Name: Murine Orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 Murine 과격 한 유 방 절제술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 5 s
Description: 학습하세요 생체 발광 영상을 활용한 쥐 유방암 정위 이식 모델 생성 및 과격한 유방절제술 수행 방법을. 이 모델은 높은 종양 발생률과 낮은 국소 재발률로 인간 유방암 진행 및 치료 연구에 활용됩니다.

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이 작품 K.T. 마우스 생물 발광 이미지 공유 리소스 로스웰 파크 변환 영상 공유 리소스에 의해 취득 되었다 NIH 그랜트 R01CA160688와 수잔 G. 코 멘 재단 조사 시작 연구 그랜트 (IIR12222224)에 의해 지원 되었다 종합 암 센터, 암 센터 지원 그랜트 (P30CA01656)과 공유 계측 그랜트 (S10OD016450)에 의해 지원 되었다.

로스웰 파크 종합 암 센터 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 승인을 얻은 모든 실험에 대 한.
참고: 12 주 오래 된 여성 BALB/c 마우스 9 얻을 수 있습니다. 4T1 luc2 셀, 마우스 유 방 선 암 세포 라인 BALB/c 마우스에서 파생 된 표현 luciferase 하도록 설계 되었습니다 사용 됩니다. 이러한 세포 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 로스웰 파크 기념 연구소 (RPMI) 1640 매체에 교양.
1입니다. 악기의 준비
<ol><li>조직 문화 후드에 얼음에 냉동된 젤라틴 단백질 혼합물 (예를들면, Matrigel)를 녹여.</li>
	<li>깨끗 하 고 압력솥 2 수술 전에 수술 악기 (기정, Adson 집게가 위와 바늘 홀더)의 세트. 멸 균된 5-0 비단 봉합 준비 하 고 (때 직렬 수술은 계획 되는) sterilant를 건조.</li>
	<li>클립은 클리퍼를 사용 하 여 마우스의 중간 가슴 털 고 펀칭 수술 전 귀 여 식별에 대 한 마우스를 표시 합니다.</li>
	<li>
작업에 즉시 사용할 수 있는 프로시저 테이블을 준비 합니다.
	<ol>
<li>흡수 성 패드를 확산 하 고 테이프로 모서리를 수정, 운영 공간 옆에 있는 테이프, sterilant 및 살 균 제 (액체, 요오드, 및 75% 에탄올)을 넣어 마 취 코 콘을 수정 작업 순서에 쥐를 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. (10 쥐)에 대 한 셀의 준비
참고: 셀을 감소 세포 생존 능력을 피하기 위해 접시에서 분리 되 고 후 1 시간 이내 주사 한다. 특히, 세포 현 탁 액 15 분 이내 젤라틴 단백질 혼합물으로 그들의 생존을 유지 하기 위해 접시에서 세포를 분리 후 혼합 한다.
<ol><li>문화 4T1 luc2 셀 마우스 유 방 선 암 셀 라인 표현 luciferase RPMI 1640 미디어 10%에서 5% CO2에서 37 ° C에서 습도 인큐베이터에서 FBS.</li>
	<li>워시와 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 10 mL 혈 청 학적인 피 펫을 사용 하 여 10 cm 접시에 부착 4T1 luc2 셀. P1000 피 펫을 사용 하 여 0.25 %trypsin 1 mL을 추가 하 고, 다음, 5 분 동안 37 ° C에서 샘플을 품 어. 그런 다음, 성장 미디어의 4 개 mL를 추가 (RPMI-1640 10 %FBS) 5 mL 혈 청 학적인를 사용 하 여 플라스틱 및 조직 문화 후드에 15 mL 원뿔 튜브에 세포 현 탁 액을 전송. 180 x g 5 분 동안에 세포 현 탁 액 원심</li>
	<li>발음은 상쾌한 고 2 ml PBS;의 셀 resuspend 그런 다음는 hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 합니다.</li>
	<li>조직 문화 후드에 차가운 PBS (pH 7.4, 4 ° C)의 40 μ 2 x 106 4T1 luc2 셀을 일시 중단 합니다.</li>
