Name: 공간 학습 및 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 사용 하 여 마우스 Prosocial 동작 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-17T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: 배우세요 마우스의 공간 학습 및 기억을 평가하는 Barnes 미로와 Damsel-in-Distress 패러다임을 사용하여 친사회적 행동을 분석하는 방법입니다. 이 기법은 행동 신경과학 연구에 유용합니다.

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Hampden 시드니 대학에서 우리에 게 승인 및 감사 숀 월 든, 자크 Leitner, 사냥꾼이, 그리고 안톤 Kheirani 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 실험에 대 한 프로토콜 테스트에 그들의 참여에 대 한. 우리는 또한 반 즈 미로 테스트 공간을 제공 하기 위한 생물학 랜 돌 프-마 콘 대학 부의 건설에 대 한 랜 돌 프-마 콘 대학에서 제임스 포스터를 감사 하 고 싶습니다.

여기에 설명 된 모든 메서드는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 Hampden 시드니 대학 또는 랜 돌 프-마 콘 대학 (어디 몇 가지 작업 이전에 수행한)에 의해 승인 되었다.
1. 기본적인 주택 마우스의
<ol><li>단단한 바닥 및 측면, 그리고 부드러운 침구와 종이 파쇄 등의 재료를 중첩의 레이어 플라스틱 장에 쥐 집. 났습니다 옥수수 cobs 구성 된 침대 또는 나무 부스러기를 사용 하 고 침구 위생에 대 한 정기적으로 변경 됩니다.</li>
	<li>음식에 대 한 액세스를 제공 하 고 광고 libitum물. 플라스틱 케이지 상단의 집 음식 호퍼. 음식 호퍼에서 제대로 공식화 마우스 음식 펠 릿을 분배 하 고 물 디스펜서를 제공 합니다. 케이지 상단 마우스 외부 오염 물질 로부터 보호 하기 위해 공기 필터를 갖추고 있는지 확인 합니다.</li>
	<li>주택 시설에 12 시간 빛 어두운 주기에 따라 쥐의 자연적인 circadian 리듬을 유지 합니다. 행동 테스트 동물의 어두운 주기 동안 이상적으로 하루 중 같은 시간에 같은 저녁 시간 동안 실시 합니다. 참고: 관리는 구별 주택에서 쥐를 취해야 한다. 구별 마우스에 대 한 다양 한 방법을 귀 펀치, 귀 태그, 꼬리 표시 등 사용할 수 있습니다.</li>
</ol>2. 반 즈 미로 테스트: 건설
<ol><li>원형 나무 보드를 약 120 cm를 가져옵니다.</li>
	<li>원의 둘레의 주위에 원형 구멍 (지름에서 4.5 c m) 20 컷. 미로 가장자리에서 2.5 cm 및 인접 구멍 떨어져 13 cm 각 구멍을 배치 합니다.</li>
	<li>서피스를 부드럽게 하 고 그들에 페인트 광택 흰색 (밝은 색 권장).</li>
	<li>작은 컵의 삽입을 위한 미로 보드의 지정 한쪽 20 구멍 및 장소 2 후크 각 구멍 (각 구멍의 양쪽에 하나)의 각각에서 대략 2-3 cm 후크.</li>
	<li>얕은 블랙 (플라스틱) 디스크를 사용 하 여 후크 미로의 측면에 구멍을 커버에 대 한. 후크를 사용 하 여 미로의 하단에 디스크를 개최 하기 위해 두꺼운 고무 밴드를 확보.</li>
	<li>안전 하 게 반 즈 미로 120cm 지상 및 테이블 또는 자 처럼 마찬가지로 키가 다른 개체에서 탑재 합니다. 상자 또는 자 미로의 중앙을 지 원하는 데 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>미로의 3 면에 추가-미로 큐로 한 모양으로 큰 흰색 포스터 (삼각형, 원 및 크로스) 각 벽에 장소. 각 시험에 대 한 미로 주위 벽에 포스터를 유지 합니다.</li>
	<li>미로의 마지막 편이 생쥐는 미로에 게 표시 되 고 연구원은 없이 데이터를 정확 하 게 기록 될 수 있도록 관찰자를 숨기려고 단단한 검은 커튼을 설정 합니다.</li>
	<li>전체 미로 표면의 조감도 함께 경기장에 비디오 카메라를 일시 중단 합니다.</li>
	<li>청소 (블랙 디스크와 대상 상자 포함) 미로의 모든 표면을 물으로 다음 70% 에탄올 솔루션 각 마우스 시험 전후.</li>
	<li>미로 (재판의 시작/완료에 온/오프 회전)의 센터를 통해 100 W 광원 25 cm를 놓고 디스크와 바닥을 직면 하는 후크 하십시오. 참고: 방에 있는 다른 모든 오버 헤드 조명 해야 해제 테스트 하는 동안. 100 W 빛 옆 매달아 초음파 소음 공해의 추가 것이 좋습니다. 각 재판의 시작/완료에 온/오프 바꿀.</li>
</ol>3. 반 즈 미로 테스트: 프로시저
참고: 모든 미로 구성 요소가 물과 70% 에탄올 용액으로 세척 이력서를 테스트 하기 전에 완전히 건조 시간에 대 한 수 있도록, 각 재판 전후 확인 합니다. 치료는 재판에 대 한 타이머로 서 공급 준비를 해야 합니다.
<ol><li>신뢰할 수 있는 식별 메서드를 사용 하 여 그룹의 모든 생쥐를 집. 그들은 적극적으로 미로에 실행 하지 않는 시험장 외부 마우스를 유지 합니다. 이것은 그들은 초음파 권총에 완전히 적용 되지 않습니다 확인 하입니다.</li>
	<li>부드럽게 따기 하 고 한 손에 발, 꼬리의 기지에서 그들을 들고 하 여 쥐를 처리 합니다.</li>
	<li>훈련, 미로에서 하루 학습/획득을 평가 하기 위해 연속에서 7 일 동안 매일 한 번 실행 하는 생쥐를 있다. 참고: 단일 장기 재판 메모리/보존 평가를 나중에 할 수 있습니다. 현재 프로토콜 훈련 출생 후 하루 32에서 시작 하는 사춘기 쥐 그리고 장기 재판 4 개월의 나이에 성인에서 수행 되었다.</li>
