Name: 실험실 토끼에 하드 진드기 감염의 다양 한 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: 학습하세요 실험실 토끼에 하드 진드기 감염을 위한 다양한 모델을 사용하는 방법을. EVA 폼 캡슐 프레임을 활용한 이 기술은 진드기 생물학 및 숙주-매개체 상호작용 연구에 적합하며, 간단하고 수정 가능한 프로토콜을 제공합니다.

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우리는 Evelyne 르 Naour, 프랑스 국립 연구소의 농업 연구 (INRA), 알랭 Bernier (INRA), Océane Le Bidel (ANSES)의 기술 지원을 인정 한다. 콘 수 엘로 Almazán 우수성, 통합 생물학의 신흥 감염 증 (LabEx IBEID), 파스퇴르 연구소의 실험실에서에서 장학금에 의해 지원 되었다. 토끼와 양 ANSES에 의해 구매 되었다. 이 작품의 일부는 Y. 공원 건강 그랜트 RO1AI090062의 국가 학회에 의해 투자 되었다. 닥터 제프리 L. 블레어 원고 검토에 대 한 인정 이다.

참고:이 연구에서 토끼 유지 되었다 음식 표준 장에 고 광고 libitum 음식, 환경 및 산업 보건 및 안전 (ANSES) 공인 동물 시설 Maisons-Alfort, 프랑스에서의 프랑스 기관에서 제공 하는 물. 동물 두 번 매일 어떤 비정상적인 피부 반응, 건강 문제 또는 합병증에 대 한 두 명의 경험이 풍부한 기술자에 의해 감시 되었다. 실험 방 진드기의 우발적인 탈출을 피하기 위해 더블 양면 테이프와 출입구의 내부 프레임으로 확보 했다. 방법이 최선 두 사람이 한 팀으로 작동 하지만 단일 한 경험 있는 사람에 의해 힘으로 완료할 수 있습니다. 대부분 토끼 유 순 하 고 침착 하지만, 긴장의 표시를 조작 하는 동안 발생할 수 있습니다. 그는 토끼가 손상 되지 자체 고군분투 하 여 되도록 수동 구속 눌러 부드럽게 한 손으로 목의 아저씨의 다른 한편에서 지 원하는 하는 동안 수행할 수 있습니다 뒷. 6 개월 된, Rambouillet 여성 양 유지 했다 생물 의학 연구 (CRBM) 시설에 대 한 센터에서 Alfort 국립 수의학 학교 (ENVA)에서 어디 물과 음식을 제공 된 ad libitum, 그리고 그것은 매일 두 번 확인 했다.
참고: 우리의 실험실 토끼와 양 틱 각각 동물 실험 맨이 Anses/ENVA/UPEC, 허가 번호 01741.01 및 11/10/16-5B, 윤리 위원회에 의해 먹이 대 한 사용할 수 있는 권한을 받았다. 우리가 우리의 실험에만 병원 체 무료 틱을 사용,이 연구에 사용 된 모든 토끼 화이트 래빗 협회, 파리, 프랑스를 통해 채용을 위해 제안 되었다.
1입니다. 캡슐의 준비
<ol><li>EVA 거품 시트 (그림 1A)에서 캡슐의 원하는 크기를 잘라. 외부 라운드 (그림 1B) 토끼 피부에 붙이는 때 실수로 분리를 최소화 하기 위해 캡슐의 모서리. 참고: 캡슐의 프레임 두께 이어야 한다 약 8 m m. 5 m m 두꺼운 거품 시트를 사용 하 여 애벌레, 님프, 및 작은 틱 성인 종 Ixodes. 1 cm 두께 거품 시트는 Amblyomma sp., Hyalomma sp., 캡슐의 크기 변화 등 성인 틱 실험 요구 사항에 따라 큰 크기에 적합 합니다. 예를 들어 20 Ixodes 성인 커플, 200 님프, 또는 1000 애벌레, 우리가 사용 하 여 내부 캡슐 크기 5 x 5 cm2, 6 x 7 cm2 또는 7 x 9 cm2각각.</li>
	<li>절단 폭 8 m m 자동 접착 걸이의 부착 테이프 ( 재료의 표참조) 하 고 준비에 바 폼 프레임 (그림 1C)에 그들을 스틱.</li>
	<li>커트 접착 루프에서 같은 크기 스트립 ( 재료의 표참조) 테이프와 고리 양쪽에 바인딩할 EVA 폼 프레임 (그림 1D)에 연결.</li>
	<li>EVA 거품 프레임의 크기를 잘 모기 망 (메쉬 크기 보다 작은 50 µ m)의 적절 한 크기를 잘라내어 자동 접착 루프 (그림 1E , 1F)에 충실. 필요한 경우에 돌출부를 잘라. 참고:이 유형의 캡슐 캡슐의 다른 씰링 시스템은 애벌레 먹이 (보충 그림 1)에 걸린 통해 애벌레의 우발적인 탈출을 방지 하기 위해 필요 하지만 님프와 성인 하드 진드기 종의 먹이 사용할 수 있습니다. 후크 및 루프 사이드입니다.</li>
</ol>2. 진드기 감염 전에 토끼의 준비
<ol><li>토끼 뒤와 측 클리퍼 (그림 2A)와 함께 사용할 수의 영역을 면도.</li>
	<li>준비 된 캡슐의 전체 표면에 비 자극 라텍스 접착제를 적용 하 고 1 분 (그림 2B)에 대 한 기다립니다.</li>
