Name: 메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에 대 한 단일 Sensillum 녹음 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: 학습하세요 메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에서 단일 sensillum 녹음 기법을 통해 후각 신경 반응을 측정하는 방법을. 이 프로토콜은 곤충 화학수용 메커니즘 연구에 필수적인 전기생리학적 데이터를 제공합니다.

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이 작품은 국립 자연 과학 재단의 중국 (No.31472037)에서 교부 금에 의해 지원 됩니다. 상호 또는이 문서에서 상용 제품의 언급만을 목적으로 특정 정보를 제공 하 고 추천을 의미 하지는 않습니다.

1입니다. 악기와 곤충의 준비
<ol><li>
텅스텐 전극 및 자극 솔루션 준비
	<ol>
<li>새로운 텅스텐 와이어 (0.125 m m의 직경, 길이 75 m m)는 micromanipulator로 해결 하 고 stereomicroscope (40 배 확대)에서 약 1 분 동안 전원 공급 장치에서 제공 하는 V 10에서 주사기에 10% (w/v) 나트륨 질산염 (나노2) 솔루션에 선명 하 게.</li>
		<li>10% 나노2 솔루션, < 1 분 (그림 1A)에서 5 V에서 약 4 mm로 반복적으로 날카롭게 텅스텐 와이어를 찍어.</li>
		<li>때까지 충분히 잘 메뚜기 벨 후 각 sensillum (그림 1B)의 표 피를 관통 하는 stereomicroscope에서 자주 날카롭게 텅스텐 팁의 직경을 검사 합니다.</li>
		<li>자극 솔루션을 준비 합니다. 미네랄 오일의 화학 자극 물질의 각각 희석. 1-nonanol 및 nonanoic 산 10% 희석에 희석. E-2-hexenal, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5에서 hexanal 희석.</li>
		<li>파스퇴르는 자극을 운반 하는 튜브 준비: 파스퇴르 튜브 필터 종이 스트립 (2 cm의 길이, 0.5 c m의 폭)를 삽입, 필터 종이 스트립에 희석된 자극 솔루션 (각 10 µ l)를 추가 하 고 다음 파스퇴르 피 펫 팁 (1 ml) 튜브를 연결.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
곤충을 준비
	<ol>
<li>60%의 상대 습도, 28-30 ° C의 온도 및 18:6 h (빛: 다크) photoperiod 붐비는 조건 하에서 신선한 밀 묘와 후면 메뚜기 (Locusta migratoria). 선택 1을 3-하루-오래 된 5번째 메뚜기 님프 탈피 하 고 기록할 때 어떤 방해를 피하기 위해 좋은 위 안테나를 제거.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
메뚜기 상 악 벨 홀더를 준비
	<ol>
<li>유리 슬라이드 (25 x 75 mm)를 사용 하 여 상 악 벨 홀더 (MPH)의 기반으로. 양면 접착 테이프를 가진 유리 슬라이드의 모서리에 플라스틱 조각 (높이, 길이 35 m m, 폭에서 10 m m 1 m m)를 부착 하 고 마지막으로 양면 접착 테이프를 가진 플라스틱 조각 위에 커버 글라스 (18 x 18 mm)을 수정. 비-슬립 층으로 커버 유리에 빨간 고무 테이프의 작은 조각을 놓습니다. 커버 유리와 플라스틱 조각 메뚜기 벨에 대 한 플랫폼을 구성합니다. 플랫폼의 높이 약 1.5 m m 이다.</li>
		<li>텅스텐 와이어 (0.125 m m의 직경, 36 m m의 길이) 안쪽에 평행 하 게 1.5 m m의 거리에 설치 플랫폼의 가장자리. 양면 접착 테이프를 가진 플랫폼에 철사의 2 개의 끝을 수정 합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2입니다. 메뚜기 상 악 Palps의 준비
<ol><li>원심 분리기 튜브 (1.5 ml) 세로로 반으로 잘라내어 바닥을 잘라. 준비 된 관으로 메뚜기를 놓습니다. 복 부 지역 및 노출 메뚜기의 머리를 두고. 양면 접착 테이프 (그림 2A)와 유리 슬라이드에 어셈블리를 수정 합니다.</li>
	<li>플랫폼에 오른쪽 상 악 벨을 당겨.</li>
	<li>벨의 4 세그먼트에 텅스텐 와이어를 넣어. 텅스텐 와이어, 상 악 벨 (그림 2A 와 2B)에서 약 2 mm의 양쪽에 접착제 퍼 티를 배치 합니다.</li>
</ol>3. 단일 Sensillum 녹음
<ol><li>저 배율 (100 배)에서 현미경으로 메뚜기 상 악 벨 준비를 놓습니다. 벨 기록 전극 (그림 3A)에 수직 될 때까지 준비의 위치를 조정 합니다.</li>
	<li>micromanipulator를 사용 하 여 메뚜기 눈에 참조 전극 (텅스텐 전극)를 삽입 합니다. (그림 3B 와 3c) micromanipulator와 상 악 벨 가까이 기록 전극 (텅스텐 전극)를 이동 합니다.</li>
	<li>상 악 벨 (그림 3B)에서 약 1 cm 냄새 배달 장치를 조정 합니다.</li>
	<li>레코딩 소프트웨어를 자동 스파이크 32를 엽니다. 녹음 매개 변수를 다음과 같이 설정: 녹음 규모 500 µ V; 300 Hz, 200 Hz;에 낮은 컷오프에 필터의 높은 컷오프 그리고 10에 pretrigger s.</li>
	<li>보편적인 ac/DC 증폭기 x 10를 기록 전극을 연결 합니다.</li>
	<li>(500 X) 높은 확대에 현미경을 전환 합니다. 상 악 벨에 basiconic sensillum의 기록 전극 삽입 하 고 섬세 하 게 기록 전극 좋은 자연 스파이크 (그림 3D)를 조정 합니다.</li>
	<li>20 ml에 지속적인 공기 흐름을 제공 하는 자극 컨트롤러/s. 10 1 미 기록 신호 자극 시간 설정 시작 10 s s 자극 펄스의 발병 하기 전에.</li>
	<li>10 x 보편적인 ac/DC 증폭기를 사용 하 여 신호를 증폭 하는. IDAC 4에 신호를 피드. 자동 스파이크 32 소프트웨어와 신호를 분석 합니다. AC 신호는 대역 통과 필터링 200 ~ 300 Hz. 사이 사용 자동 스파이크 32 소음에서 피크--물마루 진폭을 구별할 수 있다. 자연 주파수에 활동 전위 주파수 (초당 스파이크)에 증가 하는 만큼 신경의 응답을 계산 합니다. GraphPad Prism 7를 사용 하 여 통계 분석을 수행 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Carey, A. F., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insect+olfaction+from+model+systems+to+disease+control%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Insect olfaction from model systems to disease control.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (32), 12987-12995 (2011).</li>
<li>Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odorant+reception+in+insects%3A+roles+of+receptors%2C+binding+proteins%2C+and+degrading+enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes.</a> Annual Review of Entomology. 58, 373-391 (2013).</li>
<li>Zhang, J., Walker, W. B., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pheromone+reception+in+moths%3A+from+molecules+to+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Molecular+Biology+and+Translational+Science%22%5BJournal%5D)">Pheromone reception in moths: from molecules to behaviors.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 130, 109-128 (2015).</li>