	<li>각 마우스 테스트 기간 동안 사용 하 여 대상 구멍 임의로 할당 합니다. 구멍 1-20 미로의 바닥에 또는 어디 그들은 미로에서 마우스에 표시 되지 않습니다 미로 둘레의 외부에 표시 수 있습니다.</li>
	<li>작은 블랙 박스 (23 x 11 cm) 할당 된 구멍 디스크를 교체 합니다. 단단히 가까운 갈고리에 연결 된 고무 밴드를 사용 하 여 반 즈 미로를 연결 합니다. 참고: 대상 상자는 얕은 충분히 마우스나 수 쉽게 스텝 다운으로 마우스 그것으로 아래로 이동 필요가 없습니다 수 있도록 단계를 포함.</li>
	<li>테스트가 시작 될 때까지 30 초 동안 적응 하 컵 아래 미로의 센터에 마우스를 놓습니다. 비디오 녹화를 시작 합니다.</li>
	<li>빛과 초음파 권총 켭니다. 동물의 초기 제목 바이어 싱을 방지 하려면 문자열 메커니즘을 통해 컵을 들어올립니다. 타이머를 시작 하 고 관찰 하는 커튼 뒤에 앉아.</li>
	<li>마우스 입력 대상 구멍, 후 재판 또는 바인더의 시작에 사용 된 동일한 불투명 컵 구멍을 커버 하 고 초음파 권총 끄십시오. 마우스 5 분 경과 후 목표를 입력 하지 않은, 경우 대상 구멍에 마우스를 확보.<ol>
<li>마우스 입력 구멍을 확인 합니다. 마우스 대상 상자 안에 있을 때 구멍을 커버 하 고는 권총 끄십시오. 마우스를 그대로 1 분간 대상 상자에 남아 있을 수 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>하지만 대상 구멍 훈련 기간 동안 각 마우스에 대 한 일정 하 게 유지 됩니다 실행 마우스 무작위 순서로 매일 이전 마우스에 의해 왼쪽으로 어떤 단서/냄새를 따르지는 되도록.</li>
</ol>4. 반 즈 미로 테스트: 데이터 분석
<ol><li>반 즈 미로 실험 기록 다음과 같은 타임 데이터: 미로에 소요 시간 총 대상, 찾을 시간과 대상 입력 대상 구멍을 입력 하는 시간.</li>
	<li>오류 (잘못 된 구멍 탐험의 수)의 수를 확인 하려면 마우스의 전반적인 움직임을 추적 대상 발견 전후. 또한 탐험 첫 번째 구멍을 대상 구멍에서 거리를 기록 (거리는 멀리 구멍의 수), 측정 함께 어떤 주목할 만한 행동을 손질.</li>
	<li>각 재판 중 미로의 다이어그램으로 종이의 조각에 각 동물의 움직임을 추적 하 고 그것을 사용 하 여 검색 전략을 분석 하 고 대상 반대 사분면에서 탐구 했다 구멍 수를 결정. 비디오 분석을 사용 하 여 경로 확인 하십시오.</li>
</ol>5. 계 집 아이-에서-조 난 테스트: 건설 자제 챔버
<ol><li>명확한 실린더와 같은 길이 ¾ 여성 마우스의 길이에 코의 끝에 꼬리의 기지에서 잘라. 실린더의 크기는 내부 배치 마우스 돌아서 수 없습니다 있는지 확인 하십시오. 참고: 우리 만들기 4 개월 된 생쥐에 대 한 1 개월 마우스 4 cm 긴 튜브와 8 cm 긴 튜브 아래로 50 mL 원뿔 튜브의 원뿔 끝을 잘라.</li>
	<li>모자 중 하나 제거 될 수 및 다시 연결 되도록 실린더의 양쪽 끝을 모자. 펀치 구멍 3-4, 약 0.5 c m 각, 각 cap에. 구멍 마우스와 호흡12사이 코 감동 수 있도록 충분히 큰 있는지 확인 하십시오. 참고: 또는, 혈액 수집 하는 동안 마우스 구속 장치를 사용할 수 있습니다.</li>
</ol>6. 계 집 아이-에서-조 난 테스트: 경기장 준비
<ol><li>경기장 19 cm 벽 38 x 38 cm의 한 불투명 한 토플 리스 플라스틱 사각형 상자 인지 확인 합니다. 약 2.5 c m의 높이에 옥수수 침구와 그것을 균일 하 게 채우십시오. 참고: corncob 침구 쉽게 파고 이벤트 감지 합니다.</li>
	<li>경기장의 전체 보기에 경기장에 비디오 카메라를 일시 중단 합니다.</li>
</ol>7. 계 집 아이-에서-조 난 테스트: 탐구 행동 측정
<ol><li>장소는 경기장의 센터에 폐쇄 하 고 빈 스트레스 챔버.</li>
	<li>정지 카메라로 녹화를 시작 합니다.</li>
	<li>남자 마우스를 선택 합니다. 쥐 식별 표시를 하는 경우 note이 남자의이 정체성; 그렇지 않은 경우에이 마우스를 표시 하는 감 금 소에 돌려보내기 후에 구별 될 수 있다.</li>
	<li>부드럽게 경기장에서 왼쪽된 아래 모서리에 컵 아래 남성 마우스를 놓습니다. 30 초 후, 문자열 메커니즘을 통해 컵을 제거 합니다.</li>
	<li>마우스를 녹음 하는 동안 그것의 시야에 참견을 돌보는 10 분 탐구 수 있습니다. 10 분의 끝에, 경기장에서 마우스를 제거 하 고 5 분12에 대 한 지주 케이지를 반환 합니다.</li>
	<li>녹음을 중지 하 고 적절 한 식별자를 가진 비디오 파일을 저장 합니다.</li>
</ol>8. 계 집 아이-에서-조 난 테스트: 사회 응답 측정
<ol><li>예비 동작 측정에서 같은 무대와 녹음 설정 사용 하 여.</li>
	<li>여성 마우스를 선택 합니다. 쥐 식별 표시를 하는 경우 note이 여자의이 정체성; 그렇지 않은 경우에이 마우스를 표시 하는 감 금 소에 반환 후에 구별 될 수 있다. 참고: littermate, 케이지 친구, 또는 새로운 마우스를 사용할 수 있습니다, 연구 질문에 따라. 여러 실험을 수행 하는 경우 모든 재판에 걸쳐 관계를 유지 합니다.</li>
	<li>여성 마우스 부드럽게 목 구속, 또는 꼬리의 기지에 의해 필요한 경우 누른 구속 챔버로 낮은. 그것은 뒤에 오픈 엔드 닫고 돌아서 수 있는지 확인 합니다. 참고: 여성 마우스 구속 챔버를 입력 저항 것 입 저항 하는 장갑 착용 고려 하십시오.</li>