	<li>(그림 2C 및 2D) 약 3 분 동안 손가락으로 (모서리)에 특히 피부에 눌러 캡슐을 붙입니다. 참고: 둘 이상의 캡슐 gluing 때 (그림 2E 와 2F) 그들 사이 적어도 5 mm 공간을 유지 있는지 확인 합니다. 우리가 일반적으로 척추의 영역을 피하기 위해 하지만 필요한 경우에 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>약간 피부에 그들의 부착을 시각적으로 확인 하는 캡슐을 들어올립니다. 하는 경우 연결 되지 않은 지역, 주걱을 사용 하 여 접착제를 적용 하 고 또 다른 3 분에 대 한 누릅니다.</li>
	<li>자 켓 손상 (그림 2G)을 방지 하기 위해 토끼의 뒷 발에 보호 테이프를 적용. 참고:이 단계는 선택적 이며 주로 자 켓 손상, 하지 손상 틱 캡슐을 방지 하기 위해.</li>
	<li>입구를 통해 앞 다리를 놓고 있는지 토끼 남아 편안 하 게 호흡 하는 목 강화 토끼 자 켓을 입었다. 이 단계에서 탄성 인클로저를 통해 뒷 다리를 배치 하지 고 지퍼 오픈 (그림 2H)를 두고.</li>
</ol>3. 진드기 감염
<ol><li>바늘-엔드 자르고 면 (그림 1G)으로 연결 된 플라스틱 주사기 (1 또는 5 mL에 따라 개인의 수)으로 진드기를 놓습니다. 적은 양의 진드기 감염 될 경우, 집게를 사용 합니다. 참고: 눈금 식민지 유지 보수 허용 부풀어 오른된 틱 female(s) 후속 해칭 당시 애벌레의 힘 드는 조작 하지 않도록 하는 고무 밴드12 에 의해 싸여 모기 망으로 덮여 주사기 (5 또는 10 mL) 안에 그들이와 산란은 (그림 1H) 호스트에 적용 됩니다. 또한, 완전히 부풀어 오른된 애벌레 주사기에 갈 다를 수 있습니다 (추가 그림 1I; 5 또는 10 mL)로 nymphs 토끼의 직접적인 감염에 대 한.</li>
	<li>주사기를 놓고 오픈 통해 캡슐에 깊은 코너와 주사기 플런저를 추진 하 여 진드기를 예방. 천천히 트위스트 토끼 피부 쪽으로 플런저는 플런저에 연결 된 나머지 진드기를 제거 하 고 동시에 (그림 2나) 캡슐에서 꺼내. 참고: 몇몇은의 개인 캡슐, 크롤 링 하는 경우 반환 그들 집게를 사용 하 여.</li>
	<li>후크 및 루프 테이프를 refastening 캡슐을 닫습니다.</li>
	<li>재킷의 zip 탄성 인클로저 폐쇄 후면에는 토끼의 뒷 다리를 놓습니다. 참고: 안락을 보장 하 고 또한 재킷에 씹는 피하기 위하여 집게 손가락 재킷의 목과 토끼 사이 들어갈 수 있는 확인 합니다.</li>
	<li>토끼 케이지 (그림 2J)을 반환 합니다. 참고: 감염에서 시간 충만 틱 컬렉션을 다른 틱 종 및 발달 단계 마다 다. 예를 들어 Ixodes scapularis 및 Ixodes ricinus, 님프, 어른과 애벌레 먹이의 기간은 6-9, 3-4 및 2-3 일, 각각. 실험실 조건에서 29 다른 하드 틱 라이프 사이클에 대 한 참조 목록 (2016)9레빈과 Shumacher에서 찾을 수 있습니다.</li>
</ol>4. 수집 및 진드기의 모니터링
<ol><li>토끼 케이지에서 벤치에 고 재킷의 압축을 풉니다.</li>
	<li>부드럽게 손으로 토끼를 제 지. (그림 2 K 및 2 L) 후크 및 루프 테이프 잠금과 여 캡슐을 열고 부풀어 오른된 애벌레 (보충 그림 1) 또는 플라스틱 접시로 nymphs 이나 성인 (그림 2L 집게를 사용 하 여 진드기를 수집 ). 진드기는 필요한 경우 부분적으로 (하지 충만) 먹이, 틱 트위스터 또는 집게를 사용 하 여 그들을 분리. 참고: 단계 3.1에서에서 참고 하시기 바랍니다 틱 식민지를 유지 하는 경우. 특정 틱 종에 따라 부풀어 오른된 틱 적절 한 습기 조건과 온도 유지 합니다.</li>
	<li>필요한 경우, 캡슐을 후크 및 루프 테이프 refasten.</li>
</ol>5입니다. 토끼의 복구
<ol><li>캡슐에서 모기 망을 완전히 제거 하 고 토끼 (그림 2M)에 자 켓을 두고.</li>
	<li>3-4 주 기다려 하 고 부드럽게 정돈 모서리 (그림 2N) 중 하나에 의해 캡슐을 제거 하려고 합니다. 만약 캡슐 아직도 단단히 부착 하 고, 1 주일 후이 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>자 켓과 토끼 감 금 소에 복구 하자를 제거 합니다. 참고: 캡슐이 해제 되 면 비정상적인 반응에 대 한 토끼의 피부를 확인 하십시오. 일반적으로 치료 필요 하지만, 자극의 경우 부드럽게 로션을 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>프로토콜 및 실험 허용, 복구 된 토끼 (그림 2O)를 재사용 하 또는 입양에 대 한 제공 수 있습니다. 참고: 토끼 표시 되었습니다 반복된 틱 침입13;에 한번 노출 진드기 저항을 취득 따라서, reinfestations는 실험에 필요 하지 않으면를 권장 하지 않습니다.</li>
</ol>

