Name: 잎 스프레이 질량 분석: 식물 조직에서 대사를 직접 평가 하는 급속 한 대기 이온화 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: 배우세요 잎 스프레이 질량 분석법으로 식물 조직에서 알칼로이드와 살충제를 직접 검출하는 방법을. 샘플 준비 없이 빠르게 대사물질을 정성·준정량 분석할 수 있습니다.

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이 작품은 NSF 식물 게놈 연구 프로그램 그랜트 IOS-1238812와 박사 친목 생물학 IOS-1400818에 의해 투자 되었다. 작품 또한 캐서린 A. Sammons에 몬산토 대학원 학생 친교에 의해 투자 되었다. 풀브라이트 아프리카 연구원 학자 프로그램 (2017-2018) Nokwanda P. Makunga에 게 수 여 하는 자금에 대 한 감사입니다. 우리는 크게 제시카 Prenni에서 nanospray 소스의 기부와 콜로라도 주립 대학에서 Proteomics, Metabolomics 시설 주셔서 감사합니다.

1. 잎에 대 한 Nanospray 소스 수정 스프레이 MS
<ol><li>잎 스프레이 MS에 대 한 수정된 nanospray 소스를 사용 합니다. 으로 유체 구성 잎 스프레이 MS, 소스에서 LC 프로브를 제거 하 여 소스를 수정 합니다.</li>
	<li>조립 잎 스프레이 MS 철사를 소스에 연결에 대 한 적절 한 핀 식물 조직에는 전압을 적용 됩니다. 솔더 핀 절연된 전선;의 한쪽 끝을 솔더 와이어의 반대쪽 끝을 클램프. 참고: 클램프 (악어 클립 타입) 되거나 치아를 없을 수 있습니다. 작은 조직에 대 한 치아 없이 클램프가 좋습니다. 클램프와 선택적 플렉스 팔 위치 식물 조직에 도움을 nanospray 소스에 추가할 수 있습니다. 이 프로토콜 특히 하이브리드 4 극 자 이온 함정 질량 분석기 MS 시스템에 잎 스프레이 MS를 수행 하는 방법을 설명 하는 참고 ( 테이블의 자료를 참조 하십시오); 그러나, 다른 MS 시스템 수행이 기술은6을 변경할 수 있습니다. 잎 스프레이 커플링 MS 휴대용 질량 분석기 실시간 화학 분석을 수행할 수 있습니다 현장 실험실19,20공장 설비 재료를 수송 하는 필요 없이.</li>
	<li>소스는 소스에서 높은 전압을 사용 하는 경우 발생할 수 있는 전기 방전을 줄이기 위해 아래 바닥에는 정전기 방지 바닥 매트를 배치 합니다.</li>
</ol>2. 잎 스프레이 ms MS 시스템의 준비
<ol><li>시스템 최근 사용 되었습니다, 그것은 냉각 하는 터치 하 고 대체 소스 및 스윕 콘 제거 허용 합니다. Nanospray 잎 스프레이 MS 소스를 첨부 합니다.</li>
	<li>다음과 같이 설정 하는 적절 한 이온화 매개 변수 조정 파일을 만듭니다: 칼 집, 보조, 그리고 청소 가스 0; 2-5 kV; 스프레이 전압 모 세관 온도 150-250 ° c; 그리고 50 S 렌즈 RF 레벨. 원하는 매개 변수8,13조정 파일을 저장 합니다. 전압 및 온도 조직의 최고의 이온화와 관심의 compound(s)에 대 한 최적화. 참고: 좋은 시작 포인트는 4 kV와 200 ° C</li>
	<li>와 잎 스프레이 MS 조정 파일을 포함 하 여 방법 파일: 긍정적이 고 부정적인 전체 MS; 70000;의 해상도 1 x 106;의 AGC 대상 최대 200 ms;의 그것 그리고 원하는 스캔 범위 m/z. 또는, 1 극성을 사용 합니다.</li>
</ol>3. 악기, 용 매, 및 식물 조직 준비
참고: 항상 장갑을 착용 하 고 맨 손으로 처리 된 식물 조직을 사용 하지 마십시오. 그렇지 않으면, 폴 리 에틸렌 글리콜 등 오염 이온 것 이다 스펙트럼을 지배 하 고 있다.
<ol><li>MS 시스템 빠른 샘플링을 같은 방에 분석에 대 한 식물 조직을.</li>
	<li>자연스럽 게 뾰족한 끝이 없는 식물 조직에 대 한 유리 슬라이드에 면도날을 사용 하 여 잘라 테이퍼 포인트 (그림 2). 악기 감도, 조직 유형, 그리고 관심의 compound(s)에 따라 분석에 필요한 조직의 양을 결정 (예를 들어, 젊은 S. tortuosum 잎 길이 즉 ~ 5 m m).<ol>
<li>잘라 S. tortuosum 10 주에 각각 포인트를 테이퍼 끝을 얇은 스트립으로 후 발 아 나뭇잎.</li>
	</ol>
</li>
	<li>집게를 사용 하 여 부드럽게 채워 것입니다 끝에 식물 조직을 선택 합니다. 조직 집게로 잡고, 신중 하 게 그것을 옮길 클램프. 주의: 경우에 전압은 악기 소스를 만지지 마십시오.</li>
	<li>유연한 팔과 와이어 클램프 식물 조직과 MS의 이온 입구 사이의 거리는 5-10 m m 3 배 4 중 극 (예를 들어, TSQ)에 대 한 MS 입구 라인 조직 위치 조정 및 선형 함정 4 중 극 (LTQ) 및 10 -이온 트랩 질량 분석기 (예를 들어, orbitrap)850 m m.<ol>
<li>소스에는 와이어의 반대쪽 끝을 연결 합니다. 첫 번째 시도 낮은 신호 강도 생성 하는 경우 이온 입구 가까이 식물 조직 이동 (최적화에 대 한 논의 를 참조).</li>
	</ol>
</li>
	<li>방법 파일; 데이터 파일의 이름을 지정 하 고 파일 저장 위치를 설정 합니다. 다음 MS 시스템에서 재생 을 클릭 하 여 설정 하 고 데이터 획득을 시작 하려면 시작 을 클릭 합니다.</li>
