도 Jurkat T 세포의 두 번째 샘플을 준비 하 단계 반복 합니다.</li>
		<li>5 분 동안 1500 rpm에서 PBS의 1 mL로 두 번 모두 샘플을 씻으십시오.</li>
		<li>다시 일시 중단 1.25 µ M carboxyfluorescein succinimidyl 에스테 르 (CFSE) 염료와 하나 셀 샘플 및 1.25 µ M까지 붉은 염료 또는 1.25 µ M 세포 확산 염료 다른 셀 샘플 셀 1.0x106 셀/mL의 농도에. 얼룩이 솔루션 총 1.0x106 셀 1 mL 이다. 참고: 셀 필터 형광 현미경 또는 교류 cytometer에서 사용할 수에 따라 다른 염료 이라는 수 있습니다.</li>
		<li>37 ° c.에서 10 분 동안 염료 셀 샘플을 품 어</li>
		<li>10 분 후 얼음 차가운 FCS의 1 mL을 추가 하 여 착 색 반응을 중지 합니다.</li>
		<li>5 분 동안 1500 rpm에서 PBS의 1 mL로 두 번 셀 샘플을 씻으십시오.</li>
		<li>다시 RPMI 미디어 10.0x106 셀/mL, 각 색상의 농도에서 세포 샘플을 일시 중단 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
팁-로드 셀 쌍에 대 한 agarose 히드로 방울의 생산을 위한 참고: 페어링 agarose 히드로 방울을 사용 하 여 셀에 대 한 시스템은 hydrogels의 고를 방지 하 고 세포 생존 능력9영장 물방울 생성 및 수집 과정에서 37 ° C와 27 ° C의 온도 유지.<ol>
<li>그것은 최대 75 ° C PBS에서 4% (w/v)의 농도에 열 하 여 매우 낮은 고 온도 agarose를 녹이 고 20 분을 위한 혼합물을 저 어.</li>
		<li>2% (w/v)의 agarose 농도를 셀 이라는 Jurkat t agarose 솔루션을 믹스. 다르게 이라는 세포와 다른 샘플에 대 한이 반복 합니다.</li>
		<li>계면 활성 제의 20 mL 30 mL 불 기름 (오일 단계 혼합물)에 추가 하 여 불 오일 2% 계면 활성 제 혼합물을 준비 합니다.</li>
		<li>2.2.2-2.2.14 단계를 따릅니다. 참고: 낮은 녹는 agarose의 고 안정 방울 생산 점성 특성, 흐름 율의 값 주사기 펌프에 다음과 같이 설정: 단계 혼합 오일: 2000 µ L/h, 셀 샘플: 200 µ L/h. 입력 하 고 주사기의 크기를 설정.</li>
		<li>잠금 튜브에 방울을 수집 하 고 60 분 동안 4 ° C에서 물방울을 품 어.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
이멀전 속보 및 FACS 분석을 위한 agarose 구슬 검색
	<ol>
<li>60 분에 대 한 방울의 부 화, 후 주사기를 사용 하 여 작은 물방울을 포함 하는 잠금 튜브에서 초과 석유를 제거 합니다.</li>
		<li>작은 물방울에서 오일 interphase를 제거 하려면 PFO의 200 µ L를 추가 합니다. 참고: 튜브에 추가 PFO의 양을 생산 하는 작은 물방울의 수량에 따라 달라 집니다. 기름 층은 완전히 해산 될 때까지 계속 추가 PFO 추가.</li>
		<li>수집 된 agarose 구슬 10 분 1500 rpm에서 원심 분리 하 여 석유를 완전히 제거 하려면 차가운 PBS의 1 mL로 두 번 씻는 다.</li>
		<li>수집된 agarose 구슬 cytometry 사용 하 여 분석 합니다. 참고: 그것은 또한 형광 현미경 구슬 관찰 가능입니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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공개 하는 것이 없다.