<ol><li>Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Biology-Ticks-1-Daniel-Sonenshine/dp/019974405X">Biology of Ticks, Vol I</a>. , Oxford University Press. (2014).</li>
<li>Kröber, T., Guerin, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+feeding+assays+for+hard+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Parasitology%22%5BJournal%5D)">In vitro feeding assays for hard ticks.</a> Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

이 전체 프로토콜의 가장 중요 한 단계 면도 피부에 단단히 캡슐 접착제입니다. 이러한 이유로, 적어도 3 분 동안 일정 한 압력은 모서리에 특히 중요 합니다. 그것은 그들을 적용 하는 것이 중요 때 캡슐에 틱 접종, 동안을 피하기 위해 틱 탈출 씰링 오픈에서 반대 구석으로 깊은. 실험을 계획할 때 모든 캡슐 씹는 또는 긁 적 손상을 방지 하려면 재킷에 의해 보호 됩니다 있는지 확인 합니다. 재킷의 목 지역 토끼 편안 하 게 유지 하지만 충분히 느슨한 씹는 방지 하기 위해 꽉 충분히 있는지 확인 합니다.
설명된 방법의 주요 장점 중 하나는 그것의 단순과 크기 면에서 그 수정 이며 캡슐의 번호를 사용할 수 있습니다. 우리의 실험 동안 피부에서 캡슐의 초연 하지 관찰 되었다. 그러나, 가끔 손상 재킷 (안 캡슐)의 토끼에 의해 발생할 수 있습니다.
토끼에서, 캡슐에 완벽 하 게 부풀어 오른 분리 틱 (주로 미 숙 단계 애벌레와 님프 등...

단단한 진드기 (Ixodidae) 느린 먹이 절지동물으로 잘 알려져 있으며, 몇 일 동안 호스트에 연결할 수 있습니다 또는 주, 종에 따라 발달 단계1. 이러한 의무 hematophagous 절지동물 다양 한 박테리아, 원생 동물, 바이러스 등 전염 성 요원의 벡터 이며, 따라서 인간과 동물 건강1에 상당한 위험을 제시. 때 틱 생물학을 공부 하거나 평가 하는 새로운 제어 방법, 먹이 체계는 효과적인 틱의 설립은 효과적으로 실험을 디자인 하 고 연구의 목적은 달성 중요 합니다. 최근, 여러 인공 틱 먹이 시스템 (살아있는 동물의 사용을 피하고) 개발된2,,34 이었고 그들은 가능한 사용 해야 합니다. 그러나, 이러한 시스템 틱 살아있는 동물에 먹이 완전히 대체할 수 없어 그리고 그들은 과학적 연구에 필요한 많은 생리 조건에 대 한 적절 한 대체 되지 않습니다. 따라서, 어떤 경우에 실험 동물 호스트의 사용은 실험 결과의 관련성을 보장 하기 위해 중요 합니다.
실험실 뉴질랜드 토끼 여러 ixodid 틱 종5,6,7,,89에 대 한 가장 적합 한 하 고 액세스할 수 있는 호스트를 나타났습니다. 틱 토끼에 먹이의 두 가지 일반적인 전략이 자주 사용 되었습니다: a) 면 천이나 양말6,7, 덮여 토끼 귀에 먹이 그리고 b) 먹이 면 가방9, 나일론 병10 또는 내 오프 렌 실11 토끼의 뒤에 붙어. 토끼의 귀에 먹이 우아한 시스템 때문에 아니다 특히 초기 단계, 애벌레 (nymphs) 진드기 수 크롤 링 하 고 외가도, 동물에 대 한 불편 하 고 틱 먹이의 복구의 모니터링에 깊은 연결 부풀어 오른 틱 어려운입니다. 이 시스템은 또한 대표 하는 동물에 대 한 상당한 불편 엘리자베스 칼라, 보호 양말에 의해 완전히 포함 하는 귀에 두 틱 그룹에 제한. 다른 시스템9,10,11 는 확실히 더 고급 하드 틱 식민지 유지 보수에 적합. 그러나, 그들은 먹이 챔버의 크기/모양 대 뿐만 아니라 토끼에 실험 그룹의 숫자에 제한 됩니다. 또한, 이러한 프로토콜은 종종 다리 긁 고 손질을 방지 하기 위해 엘리자베스 목걸이의 사용을 피하기 위해 후면 토끼 다리를 절 필요 합니다.
