검 시 기반 야생 물고기 건강 평가

부검 기반 어류 건강 평가는 일상적인 모니터링, 현장을 비교하는 특정 연구 및 보다 심층적인 분석을 위한 조직 수집의 기초를 위해 야생 어류의 건강을 평가하는 데 사용됩니다. 물고기는 화학 물질, 병원균 및 기생충의 복잡한 혼합물과 같은 스트레스 요인의 조합에 지속적으로 노출됩니다. 이러한 스트레스 요인의 조합은 질병 저항성 감소, 암 및 생식 기능 부전과 같은 부작용으로 이어질 수 있습니다.

시연된 기술을 통해 눈에 보이는 이상에 대한 표준화된 평가와 조직 병리학을 위한 혈액 및 조직, 연령에 대한 이석 및 기타 다운스트림 분석을 위한 조직 수집을 수행할 수 있습니다. 먼저 우리는 한 마리의 물고기를 사용하여 조직 병리학을 위한 혈액, 이석 및 조직 수집을 통한 일상적인 부검 기반 평가를 시연할 것입니다. 면역 기능 분석을 위한 전방 신장 수집 및 유전자 발현을 위한 간 또는 기타 조직을 이 방법에 추가하는 것도 이 방법에 추가되는 것으로, 이 또한 시연할 것입니다.

사후 변화를 피하기 위해 가능한 한 빨리 조직을 수집하는 것이 중요합니다. 따라서 우리는 일반적으로 2-3명이 조직을 수집하고 다른 사람이 데이터를 기록하는 조립 라인 공정을 가지고 있습니다. 웨스트 버지니아 대학교의 박사 과정 학생인 헤더 월시(Heather Walsh)와 샤이엔 스미스(Cheyenne Smith)와 최근 박사 학위를 취득한 라이언 브래햄(Ryan Braham)이 프로세스의 다양한 단계를 시연할 예정입니다.

제도적 지침에 따라 물고기를 채취하여 안락사시킨 후, 물고기의 무게를 측정하고 혈액 샘플을 채취합니다. 다음으로 끝에서 꼬리 끝까지 물고기의 총 길이를 측정합니다. 이전에 헤파린으로 코팅된 22 또는 23 게이지 바늘이 있는 3개의 CC 주사기를 측선 아래의 꼬리 영역 앞쪽에 삽입합니다.

척추에 닿을 때까지 필요를 위쪽으로 기울이고 약간 빼서 혈액 샘플을 얻습니다. 혈액 샘플을 수집 튜브로 옮기기 전에 바늘을 제거하고 날카로운 물건 통에 넣으십시오. 당일 여행의 경우 실험실로 돌아올 때까지 젖은 얼음에 혈액을 보관할 수 있습니다.

그런 다음 분석 될 때까지 섭씨 영하 80도에서 보관 된 플라즈마를 제거하기 위해 원심 분리됩니다. 매일 실험실로 돌아가지 않는 경우 원심분리기와 드라이아이스 보관이 필요합니다. 다음으로, 물고기의 몸, 지느러미, 눈 및 아가미에 있는 외부 이상이나 병변을 문서화합니다.

물고기에 거머리, 유충, trematode, metacercarial cysts 및 gill 기생충과 같은 외부 기생충이 있는지 검사합니다. 그런 다음 가위를 사용하여 항문 부위에서 수술실까지 복강을 엽니다. 근육의 플랩을 제거하여 내부 장기를 노출시킵니다.

내부 장기를 검사하고 일반적인 및 국소 변색, 융기 부위의 존재, 낭종, 기생충 및 크기 이상을 문서화합니다. 다음으로 간을 제거하려면 간동맥과 앞쪽 끝의 결합 조직을 절단합니다. 담낭에서 간을 부드럽게 들어 올리고 담낭에 구멍을 뚫지 않도록 주의하면서 장과 지방 지방에 대한 유착 및 연결을 다듬습니다.