이 프로토콜에서 우리는 로드 셀 높은 처리량, 단일 세포 분석용 방울에 캡슐화 하 고 통제 세포 세포 상호 작용 연구에 대 한 연결을 수행 하는 효율적이 고 간단한 기법을 증명 하고있다. 또한, 우리 로드 셀 미세 장치를 몇 가지 기존의 방법을 비교 하 고 접근을 로드 하는 우리의 끝 다른 방법에 비해 더 효율적인 기술 이다 보여주었다.
공부 임상 표본 또는 희귀 세포 유형 드롭릿 기반 마이크로 수에 부족 한 몇 가지 고유의 과제를 소유한 다. 처럼 우리는 또한 증명 하고있다, 셀 하는 경향이 주사기와 튜브의 표면에 퇴적, 예측된 값에 맞게 세포 캡슐화를 방지. 이 문제를 피하기 위해, 일부 그룹은 주사기에 교 반 막대를 사용 합니다. 그러나, 희귀 하 고 제한 된 세포 인구를 사용할 경우 요약 셀 볼륨도 제한 됩니다, 따라서, 큰 주사기의 사용을 제한 하 고 교 반 바. 또한, 우리 또한 테플론으로 코팅 셀 첨부 파일을 방지 하기 위해 튜브와 더 일반적으로 사용 되는 튜브를 교체 하지만이 메서드는 결과 개량 하지 않았다 고 튜브 너무 긴 경우 셀 첨부 파일 문제 악화 (데이터 표시 되지 않음). 또는, 우리 큰 주사기 볼륨에서 셀의 손실을 방지 하기 위해 주사기에 튜브에 셀 로드 어디 수직 튜브 로딩 방식을 사용. 이 기술을 사용 하 여, 작은 샘플 볼륨 셀 로드할 수 있습니다, 예를 들어, Pdc는 희귀 하 고 제한. 또한, 튜브에서 샘플 셀 침전을 방지 하기 위해 수직으로 장치에 로드 됩니다. 시드 셀 사용 하는 튜브 작은 크기 있으며 microchannels 비교 될 수 있다. 튜브에서 흐름 압력 중심 이며 포물선 속도 프로 파일26. 최대 흐름 속도 배관의 중심에는 및 최소 속도 튜브27의 가장자리에는 의미 합니다. 튜브를 통해 세포의 인구 홍 조, 속도 그라데이션 경계에서 속도가 0에 가까이 있기 때문에 그들은 진정 어디 가장자리 쪽으로 밀어 세포 발생 합니다. 침전 또는 셀에 튜브에서의 정착, 실험 데이터 예측 모델과 일치 하지 않는 대표적인 결과 같이 캡슐화 효율 감소.
드롭릿 마이크로 함께 일 하는 과학자 들에 의해 사용 되는 다른 일반적으로 적응된 솔루션 밀도 일치 하는 주사기19셀 침전을 방지 하기 위해 Iodinaxol와 같은 시 약의 추가 의해 세포 배양의 밀도 증가 하는. 그러나, 일치 하는 시 약 밀도 세포 행동 영향을 미칠 수 및 부정적인 cytokine 분 비 영향으로 세포가 (데이터 표시 되지 않음)28.
기존의 셀 기술 로드에 여러 크고 작은 수정 캡슐화 효율성에 약간의 개선을 보였다, 비록 획득된 실험 결과 여전히 않았다 일치 하지 이론적인 계산. 그러나, 접근을 로드 팁 우리는 극복 이전 메서드 및 캡슐화 효율의 한계 제어 포아송 통계 수 있습니다. 이 기술은 뿐만 아니라 현 탁 액 셀 로드에 유리 하지만 기본 keratinocytes 등 A549 미세 칩을 부착 셀 로드 되었을 수도 있습니다. 풍부한 셀 라인, 예를 들면 A549, K562, 등, 사용 하는 경우 더 큰 샘플 볼륨을 사용할 수 있습니다. 따라서, 샘플의 볼륨에 따라 다른 크기의 피 펫 팁을 사용할 수 있습니다 그리고이 간단한 기술은 단일 셀 캡슐화 및 여러 셀 캡슐화에 대 한 적용할 수 있습니다.
동안 낮은 셀 농도 방울에서 단일 세포의 캡슐화 확인 하는 데 필요한, 더 높은 세포 농도 셀 쌍에 관련 된 연구에 대 한 각 방울에 셀의 평균 수를 늘리기 위해 원하는. 이전에 미세 칩 또는 ﹙ nanowells29,,3031쌍 면역 세포를 설명 하는 여러 단일 셀 방법이 있다. 드롭릿 마이크로, 포아송 통계 두 개의 서로 다른 세포 유형 대 한 쌍을 1:1 셀 최적의 세포 농도에서 달성 될 수 있다 지시 한다. 푸아송 예측을 바탕으로, 또한 있다 확률 방울 다른 조합이 포함 될 수 있습니다. 1:1 셀 쌍 수 있지만 단일 셀 수준 및 증가 세포 이해에 결과에서 세포 상호 작용을 공부 하는 것이 좋습니다, 주요 이점이 있다 또한 여러 셀 페어링. 다른 셀 형식에 대 한 셀 형식의 여러 셀의 영향을 이해할 수 있습니다. 다른 면역 세포 간의 크로스 토크 여러 감염 및 병원 체에 대 한 효과적인 면역 반응을 생성 하는 데 도움이 하 고 또한 우리의 면역 시스템32에 견고성을 추가 합니다. 따라서, 셀룰러 통신 고유한 컨텍스트, 예를 들어, 1:1, 2:1, 1:2, 2:2, 3:1, 등에서 고정밀 심문 수 있습니다. 어떻게 단일에 저조한 증가 이해 또는 셀의 면역 반응의 유도 제어합니다. 이 특히 연구 예를 들어 순차적으로 세포를 죽 일 그들의 각각 대상 자연 킬러 세포 또는 세포 독성 T 세포의 용량 흥미롭습니다.
언급 했 듯이, 방울, 셀의 여러 캡슐화에 대 한 높은 셀 농도 원하는 됩니다. 그러나, 세포 샘플의 높은 농도 셀 캡슐화에 대 한 하나의 입구에서 세포를 로드할 때 셀 하면 입구에서 집계를. 이 결과 낮은 캡슐화 속도 이론에서 높은 편차. 이 문제를 피하기 위해, 셀 뿐만 아니라 두 개의 별도 후미에서 로드할 수 있습니다. 이론적으로, 그것은 셀 수 x에 평균 보증은 세포 캡슐화의 더 높은 수준을 달성 하기 위해 여러 개의 후미와 다른 미세 소자를 개발할 수 것입니다. 이 연구에서 우리는 하나의 입구와 같은 총 농도 사용 하 여 두 후미에서 로드 하 고 비슷한 캡슐화 효율을 얻은 Jurkat T 세포의 캡슐화 효율 조사. 이 수정 칩에 쌍 다른 세포 유형에 연구자를 수 있습니다.
이 메서드는 셀 셀의 상당한 손실 없이 미세 장치 로드에 에이즈, 동안 명심 될 필요가 있는 특정 예방 조치가 있다. 공기 방울의 미네랄 오일과 피 펫 팁에서 셀 샘플을 발음 주사기를 채울 때 피해 야 한다 하 고 전체 시스템 공기 무료. 그것은 또한 미네랄 오일 샘플 혼합 하지 해야 하는 것을 명심 하는 것이 중요입니다. 피 펫 팁, 포함 하는 샘플, 미세 장치와 누설 하 고 공기 방울의 추가 설립을 방지 하기 위해 최대한 예방의 후미에 단단히 삽입 한다. 요약 하면, 팁-로드 비용 효율적인 방식으로 셀의 상당한 손실 없이 세포 캡슐화를 통해 세포 행동의 높은 처리량 분석을 허용 하는 간단 하지만, 강력한 기술입니다. 입구에서 최적의 샘플 농도 함께 사용 하면 로드 셀 피 펫 팁의이 방법은 매우 유연 하며 다른 세포 유형, 특히 드문 기본 면역 세포에 대 한에 가까운 높은 캡슐화 효율를 위해 적응 시킬 수 있다 예측된 모델입니다.