	<li>정지 카메라로 녹화를 시작 합니다.</li>
	<li>공감 경기장의 센터에서 구속 챔버 안에 갇힌 여성 마우스를 놓고 10 분 두었던 여성을 허용 합니다. 여자의 시야 밖으로 유지 하는 것을 주의.</li>
	<li>여성 마우스는 5 분 동안 감 금 실에서 후 다시 무대로 공감 하기 전에 동일한 프로세스를 사용 하 여 표시 된 남성 마우스를 놓습니다. 수 컷 마우스 다시 쥐의 시야 밖으로 남아 돌보는 경기장을 탐구 하는 추가 5 분.</li>
	<li>녹음을 중지 하 고 적절 한 식별자를 가진 비디오 파일을 저장 합니다.</li>
	<li>5 분의 끝에, 경기장에서 모두 쥐를 제거 하 고 그들의 감 금 소도 그들을 배치. 옥수수 침구를 교체 하 고 경기장 및 70% 에탄올12스트레스 챔버를 청소.</li>
</ol>9. 계 집 아이-에서-조 난 테스트: 데이터 분석
<ol><li>추적 소프트웨어를 사용할 수 있습니다, 하지만 비디오 수동으로 분석할 수도 있습니다. 비디오 파일을 컴퓨터에서 볼 수, 일단 화면 위에 투명 시트를 오버레이 및 개요는 마커를 사용 하 여 경기장의 광장. 경기장 광장을 9 동등 구획으로 나눕니다.</li>
	<li>초기 탐험 측정의 첫 5 분에 대 한 비디오 데이터를 검토 합니다. 수 기록 구획을 넘어 (운동 활동/예비 동작), 경기장 (오픈 필드 혐오), 파고의 에피소드, 정리 번호 및 횟수는 마우스만 진 빈 센터 구속 광장 센터에서 보낸 시간 약 실입니다. 참고: 남성의 10 분 초기 탐사의 두 번째 5 분 동안 하지 이루어집니다 득점도 10 분에 대 한 여성 남성의 부재에 중앙 챔버에 갇혀.</li>
	<li>남성은 갇힌된 여자와 함께 경기장 재 직후 사회 응답 측정의 5 분에 대 한 비디오 데이터를 검토 합니다. 초기 탐험 측정에 관해서는 동일한 데이터를 기록 하지만 또한 남성 마우스 건드리지 갇혀 여성 마우스와 함께 코 번의 번호를 기록 합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Sunyer, B., Patil, S., Höger, H., Lubec, G. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/protocolexchange/protocols/349">Barnes maze, a useful task to assess spatial reference memory in the mice.</a> Protocol Exchange. 2007, (2016).</li>
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<li>Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+deficits+associated+with+senescence%3A+A+neurophysiological+and+behavioral+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+and+Physiological+Psychology%22%5BJournal%5D)">Memory deficits associated with senescence: A neurophysiological and behavioral study in the rat.</a> Journal of Comparative and Physiological Psychology. 93 (1), 74-104 (1979).</li>
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<li>Langford, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+modulation+of+pain+as+evidence+for+empathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Social modulation of pain as evidence for empathy in mice.</a> Science. 312 (5782), 1967-1970 (2006).</li>
<li>Smith, M. L., Hostetler, C. M., Heinricher, M. M., Ryabinin, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Social+transfer+of+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Social transfer of pain in mice.</a> Science Advances. 2 (10), e1600855(2016).</li>
<li>Melia, K. R., Ryabinin, A. E., Schroeder, R., Bloom, F. E., Wilson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+habituation+of+immediate+early+gene+expression+in+rat+brain+by+acute+and+repeated+restraint+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Induction and habituation of immediate early gene expression in rat brain by acute and repeated restraint stress.</a> Journal of Neuroscience. 14 (10), 5929-5938 (1994).</li>
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</ol>