	<li>조직 문화 후드에 얼음에 1.5 mL microcentrifuge 튜브에 젤라틴 단백질 혼합물의 360 μ와 40 μ 세포 현 탁 액을 섞는다. 참고: 최종 농도 1 x 105/20 μ (1:9 PBS: 젤라틴 단백질 혼합물). Orthotopic 모델 (절제술), 1 x 104/20 μ 최종 농도의 2 주 안에 안락사 기준 (종양 크기 > 2 c m)를 도달 하는 피하기 위해, 사용 되었다.</li>
</ol>3. 암 세포 접종
<ol><li>생쥐는 침착 하 게 숨을 쉴 때까지 2-4 %isoflurane 및 0.2 L/min 산소 흐름 마 취 유도 실에서 쥐를 넣어 (2-3 분).</li>
	<li>마우스를 파악 하 고 그것의 어깨에 0.05 mg/kg buprenorphine를 피하 주사.</li>
	<li>발가락 핀치에 반응의 부족으로 적절 한 마 취를 확인 합니다. 2-4 %isoflurane 숯 용기 단위에 연결 된 2 L/min 산소 흐름 inhalational 마 취 수 있는 마우스 마스크의 구멍으로 마우스의 코를 삽입 합니다.</li>
	<li>랩 테이프를 사용 하 여 마우스의 사지를 구속 하 고 액체, 요오드, 면봉을 사용 하 여 75% 에탄올을 사용 하 여 피부를 소독.</li>
	<li>메 마른 서가 위, 오른쪽 절 개 옆 피부 고 피부는가 위를 사용 하 여 가슴 벽에서 분리 하 고 다음, 오른쪽 #2 노출 피부 반전 리프트를 이용 하 여 앞쪽 가슴 벽 중간에 5mm 피부 절 개를 하 게 유 방 지방 패드입니다.</li>
	<li>신중 하 게 20 μ 28.5 G 바늘으로 상처를 통해 직접적인 비전 아래 지방 패드에 1 mL 인슐린 주사기를 사용 하 여 암 세포 현 탁 액의 주사. 참고: 바늘 없는 피부 상처를 통해 간다. 공고히 젤라틴 단백질 혼합물에 대 한 시간을 수 있는 계속 당기는 그것을 밖으로, 5 s 이전에 대 한 지방 패드에 바늘을 들고.</li>
	<li>살 균 5-0 비 흡수 봉합을 사용 하 여 바느질, 여 피부 절 개를 닫습니다.</li>
	<li>수술 후, 깨끗 한 케이지를 동물을 반환 하 고 그들은 회복 하 고 자유롭게 이동 하는 때까지 그들을 모니터링 (후 ~ 1-2 분). 동물 건강 수술의 24 시간 이내에 표시 되지 않으면, buprenorphine (0.2 mg/kg)를 관리 합니다.</li>
	<li>마 취 봉합을 제거 (단계 3.1 참조)는 수술 후 7 d.</li>
</ol>4입니다. 유 방 절제술
참고: 유 방 절제술의 타이밍은 매우 중요 하다. 너무 일찍 완료 되 면 폐 전이 발생 하지 않습니다. 너무 늦게 완료 되 면 기본 종양 주요 혈관, 완전 한 종양 절제를 도전 할을 침공 했다. 따라서, 여러 시간 점 어떤 시간 포인트 제작 전에 절제 된 너무 도전적인 전이 대 한 대기에 적절 한 균형을 결정 하는 유 방 절제술에 대 한 테스트 되었습니다. 이렇게 50 마우스 실험에서 그것은 암 세포 접종 후 8 일에 유 방 절제 (또는 종양 크기 5 m m를 도달 하는 때)는 이상적인 시연 했다13균형을 달성 하기 위해 포인트를 시간.
<ol><li>2-4% 흡입 isoflurane와 마우스 anesthetize 및 buprenorphine 주사 (3.1, 3.2 단계 참조).</li>
	<li>마우스를 억제 하 고 피부를 소독 (단계 3.4 참조).</li>
	<li>서가 위를 사용 하 여 초기 암 세포 접종에서 외과 흉터에서 왼쪽에 5mm 피부 절 개를 2 mm를 확인 합니다. 종양 제거 forelimb의 루트 쪽으로 절 개를 확장, 피부 등 수술 흉터, 겨드랑이 림프절 분 지로 서 종양, 연락 병 변에서 대부분의 시간 아니 보이는 림프 노드는 mastect의 시간에 존재 omy13. 겨드랑이 정 맥 손상 되었는지 확인 합니다.</li>
	<li>"Y"의 형태로 살 균 5-0 비 흡수 봉합을 사용 하 여 바느질, 여 피부 결함을 닫습니다.</li>
	<li>단계, 3.8에서와 같이 그들이 복구 될 때까지 깨끗 한 케이지 및 모니터에 마우스를 반환 합니다.</li>
	<li>마 취 봉합을 제거 (단계 3.1 참조) 수술 후 7 일.</li>