최근 몇 년 동안, 단일 세포 수준에서 세포 분석을 위한 강력 하 고 다양 한 플랫폼으로 마이크로의 사용 급속 하 게 증가1있다. 이러한 플랫폼 단일 세포 및 높은 정밀도와 감도 매우 작은 샘플 볼륨2,,34를 사용 하 여 생물학 분자의 높은 처리량 검열을 제공 합니다. 미세 디자인의 다른 종류 중에서 물방울 기반 플랫폼 세포 정확 하 고 정확한 통제를 허용 하는 혼합할 수 없는 단계에 의해 포위 하는 수성 단계 물방울에서 그들을 분리 하 여 단일 셀의 높은 처리량 분석을 사용 microenvironment5,6. 드롭릿 기반 마이크로 제공 유연성을 단일 또는 다중 셀에, 둘 다, 수성 및 히드로 방울 고 단백질 분 비 또는 세포질 상호 작용7, 등의 복잡 한 세포 동작을 프로 빙에 가치가 있다 8 , 9. 신호 및 면역 세포 사이 잡담 microenvironment10에 있는 다른 세포와의 상호 작용에 의해 좌우 될 수 있다. 방울에 단일 셀의 절연 효과적인 잡음이 분석 실험실을, 더 효율적이 고 정확한 결과11,12에 대 한 외부 환경 요인의 영향에서 무료 제공합니다. 여러 종류의 세포 세포 상호 작용을 통해 셀 페어링12,13공부 캡슐화 가능 여러 후미와 물방울 미세 플랫폼의 디자인 수정
방울에 세포의 캡슐화 과정 무작위 이며 포아송 분포14,15에 대 한 수식을 사용 하 여 세포의 캡슐화의 속도 통계적으로 결정 될 수 있다. 캡슐화의이 속도 방울에 셀의 도착의 평균 속도 고려 하 여 예상할 수 있는 그리고 각 셀의 도착의 도착에서 독립 된 세포16. 독립적인 셀 도착을 보장할 수 없습니다, 비록 띄엄띄엄 분산된 셀의 경우, 독립의 가정으로 간주 될 수 있습니다. 및 셀의 수의 기능으로 하나 이상의 셀을 포함 하는 작은 물방울의 확률을 예측할 수 있습니다. 각 방울 방울16,17당 세포의 평균 수에 존재. 하나는 입구에서 세포의 농도 증가 셀 각 방울 에 평균 수를 늘릴 것 이라고 하는 것을 건의 할 수 있다 방울 세포 캡슐화의이 추정이 각 방울에 존재 하는 셀의 수에 따라 이기 때문에, 16. 따라서, 단일 세포 캡슐화를 위해 셀 농도 감소 되어야 한다 이것은 종종 단서 하지만 빈 물방울18의 다 수.
첨부 파일, 침전, 또는 주사기에 응집, 튜브, 또는 생산 장치에 의해 로드 하는 동안 세포의 손실은 일반적인 단점 예측된 캡슐화 값19 에서 실제 캡슐화 값의 편차에 대 한 책임 . 이 문제는 때 그들은 이미 인구에 부족 하 고 몇 가지 셀만, 훨씬 더 낮은의 캡슐화 예상 보다 제공 하지 않습니다 충분 한 데이터 실험 분석에 대 한 희귀 면역 세포 또는 임상 표본 시드 과장 더 가져옵니다. Plasmacytoid 수지상 세포 (pDCs)만 구성 하는 면역 세포의 드문 하위 집합은 약 0.2-0.6%의 전체 화이트 혈액 세포 인구20. 이 세포의 대량 분 비 interferons 활성화 유형 I와 함으로써 면역 반응21에 중요 한 역할. 방울 같은 희귀 세포의 세포질 행동 공부, 시드 셀 및 캡슐화22동안 세포 손실을 방지 하기 위해 필수적입니다. 몇 방울 방울 포함의 세대에 대 한 음향 또는 전기 힘과 같은 다른 물리적 힘을 활용 하는 적극적인 캡슐화 방법을 사용 하 여 단일 셀의 캡슐화 보장 관련된 개발 디자인 있다 단일 셀23,24. 그러나, 이러한 방법은 방울 생산16측면에서 그들의 자신의 한계를 가진다.
이 연구에서 우리는 강력 하 고 간단한 메서드를 circumvents 미세 장치 하나 또는 여러 개의 셀을 로드 하기 위한 전통적인 방법의 단점 설립. 우리의 노 외.에 의해 영감을 중요 한 샘플 손실 없이 물방울 미세 플랫폼 희귀 면역 세포의 작은 볼륨을 시드를 위한 다르게 크기의 피 펫 팁을 활용 하 여 메서드와 이론적으로 일관 된 결과 굴복 예측25. 이 방법론 쉽게 될 수 있습니다 및 성공적으로 하 게 물방울 기반 마이크로 관련 된 여러 응용 프로그램에 대 한 적응 하 고 다양 한 세포 유형 또는 심지어 미에 대 한 적용.