<li>Vosshall, L. B., Amrein, H., Morozov, P. S., Rzhetsky, A., Axel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spatial+map+of+olfactory+receptor+expression+in+the+Drosophila+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A spatial map of olfactory receptor expression in the Drosophila antenna.</a> Cell. 96 (5), 725-736 (1999).</li>
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<li>Roelofs, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+pheromone+production+and+perception+in+European+corn+borer+moths+is+determined+by+both+autosomal+and+sex-linked+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Sex pheromone production and perception in European corn borer moths is determined by both autosomal and sex-linked genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84 (21), 7585-7589 (1987).</li>
<li>Larsson, M. C., Leal, W. S., Hansson, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+receptor+neurons+detecting+plant+odours+and+male+volatiles+in+Anomala+cuprea+beetles+%28Coleoptera%3A+Scarabaeidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Insect+Physiology%22%5BJournal%5D)">Olfactory receptor neurons detecting plant odours and male volatiles in Anomala cuprea beetles (Coleoptera: Scarabaeidae).</a> Journal of Insect Physiology. 47 (9), 1065-1076 (2001).</li>
<li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+basis+of+alarm+pheromone+detection+in+aphids%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Molecular basis of alarm pheromone detection in aphids.</a> Current Biology. 27 (1), 55-61 (2017).</li>
<li>Cui, X., Wu, C., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+response+patterns+of+16+olfactory+neurons+from+the+trichoid+sensilla+to+odorant+from+fecal+volatiles+in+the+locust%2C+Locusta+migratoria+manilensis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Insect+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological response patterns of 16 olfactory neurons from the trichoid sensilla to odorant from fecal volatiles in the locust, Locusta migratoria manilensis.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 77 (2), 45-57 (2011).</li>
<li>Sharma, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cuticular+hydrocarbon+pheromones+for+social+behavior+and+their+coding+in+the+ant+antenna%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Cuticular hydrocarbon pheromones for social behavior and their coding in the ant antenna.</a> Cell Reports. 12 (8), 1261-1271 (2015).</li>
<li>de Bruyne, M., Clyne, P. J., Carlson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+a+model+olfactory+organ%3A+the+Drosophila+maxillary+palp%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Odor coding in a model olfactory organ: the Drosophila maxillary palp.</a> Journal of Neuroscience. 19 (11), 4520-4532 (1999).</li>
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<li>Lu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+coding+in+the+maxillary+palp+of+the+malaria+vector+mosquito+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">Odor coding in the maxillary palp of the malaria vector mosquito Anopheles gambiae.</a> Current Biology. 17 (18), 1533-1544 (2007).</li>
<li>Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+sensillum+recordings+in+the+insects+Drosophila+melanogaster+and+Anopheles+gambiae%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Single sensillum recordings in the insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae.</a> Journal of Visualized Experiments. 36, e1725(2010).</li>
<li>Grant, A. J., Wigton, B. E., Aghajanian, J. G., O'Connell, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+responses+of+receptor+neurons+in+mosquito+maxillary+palp+sensilla+to+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology+A%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological responses of receptor neurons in mosquito maxillary palp sensilla to carbon dioxide.</a> Journal of Comparative Physiology A. 177 (4), 389-396 (1995).</li>