	<li>용 매 (예를 들어, 메탄올) 적용 손과 사용자를 보호 하기 위해 높은 전압 사이의 거리를 최대화 하기 위해 젤 로드 팁을 피펫으로 사용 하 여. 참고: 용 매 볼륨 필요한 크기, 건조, 및 직물의 질감에 따라 달라 집니다, 일반적으로 잎 2 ~ 20 µ L. S. tortuosum 필요 하지 않습니다 추가 하는 어떤 용 매. 신중 하 게 용 매를 적용 하 고 때에 전압은 악기 소스를 만지지 마십시오. LC MS 학년 용 매 및 산 세척 되었습니다 하 고 세제의 무료로 유리를 사용 합니다. 일부 조직에서 신호 식물 조직의 자연 물 콘텐츠 인 용 매를 추가 하지 않고 관찰할 수 있습니다. 그러나, 더 큰 신호 강도 및 감소 된 S/N 일반적으로 조직에 용 매를 적용 하 여 달성 된다.</li>
	<li>신호 지속으로 또는 적절 한 스펙트럼이 수집 될 때까지 데이터를 수집 일반적으로 30-60 s. 필요한 경우, 추가 용 매는 더 긴 시간 동안 높은 신호 강도 유지 하기 위해 적용 됩니다. 데이터 수집을 중지 하 고 MS 시스템 일시 중지.</li>
	<li>조직을 제거 하 고 세척 100% 메탄올과 보풀 지우기와 클램프. 공급 업체의 사양에 따라 잎 스프레이 MS에 의해 약 1-2 h 인수 후 MS 이온 입구 청소. 또한, 다른 조직 유형 분석 사이 MS 이온 입구 청소.</li>
</ol>4. 데이터 품질 평가
<ol><li>데이터 파일을 열고 기본 피크 대량 chronogram를 육안으로 직접 검사 합니다. 신호 강도 5.0 x 10 ~1.0 x 107 인지 확인8. 신호가 낮은 경우에, 이온 유입에 조직 가까이 이동 합니다. 높은, MS 시스템의 프런트 엔드는 더러운 될 것 이다, 그래서 이온 입구에서 조직을 이동 합니다.</li>
	<li>생산 하는 질량 스펙트럼의 이온의 유무에 따라, 매개 변수를 변경 합니다. 참고: 프로토콜 수 수 일시 중지 여기.</li>
</ol>5. 협동 대량 파편
<ol><li>이온 탠덤 대량 조각 (MS/MS);에 대 한 관심은 결정 > 1.0 x 10은 질량 스펙트럼 신호5 MS/MS에 대 한 이온의 선택에 대 한 충분 하다.</li>
	<li>4 소수 자릿수 밖으로 m/z 의 포함 목록으로 새로운 방법 파일을 만듭니다. 전역 목록 및 포함을 클릭합니다. PRM의 속성선택 조각화 에너지 [예를 들어, 30-50의 정규화 된 충돌 에너지 (후부 터)에 좋은 범위는 시작] 및 다른 MS/MS 매개 변수.<ol>
<li>Mesembrine 알 카 로이드에 대 한 MS/MS 데이터를 얻기 위해 다음 이온, 276.1583 m/z, 290.1742 m/z및 292.1897 m/z, 후부 터 35 조각화. 참고: MS 후 즉시 또는 나중에 MS/MS 데이터 수집을 수행할 수 있습니다. 동일한 조직 수 자주 채워 후 전체 MS 고 MS/MS 데이터를 다시 사용할 수 있습니다. 그러나, respraying는 충분 한 신호를 제공 하지 않으면, 새로운 조직을 사용 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>MS/MS 방법 파일 명명 된 데이터 파일을 로드 합니다. 켜고 MS 시스템 데이터 획득, 필요한 경우 용 매를 추가 시작 합니다. 적절 한 스펙트럼이 수집 하는 때 일반적으로 30-60 s 후 중지 인수.</li>
	<li>조각 이온을 할당할 때 많은 다른 에너지 조각을 수집 합니다. 참고: 이후 잎 스프레이 MS 컬럼에 분리 부족, 조각화 스펙트럼 많은 이온을 포함과 선명도가지고 도움이 될 것입니다 다른 에너지에서 분할 합니다.</li>
</ol>6. 상 상속 식별 정확한 질량과 탠덤 질량 조각화 하 여
<ol><li>Metlin21, 인간의 대사체 데이터베이스22, 대량 은행23, 지질 지도24, 국립 연구소의 공개적으로 사용 가능한 대사 산물 데이터베이스에서 정확한 질량 측정을 참조 하 여 상 상속 신원 확인 표준 및 기술 MS 검색25, Phytochemicals26또는 GNPS27에 대 한 존중.</li>
	<li>이러한 데이터베이스는 완전 한, 필요에 따라 화학적 특징 식물 종에 추가 문학 검토를 수행 합니다.</li>
	<li>잎에서 일치 조각화 이온 스프레이 MS/MS MS/MS 정보는 때 상기 데이터베이스 또는 문학. MS/MS 조각 이온의 수동 해석 또는 직접 분사 또는 LC-MS/MS에 의해 수행 하는 정통 표준의 조각화를 또는 사용.</li>
</ol>7. 데이터 분석
<ol><li>Proteowizard28에서 msConvert 도구 mzXML 파일을 MS raw 파일을 변환 합니다.</li>
	<li>최대 따기에 대 한 R에서 구현 XCMS 소프트웨어 패키지를 사용 합니다. 사용 하 여 직접 주입 처리 잎 스프레이 MS 분석 방법. 참고: 잘 주석 스크립트 데이터 처리에 사용 되는 https://github.com/HegemanLab/Leaf-Spray-Code에서 찾을 수 있습니다.</li>
	<li>반 정량적 측정, 실험 가변성에 대 한 회계 표준화 각 대사 산물의 강도 총 이온 전류 (TIC)에 의해 잎 스프레이 MS 신호 강도 다를 수 있습니다, 일부의 위치에서 약간의 변화 때문으로 소스와 잎 모양과 크기 차이에 잎.</li>
	<li>또는 사용 하 여 데이터 분석 또는 MZmine2에 대 한 공급 업체에서 제공한 소프트웨어 (http://mzmine.github.io/에서 찾을 수)29.</li>
</ol>