저자는 공개 없다.

반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 실험 공간 학습, 운동 활동, 및 쥐에서 prosocial 행동, 신속, 저렴 하 고 상대적으로 쉬운 방법이 있습니다. 명백한 스트레스, 통증, 또는 동물에 대 한 음식 제한의 부재는 다른 장점이 있습니다. 대부분 학습/메모리 패러다임 처럼 반 즈 미로의 단점은 실험 동물 대상 구멍은 학습과 입력에 필요한 수입니다.
데이터 수집:
마우스의 활동 두 패러다임에 행동을 관찰 하는 경우 데이터를 지속적으로 수집할 수 한다. 반 즈 미로 대 한 첫 번째 구멍에 도달 하면, 그것은 탐구를 대상 구멍에 도달 하는 시간 및 대상 구멍에 들어가는 시간 오류/잘못 된 구멍의 수 시간 포함 됩니다. 또한, 연구팀은 미로에 각 마우스의 경로 매핑해야 합니다. 마우스 미로 실행 하는 동시에 반 즈 미로의 종이 지도 사용 하 여 데이터를 추적할 수 하 고 비디오 푸티지를 사용 하 여 타이밍 및 구멍 숫자를 확인할 수...

이 프로토콜의 목적은 측정 공간 학습과 생쥐 반 즈 미로 뿐만 아니라 사회적인 응답성 및 운동 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 사용 하 여 사용 하 여 메모리 것입니다. 일반적으로 설치류 포함 멀티-spoked 기기에의 한 팔에 숨겨진된 음식을 찾을 수 있는 마우스의 기능을 측정, 광선 팔 미로 큰 욕조 또는 수영장 물에서 마우스를 두는 모리스 물 미로 공간 학습 및 메모리 테스트를 사용 하 고 숨겨진된 수 중 플랫폼을 찾는 데 걸리는 시간을 평가 합니다. 일반적으로, 이러한 패러다임에 대 한 여러 실험을 걸쳐 훈련과 수 둘 다의 측정 수집 속도 단기 및 장기 메모리 실험을 통해 보존을 학습.
광선 팔 미로 모리스 물 미로 설치류에서 메모리 테스트를 신뢰할 수 있는 방법입니다, 하지만 그들은 일부 연구에 대 한 합병증을 제시. 미로 두 보강1으로 박탈 또는 강한 혐오 자극을 사용합니다. 광선 팔 미로 설치류 제대로 음식 보상을 찾을 동기 되도록 음식 부족을 사용 합니다. 모리스 물 미로에서 강제 수영에 의해 유도 된 스트레스의 영향 쥐2에 결과 변경할 수 있습니다.
반 즈 미로 설치류, 오픈 미로 표면3탈출 구멍의 위치를 배울 수 필요로 하는 대안 공간 인식 작업입니다. 약한 혐오 자극 (빛 또는 소리) 플랫폼에서 마우스 탈출 가능성을 높이기 위해 적용 됩니다. 그래서 동물 준비 금액 미만 반 즈 미로 음식 부족, 필요 하지 않습니다 광선 팔 미로. 그것은 행동 또는 분자 먹고, 호르몬 조절, 또는 hypothalamic 경로와 관련 된 조사는 연구자에 의해 충돌 없이 사용할 수 있습니다.
반 즈 미로 모리스 물 미로에 장점이 있습니다. 그것은 쥐4corticosterone의 더 높은 레벨을 일으키는 모리스 물 미로 보다 덜 스트레스입니다. 또한, 그것 훨씬 간단 하 게 조립 하 고 테스트 절차 및 저장 하는 동안 덜 전용된 공간이 필요.
계 집 아이-에서-조 난 분석 결과 prosocial 행동 뒤 운동 활동을 평가할 수 있는 간단한 2 부분 실험 이다. 계 집 아이-에서-조 난 분석 결과 탐색적 행동과 봉된 여성 쥐에 대 한 응답에서 남성 설치류의 사회적 응답을 평가 하기 위해 설계 되었습니다. 사교 성 (뿐만 아니라 사회 참신에 대 한 기본 설정)을 평가 하기 위해 일반적으로 사용 되는 방법은 Crawley의 3-챔버 사교 성 테스트, 근처 또는 다른 쥐5에서 시간을 보내고는 마우스의 자유로운 선택 평가의 사용 이다.
크롤 리의 3-챔버 사교 성 테스트와 마찬가지로, 계 집 아이-에서-조 난 분석 결과 또한 측정 다른 마우스의 존재 시간을 보내고 하는 방법에 관한 자유로운 선택 하지만 그것 또한 제공 하는 사회 작용의 깊은 측면에 대 한 측정: 1)에 계 집 아이-에서-조 난 분석 결과, 갇힌된 여성 마우스는 오픈 필드의 중앙에 그래서 개최 오픈 필드에 남자의 잠재적인 혐오 사회적 탐구 조사 고민된 여성 conspecific에 그의 드라이브에 대 한 경쟁해 서. 2) 계 집 아이-에서-조 난 모델은 또한 쥐에 자주 탐험 되지 않은 갇힌된 마우스에 대 한 응답에서 prosocial 및 empathetic 행동을 평가 하는 방법은 제공 합니다.
동물 공감은 정확 하 게 관찰 하 고 측정, 많은 패러다임이이 목적을 위해 존재 하더라도. 예를 들어 쥐에 갇혀 케이지 친구 쥐 덫을 놓은 동물을 무료로 작동 합니다 prosocial 동기의 상태를 유도할 수 있다. 사실, 쥐 것도 초콜릿 간식를 포함 하는 유사한 컨테이너를 열기 전에 갇힌된 동물 수 있도록 다음 초콜릿 액세스 선택한6새로 해제 된 쥐 함께 그것을 공유.
일반적으로 고통;의 형벌을 포함 하는 쥐에 공감의 측정 실제로, 고통에 다른 마우스 볼 마우스7,8자신을 고통에 더 민감합니다. 구속 스트레스 설치류에 특징이 현상 이며 공감 쥐9,10에 한 측정으로 스트레스 응답을 검사 하는 충격으로 결합 되었습니다.
윤리적 고려 스트레스 유도 대안 필요 하다 그래서 유발된 통증이 나 충격과 관련 있다. 우리는 통증이 나 충격 요법의 부재에 empathetic 행동의 측정으로 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 개발. 그들은 작은 컨테이너 내에서 주변에 돌 수 없습니다 아직 그들은 무사 히 그들의 고통에 응답을 다른 쥐에 대 한 기회를 제공 하면서 우리의 계 집 아이-에서-조 난 프로토콜에 갇힌된 쥐만 잠시 후 고통의 명백한 흔적을 보여줍니다.
계 집 아이-에서-조 난 평가 하려면 남성 마우스는 작은 빈 중앙 실린더를 포함 하는 큰 새로운 경기장에 배치 됩니다. 예비 동작으로 경기장의 얼마나 많은 부분 교차 하 고 중앙 오픈 공간에 얼마나 많은 시간 소요를 포함 하 여 몇 분 동안 기록 됩니다. 이 메서드는 성공적인 완료에 대 한 조정된 움직임을 요구 하는 학습 상황에서 잠재적인 confounder로 운전 적자를 배제 하는 빠르고 쉬운 방법을 제공 합니다. 그것은 또한 오픈 센터 분야에 얼마나 많은 혐오는 존재의 기본적인 측정을 제공 합니다. 두 측정 반 즈 미로 성능에 영향을 미칠 수 있습니다.