<li>Blaney, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+an+olfactory+sensillum+on+the+maxillary+palps+of+Locusta+migratoria+%28L.%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of an olfactory sensillum on the maxillary palps of Locusta migratoria (L.).</a> Cell and Tissue Research. 184 (3), 397-409 (1977).</li>
<li>Hassanali, A., Njagi, P. G. N., Bashir, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+ecology+of+locusts+and+related+acridids%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Chemical ecology of locusts and related acridids.</a> Annual Review of Entomology. 50, 223-245 (2005).</li>
<li>Chapman, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+chemoreception+in+feeding+by+phytophagous+insects%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Entomology%22%5BJournal%5D)">Contact chemoreception in feeding by phytophagous insects.</a> Annual Review of Entomology. 48, 455-484 (2003).</li>
<li>Chapman, R. F., Sword, G. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF01049149">The importance of palpation in food selection by a polyphagous grasshopper (Orthoptera: Acrididae).</a> Journal of Insect Behavior. 6, 79-91 (1993).</li>
<li>Winstanley, C., Blaney, W. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1570-7458.1978.tb02839.x/abstract">Chemosensory mechanisms of locusts in relation to feeding.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 24, 750-758 (1978).</li>
<li>Blaney, W., Duckett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+palpation+by+the+maxillary+palps+of+Locusta+migratoria+%28L.%29%3A+an+electrophysiological+and+behavioural+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The significance of palpation by the maxillary palps of Locusta migratoria (L.): an electrophysiological and behavioural study.</a> Journal of Experimental Biology. 63, 701-712 (1975).</li>
<li>Blaney, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+responses+of+the+terminal+sensilla+on+the+maxillary+palps+of+Locusta+migratoria+%28L.%29+to+some+electrolytes+and+non-electrolytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological responses of the terminal sensilla on the maxillary palps of Locusta migratoria (L.) to some electrolytes and non-electrolytes.</a> Journal of Experimental Biology. 60, 275-293 (1974).</li>
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<li>Zhang, L., Li, H., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+olfactory+pathways+to+detect+aldehydes+on+locust+mouthpart%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Two olfactory pathways to detect aldehydes on locust mouthpart.</a> International Journal of Biological Sciences. 13 (6), 759-771 (2017).</li>
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<li>Syed, Z., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+measurements+from+a+moth+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological measurements from a moth olfactory system.</a> Journal of Visualized Experiments. 49, e2489(2011).</li>
<li>Saha, D., Leong, K., Katta, N., Raman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-unit+recording+methods+to+characterize+neural+activity+in+the+locust+%28Schistocerca+Americana%29+olfactory+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Multi-unit recording methods to characterize neural activity in the locust (Schistocerca Americana) olfactory circuits.</a> Journal of Visualized Experiments. 71, e50139(2013).</li>
<li>Liu, F., Liu, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+single+sensillum+recording+to+detect+olfactory+neuron+responses+of+bed+bugs+to+semiochemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Using single sensillum recording to detect olfactory neuron responses of bed bugs to semiochemicals.</a> Journal of Visualized Experiments. 107, e53337(2016).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