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저자는 공개 없다.

이 프로토콜의 성공적인 사용은 식물 종, 조직 유형, 및 관심의 대상 compound(s)에 대 한 다양 한 단계의 최적화에 의존합니다. 프로토콜에서 설명 하는 매개 변수는 좋은 시작 지점을 제공 합니다. 필요가 다음과 같은 실험 결정을 만든 테스트: 여부 사용 (1) 절단 또는 포경된 조직 (2) 용 매 없는 용 매, 사용 하는 (3) 용 매 그리고 어떤 볼륨, (4) 이온 입구에서 조직의 거리 있어야 합니다 (5) 전압 진폭. 최적화의 목표는 적어도 30에 대 한 지속 되는 연속 신호를 생성 하는 조건을 찾을 수 몇 분 s. 조건 정확한 질량 및 MS/MS 측정을 수행 하는 데 필요한 적절 하 고 재현할 수 신호 강도 제공 해야 합니다. 높은 신호 강도 조직에서 이온의 성공적이 고 신뢰할 수 있는 스프레이 통해 이루어집니다. 스프레이 질 이온 입구, 조직 및 이온 입구의 팁과 전기 전압 적용 거리를 가리키는 조직 팁의 선명도에 따라 달라 집니다. 성공적인 스프레이 매우 조직 팁의 포인트의 선명도에 따라 이며, 어떤 경우에 조...