초기 탐험 다음 남성은 경기장에서 제거 하 고 여성 마우스는 동봉, 작은 분명 중앙 실린더 (와 유사한 쥐에서 혈액을 수집 하는 데 사용)에 배치 됩니다. 그리고, 원래 남성 마우스 경기장, 재는 예비 동작 다시 득점. 마우스는 갇힌된 여성 있으면 (센터 광장에 파고 편수 소요 시간에 의해 득점), 그리고 행동 패턴 변화에 따라 사회적 상호 작용에 관심이 있는지 여부를 평가 하는 계 집 아이-에서-조 난 패러다임은 마우스 (실린더 조사 및 갇힌된 여성 연락처 이벤트의 양에 의해 득점) 갇힌된 여성을 향해 prosocial 행동을 전시 한다. 계 집 아이-에서-조 난 분석 결과 사회 참신 (크롤 리의 3-챔버 사교 성 테스트와 마찬가지로) 연구원은 익숙한 또는 소설 마우스를 트랩 하는 여부에 따라 성향 측정을 사용할 수 있습니다.
함께, 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 실험 허용 마우스의 정확한 평가 학습 능력과 사회 응답 매우 스트레스 자극의 부재에서. 모든 행동 분석, 것과 같이이 실험 동물에 의해 경험 하는 불편을 최소화 하는 동물 경험으로 좋은 감도로 수행 되어야 한다.
대부분 미로 처럼 차이 운동 활동에 영향을 미칠 수 반 즈 미로에서 성능을 반 즈 미로 사용 하 여 (와 같은 움직임을 손상 시킬 수 있는 돌연변이 생쥐에 학습 평가를 하는 경우에 특히 연구원은 또한 운동 활동, 평가 한다 그래서 그는 Huntington의 질병 마우스 모델에서 발견 하거나 그 과다를 유발 하거나 지체 운동, 에탄올 같은 독 소에 노출). 또한, 미로 챔버를 철저 하 게 청소 해야 하 고 냄새 큐를 피하기 위해 각 동물 사이 변경 침구 혼동 한다.
중요 한 것은, 최소한의 금융 투자 사이트에 모든 자료를 날조 될 수 있다 그리고 이러한 분석의 작은 물리적 공간 거의 모든 설정에서 뛰어난 유연성에 대 한 수 있도록 이러한 실험을 복제 될 수 있습니다 의미 합니다. 접근의이 유형에 좋은 과학을 또는 파일럿 데이터를 신속 하 게 실질적인 지원의 부재에서에서 수집 해야 하는 상황에서 한정 된 자원을 가진 작은 기관에서 수행할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Damsel-in-Distress</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL 원뿔형 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td>모든 브랜드의 50 mL 원뿔형 튜브가 작동합니다</td></tr><tr><td>고무 밴드</td><td>Sprano 브랜드</td><td>n/a</td><td>사이즈 62, 캡을 합판 망치에 고정하는 데 사용</td></tr><tr><td></td><td>Grainger</td><td>6R252</td><td>모든 표준 망치는</td></tr><tr><td>못(크기 8D)</td>을 작동합니다.<td>Grainger</td><td>4NFE3</td><td>비슷한 크기의 손톱도 마찬가지로 작동해야 합니다</td></tr> 불<tr><td>투명, 토플리스 플라스틱 상자</td><td>AcmePlastics</td><td>CUT-TO-SIZE-ACRYLIC-CAST-BLACK-SHEET-2025</td><td>불투명 플라스틱, 크기에 맞게 자릅니다(30cm L x 19cm W x 3-6cm H). 마우스의 입구 깊이가 3.5cm 이하로 떨어지도록 단계를 추가할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>비디오 카메라 (스마트폰)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>카메라가 장착된 모든 스마트폰은</td></tr><tr><td>물림 방지 장갑</td>을 작동합니다. <td>Kent Scientific</td><td>GLVDYN02</td><td>적절한 보호를 제공하는 모든 브랜드</td></tr>, <tr><td>투명 시트</td><td>스테이플</td><td>954145</td><td>투명 플라스틱 시트의 모든 브랜드가 작동하며, 점수 매기기에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>Barnes Maze</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri Dishes</td><td>Corning</td><td>353025</td><td>Barnes 미로 구멍</td></tr><tr><td>합판 (3/4 인치)</td> 커버로 사용 스프레이 페인트 및 사용<td>LP 건축 제품</td><td>22487</td><td>Barnes 미로</td></tr><tr><td>스프레이 페인트</td><td>Krylon</td><td>1274937</td><td>페트리 접시 뚜껑을 칠하는 데 사용 합판 컵 후크 (5/8 인치)를 페인트하는 데 사용되는 검정색, 흰색 페인트를 칠하는 데 사용됩니다</td></tr><tr><td>.</td><td>Ace Hardware</td><td>5360615</td><td>2는 복부 구멍 표면의 양쪽에 사용됩니다. 고무 밴드는 캡을 평평하게 유지하기 위해 후크를 감쌉</td></tr>니다 <tr><td>포스터 보드</td><td>Creatology</td><td>n/a</td><td>미로의 가장자리에서 추가 신호로 사용</td></tr><tr><td>전구</td><td>Phillips</td><td>n/a</td><td>100W 전구, 시험 기간 동안 사용</td></tr><tr><td>고무 밴드</td><td>Sprano 브랜드</td><td>n/a</td><td>크기 62, 캡을 합판에 고정하는 데 사용</td></tr><tr><td>초음파 소음기</td><td>Victor mini PestChaser</td><td>M753SN</td><td>혐오로 사용 자극</td></tr></tbody></table>