곤충 음식 냄새를 감지 하는 palps에 의존 하 고 그들의 palps speciation13,27에 중요 한 역할을 것으로 추정 된다. palps 간단한 후 각 장기 고는 neuromolecular의 탐험에 대 한 매력적인 모델 네트워크 기본 chemosensation28로 증가 관심을 받고 있다.
Labellar 곤충 및 벨 SSRs 성공적으로 수행 되었습니다 초파리 melanogaster, Anopheles gambiae, 및 Culex quinquefasciatus13,,1415,<sup cla...

동물 외 인 화학 신호를 감지 하는 chemosensory 기관의 범위를 진화 했다. 곤충, 가장 중요 한 chemosensory 기관에서는 안테나와는 palps 있습니다. 이러한 기관에 chemosensory sensilla 라는 chemosensory 머리카락의 여러 종류 머리카락 내 chemosensory 뉴런 (CSNs) 의해 innervated 있습니다. CSNs chemosensory sensilla에 특정 화학 신호는 중앙 신경 시스템1,2,3 이후에 전송 되는 전기 잠재력에 화학 자극에서 신호 변환 통해 인식 .
CSNs 익스프레스 다양 한 chemosensory 수용 체 [예를 들어, odorant 수용 체 (ORs)], ionotropic 수용 체 (국세청), 그리고 chemosensation 의 다른 종류와 관련 된 외 인 화학 신호를 인코딩하는 그들의 세포 막에 미각 수용 체 (GRs) 4,,56. CSNs의 특성 곤충 chemoreception의 세포 및 분자 메커니즘의 해명에 열쇠 이다. 이제 단일 sensillum 기록 (SSR)은 널리 사용 되는 기술 등 많은 곤충의 더듬이 sensilla에 곤충 CSNs 특성 파리7, 나 방8,9, aphids10, 메뚜기11, 딱정벌레 그리고 개미12. 그러나, 몇 가지 연구에 적용 된는 SSR 곤충 palps13,14,15,,1617, 때문에 그들의 sensilla의 특정 구조를 electrophysiological 녹음 어려운18.
메뚜기 메뚜기 (메뚜기목)의 심각한 작물 피해 및 경제적 손실19에 종종 발생할. palps 메뚜기20,,2122,,2324의 식품 선택에 중요 한 역할을 추정 된다. 두 가지 유형의 chemosensory sensilla 스캐닝 전자 현미경 (SEM)에 의해 조사 됩니다. 일반적으로, 350 sensilla chaetica와 7-8 sensilla basiconica 메뚜기 palps18의 각 돔에서 관찰 된다. Sensilla chaetica는 비 휘발성 화학 신호를 감지 하는 미각 sensilla sensilla basiconica 휘발성 화학 신호를 감지 하는 후 각 기능을가지고 반면.
메뚜기 palps sensilla basiconica (ca. 12 µ m)의 머리 소켓의 직경 sensilla chaetica의 그들 보다는 훨씬 더는 (ca. 8 µ m)18,25. 에 palps sensilla basiconica의 cuticular 벽은 더듬이 sensilla18의 그것 보다 훨씬 두꺼운. 또한,는 벨의 돔 매우 유연한 표 피 내에서 액체 내용이 있다. 이러한 특성 의미는 microelectrode와 좋은 electrophysiological 신호 취득 침투 더듬이 sensilla 보다 더 어려운. 이 논문에서는, 메뚜기 벨 sensilla basiconica에 대 한 상세 하 고 매우 효과적인 SSR 프로토콜 비디오와 함께 제공 됩니다.

