Name: 다 발성 골 수 Xenografts 노 그 쥐에서의 복합 발광 및 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 영상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 32 s
Description: 배우세요 다중 발광 및 PET/CT 영상을 이용해 NOG 쥐 골수 이종이식 다발성 골수종 종양에서 mTOR 억제 효과를 비침습적으로 분석하는 방법입니다. 이 기법은 종양 역학과 치료 반응을 종단적으로 연구하는 데 활용됩니다.

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이 작품 버지니아 장점 grant1I01BX001532에서 미국 학과의 재향 군인 담당 생물 의학 실험실 연구에 의해 지원 되었다과 개발 서비스 (BLRDS) P.F., 및 유럽 인정 버지니아 임상 과학 R & D 서비스 (에서 지원 수상 I01CX001388 장점)와 버지니아 재활 R & D 서비스 (공로 수상 I01RX002604). 조 앤 UCLA 교수 씨 그랜트에서 온 추가 지원 이러한 내용을 반드시 미국 재향 군인 담당 부서 또는 미국 정부의 의견을 대표 하지 않는다.

아래 설명 하는 모든 동물 절차 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 큰 로스 앤젤레스 VA 의료 시스템에 의해 승인 하 고 살 균과 병원 체 없는 조건 하에서 수행 되었다.
1. 8226 셀 Luciferase 표현 (8226-루크)의 준비
<ol><li>8226, 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 95% 공기와 5% 이산화탄소 (CO2)를 포함 하는 습도 분위기에서 37 ° C에서 1% 페니실린 스 보충 RPMI 1640 매체에 인간의 MM 셀 라인을 유지 합니다.</li>
	<li>안정적인 뤽 표현 기자 8226 세포 생성 transfecting 1 x 106 8226 셀 hygromycin (100-350 mg/mL)와 선택 이전 다음 luciferase 기자 벡터와 설명6.</li>
	<li>표준 조건 하에서 무 균 자란 2-3 주 동안 매일, 안정적 transfected 8226 셀 라인의 설립을 생성 될 때까지 매체를 변경 셀을 유지 합니다.</li>
	<li>버퍼링 하는 인산 염 (PBS)의 1 x 106 페 셀/100 µ L에서 생체 외에서 luciferase 활동 luciferase 기판, D-소를 추가 하 여 확인 (150 µ g/mL 작업 솔루션 prewarmed 문화 매체에서), 측정 하는 테스트 튜브 또는 96 잘 접시 루미 노6을 사용 하 여 셀의 생물 발광.</li>
</ol>2. Orthotopic이 종이 식 모델
<ol><li>적절 한 동물 보호 시설에서 살 균/병원 체-무료 조건 노 그 마우스 (4-6 주 오래 된, 남성 또는 여성)을 유지 합니다.</li>
	<li>실험 당일 노 그 쥐 (5 ~ 106 셀/마우스 x)로 IV 주입 8226 루크 페 셀을 준비 합니다. 3 세포를 씻어 얼음 처럼 차가운 PBS에 x, 고 PBS의 5 x 106 셀/200 µ L의 최종 농도에 그들을 (마이너스 항생제와 FBS) 얼음 처럼 차가운 PBS에 resuspend) 멸 균 시험관에. 얼음에 세포를 유지 하 고 최대한 빨리 (30-120 분) 내에서 마우스를 도전.</li>
	<li>Anesthetize (isoflurane, 0.5-1 L/min에 공기에 1%-3%)와 마우스와 향함을 멀리 머리와 생리대에 부정사 위치에 동물을 배치. 발가락을 곤란 하 게 하 여 anesthetization의 수준을 확인 합니다. 눈에 눈 연 고를 적용 합니다.</li>
	<li>1 mL 인슐린 주사기 26 G 바늘을 사용 하 여 꼬리 정 맥 (200 µ L/분사) 통해 쥐로 8226 뤽 셀을 주입. 참고: 열 램프는 꼬리, 그로 인하여 혈관을 dilating 하 고 주사의 효능을 증가 하 고 따뜻하게 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>그들의 가정 케이지를 동물을 그들은 완전히 복구 될 때까지 동물을 모니터링.</li>
	<li>8226-뤽 셀 마우스 뼈대에 engraftment 라스 마 취 쥐 (아래 설명 및 그림 1A에 표시)를 측정 하 여 확인 합니다. 참고: 수확된 뼈 (그림 1C) immunohistochemistry 또는 cytometry (그림 1B)를 사용 하 여 인간의 CD45 식 BM exudates 또한 스테인드 수 있습니다.</li>
</ol>3. 씨에서 Vivo에서 의 측정
참고: 일반적으로, 마우스에 engrafted 종양에서 측정 씨 10-20 일 postchallenge, 사이 처음 관찰 될 수 있다 하지만이 실험적으로 결정 될 필요가 있습니다.