<table><tbody><tr><td>1H,1H,2H,2H-퍼플루오로-1-옥탄올&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>171468-5G</td><td></td></tr><tr><td>1H,1H,2H,2H-Perfluorooctyltriethoxysilane</td><td>Fluorochem/UK</td><td>S13150</td><td>실란 (독성)</td></tr><tr><td>Agarose (초저 겔화 온도)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; 9012-36-6</td><td></td></tr><tr><td>BD&nbsp; Wegwerpspuiten met Luer-Lok-punten</td><td>Fisher Scientific</td><td>10630694</td><td>Syringe</td></tr><tr><td>Biopsy Punch 1.2 mm</td><td>Harris Uni-Core</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell Proliferation Dye eFluro 670</td><td>eBioscience</td><td>65-0840-85</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace CFSE</td><td>Invitrogen</td><td>C34554</td><td></td></tr><tr><td>CellTrace Far Red Cell</td><td>Invitrogen</td><td>C34564</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Tubes</td><td>Eppendrof 튜브</td><td></td><td>Safe-Lok 튜브 1 mL 및 2 mL</td></tr><tr><td>유리 슬라이드</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS294775X38-72EA</td><td>Corning 현미경 슬라이드, 일반 L &times; 여 75&nbsp; mm &시간; 38&nbsp; mm</td></tr><tr><td>하버드 펌프</td><td>하버드 장치</td><td>C-400750; C-400727</td><td>주사기 펌프</td></tr><tr><td>HFE-7500 3M Novec 엔지니어드 플루</td>이<td>드 플루오로켐/영국</td><td>51243</td><td>플루린화 오일</td></tr><tr><td>Kai Biopsy Punch 5mm</td><td>Amstel Medical</td><td>1980130</td><td></td></tr><tr><td>Luer stub</td><td>Instechlabs/USA</td><td>LS20S</td><td>Luer stub, 20ga(핑크) x 0.5in(12mm), 비멸균</td></tr><tr><td>미네랄 오일(라이트)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M8410-1L</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate 완충 식염</td>수 <td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-50TAB</td><td>정제</td></tr><tr><td>Pico-Surf 1 (Novec 7500에서 5%)</td><td>Sphere Fluidics</td><td>020317-09</td><td>계면활성제</td></tr><tr><td>플라즈마 Asher</td><td>Emitech</td><td>K1050X&nbsp;</td><td>플라즈마 애셔</td></tr><tr><td>RPMI 1640 중간</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>실리콘 엘라스토머 베이스 184</td><td>실가드</td><td>9355218</td><td>PDMS 베이스</td></tr><tr><td>실리콘 엘라스토머 경화제&nbsp;</td><td>실가드</td><td>9355218</td><td>경화제&nbsp;</td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 카테터 커플러</td><td>Instechlab/USA</td><td>SC20/15</td><td>20ga x 15mm, 비멸균</td></tr><tr><td>TFE 테플론 튜빙</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>58696-U</td><td>PTFE 튜빙&nbsp; L &시간; O.D. &times; I.D. 50 ft &times; 1/16 에. &시간; 0.031 에.</td></tr><tr><td>Thinky 믹서 ARE-250</td><td></td><td>EX-4025F</td><td>컨디셔닝 혼합물</td></tr></tbody></table>