식물에는 다양 한 화학 특성을 가진 작은 분자의 다양 한 포함 되어 있습니다. MS 검색 및 대사 산물1의 식별에 대 한 높은 감도와 특이성 원소 구성을 제공할 수 있습니다 때문에 식물 화합물을 분석 하기 위한 강력한 기술입니다. 가장 일반적으로, MS는 MS 분석1전에 크로마토그래피에 의해 구분 되는 용 매 추출 샘플에 수행 됩니다. 그러나, 액체 크로마토그래피 (LC)를 사용 하 여 긴 분석 시간을 요구 하며 관련 된 광범위 한 샘플 준비1자주 됩니다. 반면, 크로마토그래피 circumvents 그대로 조직의 직접적인 화학 분석은 매우 빠른 기술, 요구 하는 최소한의 샘플 준비2. 따라서, 경우에 컬럼에 단계를 forgone 있습니다 어디, 직접 화학 분석 매우 유리한 수 있습니다.
천연 제품 및 대사체학 연구를 위한 전형적인 액정-MS 냉동 또는 말린 식물 재료를 포함 하는 여러 조직 및 세포 유형3의 긴 대량 추출에 의존 합니다. 또는 식물 조직에서 대사 산물의 MS 검출 등의 직접적인 화학 분석 종류를 분리 하 고 준비 유물4를 피할 수 있습니다. 잎 스프레이 MS, 조직-스프레이5,6, 라고도 본질적으로 아무 샘플 준비5,7필요로 하는 직접적인 주변 이온화 MS 기술입니다. MS는 밀접 하 게 종이 스프레이 MS, 종이7에 예금 된 analytes의 검출을 허용 하는 분무 이온화의 특성을 가진 주변 이온화 기술 관련이 잎 스프레이. 이름, 불구 잎 스프레이 MS는 다양 한 유형의 식물 조직에 적용, 아니라 나뭇잎, 그리고 되었습니다6,,89, 과일, 씨앗, 뿌리, 꽃, 조직과 tubers, 다른 사람 사이 시연 10,,1112. 기술은 탐지8질량 분석기로 공장 설비 재료에서 직접 생 phytochemicals의 이온화를 촉진 한다. 잎 스프레이 MS 또한 다른 조직 유형 식물13에서 화학 물질의 공간 분포에 대 한 정보를 제공할 수 있습니다. 잎 스프레이 MS 용 매 추출 및 LC-MS와 비교 하는 경우 결과 잎 스프레이 MS trichomes13등 독특한 셀 형식에서 표면 대사 산물의 급속 한 탐지에 대 한 수 있습니다 제안 합니다. 그림 1 에서는 잎 스프레이 MS 실험 설정을 보여 줍니다. 직접 분무 이온화만 사소한 소스 수정 후 발생합니다. 금속 클램프를 통해 식물 조직에 적용 되는 높은 전압, 테일러 콘 운반 양 분무의 이온 유입에 이온을 형성 하는 고도로 청구 방울 스프레이 생산 이온화 발생 또는 용 매 appl에서 식물의 자연 액체에서 식물 표면에 폭발물입니다. 조직에 뾰족한 팁은 분무를 용이 하 게 하 고 자연스럽 게 발생 또는 수 만든 절단 하 여.
잎 스프레이 MS은 다양 한 응용 프로그램에 대 한 유틸리티 있는 그대로 식물 조직의 질적 및 반 정량 분석에 대 한 빠른 방법입니다. 예를 들어 기술 관련된 종, 구별 하 고 다른 조건 하에서 성장 하는 동일한 종에서 변화를 평가 내 인 성 화합물을 검출 하기 위하여 사용 되었습니다. 이전 연구이 방법은 beautyberry (새 나) 대사 산물을 측정 하 여 12 및 미국 인삼 (Panax quinquefolium L.) 6. 후자의 예에서 ginsenosides, 아미노산, 및 oligosaccharides 검출 될 수 원시 인삼 조직 일로 후. 야생 및 재배 미국 인삼은 괴 조각6에서 분화 되었다. 삼 괴 무결성 성공 잎 스프레이 MS, 후속 형태학 및 현미경 검사6에 대 한 허용 되는 보존 되었다. 또한, 공장 샘플에 외 인 화합물도 감지할 수 있습니다. 농약 (acetamiprid, diphenylamine, imazalil, linuron, 및 thiabendazole) 수 껍질 또는 과일과 야채9의 펄프에서 발견 되었습니다. 이러한 연구와 많은 다른 다양 한 특정 목적을 위한 잎 스프레이 MS의 유틸리티를 표시는, 상세한 프로토콜 하지 이전 보고 되었습니다.
여기, 프로토콜 설명 방법 특정 조직에 대 한 또는 화합물의 최적화에 집중 하지 않습니다. Mesembrine 알 카 로이드에서 Sceletium tortuosum (나) N.E.Br (Aizoaceae)의 탐지 종족, 조직에 대 한 리프 스프레이 MS 실험을 설정할 때 수행 해야 하는 필요한 최적화 대책을 논의 하기 위해 예제로 사용은 오히려, 또는 처음으로 compound(s)입니다. S. tortuosum 는 남아 프리 카 공화국의 반건조 Karroo 지역에 즙이 발병입니다. San의 전통 의학 및 코 코 사람들, 식욕과 갈증을 억제 뿐만 아니라 그것의 정신 및 진통 효과14,15에 관해서는 위해 이용 되었다. 현재, 표준화 된 추출 물 정신병과 신경 심리적 장애16,17의 치료에 사용 됩니다. 관심의 주요 화합물에는 알칼로이드 mesembrine와 그 파생 상품, 어떤의 대부분은 또한 관련된 Sceletium 종15에 발견 포함 됩니다. S. tortuosum 의 야생 및 재배 인구는 mesembrine alkaloids의 가변 농도 따라서 품질 관리 도전18을 제시. Mesembrine 알 카 로이드, 잎 스프레이, MS 등의 급속 한 탐지 하는 방법 Sceletium 제품 모니터링에 유용할 수 있습니다. 때문에 이전에 잎 스프레이 MS 기술에 대 한 더 자세한 시각적 실험 프로토콜 왔다, 우리는 S. tortuosum의 예를 사용 하 여 메서드를 보여주는 것입니다 다음 설명: nanospray 소스 수정에 선택 및 식물 조직의 준비, 데이터 수집, 결과의 해석 및 MS 매개 변수의 최적화.