여기 우리는 엘리자베스 목걸이 필요 없다 또는 실험 기간 동안 다리를 절 재킷, 다시 적용 하는 토끼에 붙어 폐쇄 실에서 단단한 진드기의 여러 그룹을 먹이, 힘 드는 비 간단 하 고 매우 효과적인 방법을 제안 합니다. 특히, 우리의 시스템을 에틸렌-비닐 아세테이트 (EVA) 거품 시트 모기 망 하 고 빠른 응고 (3 분) 비 자극 하는 라텍스 접착제로 다시 면도 토끼에 붙어에서 만든 탄성 캡슐을 사용 합니다. 이 기술은 원하는 크기 또는 모양, 여러 캡슐의 첨부 파일을 허용 하 고 실험 후 몇 주 동안 토끼는 완. 시스템은 주로 nymphal 및 성인 하드 틱 단계에 적합 하지만 약간 수정 그것 애벌레도 먹이 대 한 사용할 수 있습니다. EVA 거품 기반 방법 하드 틱 먹이 척추 호스트, 예 양 (는이 종이에 대안 중 하나로 표시 됩니다)의 다른 유형에 적응 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>뉴질랜드 토끼 (2.5-3.5 kg)</td><td>찰스 리버&nbsp;</td><td>스트레인 코드 571</td><td></td></tr><tr><td>Rambouillet 양</td><td>현지 공급자-진드기 없는 농장</td><td>여성 6개월 된</td><td></td></tr><tr><td>EVA 폼 5mm 두께&nbsp;</td><td>코스프레 샵</td><td>EVA-PE451kg (950mm x 450mm)</td><td>10 mm PE45 kg 폼은 코스프레 샵에서 대형 성인 진드기 종에 사용할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>폼 시트 9" X 12" 6 mm-화이트</td><td>아마존</td><td>FOAMSHT6-20</td><td>6 mm-EVA 폼 ca는 코스프레 샵의 폼 대신 아마존을 통해 주문할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>전체 길이 토끼 재킷&nbsp;</td><td>하버드 장치, Inc.&nbsp;</td><td>620077- 중형, 6270078 - 대형&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>비독성 라텍스 접착제&nbsp;</td><td>눈물 수선공&nbsp;</td><td>패브릭 & 가죽 접착제</td><td></td></tr><tr><td>튜블러 코튼 정형외과 스타키넷</td><td>BSN Medical</td><td>9076 (12-15 cm 넓이)</td><td></td></tr><tr><td>모기메시&nbsp;</td><td>Loisirs Creatifs</td><td>매우 미세한 필터 나일론 메쉬 패브릭</td><td>메시 크기가 50 미만인 모기 메시 또는 커튼 재질; m이 적합합니다.</td></tr><tr><td>백혈질&nbsp;</td><td>BSN 의학 S.A.S</td><td>LF 72361-02</td><td></td></tr><tr><td>접착 훅 앤 루프 테이프</td><td>AIEX 스토어</td><td>AIEX 39.37 피트 / 12m 후크 및 루프 자체 접착 테이프 롤, 20mm 너비, 흰색</td><td>Fullfiled 아마존</td></tr><tr><td>빠른 건조 접착제 &nbsp;</td><td>픽스투트&nbsp;</td><td>초강력 접착제</td><td></td></tr></tbody></table>