피 펫 팁 드롭릿 미세 플랫폼 시드 셀에 대 한 메서드를 기반으로

A Pipette-Tip Based Method for Seeding Cells to Droplet Microfluidic Platforms

다양 한 미세 플랫폼 디자인 세포 분석에 자주 사용 되, 사이 방울-마이크로 분리 하 고 세포에 외부 요인의 영향을 제거 하 여 세포를 단일 세포 수준에서 분석 하기 위한 강력한 도구를 제공 합니다. microenvironment입니다. 방울에 세포의 캡슐화는 각 방울에 존재 하는 셀의 수와 물방울의 부피 당 세포의 평균 수의 함수로 포아송 분포값에 의해 결정 됩니다. 1 차 셀, 특히 면역 세포, 또는 임상 표본 부족 수 있으며 셀의 무손실 캡슐화 유지 도전. 이 문서에서 우리는 로드 셀 셀의 상당한 손실 없이 미세 물방울 기반 장치에에 피 펫 팁을 사용 하는 새로운 방법론 제시. 다양 한 세포 유형으로 밀접 하 게 캡슐화 효율 포아송 분포에 의해 예측에 해당 하는 물방울에 효율적인 셀 캡슐화를 설명 합니다. 우리의 방법은 미세 플랫폼 셀의 무손실 로드를 보장 하 고 다운스트림 단일 세포 분석, 예를 들어, 다른 세포 유형 사이 세포 상호 작용 해독을 위해 쉽게 적용할 수 있습니다.

우리의 실험 3-입구 PDMS 기반된 미세 장치 25 미크론 (그림 1)의 높이를 사용 했습니다. 이 장치 설치, 우리 셀 정지 또는 미디어 수성 단계를 홍 조에 대 한 계면 활성 제와 두 개의 내부 후미 오일 홍 조에 대 한 외부 입구를 사용 합니다. 세대 수집 후에, 작은 물방울 cytometry 흐름 사용 하는 다운스트림 분석 하기 전에 몇 시간 칩에서 incubated는. 인큐베이션 기간 동안 혈 청 구성 요소는 미디어에는 계면 활성 제와 상호 작용 하 고 불안정 하 고 분해 하는 방울을 발생할 수 있습니다. 그러므로 계면 활성 제에의 한 최적화 된 농도 불 기름에 추가 중요 하다. 우리 조 혈 혈 청 무료 문화 미디어 불 기름에 계면 활성 제의 다른 농도가 2% 인간의 혈 청으로 보충을 포함 하는 monodispersed 작은 물방울의 안정성을 테스트. 그것은 추정 될 수 있다 그림 2<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57848/57848fig1.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57848/57848fig1large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57848/57848fig2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57848/57848fig2large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57848/57848fig3.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57848/57848fig3large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57848/57848fig4.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57848/57848fig4large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57848/57848fig5.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57848/57848fig5large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57848/57848fig6.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57848/57848fig6large.jpg" target="_blank"></a>