<table><tbody><tr><td>Conn Pin</td><td>Digi-Key elctronics</td><td>WM2563CT-ND</td><td>핀은 전압 소형 클램프를 제공하기 위해 Thermo Scientific 소스에 삽입됩니다</td></tr>. <tr><td></td><td>Digi-Key elctronics</td><td>314-1018-ND</td><td>CLIP MICRO ALLIGATOR COPPER 5A</td></tr><tr><td>대형 클램프</td><td>Digi-Key elctronics</td><td>290-1951-ND</td><td>ALLIGATOR CLIP NARROW NICKLE 5A</td></tr><tr><td>열 수축</td><td>Digi-Key elctronics</td><td>Q2Z1-KIT-ND</td><td>to 커버 납땜 조인트</td></tr><tr><td>NSI 소스 나노 스프레이 이온 소스</td><td>Thermo scientific</td><td>NA</td><td>다른 브랜드는 Thermo 기기를 사용하지 않는 경우 작동합니다</td></tr><tr><td>Q Exactive- 하이브리드 사중극자 Orbitrap</td><td>Thermo scientific</td><td>NA</td><td>다른 브랜드는 Thermo 기기를 사용하지 않는 경우 작동합니다</td></tr><tr><td>Tune Software</td><td>Thermo scientific</td><td></td><td>다른 브랜드는 Thermo 기기를</td></tr> <tr>사용하지 않는 경우 작동합니다.<td>Xcalibur Software</td><td>Thermo scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>관심 식물 - S. tortousum</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

잎 스프레이 질량 분석: 식물 조직에서 대사를 직접 평가 하는 급속 한 대기 이온화 기술

Leaf Spray Mass Spectrometry: A Rapid Ambient Ionization Technique to Directly Assess Metabolites from Plant Tissues