</ol>5. 발광 부 량 기본 종양 (유 방 절제술 없이 Orthotopic 접종) 또는 폐 전이 (유 방 절제술 모델)
참고: 기본 종양 부담 정량화는 생물 발광 측정된 2x orthotopic 접종 후 하루에서 일주일입니다. 폐 전이 정량화는 생물 발광 측정된 2x는 유 방 절제술 후 하루에서 일주일입니다.
<ol><li>Dulbecco의 인산 염 버퍼 식 염 수 (DPBS) 조직 문화 후드에서 15 mg/mL의 최종 농도에서 D-소를 용 해. 1.5 mL 빛 차폐 microcentrifuge로 튜브 aliquot 합니다. -80 ° c.에 희석된 솔루션 저장 참고: 20 g 마우스 희석된 D-소의 200 µ L가 필요 합니다.</li>
	<li>이미징 소프트웨어를 열고 초기화를 클릭 합니다. 참고: 그것은 충전-결합 소자 (CCD)을 약 15 분 걸립니다. CCD에서 설정된 온도 도달 하면 온도 바의 색 빨강에서 녹색으로 바뀝니다.</li>
	<li>Anesthetize 영상 전에 전용된 유도 실에서 2-4 %isoflurane 쥐 (단계 3.1 참조).</li>
	<li>쥐의 무게.</li>
	<li>D-소 28.5 G의 바늘을 사용 하 여 중간 복 부 지점에서 intraperitoneally 150mg/kg을 주사.</li>
	<li>코 콘 부정사 위치 (장소 최대 동시에 5 쥐)에 이미징 시스템 내부의 각 마우스에 맞게. 코 콘을 통해 이미징 동안 1%-3% (100% 산소)에서 isoflurane에 마 취를 유지 합니다.</li>
	<li>
50 분 (또는 확인된 피크 생물 발광) 피크 생물 발광을 감지 하는 이미지를 마다 5 분을 캡처하십시오.
	<ol>
<li>자동, 매체, Binning 및 필드의 보기 D로 발광 을 선택 합니다.</li>
		<li>취득 은 이미지를 클릭 하십시오.</li>
	</ol>
</li>
	<li>그들의 cage(s)에 쥐를 반환 하 고 그들은 (단계 3.8 참조) 회복 될 때까지 그들을 감시.</li>
</ol>6. 폐 전이 종양 부담 정량화 Ex Vivo 영상으로
참고: 폐 전이 정량화 orthotopic 접종 모두와 함께 유 방 절제술 모델 없이 적용 됩니다. 유 방 절제술 모델에서 ex vivo 영상 또는 생존 관찰 목적에 따라, 선택 됩니다. Orthotopic 접종 (절제술) 없이 모델에서 대부분의 경우 기본 종양 크기 안락사 기준 (> 2 cm) 접종 후 약 21 일 생산.
<ol><li>Ex vivo 영상에 의해 암 세포 접종 후 21 일 폐 전이성 병 변 계량.</li>
	<li>Anesthetize 전용된 유도 실에서 2-4 %isoflurane 쥐 (단계 3.1 참조).</li>
	<li>쥐의 무게.</li>
	<li>Intraperitoneally D 소 150 mg/kg을 주사 (단계 5.6 참조).</li>
	<li>자 궁 탈, 주사 후 15 분 여 쥐를 안락사.</li>
	<li>곡선된 메이 요가 위를 사용 하 여 중간 복 부에 피부와 복을 절단 하 여 복 부를 엽니다. 오른쪽과 왼쪽 모두에 절 개를 확장 합니다. 횡 경 막의 시각 이다; 때까지 집게와 함께 간 밖으로 끌어 그런 다음에 횡 경 막 잘라.</li>
	<li>Caudad에서 양측 갈비뼈를 잘라 곡선된 메이 요가 위를 사용 하 여 (제 12 늑 골)에 cephalad 앞쪽 가슴 벽을 대칭 이동 하 여 폐를 폭로 (1 골).</li>
	<li>집게를 사용 하 여 폐를 해제 하 여 척추, 폐를 연결 코드 처럼 보이는 흉부 식도 식별 하 고, 그러면 서가 위를 사용 하 여 식도 잘라.</li>
	<li>양측 폐와 심장 집게 (견인 잡아당기는의 방향에 cephalad에 caudad 적용)을 사용 하 고, 다음, 기관 및 주요 혈관에서 폐 꼭대기 잘라 리프트는 cephalad, 서가 위를 사용 하 여. 참고: 폐 및 심장 신체에서의 격리에 대 한 수 있습니다.</li>
	<li>서가 위를 사용 하 여 폐에서 심 혼을 제거 합니다.</li>
	<li>10 cm 배양 접시에에서 폐를 넣어.</li>
	<li>생물 발광 이미지를 캡처 (5.7.1 및 5.7.2 단계 참조) 안락사 (소 주사 후 20 분) 후 5 분.</li>
</ol>