실험실 토끼에 하드 진드기 감염의 다양 한 모델

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

틱 연구에 있는 동물의 사용은 다양 한 하드 틱 식민지의 유지 보수를 포함 하 여 실험실에서 실험 목적에 대 한 중요 합니다. 틱에서 (계란)를 제외 하 고 모든 발달 단계는 hematophagous, 하 고 그들의 수명 주기의 성공적인 완료에 대 한 필수적입니다 때 그들의 척 추가 있는 호스트에 연결 된 혈액 식사를 취득 합니다. 여기 토끼에 단단한 진드기의 먹이를 쉽게 열 수 있는 캡슐을 사용 하는 간단한 방법을 설명 합니다. 제안된 된 방법의 이점은 그것의 간명, 짧은 기간 및 특정 실험 요구 사항을 요구에 가장 중요 한 것은 다양 한 조정 포함 한다. 메서드를 사용 하면 가능 하 게 (다양 한 크기)의 여러 챔버를 사용 하 여 여러 단계 또는 다른 실험적인 그룹의 전반적인 동물 요구를 줄이면서 먹이 허용 같은 동물에. 비 자극 하 고 쉽게 액세스할 수 재료를 사용 수 수 쉽게 실험에서 발견 및 입양에 대 한 제공 또는 재사용 윤리적인 프로토콜 허용 하는 경우 동물에 불편을 최소화 합니다.