간의 무게를 잰다. 그런 다음 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 간체 지수를 얻습니다. 다음으로 생식선을 제거하고 무게를 잰다.

당기지 않고 조심스럽게 작은 조직 샘플을 잘라냅니다. 한 물고기의 조직 샘플을 같은 용기에 넣습니다. 다음으로, 간의 다양한 영역에서 최소 5, 3-4mm 두께의 조각을 잘라 고정 용기에 넣습니다.

크기에 따라 고정 용기에 생식선 전체 또는 생식선 조각을 넣으십시오. 그런 다음 더 작은 전체 장기와 다른 큰 장기 조각을 고정 용기에 넣습니다. 비정상적인 조직이 관찰되면 정상 조직의 인접한 추가 조각을 보존합니다.

비늘, 지느러미 광선 및 이석과 같은 수많은 구조를 사용하여 물고기를 노화시킬 수 있습니다. 여기서 우리는 가장 정확한 이석을 사용하고 있습니다. 먼저 아가미 지협을 자르고 머리를 뒤로 구부립니다.

그런 다음 prootic bulla를 찾기 위해 신경두개골의 하부 부분 주위의 결합 및 근육 조직을 제거합니다. 뼈 절단기를 사용하여 뿌리 수포를 부수고 이석을 노출시킵니다. 이석은 육안으로 볼 수 있어야 합니다.

이석을 라벨이 부착되고 뚜껑이 없는 바이알에 넣고 연령 분석을 수행할 수 있을 때까지 실온에서 보관합니다. 수많은 화학 물질 및 기타 환경 스트레스 요인에 노출되면 면역 억제가 발생할 수 있습니다. 림프구, 대식세포 및 과립구는 이 조직에서 분리할 수 있으며 실험실에서 병원체를 죽이고, 항체를 생성하고, 종양 세포에 반응하고, 다른 기능을 수행하는 능력을 측정할 수 있습니다.

멸균 가위를 사용하여 메스와 집게를 사용하여 신장 앞쪽 조직을 제거합니다. 세포가 살아 있도록 전방 신장 샘플을 적절한 매체에 놓습니다. 멸균 휴대용 조직 분쇄기를 사용하여 샘플을 단일 세포 현탁액으로 균질화합니다.

그리고 샘플을 젖은 얼음 위에 올려 놓습니다. RNA 보존을 위해 2-3개의 작은 간 조각을 적절한 방부제에 10:1 비율로 방부제와 조직 간의 비율로 놓습니다. 이 연구에서는 3개의 오대호 우려 지역(AOC)과 참조 사이트인 Kewanee River에서 흰 빨판을 수집했습니다.

외부 종양이 있는 물고기의 비율은 세인트루이스 AOC의 15.5%에서 밀워키 AOC의 58%까지 다양했습니다. 눈에 띄지 않는 흰 반점, 약간 융기된 점액성 병변, 큰 유두종 병변을 포함한 여러 유형의 외부 병변이 관찰되었습니다. 이 연구에서 관찰된 많은 불연속적인 흰 반점과 점액성 병변, 특히 Kewanee 참조 부위는 신생물과 반대되는 과형성 병변이었습니다.

조직병리학적 분석은 또한 육안 관찰로 식별할 수 없는 간 종양을 확인했다. 일단 숙달되면 이 기술은 제대로 수행되면 물고기 한 마리당 15-20분 안에 완료할 수 있습니다. 이 절차를 시도하는 동안 특정 종에 대해 무엇이 정상인지 알고 이상을 설명할 때 가능한 한 일관되고 정확하게 설명하는 것이 중요합니다.

크기, 색상, 질감 및 위치를 포함합니다. 사진 설명서가 유용합니다. 이 기술은 모든 어종에 사용할 수 있으며 환경적 스트레스 요인의 부작용을 더 잘 이해하고 침입성 질병을 식별하기 위해 공간적 및 시간적으로 물고기 건강을 문서화하는 데 유용합니다.