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저자는 공개 없다.

지난 10 년 동안 우리가 유 방 암 모델3,7,13,,1620,21을 포함 한 여러 murine 암 모델을 수립 되었습니다. 이전에 우리가 직접 비전 유선 조직에 유 방 암 세포 orthotopic 접종7 수술 절 개 없이 젖꼭지 주위 세포 주입에 비해 적은 크기 가변성 더 큰 종양을 제작 시연 . 이 모델에는 젤라틴 단백질 혼합물에 세포 현 탁 액을 이용 하 여 향상 되었습니다. 혼합물을 일시 중단 하는 젤라틴 단백질 세포에 의해 생성 된 종양의 더 적은 가변성 라운드, 그 PBS 정지 세포에 의해 생성 하는 반면 유선<sup cla...

동물 모델 연구에 핵심 역할을 한다. 가설을 생체 외에서 입증 하는 때 그것의 임상 관련성을 평가 하는 vivo에서 시험 되어야 한다. 암 진행과 전이 종종 더 나은 잡혀 체 외 모델에 비해 동물 모델 그리고 약물 개발1,2에 대 한 전 임상 연구로 동물 모델에서 신약을 테스트 것이 필수적입니다. 그러나, 동물 실험의 기술적인 세부 사항은 종종 모델을 성공적으로 재현에 도전 하는 게시 된 기사에서 잘 기술 된다. 사실, 이러한 orthotopic 접종 및 절제술 모델 설립 저자는 시행 착오의 길고 엄격한 과정을 통해 갔다. Tumorigenesis 후 암 세포 접종 중 하나 이며 성공 여부를 결정 하는 주요 인 동물의 효율성의 연구3. 셀 라인 및 세포 접종, 접종 사이트 및 쥐의 긴장의 수는 모두 중요 한 요소. 그것은 잘 알려진 체 외 기법에 비해 개별 차이 동물 실험의 결과에 큰 변화는. 따라서, 표준 기술로 잘 설립 모델을 사용 하 여 안정적인 결과, 동물 실험의 효율성을 개선 하 고 잘못 된 결과 피하기 위해 중요 하다.
이 종이 잘 설립 기법4 유 방 암 orthotopic 및 절제술 마우스 모델을 생성 하를 제공 합니다. 이 방법의 목표 1) 인간의 유방암 암 진행 및 치료 과정을 모방 하 고 2) 더 큰 효율성과 다른 유 방 암 접종 또는 유 방 절제술 기법에 비해 높은 성공률 생체 조건 실험을 실시 하. Orthotopic 암 세포 접종에서 인간의 유방암 암 진행, 모방을 우리 선택 #2 유 방 지방 패드 접종 사이트로, 가슴에 있는. 연구의 대부분에서는, 유 방 암 세포는 피하 주사는5. 이 기술은 수술을 요구 하지 않는다 그리고, 따라서, 그것은 간단 하 고 간단. 그러나, 피하 microenvironment 다른 암 진행에도 분자 프로 파일6,7결과 유선 microenvironment에서 매우 다르다. 일부 연구는 복 부에 있는 #4 유선을 사용 하 여 접종 사이트6. 그러나, #4 유 방 동맥은 복 부에 위치 하 고 있습니다, 가장 일반적인 전이성 패턴 이므로 복 수7, 전이성 유방암 암8의 10% 미만으로 발생 하는. 유 방 암 #2 유선에 여기 제시 하는 기술에 의해 생성 된 가장 일반적인 유 방 암 전이성 사이트9중 폐에 metastasizes.