여기 우리가 처음으로 하드 체크 EVA 폼에 먹이의 상세한 단계-의해 단계 방법 제안 면도 토끼의 뒤에 적용 하는 캡슐 자 켓 (그림 1 및 그림 2)에 의해 보호. 이 프로토콜은 다양 한 종류의 실험에 적합 때 동일한 호스트에 다른 틱 그룹이 필요 하 고 단단한 진드기의 대량 양육을 위해 또한 사용 될 수 있습니다. 먹이 주로 실험실에서 성공 틱 틱 개인의 체력과 기술 자체 보다는 특정 틱 종 토끼 호스트의 적합성에 의존 합니다. EVA 폼을 사용 하 여 우리의 시스템 캡슐 다시 토끼에 붙어 양 (같은 실험실 호스트의 다른 유형에 대 한 적응 시킬 다양 한 하드 틱의 다른 발달 단계 종 (표 1) 및 5 월 또한 먹이 때 매우 성공적인 수 입증 된 그림 3</stro...

우리는 단단한 진드기 실험실 토끼에 먹이를 간단 하 고 다재 다능 한 시스템을 개발 했습니다. 우리의 힘 드는 비 프로토콜 쉽게 액세스할 수 재료를 사용 하며 다양 한 실험 설정의 요구 사항에 따라 조정 될 수 있다. 메서드를 사용 하면 편안 하 게 모니터링 및 수 유 기간 틱의 샘플링 수 있습니다.