<ol><li>Anesthetize (isoflurane, 0.5-1 L/min에 공기에 1%-3%)와 마우스 하 고 발가락을 곤란 하 게 하 여 anesthetization의 수준을 확인 합니다. 그 눈에 안과 연 고를 적용 합니다.</li>
	<li>동물의 IP 주사 (200 µ L/주입)에 게 "vivo에서-학년" D 소 기판 (30mg/mL 멸 균 식 염 수에 희석).</li>
	<li>측정 소 기판의 주입 (비록 씨 활동 최대 45-60 분 동안 쥐에서 관찰 될 수 있습니다) 다음 5-10 분, 내 씨, 마 취 동물 작은 동물 이미징 시스템 (그림 2에서에서 부정사 위치에 배치 하 여 ). 발광 및 x 선 분석을 선택 하 고 이미지 (그림 3).<ol>
<li>이미징 소프트웨어 (그림 4)를 사용 하 여 관심사 (ROIs)의 선택한 영역에서 평균 빛 (광자/s/cm2/steradian)를 측정 합니다.</li>
		<li>동물의 홈 케이지를 반환 하 고 (약 15-20 분)를 완은 때까지 그것을 모니터링.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 타겟된 치료와 쥐의 치료
<ol><li>기준 씨를 측정 하 고 동물 치료 그룹 (4-8 마우스/그룹)으로 무작위.</li>
	<li>IP 주사 (200 µ L/사출) temsirolimus (0.2-40 mg/kg 마우스)의 나머지는 추가 5 매일 주사11의 2 일 다음 5 일일 IP 주사 처방을 사용 하 여의 쥐를 취급 합니다.</li>
	<li>Luciferase 활동 (광자/s/cm2/steradian) 측정 / 주 섹션 3에 음모는 씨의 시간에 따른 변경 설명 하는 대로 2 배. 종양에 변화 씨 쥐 (그림 5B)의 직렬 이미지로 제시하실 수 있습니다. 참고: 것이 좋습니다 그들은 (일반적으로 초기의 45-60 일) 내에서 다음과 같은 현상이 현재까지 그를 수행 매일 동물의 모니터링: 무게 손실 (이식 전에 무게를 기준으로 10%의 손실) 및 뒷 다리 사지 마비, 어떤 시간에 그들은 한다 안락사 된다 자 궁 경관 탈 구 다음 공동2 챔버를 사용 하 여</li>
</ol>5. PET/CT 분석 18를 사용 하 여 측정 F FDG 종양 물질 대사에 변화
<ol><li>18F FDG의 초과 일반적인 이해를 피하기 위해 실험 전에 24 h에 대 한 그들의 음식을 제거 하 여 그들의 집에 감 금 소에 있는 동물을 빨리.</li>
	<li>실험 당일 18FDG 애완 동물 F 방사선 조사 (50-100 µCi/멸 균 식 염 수에 주입)을 준비 합니다. 복용량 교정기와 시간과 18F FDG 탐사선의 활동을 기록 합니다. 참고: 18F는 상대적으로 짧은 반감기 (~ 2 h) 있기 때문에, 주의 깊은 준비 및이 프로브를 사용 하 여 계획 해야 합니다 설립.</li>
	<li>Anesthetize (isoflurane, 0.5-1 L/min에 공기에 1%-3%)와 동물 그리고 향함을 멀리 머리와 생리대에 부정사 위치에 놓습니다. 발가락을 곤란 하 게 하 여 anesthetization의 수준을 확인 합니다. 그 눈에 안과 연 고를 적용 합니다.</li>
	<li>차폐 1 mL 인슐린 주사기 26 G 바늘을 사용 하 여 꼬리 정 (100 µ L/분사) 통해 프로브 주사. 참고: 열 램프는 꼬리, 그로 인하여 혈관을 dilating 하 고 주사의 효능을 증가 하 고 따뜻하게 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>바늘/주사기 복용량 캘 리브레이 터에 있는 잔여 방사능을 측정 하 고 활동와 시간. 참고: 마우스 인큐베이션, 복용량, 및 타이밍의 표준화 데이터 재현성 및 comparability를 위해 필수적입니다.</li>
	<li>마 취 및 프로브 통풍 관 (~ 45-90 분)의 전체 기간 동안가 열 패드를 사용 하 여 37 ° C에서 생쥐를 유지 합니다. 참고: 쥐 무부하 및 프로브의 일반적인 이해를 피하기 위해 37 ° C에서 유지 중요 하다.</li>
	<li>쥐에서 비슷한 라벨 시간 되도록 약 20-30 분 간격으로 발생 하도록 18F FDG 프로브 주사를 엇갈리게 설정 합니다. 참고: 적절 한 워크플로 고 프로브 주사의 타이밍 최적의 재현성 이미징 조건에서 발생 합니다.</li>
	<li>PET/CT 작은 동물 이미징 시스템에서 선택된 영역에 engrafted 종양 (그림 6)에 해당 하는 관심의 18F FDG 활동을 측정 합니다. 참고: 처음 10 분 정적 애완 동물 노출 및 2 분 CT 노출은 좋지만 정확한 노출 시간 실험적으로 결정 될 필요가 있습니다.</li>