이 기술은 목표와 다른 유 방 암 접종 기법에 비해 최소한의 종양 크기 변화 더 높은 tumorigenesis 속도 달성 하기 위해 이기도 합니다. 이렇게 하려면 암 세포는 젤라틴 단백질 혼합물에 중간 앞쪽 가슴 벽 절 개를 통해 직접 비전 주사 됩니다. 이 기술은 종양 크기와 모양이 이전에 보고 된3,7피하 또는 비-외과 주사에 비해 적은 변동성으로 높은 tumorigenesis 속도 생성 합니다.
우리는 또한 orthotopic 유 방 종양 주변 조직 및 겨드랑이 림프절 절제는 마우스 급진적 절제술 기법을 소개 합니다. 임상 설정에서 먼 전이 질병 없이 유방암 환자에 대 한 치료의 표준 유 방 절제술10,11이다. 유 방 절제술, 전에 겨드랑이 림프절 전이 이미징 및 센 티 넬 림프절 생 검에 의해 조사 했다. 겨드랑이 림프절 전이의 증거가 있는 경우에, 환자는 전체 또는 부분 유 방 절제술, 겨드랑이 림프절 절제를 생략 하면 다음 처리 됩니다. 총 유 방 절제술은 일괄적, 전체 유 방 조직으로 유방암 resect 기술 부분 유 방 절제술은 정상 유 방 조직만, 주변의 여백으로 유방암 resect 반면 나머지 정상 유 방 조직에 따라서 보존은 환자입니다. 그러나, 부분 유 방 절제술 후 남아 있는 정상적인 유 방 조직을 유지 하는 환자10현지 재발 피하기 위해 수술 후 방사선 치료를 필요 합니다. 겨드랑이 림프절 전이 수행 모든 정상으로 유방암을 제거 하는 과격 한 유 방 절제술 환자 조직과 겨드랑이 림프절을 유 방 하 고 조직 en 블록10,11을 침공. 마우스 모델에서 겨드랑이 림프절 전이 및 수술 후 방사선에 대 한 감시가 아니다 합리적인 또는 가능한. 따라서, 우리는 로컬 또는 겨드랑이 림프절 전이 피하기 위해 과격 한 유 방 절제술 기법을 이용 한다.
꼬리 정 맥을 통해 암 세포 접종은 가장 일반적인 폐 전이 마우스 모델12, 소위 "실험적인 전이". 이 모델 생성 하기 쉽습니다와 수술; 필요 하지 않습니다. 그러나, 그것은 결과가 발생할 수 있습니다 다른 전이성 질병을 인간의 유방암 암 진행을 모방 하지 않습니다. 전이 종종 유 방 절제술 후 발생 하는 인간의 유방암 암 치료 과정을 모방 하기 위해 기본 종양 orthotopic 암 세포 접종 후 제거 됩니다. 이 기술은 이전에 보고 된13, 간단한 종양 절제술에 비해 적은 지역 되풀이 생성 하 고 새로운 치료제, 임상 연구, 그리고 전이성 유 방 암 연구 연구에 대 한 유용. 여기서 설명 대부분 유 방 암 orthotopic 모델 실험에 대 한 적용 됩니다. 그러나, 그것은 젤라틴 단백질 혼합물은 microenvironment에 영향을 미칠 수 있습니다 수술 스트레스/면역 응답14에 영향을 미칠 수 있습니다 고려 하는 것이 중요. 따라서, 조사자는 microenvironment / 스트레스/면역 응답을 공부 하 고 잠재적인 혼동 요인의 알고 있어야 합니다.