식물은 그들의 화학 속성에 다양 한 작은 분자의 수천을 생성 합니다. 질량 분석 (MS)는 높은 감도와 특이성 분자 중량을 제공 하기 때문에 식물 대사 산물을 분석 하기 위한 강력한 기술입니다. 잎 스프레이 MS 공장 조직 분무, 제거 과정에서 크로마토그래피를 통해 직접 화학 분석을 위해 사용 되는 주변 이온화 기법입니다. Metabolites 샘플링을이 이렇게 다양 한 화학 클래스에 대 한 샘플 준비 필요 최소화 그대로 식물 조직에서 동시에 검출 될 수 있습니다. 고해상도, 정확한 대량 MS와 함께 사용 하면 잎 스프레이 MS의 대사 산물의 급속 한 탐지를 촉진 한다. 그것은 또한 복합 식별을 용이 하 게이 기술 함께 탠덤 질량 조각화 데이터 수집 가능입니다. 정확한 질량 측정 및 조각화의 조합 복합 정체성 확인에 도움이 됩니다. 잎 스프레이 MS 기술 nanospray 이온화 소스에 약간의 수정만을 요구 하 고 더 질량 분석기의 기능을 확장 하는 유용한 도구입니다. 여기, Sceletium tortuosum (Aizoaceae), 남아 프리 카 공화국에서 전통적인 약용 식물에서에서 신선한 잎 조직을 분석 된다; 수많은 mesembrine alkaloids 잎 스프레이 MS와 검색 됩니다.

10 주 후 발 아, 갓 수집 온실 재배 S. tortuosum 단풍 잎 스프레이 MS에 의해 분석 되었다. S. tortuosum 에서 대사 산물을 검출 하기 위한 실험 워크플로 MS는 그림 2에 나와 있는 잎 스프레이 사용 하 여 나뭇잎. 잎 선정, 테이퍼 끝 포인트를 형성 하는 얇은 스트립으로 잘라 되었고 잎 스프레이 MS 와이어 클램프 기구와 고정. 식물 조직 이온 입구에서와 x 축 및 y 축의 ~ 30 mm은 배치 했다. S. tortuosum 의 MS 단풍 잎 스프레이의 시작 시 이온 용 응용 프로그램 없이 발견 했다. Sceletium 가족의 식물 succulents 분무 이온화 용 매의 외부 응용 프로그램 없이 잎 스프레이 MS에 의해 가능 하 게 높은 함량으로 두꺼운 잎은. 그러나, 가장 일반적으로 식물 조직 이온 검출 용 응용 프로그램이...

잎 스프레이 질량 분석 샘플 준비를 최소화 하 고 착 색 인쇄기, 식물 조직에서 작은 분자의 급속 한 탐지에 대 한 수를 제거 하는 직접적인 화학 분석 기술 이다.

Plants produce thousands of small molecules that are diverse in their chemical properties. Mass spectrometry (MS) is a powerful technique for analyzing ...