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

이 방법은 단단한 식민지를 유지하거나, 진드기 생물학 또는 호스트 벡터 병원체 상호 작용을 공부하거나, 이러한 의학적으로 중요한 특성의 다른 통제 측정을 평가하는 데 적합합니다. 이러한 기술의 주요 장점은 단순함과 짧은 기간입니다. 그리고 가장 중요한 것은 연구의 실험적 요구에 따라 수정 할 수있는 능력.이 방법은 실험실 토끼에 하드 진드기의 다른 생활 단계를 공급하는 데 사용할 수 있지만. 또한 양과 같은 다른 호스트 시스템에 적응할 수도 있습니다. EVA 폼 시트에서 적절한 크기의 캡슐 프레임을 절단하여 접착 중 우발적 인 분리를 최소화하기 위해 외부 모서리를 반올림합니다.자체 접착제 후크 테이프의 4 8 밀리미터 폭 스트립을 잘라 프레임의 측면에 스트립을 부착. 자체 접착제 루프 테이프에서 동일한 크기의 스트립을 잘라 프레임의 후크 테이프에 바인딩합니다. 다음으로, 프레임을 커버하고 메쉬를 자체 접착 루프 스트립에 붙일 만큼 큰 소나무 모기 메쉬 조각을 자르고 필요에 따라 돌출 된 재료를 다듬습니다.캡슐이 준비되면 토끼를 수동으로 억제하고 동물의 뒤쪽과 측면에 있는 실험 영역을 면도합니다. 준비된 캡슐의 전체 표면에 빠르게 건조하지 않는 라텍스 접착제를 바르고 1분 후에 캡슐을 피부에 부드럽게 밀어냅니다. 프로토콜의 가장 중요한 단계는 피부에 캡슐의 필드 부착입니다.따라서, 특히 적어도 3 분 동안 모서리에 토끼 피부에 캡슐의 일정한 압력이 필요합니다. 3분 후 캡슐을 약간 들어 올려 주걱을 사용하여 부착물을 확인하여 부착되지 않은 부품에 접착제를 적용합니다. 캡슐이 고정되면 재킷 손상을 방지하기 위해 후면 발에 보호 테이프를 바르고 앞다리를 앞재킷 개구부로 배치하여 재킷의 목을 동물과 재킷 사이의 한 손가락 너비로 조이게 합니다.진드기 감염을 시작하려면 먼저 컷오프 팁으로 주사기를 위해 플라스틱 면 플러그의 플런저 끝에 진드기를 추가합니다. 다음으로 캡슐의 한 구석에서 메시를 들어 올리고 주사기를 캡슐 깊숙이 배치합니다. 플런저를 주사기에 삽입하여 진드기로 동물을 감염시다.그런 다음 플런저를 피부쪽으로 천천히 비틀어 캡슐에서 플런저를 당기면서 남은 진드기를 제거합니다. 모든 진드기가 배달되면 후크및 루프 테이프를 다시 고정합니다. 뒤쪽을 지퍼로 재킷을 닫고 토끼의 뒷다리를 후면 탄성 인클로저에 삽입합니다.그런 다음 토끼를 케이지로 돌려놓습니다. 적절한 실험 시점에서 토끼를 벤치로 옮기고 재킷의 압축을 풀수 있습니다. 토끼를 부드럽게 억제하고 캡슐을 열고 집게를 사용하여 완전히 기운을 얻은 성인과 진드기 트위스터를 수집하여 부분적으로 먹이는 성인을 수집합니다.옹고된 애벌레와 님프는 접시에 붓기하여 수집할 수 있습니다. 그런 다음 실험적으로 적합한 경우 캡슐을 다시 닫습니다. 실험이 끝나면 재킷을 제거하지 않고 캡슐에서 모기 메시를 완전히 제거합니다.3~4주 후, 캡슐을 제거하기 위해 모서리 중 하나를 부드럽게 다듬습니다. 캡슐이 제거되면 재킷을 제거하고 토끼가 케이지에서 회복되도록 하십시오. 프로토콜과 실험이 허용하는 경우 복구된 토끼를 재사용하거나 채택할 수 있습니다.이 프로토콜은 동일한 호스트에서 여러 틱 그룹의 대량 사육을 포함한 다양한 유형의 실험에 적합합니다. EVA 폼 캡슐 시스템은 다양한 하드 틱 종의 다양한 발달 단계를 공급 할 때 매우 성공적인 것으로 입증되었습니다. 그것은 또한 양 과 같은 실험실 호스트의 다른 유형에 대 한 적응 될 수 있습니다.또한, 이 다목적 방법은 숙주에 캡슐의 수정 가능한 수, 모양 및 조성에 기초하여 다양한 실험 설정을 생성할 수 있도록 한다. 절차는 또한 실험 후 토끼 호스트의 완전한 복구를 허용합니다. 이 프로토콜은 힘들지 않으며 이 기술에 익숙해지기 위해 집중교육이 필요하지 않습니다.또한 실험 동물에 대한 최소한의 재료, 단계 및 스트레스가 필요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 문서는 엔도 또는 ectoparasitism을 감지 선별 쥐 및 생쥐를위한 각종 절차에 대해 설명합니다. 여러 진단 assays이 시연되고, 살아있는 동물에서 사용하기에 적합 사람과 동물의 안락사 후 사용되는 모두. 쥐, 마우스 기생충의 식별에 도움을 사진이 포함됩니다.

연구실 고양이와 마우스에 외부의 뜻과 Endoparasites의 진단

이 비디오는 박테리아의 누출을 방지하기 위해 뼈 왁스를 사용하여 토끼의 골수에 외과적으로 박테리아 감염을 유도하는 기술에 대해 설명합니다. 이 토끼 모델은 뼈 감염 치료 및 뼈 재생을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

뼈 감염의 토끼 모델 생성: 골수에 직접 박테리아를 주입하여 만성 감염을 유도하는 기술

라임 병은 북미에서 가장 일반적으로보고 된 벡터 매개 질병입니다. 원인 물질은 보렐리 아 burgdorferi는 Ixodid 진드기에 의해 전송 spirochete 박테리아입니다. 동물 모델에서 감염의 전송 및 검출은 우리가 여기에서 설명하는 진드기의 먹이의 사용에 최적화되어 있습니다.