이 문서 시드 방울에 세포의 캡슐화 능률을 제공 하기 위해 물방울 미세 장치에 피 펫 팁을 사용 하 여 셀의 부족 한 인구를 위한 프로토콜을 제공 합니다.

Amongst various microfluidic platform designs frequently used for cellular analysis, droplet-microfluidics provides a robust tool for isolating and ...

이 방법론을 물방울 기반 미세 유체학과 통합하면 단일 세포 또는 병원체 간의 세포 이질성 및 통신을 코딩하기 위해 시스템 면역학 분야와 관련된 주요 질문에 답하는 데 도움이 됩니다. 우리가 개발 한이 기술의 주요 장점은,이 팁 로딩 절차는 밀접하게 예측 된 퍼센트 분포와 일치하는 방울에 희귀 세포의 캡슐화를 할 수 있다는 것입니다. 이 방법의 시각적 데모는 파이펫 팁을 사용하여 세포를 성별 된 물방울에 로드하고 물방울에서 셀을 검색하는 방법을 이해하기 위해 중요합니다.수성 액적 생성을 위한 팁 로딩의 경우 먼저 3밀리리터의 계면활성제를 밀가루 오일 2밀리리터에 넣고 오일 상 혼합물을 2.5 밀리리터 주사기로 그립니다. 주사기에서 기포를 제거하고 주사기를 적절한 길이의 테플론 튜브 조각에 연결합니다. 적절한 양립할 수 있는 미네랄 오일로 두 개의 샘플 주사기를 적재하고 주사기를 적절한 길이의 테플론 튜브의 두 번째 조각에 연결합니다.다음으로, 경화 EDMS 슬래브에서 직경 5밀리미터 직경 폴리디메틸실록산 또는 PDMS 플러그를 펀치하고 플러그의 중심을 통해 1밀리미터 구멍을 펀치. 플러그를 200 마이크로리터 파이펫 팁의 상단 끝에 단단히 삽입하고 양호환 미네랄 오일 주사기에 부착된 튜브를 플러그에 삽입합니다. 주사기 플런저를 천천히 누르고 파이펫 팁을 미네랄 오일로 채우면 잔류 공기를 모두 밀어내게 됩니다.시료 주사기와 밀가루 오일 주사기를 주사기 펌프에 조심스럽게 배치합니다. 모든 공기가 제거되면 각 파이펫 팁을 샘플 용액으로 낮추고 약 100 마이크로리터의 셀 샘플을 팁에 흡인시합니다. 다음으로, PDMS 칩의 두 개의 내부 입구에 시료 함유 파이펫 팁을 모두 삽입하고 오일 상 혼합물을 함유한 튜브를 외부 입구에 삽입한다.지시된 대로 주사기 펌프의 유량을 설정하고 각 주사기의 치수를 입력하고 설정합니다. 펌프를 시작하여 장치의 내부 채널을 통해 시료 솔루션을 플러시하고 장치의 외부 채널을 통해 오일 위상을 낸다. 그런 다음 적절한 길이의 튜브 조각을 콘센트에 연결하여 액적 형성이 안정되면 물방울을 수집하기 시작하여 잠금 튜브의 물방울을 수집합니다.모든 액적이 수집되면, 적절한 실험 기간 동안 슬럼없이 RPMI 배지 200 마이크로 리터를 추가하고, 물방울 위에 샘플을 배양한다. 에멀젼 파손의 경우 먼저 PFO 2밀리리터를 8밀리리터에 넣고 주사기를 사용하여 물방울 수집 튜브 의 바닥에서 과도한 오일을 제거합니다. 그런 다음 에멀젼에 20%PFO 용액의 100마이크로리터를 추가하여 캡슐화된 세포를 수성 상으로 방출하고 튜브를 짧게 탭하여 혼합합니다.PFO가 세포에 해로울 수 있다는 것을 잊지 마십시오. 따라서 PFO와의 접촉을 최소한으로 유지하십시오. 1~2분 후, 가능한 가장 낮은 상대 원심력으로 30초 간 용액을 회전시키고 수성 분수 550마이크로리터를 차가운 PBS 500 마이크로리터가 들어있는 새로운 잠긴 튜브로 즉시 전송하여 2%의 태아 종아리 혈청 또는 FCS로 보완합니다.잔류 오일이 새로운 잠금 튜브의 바닥으로 가라앉게 하고 수성 상이 포함된 세포의 950 마이크로리터를 새로운 잠금 튜브로 조심스럽게 이송하십시오. 수중 상과 함께 오일이 새로운 잠금 튜브로 전달되지 않았는지 확인하십시오. 그런 다음 원심 분리에 의해 세포를 수집하고 2 %FCS로 보충 신선한 감기 PBS의 300 마이크로 리터에서 펠릿을 다시 중단합니다.팁 로딩 접근법을 방금 입증한 바와 같이, 통계적으로 예측된 값과 일치하는 Jurkat T 셀 캡슐화 속도를 얻을 수 있다. 놀랍게도, 종양 세포와 같은 부착 세포, 덩어리 경향이 있는 종양 세포, 또는 혈장 세포 수지상 세포와 같은 희소한 세포에도, 향상된 캡슐화 효율이 관찰됩니다. 이 대표적인 캡슐화 동안, 액적은 극저겔링 온도 아가로즈를 사용하여 재생되고 제조 후 겔화되어 현미경 검사법과 유동 세포측정을 통해 후속 다운스트림 분석을 허용하는 아가로즈 하이드로겔 구슬을 형성한다.현미경 분석에 따르면 세포 페어링은 유동 세포측정에 의한 하이드로겔 구슬의 동일한 집단의 높은 처리량 세포 페어링 및 분석을 나타내는 상이한 조합에서 달성되었으며, 세포가 없는 구슬은 서로 다른 전방 및 측면 산란 패턴을 기반으로 세포와 구슬과 분리될 수 있음을 밝혔다. 실제로, 세포 없이 구슬의 인구에 게이팅세포와 비드 인구에 게이팅하는 동안 형광 신호의 부재에 의해 세포 캡슐화의 부족을 확인 다른 표지 Jurkat T 세포의 캡슐화를 나타내는 다중 하위 집단의 존재를 밝혔다. 이 방법을 사용하는 동안 세포 농도가 제한 요소이며 효율적인 세포 캡슐화 및 세포 페어링을 보장하기 위해 최적화되어야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.이 절차에 따라, 하나 또는 두 개의 세포가 고효율을 가진 물방울에 캡슐화 될 수 있을 뿐만 아니라, 다중 세포, 또는 세포 모형은 세포 마이크로 환경의 보다 정확한 복제를 위해 캡슐화될 수 있다. 이 기술은 무소음 환경에서 세포 행동을 연구하기 위해 흉터 세포 인구의 최적 활용과 물방울의 효율적인 캡슐화를 위해 면역학 및 관련 분야의 연구자들이 길을 열어줄 것입니다.

