타악기 황 호르몬 분 비의 평가 대 한 쥐에서 꼬리 팁 혈액 샘플링을 자주

잦은 꼬리 끝 혈액 샘플링의 전반적인 목표는 깨어 있고 마취되지 않은 정상적인 행동을 하는 마우스에서 LH라고 하는 박동성 황체 형성 호르몬 분비를 측정하기 위한 전혈 샘플을 얻는 것입니다. 이 방법은 생쥐의 황체 형성 호르몬 박동 분비를 평가하기 위한 신뢰할 수 있는 프로토콜을 제공함으로써 재생 신경 내신학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 잦은 취급과 습관화로 급성 또는 만성 실험 치료 후 강력하고 신뢰할 수 있는 황체 형성 호르몬 펄스 측정을 보장할 수 있다는 것입니다.

채혈 전 5주 동안 월요일부터 금요일까지 매일 쥐를 다루십시오. 마지막 2주 동안은 토요일과 일요일에도 생쥐를 처리하십시오. 생물 안전 캐비닛에서 마우스 취급 요법을 수행합니다.

케이지에서 첫 번째 마우스를 꺼내 캐비닛 내의 적절한 표면에 놓습니다. 꼬리 밑부분을 잡고 이 표면에서 마우스를 부드럽게 제지합니다. 그런 다음 다른 손으로 꼬리의 복부 표면을 바닥에서 끝까지 단단히 쓰다듬습니다.

이 작업을 총 6번 수행한 다음 마우스를 케이지로 되돌립니다. 이는 하나의 처리 세트를 구성합니다. 이제 6분 정도 기다렸다가 다른 처리 세트를 수행합니다.

inter set 간격으로 이 패턴을 계속하면 처리 세션당 4개의 처리 세트를 수행합니다. 이것은 세션당 총 24개의 테일 스트로크를 제공합니다. 샘플링 기간 동안의 실험적 처리에 스크러핑 또는 복강내 주사와 같은 추가 처리 방법이 포함되는 경우, 핸들링 세션 동안 마우스가 이러한 핸들링 활동에 순응하도록 합니다.

계획된 혈액 채취일 2주 전에 쥐를 짝을 지어 수용하여 채취 기간 동안 생쥐의 중단을 최소화합니다. 혈액 수집을 위해 혈액 저장을 위해 0.6ml 마이크로 원심 분리기 튜브를 준비하십시오. 튜브에 라벨을 붙이고 3마이크로리터 혈액 수집을 위해 각 튜브에 57마이크로리터의 ACES 완충액을 분취합니다.

준비가 되면 튜브를 섭씨 4도에서 보관하십시오. 생물 안전 캐비닛에는 피펫 팁, 쓰레기통, 타이머, 실험 일지, 채혈 튜브가 들어 있는 얼음 양동이, 날카롭고 멸균된 가위, 영구 마커 및 작은 거즈가 준비되어 있습니다. 채혈을 시작하기 45분 전에, 첫 번째 쥐를 우리에서 꺼내 적당한 표면에 놓는다.

그런 다음 꼬리를 표시하여 케이지 파트너에서 이 마우스를 빠르게 식별합니다. 이제 가위를 사용하여 꼬리 끝의 1-2mm를 제거합니다. 꼬리를 자른 후 꼬리 끝에 핏방울이 형성될 때까지 꼬리를 조심스럽게 쓰다듬습니다.

그런 다음 3마이크로리터의 혈액을 모아 혈액과 팁을 모두 쓰레기통에 버리십시오. 다음으로 혈류가 멈췄는지 확인합니다. 필요한 경우 멸균 거즈로 부드러운 압력을 가하십시오.

그런 다음 6분 동안 마우스를 케이지에 다시 넣습니다. 이제 45분에 걸쳐 6분 간격으로 꼬리를 세게 쓰다듬어 쥐로부터 추가 혈액 샘플을 채취합니다. 핏방울이 형성되지 않으면 식염수를 적신 거즈 패드로 꼬리를 두드려 혈전을 제거하는 데 도움이 됩니다.

사전 샘플링 기간 동안 모든 혈액 분취량을 폐기합니다. 45분 후에 샘플링 기간이 시작됩니다. 샘플을 채취할 때 3마이크로리터의 혈액을 채취 튜브에 옮기고 튜브를 반전으로 혼합한 다음 얼음에 다시 넣습니다.

이제 필요한 만큼 샘플링을 진행합니다. 한 번은 쥐를 안락사시키거나 꼬리 혈류가 완전히 멈췄는지 확인한 다음 쥐에게 깨끗한 케이지를 제공하십시오. 그런 다음 혈액 샘플을 보관 상자로 옮기고 샘플을 분석할 수 있을 때까지 섭씨 영하 20도에서 보관하십시오.

황체형성 호르몬(LH)을 급성 심리사회적 스트레스 챌린지에 대한 반응을 결정하기 위해 빈번한 혈액 샘플에서 측정했습니다. 성체 암컷 C57 블랙 6 마우스에서 난소 절제술을 실시하고 90분 동안 혈액 샘플을 채취하여 LH 박동 분비의 전처리 기준선을 확립했습니다. 90분 동안 스트레스 치료를 위해 표본 채취를 위해 실험 동물들은 설치류 억제 장치에 들어가 새로운 우리로 옮겨졌고, 대조군은 집에 있는 우리에 남아 구속되지 않았다.

분석 결과, 대조군 동물은 전체 샘플링 기간 동안 명확하고 모호하지 않은 LH 펄스를 가지고 있는 것으로 나타났습니다. 대조적으로, 억제로 인한 심리사회적 스트레스는 실험군에서 박동성 LH 분비를 빠르고 명백하게 억제했습니다. 이 기술의 사용을 준비할 때 쥐에게 스트레스를 주고 박동성 LH 분비를 방해할 수 있는 소음이나 다른 연구자의 방해와 같은 환경 방해를 최소화하는 것이 중요합니다.

첸 실험실의 Stein 박사와 다른 사람들이 개발한 이래로 이 기술은 신경 내분비학 분야의 연구자들이 복잡한 분자 및 유전 도구가 실용적이고 사용 가능한 종에서 LH 펄스 조절을 탐구할 수 있는 길을 닦기 시작했습니다.