<table><tbody><tr><td>텅스텐 와이어</td><td>어드벤트</td><td>W559504</td><td>전극을 만들고 palp</td></tr><tr><td>NaNO2</td> <td>aldrich</td><td>563218-25G</td><td>텅스텐 와이어</td></tr><tr><td>AC 전원 공급 장치</td><td>Syntech</td><td>A2-70</td>을 연마하는 데 사용됩니다. <td>텅스텐 와이어</td></tr><tr><td>Stereoscope</td><td>Motic</td><td>SMZ-163</td>을 연마하는 데 전압을 제공하는 데 사용됩니다<td>. 텅스텐 와이어의 샤프닝</td></tr><tr><td>현미경</td><td>올림푸스</td><td>W-51</td><td>메뚜기 상악 손바닥에서 센실라를 관찰하는 데 사용</td></tr><tr><td>지능형 데이터 수집 컨트롤러</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td>기록 전과 기록 중 모든 신호의 실시간 화면 표시</td></tr><tr><td>자극 컨트롤러</td><td>Syntech</td><td>CS-55</td><td>자극 응용 프로그램</td></tr><tr><td>전자 제어에 사용 micromanipulator</td><td>C.M.D.T</td><td>CFT-8301D</td><td>기록 전극의 미세한 움직임에 사용</td></tr><tr><td>Micromanipulator</td><td>Narishige</td><td>MN-151</td><td>기준 전극의 미세한 움직임에 사용</td></tr><tr><td>스피커</td><td>EDIFIER</td><td>R101T06</td><td>IDAC-4와 연결되어 신호에 소리를 제공</td></tr><tr><td>Magnetic base</td><td>PDOK</td><td>PD-101</td><td>전극 및 자극 전달 튜브를 고정하는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>진동 절연 테이블</td><td>TianHe</td><td>HAP-100-1208</td><td>장비에서 진동을 분리하는 데 사용</td></tr><tr><td>유리 슬라이드</td><td>CITOGLAS</td><td>ZBP-407</td> MPH Blu-tack Bostik Blu-tack-45g<td>의 기초를 만드는 데 사용</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>텅스텐 와이어</td></tr><tr><td>고정 파스퇴르 튜브</td><td>YARE</td><td>WITEG</td><td>자극 자극 용액을 포함하는 여과지 배치</td></tr></tbody></table>

메뚜기 벨 sensilla basiconica에 대 한 단일 sensillum 녹음

Single Sensillum Recordings for Locust Palp Sensilla Basiconica

메뚜기 mouthparts의 palps 기존의 미각 기관 (이전 라는 터미널 sensilla sensilla chaetica 통해 비 휘발성 화학 신호의 탐지를 위해 특히 메뚜기의 식품 선택에 중요 한 역할을 재생 하는 것으로 간주 됩니다. 또는 볏된 sensilla)입니다. 이제 증거는 후 각 기능을가지고 하는 이러한 palps 증가입니다. Odorant 수용 체 (LmigOR2)와 odorant 의무적인 단백질 (LmigOBP1)는 되었습니다 지역화 신경 및 액세서리 셀에 각각,는 palps sensilla basiconica에서. 단일 sensillum (SSR) 녹음 사용 됩니다 odorant 수용 체 신경의 응답을 기록 심사 특정 odorant 수용 체에 활성 ligands를 위한 효과적인 방법입니다. SSR 벨 sensilla에 odorant 수용 체의 기능 연구에 사용 됩니다. palps의 돔에 있는 sensilla basiconica의 구조는 안테나에 그들의 구조에서 약간 다릅니다. 따라서, odorants에 의해 elicited는 SSR을 수행할 때 몇 가지 구체적인 조언을 최적의 결과 얻기 위해 유용할 수 있습니다. 이 문서에는 SSR 곤충 벨 sensilla basiconica에서에 대 한 상세 하 고 매우 효과적인 프로토콜 도입 되었습니다.