공간 학습 및 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 사용 하 여 마우스 prosocial 동작 분석

Analyzing Spatial Learning and Prosocial Behavior in Mice Using the Barnes Maze and Damsel-in-Distress Paradigms

반 즈 미로 공간 학습 및 음식 제한 또는 매우 스트레스 자극에 노출 하지 않아도 메모리의 신뢰할 수 있는 측정 이다. 반 즈 미로 또한 미로 플랫폼 및 탐험 행동에서 탈출을 일반 동기 같은 다른 마우스 동작을 평가할 수 있습니다. 반 즈 미로 유전자 변이 여부를 측정할 수 있다 또는 환경 변수 수집 및 공간 기억의 보존에 영향을 줄 뿐만 아니라 수 쥐 여 검색 전략에 대 한 정보를 제공. 여기 반 즈 미로 사용 하 여 성인 쥐 단일 발달 에탄올 노출 이벤트 다음에 메모리 적자를 검출 하기 위하여. 새로 설명된 조에 계 집 아이 패러다임 남성 마우스 경기장의 센터 필드에 챔버에 갇혀 여성 마우스를 제공 합니다. 그것은 사회적으로 갇힌 여성 응답 prosocial 동작을 마우스에 대 한 기회를 제공 합니다. 계 집 아이-에서-조 난 패러다임 또한 새로운 경기장 및 측정 운동 활동에서 마우스 동작을 검사 하 사용할 수 있습니다. 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 프로토콜 필요 최소한의 금융 투자와 일반적인 실험실에서 테스트의 대부분의 측면을 구성할 수 있습니다. 이러한 유연 하 고 액세스할 수 있는 도구를 개발의 과정을 통해 행동 변화를 감지 사용할 수 있습니다.

반 즈 미로
반 즈 미로 사용 하는 방법을 설명 하기 위해 우리는 단일 초기 에탄올 노출 마우스 개발의 과정을 통해 학습에 차이 발생 여부 조사. C57Bl6/J 쥐도 2.5 g/kg의 에탄올 솔루션 주입 했다 (n = 8) 또는 식 염 수 (n = 6) 두 번, 두 시간 떨어져, 출생 후 주 6에서. 우리는 사춘기 (P30), 동안에 반 즈 미로 동물 훈련 후 성인 (4 개월)에 단일 장기 시험을 수행. 수집 된 데이터는 몇 가지 주요 범주로 나눌 수 있습니다: 1) 정확도 시간과 오류 비율, 2) 대상 항목, 및 3) 탐사 경로 매핑.
시간 및 오류 비율 정확도:
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이 프로토콜은 공간 학습 및 반 즈 미로 사용 하 여 메모리를 측정 합니다. 새로운 계 집 아이-에서-조 난 패러다임 쥐에서 prosocial 동작과 운동 활동을 평가 하는 데 사용 됩니다.

공간 학습 및 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 사용 하 여 마우스 Prosocial 동작 분석

The Barnes maze is a reliable measure of spatial learning and memory that does not require food restriction or exposure to extremely stressful stimuli. ...