라임 병 연구의 변속기 및 Xenodiagnosis에 대한 동물에 진드기의 먹이

건강한 실험실에서 재배 한 진드기의 생산은 진드기 생물학 및 진드기 - 병원체 상호 작용에 대한 연구에 필수적입니다. 여기서 우리는 마우스에 비용 효과적이고 스트레스가 적은 미성숙 진드기 먹이를위한 간단한 프로토콜을 시연합니다.

사육<em&gt; Ixodes의 scapularis,</em&gt; 블랙 다리 틱 : 마우스에 미성숙 단계를 먹이

이 연구에서는 실험실 마우스에 부착된 캡슐을 사용하여 하드 틱의 님프및 애벌레 단계를 위한 먹이 시스템이 개발되었습니다. 수유 캡슐은 유연한 재료로 만들어졌으며 적어도 일주일 동안 마우스에 단단히 부착되어 있어 진드기 공급에 대한 편안한 모니터링을 가능하게 합니다.

실험실 마우스에 미숙한 하드 진드기 단계 감염에 대 한 캡슐 기반 모델

본 프로토콜은 진드기 타액선 및 정제된 세포밖 소포로부터 마이크로RNAs의 단리를 기술한다. 이것은 일반적으로 사용되는 시약과 공급을 결합하는 보편적 인 절차입니다. 이 방법은 또한 적은 수의 틱을 사용할 수있게하여 쉽게 시퀀싱 할 수있는 양질의 microRNA를 생성합니다.

Tick Ex Vivo Salivary Gland Cultures 및 Extracellular Vesicles에서 microRNAs의 분리

여기에 제시된 것은 다양한 진드기 수명 단계의 부분적 또는 전체 충혈을 허용하기 위해 인공 막 시스템을 통해 시험관 내에서 진드기를 혈액으로 공급하는 방법입니다.

Ixodes 견갑골에 대한 진드기 인공 막 공급

이 기사에서는 임상 연구를 위해 인간을 유충 Ixodes scapularis 에 노출시키는 방법을 제시합니다. 이 기술은 비교적 간단하고 연구 지원자가 견딜 수 있으며 실험적 필요에 따라 수정할 수 있습니다. 인간 피험자를 대상으로 하는 이러한 연구는 해당 규제 당국이 승인한 임상 연구 프로토콜에 따라 수행되어야 합니다.

유충 Ixodes scapularis 진드기에 대한 인간의 실험적 노출을 위한 모델

토끼의 일상적인 축산 절차에 대한 긍정적 강화를 포함하는 훈련 프로토콜이 개발되어 토끼가 주간 일반 검사에서 훈련된 행동을 신뢰할 수 있게 보임에 따라 성공적인 것으로 입증되었습니다. 운송 상자로 토끼를 집어 올리는 것은 기존의 처리 기술보다 덜 혐오감이 들었습니다.

일상적인 사육 절차를 개선하기 위해 실험실 토끼 훈련

녹내장은 세계에서 실명의 주요 원인 중 하나입니다. 고가 intraocular 압력은 큰 위험 요소입니다. 레이저 photocoagulation 유도 안구 고혈압은 물론 기존 동물 모델 중 하나입니다. 이 동영상은 쥐에서 아르곤 레이저 photocoagulation에 의해 안구 고혈압을 유발하는 방법을 보여줍니다.

SD 쥐에서 레이저 유도 만성 안구 고혈압 모델

학습하세요 실험실 토끼에 하드 진드기 감염을 위한 다양한 모델을 사용하는 방법을. EVA 폼 캡슐 프레임을 활용한 이 기술은 진드기 생물학 및 숙주-매개체 상호작용 연구에 적합하며, 간단하고 수정 가능한 프로토콜을 제공합니다.

실험실 토끼에 하드 진드기 감염의 다양 한 모델

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