Leaf spray MS는 다양한 응용 분야를 가진 온전한 식물 조직의 정성 및 반정량 분석을 위한 빠른 방법입니다. 이 기술의 주요 장점은 기본적으로 샘플 준비 없이 식물 조직을 직접 분석할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 Sceletium의 메셈브린 알칼로이드에 대한 좋은 통찰력을 제공하지만 다양한 다른 식물 종 및 살충제와 같은 외인성 화학 물질의 분석에도 사용할 수 있습니다.이 방법을 처음 접하는 개인은 각 식물 종, 조직 유형 및 관심 화합물에 대한 프로토콜을 최적화해야 하기 때문에 어려울 수 있습니다. 잎 스프레이를 위해 변형된 나노 스프레이 소스를 사용하십시오 MS.As 잎 스프레이 MS에 유체 성분이 필요하지 않은 경우 소스에서 액체 크로마토그래피 프로브를 제거하여 소스를 수정하십시오. 식물 조직에 전압을 인가하는 잎 스프레이 질량 분석 와이어에는 한쪽 끝의 와이어에 납땜된 핀과 다른 쪽 끝에 납땜된 클램프가 있습니다.시스템을 최근에 사용한 경우 스윕 콘에서 대체 소스를 제거하기 전에 만졌을 때 식히십시오. 그런 다음 나노 스프레이 잎 스프레이 MS 소스를 부착합니다. 마지막으로, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 tune 파일과 method 파일을 만듭니다.항상 장갑을 착용하고 맨손으로 취급한 식물 티슈는 사용하지 마십시오. 그렇지 않으면 폴리에틸렌 글리콜과 같은 오염 이온이 스펙트럼을 지배하게 됩니다. 분석을 위해 식물 조직을 질량 분석 시스템과 동일한 방으로 가져와 빠른 샘플링을 수행할 수 있습니다.끝이 자연적으로 뾰족하지 않은 식물 조직의 경우 유리 슬라이드에 면도날을 사용하여 가늘어지는 부분을 자릅니다. 발아 후 10주가 되면 Sceletium tortuosum 잎을 얇은 스트립으로 자르고 각 스트립은 끝이 가늘어져 점을 형성합니다. 집게를 사용하여 고정할 끝의 식물 조직을 부드럽게 선택합니다.집게로 조직을 잡고 조심스럽게 클램프로 옮깁니다. CL로 플렉시블 암과 와이어를 조정합니다.amp MS 주입구와 일직선으로 조직을 배치합니다. 각 특정 질량 분석기에 대한 이온 주입구로부터의 최적 거리에 대해서는 텍스트를 참조하십시오.첫 번째 시도에서 낮은 신호 강도가 생성되면 식물 조직을 이온 주입구에 더 가깝게 이동할 수 있습니다. 방법 파일을 로드합니다. 데이터 파일의 이름을 지정하고 파일 스토리지 위치를 설정합니다.그런 다음 재생을 클릭하여 MS 시스템을 켜고 시작을 클릭하여 데이터 수집을 시작합니다. 젤 로딩 팁이 있는 피펫을 사용하여 솔벤트를 도포하여 고전압과 사용자의 손 사이의 거리를 최대화하여 보호합니다. 신호가 지속되는 동안 또는 적절한 스펙트럼이 수집될 때까지(일반적으로 30-60초) 데이터를 수집합니다.데이터 수집을 중지하고 MS 시스템을 일시 중지합니다. 획득 후 조직을 제거하고 보푸라기가 없는 와이프에 100% 메탄올이 포함된 클램프를 세척합니다. 데이터 파일을 열고 기본 피크 질량 크로노그램을 육안으로 검사합니다.신호 강도가 약 1,000만에서 5억 사이인지 확인하십시오. Z 위의 M에 대한 포함 목록이 있는 새 방법 파일을 소수점 이하 네 자리까지 만듭니다. 전역 목록 및 포함을 클릭합니다.PRM의 속성에서 단편화 에너지 및 기타 탠덤 MS 매개변수를 선택합니다. 메셈브린 알칼로이드에 대한 Tandem MS 데이터를 얻으려면 정규화된 충돌 에너지 35에서 Z에서 276.1583M, Z에서 290.1742M, Z에서 292.1897M에서 이온을 조각화합니다. 다음으로, 탠덤 MS Method 파일과 명명된 데이터 파일을 로드합니다.MS 시스템을 켜고 필요한 경우 용매를 추가하여 데이터 수집을 시작합니다. 일반적으로 30초에서 60초 후에 적절한 스펙트럼이 수집되면 수집을 중지합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 데이터 분석을 수행합니다.잎 스프레이 MS에 의한 Sceletium tortuosum의 대사 프로파일링 및 양성 이온화의 대표적인 결과는 이 연구를 통해 260-295M를 표시하는 삽입물과 함께 표시되며, 이 연구를 Z.In 총 9개의 메셈브린 알칼로이드가 잎 스프레이 MS에 의해 검출되었으며 puditive 식별이 이루어졌습니다. 잎 스프레이 MS 총 이온 수 질량 크로노그램은 전체 획득 기간 동안 안정적인 신호가 유지된 성공적인 잎 스프레이 MS 실험을 나타냅니다. 각 피크에 대해 상단 숫자는 시간 (분)이고 하단은 M over Z.Tandem 질량 스펙트럼을 잎 스프레이 MS로 Sceletium tortuosum 절단 잎으로 만든 양이온화에서 수집 한 것입니다. 알칼로이드의 Puditive 식별은 mesembrine M 및 mesembrenone M 이성질체, mesembrine 및 mesembrine M dihydro에 대한 정확한 질량 및 질량 단편화로 이루어졌습니다.이 동영상을 시청한 후에는 잎 스프레이 MS를 사용하여 식물 대사 산물을 검출하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 잎 스프레이 MS는 내인성 화합물뿐만 아니라 살충제와 같은 외인성 화합물을 검출하는 데 사용되었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biochemistry

생화학

레이저 박리 전기 분무 이온화 (LAESI)는 질량 분광법에 대한 대기 압력 이온 소스입니다. 이미징 모드에서 중간 적외선 레이저 프로브 조직 섹션 또는 biofilm에 걸쳐 분자의 배포판. 이 기술은 원래 실험 조건 하에서 수행 다양한 bioanalytical 연구에 대한 새로운 접근법을 제공합니다.

LAESI 질량 분석법에 의해 생물 학적 조직 및 Biofilms의 대기 압력 분자 이미징

타겟이 불분명 한 대사는 대사 프로파일의 스냅 샷을 생성하는 가설을 제공합니다. 이 프로토콜은 혈청 세포 또는 조직에서 대사 산물의 추출 및 분석을 보여줍니다. 대사 산물의 범위는 액체 - 액체 상 추출을 사용하여 조사하는, 마이크로 ultraperformance 액체 크로마토 그래피 / 차동 분석 소프트웨어에 결합 고해상도 질량 분석법 (UPLC-HRMS).