이 방법은 유전 돌연변이 또는 환경 변수가 사회적 행동 또는 스파시션 기억의 획득 그리고 보존에 영향을 미칠 수 있는지에 관하여 행동 신경 과학 필드에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이러한 기술의 주요 장점은 두 연구가 최소한의 금융 투자로 단순히 구성 될 수 있으며 어느 프로토콜도 동물이 극단적이거나 스트레스가 많은 자극을 경험할 필요가 없다는 것입니다. 조난의 댐은 마우스 친사회적 행동에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 다른 포유류 모델 유기체에서 공감 측정으로도 사용할 수 있습니다.반즈 미로 테스트 절차를 시작하기 전에 모든 미로 성분을 물과 70%에탄올로 청소하십시오. 구성 요소가 건조하면 미로를 조립하고 테스트 기간 동안 사용할 대상 구멍에 각 마우스를 무작위로 할당합니다. 구멍은 미로 의 바닥 또는 미로 경계의 바깥쪽에 1 ~20개의 레이블을 지정할 수 있습니다.훈련 테스트를 시작하려면 할당된 구멍 디스크를 23~11cm 블랙박스로 교체하고 고무 대역과 후크를 사용하여 상자를 미로에 단단히 부착합니다. 그런 다음 컵 아래에 반즈 미로의 중앙에 마우스를 놓고 마우스가 30 초 동안 적응할 수 있도록합니다. 적응 기간이 끝나면 비디오 녹화를 시작하고 빛및 초음파 소음 메이커를 켭니다.동물의 초기 헤딩을 편향하지 않도록 문자열 메커니즘을 통해 컵을 들어 올리고 관찰 커튼 뒤에 타이머를 시작합니다. 미로의 다이어그램과 종이에 동물의 움직임을 추적하고 다이어그램을 사용하여 마우스의 검색 전략을 분석하고 대상 맞은편 사분면에서 탐색된 구멍수를 결정합니다. 마우스가 대상 구멍에 들어가면 무거운 불투명 바인더로 구멍을 덮고 초음파 소음 제조업체를 끕니다.마우스가 5분 후에 대상에 들어가지 않은 경우, 동물을 대상 구멍으로 산호한다. 그런 다음 마우스가 방해받지 않고 1 분 동안 대상 상자에 남아 초음파 소음을 끄도록 하십시오. 그런 다음 동물을 케이지로 돌려놓습니다.모든 마우스가 테스트되었을 때, 수동으로 마우스의 전체 움직임을 추적하여 대상이 발견되기 전과 후에 탐구된 잘못된 구멍의 수와 대상 구멍에서 첫 번째 구멍까지의 구멍 수 및 주목할 만한 그루밍 동작을 결정합니다. 조난 테스트에서 탐색 적 행동 Damsel을 위해, 공감 경기장의 중심에 폐쇄되고 빈 스트레스 챔버를 배치하고 일시 중단 된 카메라로 녹화를 시작합니다. 30초 동안 경기장 왼쪽 아래 모서리에 컵 아래에 수컷 마우스를 부드럽게 놓습니다.그런 다음 문자열 메커니즘을 통해 컵을 제거하고 마우스가 녹화 중에 시야에서 벗어나기 위해 10 분 동안 탐색 할 수 있습니다. 탐사 기간이 끝나면 경기장에서 마우스를 5분 동안 홀딩 케이지로 옮기고 멈추고 기록을 저장합니다. 조난 테스트에서 사회적 반응성 Damsel을 위해 여성 마우스를 수동으로 억제하고 마우스를 구속실로 낮춥니다.마우스 뒤쪽 챔버의 열린 끝을 닫고 마우스가 돌릴 수 없는지 확인합니다. 정지된 카메라로 녹화를 시작하고 경기장 중앙에 구속실을 배치합니다. 동물이 시야에서 벗어나도록 주의하여 10분 동안 적응하도록 허용하십시오.그런 다음, 수컷 마우스를 10초 동안 공감장으로 다시 옮기고, 남성 마우스가 5분 더 야구장에서 벗어나도록 주의를 기울여 경기장을 탐험할 수 있게 한다. 탐사 기간이 끝나면 비디오 파일을 중지하고 저장하고 두 마우스를 케이지로 반환합니다. 그런 다음 옥수수 침구를 교체하고 경기장과 스트레스 챔버를 모두 70 %의 에탄올로 소독하십시오.데이터를 분석하려면 적절한 추적 소프트웨어에서 비디오 파일을 열고 화면에 투명 시트를 배치합니다. 경기장 광장에 마커로 윤곽을 그리며 아레나 광장을 9개의 동일한 구획으로 나눕니다. 처음 5분 동안 의 비디오 데이터를 검토하여 교차된 구획 수, 경기장 중앙 광장에서 소요된 시간, 파고 및 그루밍 에피소드 수, 마우스가 빈 센터 구속실을 만진 횟수를 기록합니다.이어서, 남성이 초기 탐사 측정과 동일한 데이터를 기록하면서, 갇힌 암컷이 경기장에 다시 도입된 직후 5분간의 사회적 반응성 측정을 위한 비디오 데이터를 검토하되, 수컷 마우스가 갇힌 암컷 마우스로 코를 만진 횟수의 추적을 추가한다. 반스 미로 훈련 된 신생아가 단일 장기 시험에서 성인으로 실행될 때, 에탄올 주입 마우스는 대상 구멍이 식염수 주입 대조군 동물보다 위치가 어디 기억하기 어려운 시간이있다. 에탄올 처리 마우스는 또한 대상으로부터 반대 사분면에 훨씬 더 많은 구멍을 탐구, 정확한 일반 간격 위치를 기억하지 못하는 것을 나타내는 구멍이 발견 될 때까지 링 모양의 방식으로 구멍 검색에 순차적 구멍을 사용합니다.조난 모델의 댐셀에서, 더 오래된 마우스는 젊은 마우스 보다는 더 많은 사각형을 교차합니다. 그러나 갇힌 여성의 존재에서, 두 연령대의 남성 마우스는 경기장을 탐험하는 데 적은 시간을 보낸다. 청소년 남성은 혼자 갇혀 여성에 대한 불안이나 친사회적 행동을 제안 할 때보다 갇혀 여성 마우스의 존재에 경기장에서 자신의 시간 동안 파고 더 많은 시간을 보낸다.대조적으로, 남성 마우스는 갇힌 암컷을 포함하는 관을 만지고 청소년보다는 성인으로 훨씬 더 빈번하로 갇힌 여성 접촉을 시작합니다. 이 절차를 시도하는 동안 환경 변수가 연구 결과를 혼동하지 않도록 시험 사이와 재판 내에서 조건을 일정하게 유지하는 것이 중요합니다. 이러한 행동 적 실험의 초기 사용에 따라, 같은 동물은 장기 기억과 사회적 행동에 가능한 변화에 대한 질문에 대답하기 위해 개발 중 다양한 시점에서 다시 테스트 할 수 있습니다.