메뚜기 상 악 벨에 두 sensilla 하위 (pb1 및 pb2) 화학 odorants (10 %1 nonanol 및 10 %nonanoic 산)에 다른 응답 역학에 따라 식별 됩니다. Pb1에 있는 신경 세포 생산 1-nonanol 보다 pb2에 신경 동안 nonanoic 산에 상당히 적은 1-nonanol nonanoic 산 (그림 4)와 비교 하 여 활성화에 훨씬 더 많은 스파이크. Hexanal 및 E-2-Hexenal 응답 (POR)26여 메뚜기 벨을 보여주고 수 있습니다. Hexanal는 풍부한 호스트 녹색 식물 잎 휘발성 음식 소스26추가 확인에 기여할 수 있는 이다. Pb1 뉴런에 마지막 elicited 스파이크 pb2 그들은 E-2-hexenal (그림 4)에 의해...

이 종이에 곤충 mouthparts의 palps sensilla basiconica에서 단일 sensillum 기록에 대 한 상세 하 고 매우 효과적인 프로토콜을 설명합니다.

메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에 대 한 단일 Sensillum 녹음

The palps of locust mouthparts are considered to be conventional gustatory organs that play an important role in a locust&#39;s food selection, especially ...

이 절차의 전반적인 목표는 곤충 손바닥 Sensilla Basiconica에서 단일 센실럼 기록을 만들기 위한 상세하고 매우 효과적인 프로토콜을 도입하는 것입니다. 숙달되면 해부 화학수용 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. palp sensilla에 있는 특정한 냄새 물질 수용체의 허용에 의하여.이것의 주요 장점은 손바닥의 메뚜기의 레코더 Sensilla Basiconia를 사용한다는 것입니다. 텅스텐 전극을 준비하려면 먼저 새 텅스텐 와이어를 마이크로 매니퓰레이터에 연결하고 40 배 배율로 관찰하십시오. 이제 주사기를 사용하여 10% 아질산나트륨을 도포하는 동안 10볼트를 와이어에 전달하여 와이어를 날카롭게 합니다.그런 다음 전력을 5볼트로 줄이고 1분 이상 날카로운 와이어를 4mm의 아질산나트륨 용액에 반복적으로 담그십시오. 사용할 때 팁은 메뚜기 손바닥 후각 감각의 표피를 관통할 수 있을 만큼 충분히 미세해야 합니다. 다음으로 자극 용액을 준비합니다.각 화학 자극 물질을 미네랄 오일에 희석하십시오. 미네랄 오일에 1-Nonanol 및 Nonanoic acid를 10% 희석합니다. 그런 다음 미네랄 오일에서 E-2-Hexenal 및 Hexanal의 일련의 10 배 연속 희석을 만듭니다.다음으로 자극이 담긴 파스퇴르 튜브를 준비합니다. 여과지 스트립을 튜브에 삽입하고 희석된 자극 용액 10마이크로리터를 여과지 스트립에 추가합니다. 그런 다음 1밀리리터 피펫 팁으로 튜브를 꽂습니다.녹음에서 유리 슬라이드, 플라스틱 조각, 커버 슬립 및 양면 테이프 및 고무 테이프로 메뚜기 상악 손바닥 홀더를 만듭니다. 양면 테이프를 사용하여 플라스틱 조각을 슬라이드 모서리에 부착한 다음 다른 테이프 조각을 사용하여 커버 슬립을 플라스틱 조각에 부착합니다. 그런 다음 커버 유리에 작은 빨간색 고무 테이프를 부착하여 미끄럼 방지 표면을 만듭니다.그런 다음 테이프를 사용하여 플랫폼의 내부 가장자리와 평행하게 1.5mm 텅스텐 와이어를 연결하고 와이어의 양쪽 끝을 플랫폼에 고정합니다. 이것으로 홀더가 완성됩니다. 신선한 밀 묘목과 60 % 습도, 섭씨 28-30도, 18 시간 광주기로 메뚜기를 기릅니다.안테나를 수집하려면 1일에서 3일 된 다섯 번째 instar 메뚜기 애벌레를 선택하십시오. 녹음을 방해하지 않도록 가는 가위를 사용하여 안테나를 제거하십시오. 메뚜기를 고정하려면 수직으로 1/2로 자른 1.5mm 튜

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

odorants에 후각 감각 뉴런의 Electrophysiological 반응은 단일 sensillum 레코딩을 사용하는 곤충에서 측정할 수 있습니다. 이 비디오를 문서에서 우리는 식초 파리의 안테나에서 단일 sensillum 레코딩을 수행하는 방법을 보여줍니다 것입니다...

