잎 스프레이 질량 분석: 식물 조직에서 대사를 직접 평가 하는 급속 한 대기 이온화 기술

Leaf spray MS는 다양한 응용 분야를 가진 온전한 식물 조직의 정성 및 반정량 분석을 위한 빠른 방법입니다. 이 기술의 주요 장점은 기본적으로 샘플 준비 없이 식물 조직을 직접 분석할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 Sceletium의 메셈브린 알칼로이드에 대한 좋은 통찰력을 제공하지만 다양한 다른 식물 종 및 살충제와 같은 외인성 화학 물질의 분석에도 사용할 수 있습니다.

이 방법을 처음 접하는 개인은 각 식물 종, 조직 유형 및 관심 화합물에 대한 프로토콜을 최적화해야 하기 때문에 어려울 수 있습니다. 잎 스프레이를 위해 변형된 나노 스프레이 소스를 사용하십시오 MS.As 잎 스프레이 MS에 유체 성분이 필요하지 않은 경우 소스에서 액체 크로마토그래피 프로브를 제거하여 소스를 수정하십시오. 식물 조직에 전압을 인가하는 잎 스프레이 질량 분석 와이어에는 한쪽 끝의 와이어에 납땜된 핀과 다른 쪽 끝에 납땜된 클램프가 있습니다.

시스템을 최근에 사용한 경우 스윕 콘에서 대체 소스를 제거하기 전에 만졌을 때 식히십시오. 그런 다음 나노 스프레이 잎 스프레이 MS 소스를 부착합니다. 마지막으로, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 tune 파일과 method 파일을 만듭니다.

항상 장갑을 착용하고 맨손으로 취급한 식물 티슈는 사용하지 마십시오. 그렇지 않으면 폴리에틸렌 글리콜과 같은 오염 이온이 스펙트럼을 지배하게 됩니다. 분석을 위해 식물 조직을 질량 분석 시스템과 동일한 방으로 가져와 빠른 샘플링을 수행할 수 있습니다.

끝이 자연적으로 뾰족하지 않은 식물 조직의 경우 유리 슬라이드에 면도날을 사용하여 가늘어지는 부분을 자릅니다. 발아 후 10주가 되면 Sceletium tortuosum 잎을 얇은 스트립으로 자르고 각 스트립은 끝이 가늘어져 점을 형성합니다. 집게를 사용하여 고정할 끝의 식물 조직을 부드럽게 선택합니다.

집게로 조직을 잡고 조심스럽게 클램프로 옮깁니다. CL로 플렉시블 암과 와이어를 조정합니다.amp MS 주입구와 일직선으로 조직을 배치합니다. 각 특정 질량 분석기에 대한 이온 주입구로부터의 최적 거리에 대해서는 텍스트를 참조하십시오.

첫 번째 시도에서 낮은 신호 강도가 생성되면 식물 조직을 이온 주입구에 더 가깝게 이동할 수 있습니다. 방법 파일을 로드합니다. 데이터 파일의 이름을 지정하고 파일 스토리지 위치를 설정합니다.

그런 다음 재생을 클릭하여 MS 시스템을 켜고 시작을 클릭하여 데이터 수집을 시작합니다. 젤 로딩 팁이 있는 피펫을 사용하여 솔벤트를 도포하여 고전압과 사용자의 손 사이의 거리를 최대화하여 보호합니다. 신호가 지속되는 동안 또는 적절한 스펙트럼이 수집될 때까지(일반적으로 30-60초) 데이터를 수집합니다.

데이터 수집을 중지하고 MS 시스템을 일시 중지합니다. 획득 후 조직을 제거하고 보푸라기가 없는 와이프에 100% 메탄올이 포함된 클램프를 세척합니다. 데이터 파일을 열고 기본 피크 질량 크로노그램을 육안으로 검사합니다.

신호 강도가 약 1,000만에서 5억 사이인지 확인하십시오. Z 위의 M에 대한 포함 목록이 있는 새 방법 파일을 소수점 이하 네 자리까지 만듭니다. 전역 목록 및 포함을 클릭합니다.

PRM의 속성에서 단편화 에너지 및 기타 탠덤 MS 매개변수를 선택합니다. 메셈브린 알칼로이드에 대한 Tandem MS 데이터를 얻으려면 정규화된 충돌 에너지 35에서 Z에서 276.1583M, Z에서 290.1742M, Z에서 292.1897M에서 이온을 조각화합니다. 다음으로, 탠덤 MS Method 파일과 명명된 데이터 파일을 로드합니다.

MS 시스템을 켜고 필요한 경우 용매를 추가하여 데이터 수집을 시작합니다. 일반적으로 30초에서 60초 후에 적절한 스펙트럼이 수집되면 수집을 중지합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 데이터 분석을 수행합니다.

잎 스프레이 MS에 의한 Sceletium tortuosum의 대사 프로파일링 및 양성 이온화의 대표적인 결과는 이 연구를 통해 260-295M를 표시하는 삽입물과 함께 표시되며, 이 연구를 Z.In 총 9개의 메셈브린 알칼로이드가 잎 스프레이 MS에 의해 검출되었으며 puditive 식별이 이루어졌습니다. 잎 스프레이 MS 총 이온 수 질량 크로노그램은 전체 획득 기간 동안 안정적인 신호가 유지된 성공적인 잎 스프레이 MS 실험을 나타냅니다. 각 피크에 대해 상단 숫자는 시간 (분)이고 하단은 M over Z.Tandem 질량 스펙트럼을 잎 스프레이 MS로 Sceletium tortuosum 절단 잎으로 만든 양이온화에서 수집 한 것입니다. 알칼로이드의 Puditive 식별은 mesembrine M 및 mesembrenone M 이성질체, mesembrine 및 mesembrine M dihydro에 대한 정확한 질량 및 질량 단편화로 이루어졌습니다.

이 동영상을 시청한 후에는 잎 스프레이 MS를 사용하여 식물 대사 산물을 검출하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 잎 스프레이 MS는 내인성 화합물뿐만 아니라 살충제와 같은 외인성 화합물을 검출하는 데 사용되었습니다.