analyzing-spatial-learning-prosocial-behavior-mice-using-barnes-maze

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

이 비디오는 마우스로 Barnes Maze를 사용하는 방법을 보여줍니다. Barnes Maze 테스트 절차는 연구자들이 반복적인 실험을 통해 실험실 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하는 데 사용합니다.

Barnes Maze : 실험실 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하는 방법

마른 땅 반스 미로 널리 응답 약간 혐오 자극에 공간 탐색 능력을 측정하는 데 사용됩니다. 연속 일 동안 대조군의 성능 (탈출 케이지를 찾습니다 예를 들어 지연 시간) 일반 학습과 기억을 나타내는 향상. 쥐와 생쥐의 차이는 여기에 자세히 설명되어 있습니다 장치 및 방법의 변경을 필요로.

크고 작은 설치류 모델 바네스 미로 테스트 전략

이 프로토콜의 목표는 설치류의 공간 인지를 조사하는 것입니다. double-H water maze는 새로운 테스트로, 학습, 통합 및 기억의 다양한 구성 요소와 기억 시스템의 상호 작용을 설명하는 데 특히 유용합니다.

더블 H 미로 : 설치류의 강력한 행동 학습에 대한 테스트 및 메모리

이 프로토콜 분석 결과 행동, 반 즈 미로 테스트에 따라, 어떻게 본능적 인 방어 연구 작업 공간 환경 지식에 의해 수정 됩니다.

생쥐의 본능적 인 방어 하는 동안 공간 메모리의 역할을 조사에 대 한 행동 분석 결과

여기 우리 디자인, 비용, 및 건설의 필수 장비를 포함 하 여 murine 개체 위치 및 소설 개체 인식 행동 테스트, 경제적인 설립에 대 한 포괄적인 지침을 포함 하는 프로토콜을 제공 뿐만 아니라 행동 테스트, 데이터 수집 및 분석의 실행.

소설 개체 인식 및 행동 예산에 쥐에 테스트 개체 위치

여기에서 우리는 설치류를 위해 설계된 해마 의존 공간 학습 패러다임인 활성 장소 회피 테스트를 위한 프로토콜을 제시합니다. 주요 매개변수를 변경하면 처리 전후 또는 시간이 지남에 따라 동물을 다시 테스트할 수 있습니다.

APA(Active Place Avoidance) 테스트는 생쥐를 위한 효과적이고 다재다능하며 반복 가능한 공간 학습 과제입니다.

설치류에 대한 대부분의 행동 실험은 원래 쥐를 위해 고안되었습니다. 쥐와 생쥐의 행동 차이로 인해 때때로 생쥐에 대한 수정이 필요합니다. 우리는 생쥐의 공간 작업 기억을 테스트하여 작업 기억 작업 중 스트레스를 최소화하는 방법을 제시합니다.

반자동 8팔 방사형 미로에서 마우스를 위한 식욕을 유발하는 공간 작업 기억 작업, 미로에서 두려운 기억 연관성 감소

이 문서에서는 마우스에서 학습 공포와 메모리를 평가하기 위해 비디오 분석 시스템을 사용하여 상황과 큐 공포 조건화 시험을위한 프로토콜을 제시한다.

마우스에서 비디오 분석 시스템을 사용하여 콘텐츠 및 시작됨 공포 컨디셔닝 테스트

Open Field Maze를 사용하여 실험실 마우스 모델에서 일반적인 운동 활동, 불안 및 감정에 접근하기 위한 프로토콜이 제공됩니다.

열기 필드 미로의 사용은 마우스의 운동력과 불안 같은 행동을 측정하기 위해

오픈 필드 타워 미로 (OFTM)은 쥐 공간 학습 (예를 들어, 장소 - 또는 응답 학습)의 행동 및 신경 메커니즘을 연구하기 위해 만든 미로이다. 이 미로는 자신의 연구에서 공간 학습을 조사하기 위해 비 스트레스 미로 패러다임을 사용하려는 실험자에 특히 유용합니다.

오픈 필드 타워 미로를 취하게하고 응답 학습

배우세요 마우스의 공간 학습 및 기억을 평가하는 Barnes 미로와 Damsel-in-Distress 패러다임을 사용하여 친사회적 행동을 분석하는 방법입니다. 이 기법은 행동 신경과학 연구에 유용합니다.

공간 학습 및 반 즈 미로 계 집 아이-에서-조 난 패러다임을 사용 하 여 마우스 Prosocial 동작 분석

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