a-pipette-tip-based-method-for-seeding-cells-to-droplet-microfluidic

Research

연구

JoVE Journal

Engineering

공학

이 문서에서 우리는 쥐를 기본의 연결을 문화와 아르나의 증폭을 사용하여 후속 transcriptome 분석에서 단일 세포의 수확을위한 간단한 방법을 설명합니다. 이러한 접근 방식은 모든 세포 유형에 generalizable있다.

단일 셀 Transcriptome 분석

그들은 kHz에서 속도 저렴 picoliter, 자기들에게만 혈관을 생성할 수 있기 때문에 비말 기반 microfluidic 플랫폼은 높은 처리량 실험을위한 유망한 후보자 있습니다. 빠르고, 민감하고 고해상도 형광 spectroscopic 방법과의 통합을 통해 이러한 시스템 내에서 발생하는 정보의 다량은 효율적으로 추출 무력화하고 이용하실 수 있습니다.

microfluidic 비말 플랫폼 형광 검출 방법

여기 셀 강성을 측정 할 수있는 빠르고 간단한 방법을 설명합니다. 이 방법의 일반적인 원리는 세포 표면에 micropipette를 통해 적용 잘 정의 된 부정적인 압력에 대한 응답으로 막 변형을 측정하는 것입니다. 이 방법은 기판에 연결된 세포의 biomechanical 속성을 연구 할 수있는 강력한 도구를 제공합니다.

