2018년 7월 4일
정렬 및의 인구 나이 일치의 청소에 대 한 방법론을 포함 하는 현재 프로토콜 꼬마 선 충. 그것은 연구에 대 한 선 충의 큰 실험적인 인구를 간단 하 고, 저렴 한, 그리고 효율적인 맞춤 도구를 사용 합니다.
이 방법은 예쁜꼬마선충의 특정 발달 단계를 필요로 하는 분석법과 관련된 분자 생물학의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 유전자 및 단백질 발현 수준의 분석과 같습니다. 이 기술의 장점은 신체 크기에 따라 많은 수의 예쁜꼬마선충을 정확하고 효율적으로 선택할 수 있다는 것이며, 이는 일반적으로 시간과 비용이 많이 드는 분석의 사용을 용이하게 합니다.
일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 아치형 턴오버 단계를 수행할 수 없거나 솔루션 흐름을 메쉬 중앙에 유지하지 않기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 이 방법의 시각적 시연은 세척 및 뒤집기 단계를 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다. 어떤 사람들은 텍스트의 특정 움직임을 해석하고 시각화하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다.
먼저 뚜껑이 있는 50mL 원뿔형 튜브 2개를 준비한 다음 계단식 드릴 비트를 사용하여 뚜껑 안쪽 립에서 중심을 제거합니다. 필요한 경우 파일을 사용하여 사포 또는 회전 도구를 사용하여 뚜껑의 가장자리와 상단을 청소하고 사포질합니다. 그런 다음 뚜껑의 직경보다 약간 작은 나일론 모노 필라멘트 짠 메쉬 디스크를 자릅니다.
뚜껑의 윗면에 질감을 바르고 에탄올로 청소합니다. 뚜껑을 건조시킨 후 양쪽 뚜껑의 윗면에 시아노아크릴레이트 접착제를 바릅니다. 다음으로, 접착된 하나의 뚜껑에 모노필라멘트 메쉬 디스크를 놓습니다.
메쉬 상단의 두 번째 뚜껑을 뒤집고 뚜껑을 함께 단단히 누릅니다. 접착제의 첫 번째 층이 건조된 후 뚜껑 사이의 바깥쪽 틈 주위에 시아노아크릴레이트 접착제를 넉넉하게 바르십시오. 다음으로, 필터에 각각의 메쉬 공극 크기로 레이블을 지정합니다.
먼저, 라벨이 붙은 50mL 원뿔형 튜브 위에 체를 놓습니다. 그런 다음 물방울이 형성되고 합쳐져 필터 중앙에서 떨어질 때까지 체 중앙을 통해 식염수 용액을 피펫으로 주입합니다. M9 버퍼를 사용하여 오거 플레이트에서 C.elegans 개체군을 씻어낸 다음 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 모노필라멘트 메쉬의 윗면에 웜이 포함된 버퍼를 옮깁니다.
메쉬 중앙에서 작동하여 M9 버퍼로 필터를 헹구고 필요에 따라 이 헹굼 단계를 반복하여 모든 박테리아와 더 작은 벌레가 메쉬를 통과시킵니다. 다음으로, 새 50mL 원뿔형 튜브를 체 상단에 부착하면 이전에 수집된 웜이 메쉬의 기공보다 큰 새 튜브 내부를 향하게 됩니다. 폐기물 튜브를 제거하고 체를 빠르게 뒤집습니다.
그런 다음 M9 버퍼가 있는 메쉬를 새 수집 튜브로 헹굽니다. 수집된 벌레가 약 1분 동안 가라앉을 때까지 기다린 다음 벌레 펠릿에서 완충 용액을 조심스럽게 흡입합니다. 유리 파스퇴르 피펫을 사용하여 NGM 플레이트에 벌레 방울을 만들고 건조시킵니다.
마지막으로 역삼투압 물과 에탄올로 체를 헹굽니다. 체가 마르면 나중에 사용할 수 있도록 깨끗한 용기에 보관하십시오. 체가 처진 모양이 나타나면 버리십시오.
이 프로토콜에서는 나이가 일치하는 예쁜꼬마선충 개체군을 분류하고 청소하기 위해 체가 구성되었습니다. 체 처리 그룹의 동물은 성인기 내내 정상적이고 자발적인 움직임 패턴을 보였습니다. 또한, pick 및 sieve 그룹은 인두 펌프 속도에서 유의한 차이를 보이지 않았습니다.
체 그룹에 속한 동물들은 또한 실험일 중 어느 날의 모든 치료 그룹과 비교했을 때 전방 또는 후방 기계적 자극에 정상적으로 반응했다. 마지막으로, 치료 그룹의 생산력을 비교했습니다. 체의 사용은 Pick 처리 그룹과 비교할 때 자손의 수에 큰 영향을 미치지 않았습니다. 이 기술을 완전히 익히면 10분 이내에 완료할 수 있습니다.
이 절차를 시도하는 동안 메쉬 영역의 중심에서 작동해야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 Caenorhabditis 체를 조립하고 적절하게 사용하여 신체 크기별로 벌레를 분류하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
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본 프로토콜은 맞춤형 도구를 사용하여 연령이 일치하는 Caenorhabditis elegans 개체군을 선별하고 세척하는 방법론을 설명합니다. 이를 통해 연구자는 대규모 실험 개체군을 효율적이고 경제적으로 확보할 수 있습니다.
바이오 제약 R&D에서 C. elegans와 같은 모델 생물의 동기화된 개체군을 확보하는 것은 재현 가능한 표현형 스크리닝 및 타겟 검증 분석을 위해 매우 중요합니다. Caenorhabditis Sieve는 체강 크기에 따른 신속하고 비용 효율적인 분류를 가능하게 하여 초기 발굴 워크플로의 시간 및 자원 부담을 줄여줍니다. 이는 균일한 생물학적 입력을 보장함으로써 분석 준비 상태와 포트폴리오 우선순위 결정에 대한 예측 신뢰도를 높여줍니다.
Caenorhabditis Sieve는 초기 발견(Early Discovery)부터 리드 화합물 도출(Lead Identification)까지의 발견 연속체 내에 적합하며, 특히 C. elegans 기반 표현형 스크리닝을 위한 분석 준비도와 스크리닝 재현성을 지원합니다.