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae</em

곤충 후각 시스템은 electroantennograms (EAG)와 안테나에 위치한 모든 odorant 수용체 뉴런 (ORNs)에서 개별 안에 보관되어과는 반응을 표현하는 아르 단일 sensillum 레코딩 (SSR)의 형태로 기록 odorant 유발 반응에 대한 독특한 기회를 제공 각각 sensilla.

모쓰 강한 시스템에서 Electrophysiological 측정

이 문서는 광유에 따라 세포, 팁 - 녹음을 통해 개별 sensilla에 화학 자극을 분리에 대한 electrophysiological 방법을 설명합니다.

전갈 페그 Sensilla의 전기 생리학

이 비디오에서는 전기생리학 연구를 위해 살아있는 초파리 파리가 튜브에 장착되어 있습니다. 전극은 파리의 후각 수용체 뉴런과 함께 페로몬에 대한 특정 뉴런 반응을 기록하기 위해 감각의 기저부에 위치합니다.

휘발성 냄새 물질에 대한 반응으로 Drosophila Sensilla의 전기 생리학적 기록

우리는 invertebrate 후각 경로의 처음 세 단계에서 냄새 evoked 응답을 특징하는 세포 다중 단위 기록 기술의 변화를 보여줍니다. 이 기술은 쉽게뿐만 아니라 다른 신경 시스템에서 앙상블 활동을 검토하도록 구성 할 수 있습니다.

메뚜기에 신경 활동을 특성화하기 위해 다중 단위 기록 방법 (<em&gt; Schistocerca 아메리카나</em&gt;) 강한 회로

이 프로토콜은 초파리에서 labellar 맛 뉴런에 의해 트리거되는 액션 잠재적 인 반응의 세포 녹음을 설명합니다.

에서 전기 생리학 기록<em&gt; 초파리</em&gt; Labellar는 Sensilla 맛

빈대는 더듬이 후각 감각에 있는 후각 수용체 뉴런에 의존하여 환경의 기호화학 물질을 감지합니다. 단일 센실럼 기록을 활용하여 기호화학 물질에 대한 빈대 반응을 평가하고 관련된 코딩 프로세스를 탐구하는 방법을 보여줍니다.

Semiochemicals에 침대 버그의 후각 신경 세포 응답을 감지하기 위해 단일 ​​Sensillum 기록을 사용하여

이 논문은 digoxigenin (DIG) 표지 또는 바이오틴 표지 프로브를 사용하는 곤충 안테나에서 특히 낮은 수준으로 발현 된 Odorant Receptor (OR) 유전자 및 기타 유전자에 대해 상세하고 매우 효과적인 RNA in situ hybridization 프로토콜을 설명합니다.

RNA에 의한 Locust Antenna 내의 악취 수용체 유전자의 국산화<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드 화

이 프로토콜의 전반적인 목표는 장쇄 사상 페로몬에 반응하는 Drosophila 후각 수용체 뉴런으로부터 단일 감각 기록을위한 낮은 휘발성의 냄새 물질을 제시하는 방법을 입증하는 것입니다.

에서 전기 생리 학적 기록<em&gt; Drosophila</em&gt; 낮은 휘발성의 냄새에 반응하는 Trichoid Sensilla

곤충 센실라의 초구조를 관찰하기 위해, 스캐닝 및 투과 전자 현미경(SEM 및 TEM) 시료 준비 프로토콜을 각각 연구에서 발표되었다. Tween 20은 SEM에서 샘플 변형을 피하기 위해 고정식에 첨가되었습니다.

목공 딱정벌레의 부속물을 위한 주사 및 투과 전자 현미경의 시료 제조 방법

드물게 사용되는 전기생리학적 기록 방법인 염기 기록은 기존의 기록 방법으로는 검사할 수 없는 맛 코딩의 특징을 분석할 수 있습니다. 또한 염기 기록을 통해 기존의 전기생리학적 방법으로는 연구할 수 없는 소수성 자극에 대한 맛 반응을 분석할 수 있습니다.

염기 기록: 초파리에서 미각 뉴런의 반응을 분석하는 기법

학습하세요 메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에서 단일 sensillum 녹음 기법을 통해 후각 신경 반응을 측정하는 방법을. 이 프로토콜은 곤충 화학수용 메커니즘 연구에 필수적인 전기생리학적 데이터를 제공합니다.

메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에 대 한 단일 Sensillum 녹음

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