<table><tbody><tr><td>마이크로 해부 가위</td><td>Roboz</td><td>RS-5983</td><td>암세포 접종 및 집단 절제술용</td></tr><tr><td>Adson 집게</td><td>Roboz</td><td>RS-5233</td><td>암세포 접종 및 대량 절제술용</td></tr><tr><td>바늘 홀더</td><td>Roboz</td><td>RS-7830</td><td>암세포 접종 및 대량 절제술용</td></tr><tr><td></td><td>Mayo Roboz</td><td>RS-6873</td><td>생체 외</td></tr><tr><td>5-0 실크 봉합</td><td>사Look</td><td>774B</td><td>암세포 접종 및 집단 절제술용</td></tr><tr><td>건식 살균제(Germinator 500)</td><td>Braintree Scientific</td><td>GER 5287-120V</td><td>암세포 접종 및 대량 절제술용</td></tr><tr><td>Clipper</td><td>Wahl</td><td>9908-717</td><td>암세포 접종 및 대량 절제술용</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>암세포 접종용</td></tr><tr><td>D-Luciferin, 칼륨염</td><td>GOLD-Bio</td><td>LUCK-1K</td><td>생물 발광 정량화용</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Insitute 1640</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>세포 배양용</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serub</td><td>Gibco</td><td>10437028</td><td>세포 배양용</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>세포 배양용</td></tr></tbody></table>

murine orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 murine 과격 한 유 방 절제술

Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy

유 방 암 진행을 평가 하기 위해 vivo에서 마우스 모델 연구, 전 임상 약물 개발을 포함 한 필수적입니다. 그러나, 실용적이 고 기술적인 내용의 대다수는, 그러므로, 도전 수술 기법을 포함 하는 경우에 특히, 모델을 재현 하는 출판된 원고에 일반적으로 생략 됩니다. 생물 발광 기술 종양은 만져 서 하는 경우에 적은 양의 암 세포의 평가 대 한 수 있습니다. 암 세포 luciferase 표현에 활용 하 여, 우리 높은 tumorigenesis 속도와 유 방 암 orthotopic 접종 기법을 설정 합니다. 폐 전이 비보 전 기술을 활용 하 여 평가 됩니다. 우리, 그럼, 전이성 종양 부담을 평가 하기 위해 낮은 로컬 재발 률과 유 방 절제술 모델을 설정 합니다. 여기, 우리, 자세히 설명, orthotopic 주입 및 높은 tumorigenesis 속도와 낮은 로컬 되풀이 요금, 유방암을 위한 유 방 절제술의 수술 기법 각각, 유 방 암 모델 효율을 향상 시킨다.

Orthotopic 모델의 목적은 인간의 암 진행 (즉, 림프절 전이 및 다음 먼 폐 전이 기본 종양의 성장)을 모방 하는15. 암 세포 접종 후는 생물 발광은 정기적으로 계량 (2 3 시간 / 주) (그림 1A). 폐에서 생물 발광 기본 병 변 보다 작은 깊은입니다. 생물 발광은 주로 라이브 마우스3 (그림 1B 및 1 C) 기본 종양 부담을 반영합니다. 종양 크기 또한 캘리퍼스 측정 하 여 측정 했다. 종양 볼륨 다음 수식을 사용 하 여 추정 되었다: 볼륨 = (길이) x (폭)2/2 (그림 1D). 생물 발광 및 캘리퍼스 측정 하 여 종양의 부 량 대표 결과...

Murine orthotopic 유 방 암 모델 및 과격 한 유 방 절제술 모델 인간의 유방암 암 진행을 모방 하기 위해 종양 부담 척도를 생물 발광 기술을 소개 합니다.

Murine Orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 Murine 과격 한 유 방 절제술

In vivo mouse models to assess breast cancer progression are essential for cancer research, including preclinical drug developments. However, the majority ...