Ultraperformance 액체 크로마토 그래피 고해상도 질량 분석 (UPLC-HRMS)를 사용하여 생물 소스에서 타겟이 불분명 한 대사

질량 분석 영상 (MSI)은 생물 학적 과정에 새로운 통찰력을 제공 할 수있는 자신의 네이티브 환경에서 화합물을 보존, 그대로 조직에서 다양한 화학 종을 발견하고 식별하는 데 사용할 수있는 강력한 도구입니다. 여기서 작은 분자의 분석을 위해 개발 MSI 방법이 설명된다.

의 대사 산물의 조사를위한 MALDI-질량 분석 이미징<em&gt; 개자리 truncatula</em&gt; 루트 결절

실시간 고해상도 질량 분석 다변량 통계 분석을 직접 분석에 의해 식물 재료의 종을 식별하는 방법이 제공된다.

실시간 고해상도 질량 분석에 직접 분석을 사용하여 식물 소재의 신속한 높은 처리량 종 확인

하나의 샘플을 사용하여 생물학적 조직에서 지질, 대사 산물 및 단백질을 포괄적으로 추출하기위한 프로토콜이 제시됩니다.

단일 시료의 대사 산물, 지질 및 단백질의 종합 분석을위한 간단한 분취 추출 방법

이 프로토콜 자연 유기 물질과 다른 생태계에서 미생물 단백질의 완전 한 쌍 특성에 culminating 보완 분석 및 omics 기술에 대 한 단일 처리량을 설명 합니다. 이 이렇게 강력한 비교 대사 경로 및 변환을 설명 하는 온실 가스 생산 및 환경 변화에 대 한 응답을 예측에 대 한 중요 한 식별 수 있습니다.

복잡 한 자연 유기 물질 혼합물을 특성화에 대 한 단일 처리량 보완 고해상도 분석 기법

밀 곡물 대사 산물 및 지질의 비표적 분석을위한 방법이 제시된다. 이 프로토콜에는 아세토니트릴 대사산물 추출 방법 및 역위상 액체 크로마토그래피 질량 분광법 방법이 포함되며, 양극 및 음전소 이온화 모드로 수집됩니다.

밀 곡물의 비표적 액체 크로마토그래피 질량 분광계 기반 대사체학 분석

이 방법은 xenobiotics에 드러날 때 S. 알바 잎에 있는 신진 대사 과정을 이해하기 위하여 질량 분광법 화상 진찰 (MSI)를 이용합니다. 이 방법을 사용하면 관심 있는 화합물과 예측된 대사산물의 공간 적 국소화를 특정, 그대로 조직 내에서 할 수 있습니다.

살릭스 알바에서 제노바이오틱스 대사에 대한 조사는 질량 분광화상 영상을 통해 나뭇잎

본 연구에서는 플랜트에서 DESI-MSI 샘플을 준비하기 위한 일련의 방법을 제시하고, DESI 어셈블리 설치, MSI 데이터 수집 및 처리 절차를 상세히 설명한다. 이 프로토콜은 식물에서 공간 대사체 정보를 획득하기 위한 여러 조건에 적용될 수 있습니다.

DESI-MSI를 이용한 중국 전통 의학의 공간 대사체에서 확인된 대사산물의 시각화

액체 크로마토그래피 고분해능 질량 분석법과 결합된 13C 6-Glucose 라벨링의 개발된 방법은 다재다능하며 약용 식물에서 2차 대사 산물의 합성에 관여하는 1차 장기 및 경로에 대한 향후 연구와 이러한 2차 대사 산물의 포괄적인 활용을 위한 토대를 마련합니다.

13명LC-MS와 관련된 C6-포도당 라벨링: 2차 대사산물 합성에서 식물 일차 장기 식별

트로판 알칼로이드의 고속 질량 분석법(MS)/질량 분석법(MS) 기반 주석 및 분류를 위한 방법을 제시하며, 이는 트로판 함유 샘플의 예비 복제 및 분리를 위한 새로운 알칼로이드의 발견 모두에 유용합니다.

천연 제품 연구에서 액체 크로마토그래피 탠덤 질량분석법의 응용 분야: 사례 연구로서의 트로판 알칼로이드

배우세요 잎 스프레이 질량 분석법으로 식물 조직에서 알칼로이드와 살충제를 직접 검출하는 방법을. 샘플 준비 없이 빠르게 대사물질을 정성·준정량 분석할 수 있습니다.

잎 스프레이 질량 분석: 식물 조직에서 대사를 직접 평가 하는 급속 한 대기 이온화 기술

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