기판에 연결된 전지의 Micropipette의 열망은 셀 강성을 추정하기 위해

출처: Sutlief, A. L. 외 자동화된 고처리량 마이크로유체 시스템을 이용한 Pseudomonas aeruginosa 의 전단 응력에 대한 생세포 분석. J. Vis. 경험 (2019).이 영상은 박테리아 배양에서 전단 응력 연구를 위한 마이크로플루이딕 플레이트 준비 과정을 보여줍니다. 채널에 배지를 프라이밍한 후, 박테리아 세포를 실험 채널에 도입하여 부착을 위해 배양합니다. 잔류 배지와 배양물을 제거하여 이후 전단 응력 실험을 준비합니다.

박테리아 세포를 이용한 마이크로플루이딕 플레이트 준비

우리는 마이크로 스케일 세포 자극 실험에 자동 세포 배양 및 심문 플랫폼을 개발했습니다. 플랫폼은 양성 세포의 작은 인구를 자극 분자 분석을위한 해물을 복구하는 간단한 다목적 및 정밀한 컨트롤을 제공합니다. 플랫폼은 물론 귀중한 세포 및 / 또는 시약을 사용하는 연구에 적합합니다.

마이크로 스케일 세포 자극 실험을위한 다목적 자동화 플랫폼

세균 mechanosensitive 채널은 생체 분자 장치에서 mechanoelectrical 트랜스 듀서로 사용할 수 있습니다. 물방울 인터페이스 이중층 (DIB의), 이러한 장치에 휴대 영감 빌딩 블록, 통합 및 mechanosensitive 채널을 자극하는 새로운 플랫폼을 나타냅니다. 여기서 우리는, DIB의 형성 기계적인 자극에서 mechanosensitive 채널의 연구를 허용하는 새로운 마이크로 피펫 기반 방법을 보여줍니다.

다기능, 물방울 인터페이스 이중층에서 세균 Mechanosensitive 이온 채널의 설립과 자극에 대한 방법을 마이크로 피펫 기반

여기에서는 모세관 기반 원심 미세유체 장치를 사용하여 크기 제어 가능한 단분산 W/O(Water-in-Oil) 미세방울에 대한 간단한 생산 방법을 보여줍니다. 이 방법은 소량의 시료만 필요하며 고수율 생산이 가능합니다. 우리는 이 방법이 신속한 생화학 및 세포 분석에 유용할 것으로 기대합니다.

단 분산 미세 방울의 크기가 제어 형성을위한 모세관 기반 원심 미세 유체 장치

여기에서는 고효율 단세포 분리 및 장기 클론 배양을 가능하게 하는 새로운 마이크로웰 설계 개념을 활용하는 미세유체 플랫폼으로 단일 세포를 분리 및 배양하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

높은 처리량 단일 세포의 분리 및 문화를위한 미세 유체 플랫폼

프로토콜에는 회전 타원 체에 perfusable 혈관 네트워크를 설계 하는 방법을 설명 합니다. 회전 타원 체의 주변 microenvironment 신생 유도 microchannels 미세 장치에는 회전 타원 체 연결을 고안 이다. 메서드를 사용 하면 3 차원 문화에 오랫동안 기다려온 기술 회전 타원 체의 관류를 수 있습니다.

미세 소자에서 조직 모델 perfusable 혈관 네트워크

이 프로토콜은 개별 인간 말초 혈액 단핵 세포의 사이토카인 분비 역학을 정량적으로 측정하기 위한 고급 미세유체 플랫폼을 설명합니다. 이 플랫폼은 예를 들어 지질다당류로 자극된 각 개별 세포에 대해 최대 3개의 사이토카인(IL-6, TNFα 및 IL-1β)을 병렬로 측정합니다.

개별 다기능성 세포의 동시 및 순차적 사이토카인 분비를 해결하기 위한 미세유체 접근법 

이 프로토콜은 처리량이 많은 스캐폴드 기반 배양 플랫폼인 SPOT의 제작 및 조립을 96웰 및 384웰 형식으로 문서화합니다. 또한 수동 및 상업적으로 이용 가능한 액체 처리기를 사용하여 SPOT의 파종 프로세스에 대해 자세히 설명합니다.

고처리량 스캐폴드 기반 배양 플랫폼으로서의 SPOT의 재현 가능한 제조

배우세요 피펫 팁을 이용한 드롭릿 미세유체 장치에서 희귀 세포 캡슐화 방법을. PDMS 칩과 미세유체학을 활용하여 Jurkat T 세포 및 희귀 면역 세포의 효율적 캡슐화와 세포 간 상호작용을 연구할 수 있습니다.

피 펫 팁 드롭릿 미세 플랫폼 시드 셀에 대 한 메서드를 기반으로

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