이 방법은 마우스 모형에 있는 인간적인 유방암 진행 그리고 처리를 모방하는 방법에 관하여 유방암 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 마우스 유방암 모델의 주요 장점은 정형소 이식 후 종양 발생률이 높고 유방 절제술 후 국소 재발률이 낮다는 것입니다. 먼저 마취된 여성 마우스에 발가락 꼬집어에 대한 반응이 부족한지 확인하고 동물의 팔다리를 수술 보드에 테이핑하는 것으로 시작합니다.멸균 면봉을 사용하여 클로르헨시딘, 요오드 및 75 %의 에탄올로 수술 부위를 살균합니다. 그리고 전방 가슴 벽의 중간에 5 밀리미터 피부 절개를합니다. 다음으로 절개에 인접한 피부의 오른쪽을 들어 올리고 멸균 미세 절 가위를 사용하여 가슴 벽에서 피부를 분리합니다.피부를 반전하여 올바른 2번 유방 지방 패드를 노출시키고 28.5게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 인슐린 주사기를 사용하여 상처를 통해 암세포 현탁액 20마이크로리터를 조심스럽게 지방 패드에 주입합니다. 젤라틴 암 세포 단백질 혼합물이 바늘을 제거하기 전에 고화할 수 있도록 지방 패드 내에서 5 초 동안 바늘을 잡고 멸균 5-0 비흡수성 봉합사로 절개를 닫습니다. 그런 다음 동물을 깨끗한 케이지에 넣고 전체 재조정이 있을 때까지 모니터링합니다.암 접종 후 8일 간 유방절제술을 수행하여 마우스를 수술에 준비하고, 암세포 접종으로부터 수술 흉터의 왼쪽에 2밀리미터의 5mm 피부 절개를 한다. 종양을 제거하기 위해 앞다리의 뿌리쪽으로 절개를 확장하고, 외과 적 흉터를 포함한 피부, 및 종양과 접촉하는 병변, 및 전형적으로 눈에 보이는 림프절 분지가 유방 절제술시에 존재하지 않는 축삼 림프절 분지. 그런 다음 Y.의 모양으로 멸균 5-0 비흡수성 봉합사로 피부 결함을 닫고 전체 주무일까지 모니터링하여 동물을 케이지로 되돌려 줍니다.폐 전이 정량화의 경우 접종 후 21 일 D-루시페린 IP의 킬로그램 당 150 밀리그램을 주입 15 분 전에 안락사. 그리고 곡선 마요 가위를 사용하여 중간 복부에서 피부와 복막을 엽니 다. 다이어프램이 시각화될 때까지 간을 누르고, 다이어프램과 카다드에서 세팔라드로 양자 간 갈비뼈를 잘라냅니다.전방 흉부 벽을 뒤집어 폐를 노출시키고 폐를 들어 올려 폐를 척추에 연결하는 코드처럼 보이는 흉부 식도를 식별합니다. 미세 절 가위로 식도를 자르고 집게를 사용하여 양측 폐와 심장을 카우다드쪽으로 당깁니다. 그런 다음 기관및 주요 혈관을 세팔라드의 폐 정점에 잘라 내고 폐를 생물 발광 이미징을 위해 10센티미터 페트리 접시에 넣습니다.가위를 사용하여 폐 조직에서 심장을 제거하십시오. 유방 지방 패드 암 세포 접종 후 약 8 일에서 시작하여 폐의 생물 발광은 살아있는 마우스의 1 차적인 종양 부담을 반영하는 1 차적인 병변보다 더 깊고 작습니다. 캘리퍼로 종양 크기의 측정은 그 중종양 부피의 추정을 허용한다.이 유방 절제술 모델은 또한 동물을 안락사시킬 필요 없이 연쇄 전이성 종양 부담 모니터링을 허용합니다. 폐 전이의 종양 부담은 또한 전 생체 영상에 의해 정량화될 수 있습니다, 그러나 한계는 마우스가 안락사되어야 한다는 것입니다. 외과 적 치료 후 마우스 생존은 또한 번역 가능한 임상 종점으로 모니터링 될 수있다.개발 후이 기술은 유방암 분야의 연구자들이 신약 개발뿐만 아니라 일반적으로 유방암 연구를 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.

generating-murine-orthotopic-metastatic-breast-cancer-model

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 비디오는 마우스 모델에서 유방암 정소성 접종 기술을 보여줍니다. 이 기술은 피하 또는 비수술적 주사에 비해 종양 크기와 모양의 변동성이 적고 높은 종양 형성률을 생성합니다.

정소주사: 성체 마우스에 조직 특이적 암세포 이식

이 비디오는 암 진행을 연구하기 위해 마우스에서 유선(유선) 전체를 외과적으로 제거하는 데 사용되는 근치적 유방 절제술 기술에 대해 설명합니다.

근치적 유방 절제술: 암 진행을 연구하기 위해 마우스에서 전체 유선을 외과적으로 제거

암 종양 주변 조직뿐만 아니라 로컬 프 및 항 염증 매개 의해 영향 복잡한 질환이다. 따라서, 오히려 피하 모델보다 이방성 주입 모델은 방식으로 더 잘 모방 인간의 병리 암의 진행을 연구하기 위해 유용 할 수 있습니다.

마우스의 유방 지방 패드에 유방암 세포의 소성 주입은 종양의 성장을 연구한다.

동소 유방암 차 종양 모델 원발 종양의 외과 적 제거가 기재되어 자발적 전이를 생성하는 마우스의 수명을 연장한다. 종양 성장 및 진행 모니터링하고 루시퍼 형광 이미징에 의해 정량화된다.

자발적 유방암 전이의 동소 이식 마우스 모델

난소 암의 복막 보급의 다단계 과정을 명확히하기 위해, 본 연구는 이러한 종양 세포와 동 소성 접종을 통해 원래의 종양 개발 및 복막 전이의 쥐 실험 모델을 제시한다.

원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이<em&gt;를 통해</em난소 암 세포에&gt; 동소 이식 접종

유방암 전이를 목표로하는 보조 요법을 평가하는 전임상 모델이 부족합니다. 이를 해결하기 위해, 우리는 de novo 폐 유방 선암 전이의 마우스 모델을 개발했는데, adjuvant setting (원발 종양의 수술 후 절제술)에서 투여 된 치료법은 이전에 파종 된 폐 전이에 영향을 미치는 효능을 평가할 수 있습니다.

전임상 마우스 모델에 대한 수술 절차 및 방법론 드 노보 유방암 전이

여기, 우리는 간단 하 고, 침략, 그리고 쉽게 처리 방법, 더 적은에서 유 방 지방 패드에 유방암 세포를 이식 하는 프로토콜을 제시 하 고이 마우스 orthotopic 유 방 암 모델 적절 한 유 방 지방 패드 환경으로 사용할 수 있습니다의 다양 한 측면을 조사 하 암입니다.

Orthotopic 쥐 유 방 지방 패드 유방암 세포의 주입

이 작업은 녹색 형광 단백질 및 생물 발광 신호의 검출뿐만 아니라 정량적 분자 검출 기술의 통합에 의해 종양 하중을 정확하게 평가하기 위한 고급 프로토콜을 미리 설정합니다.

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

환자 유래 제노이식(PDX) 모델과 이식 가능한 유전자 조작 마우스 모델은 인체 질환을 충실히 재구성하고 기본 및 번역 형 유방암 연구를 위한 선호 모델입니다. 여기서, 종양 생물학을 연구하고 약물 반응을 평가하기 위해 유방 지방 패드로 유방 종양 단편을 정형전으로 이식하는 방법이 설명된다.

유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

본 프로토콜은 동위원소 골육종 및 폐 전이 병변을 지닌 마우스 모델을 생성하기 위해 경막내 골육종 세포 주사를 기술한다.

경골 내 골육종 세포 주사 동위원소 골육종 및 폐 전이 마우스 모델 생성

이 원고는 전이성 캐스케이드의 모든 단계에서 개입할 수 있는 orthotopically 주입된 유방 종양의 자발적 폐 전이의 확립 및 종단 성장 모니터링을 위한 방법론을 설명합니다.

생체 내 Orthotopically injected breast tumor cells의 자발적 폐 전이를 측정하기 위한 이미징

학습하세요 생체 발광 영상을 활용한 쥐 유방암 정위 이식 모델 생성 및 과격한 유방절제술 수행 방법을. 이 모델은 높은 종양 발생률과 낮은 국소 재발률로 인간 유방암 진행 및 치료 연구에 활용됩니다.

Murine Orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 Murine 과격 한 유 방 절제술

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