	<li>자신의 집 새에 동물을 반환 하 고 완전히 복구 될 때까지 그들을 모니터링 합니다. 배경 레벨을 프로브 자연 붕괴 하면서 24 h에 대 한 전용 반환 방에 쥐를 집. 참고: 18F의 짧은 반감기 때문에 여러 측정 신선한 프로브를 사용 하 여 만들 수 있습니다 주당 2 배 만큼 자주.</li>
</ol>

<ol><li>Raab, M. S., Podar, K., Breitkreutz, I., Richardson, P. G., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19541364">Multiple Myeloma.</a> The Lancet. 374 (9686), 324-339 (2009).</li>
<li>Galson, D. L., Silbermann, R., Roodman, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Multiple+Myeloma+Bone+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+Reports%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Multiple Myeloma Bone Disease.</a> BoneKEy Reports. 1, 135(2012).</li>
<li>Anderson, K. C., Carrasco, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+Myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of Myeloma.</a> Annual Review of Pathology. 6, 249-274 (2011).</li>
<li>Reagan, M. R., Rosen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Navigating+the+Bone+Marrow+Niche%3A+Translational+Insights+and+Cancer-Driven+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Navigating the Bone Marrow Niche: Translational Insights and Cancer-Driven Dysfunction.</a> Nature Reviews Rheumatology. 12 (3), 154-168 (2016).</li>
<li>Frost, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+Target+of+Rapamycin+Inhibitors+Induce+Tumor+Cell+Apoptosis+in+Vivo+Primarily+by+Inhibiting+Vegf+Expression+and+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Mammalian Target of Rapamycin Inhibitors Induce Tumor Cell Apoptosis in Vivo Primarily by Inhibiting Vegf Expression and Angiogenesis.</a> Journal of Oncology. 2013, 897025(2013).</li>
<li>Mysore, V. S., Szablowski, J., Dervan, P. B., Frost, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+DNA-Binding+Molecule+Targeting+the+Adaptive+Hypoxic+Response+in+Multiple+Myeloma+Has+Potent+Antitumor+Activity%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A DNA-Binding Molecule Targeting the Adaptive Hypoxic Response in Multiple Myeloma Has Potent Antitumor Activity.</a> Molecular Cancer Research. 14 (3), 253-266 (2016).</li>
<li>Podar, K., Chauhan, D., Anderson, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+Marrow+Microenvironment+and+the+Identification+of+New+Targets+for+Myeloma+Therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Bone Marrow Microenvironment and the Identification of New Targets for Myeloma Therapy.</a> Leukemia. 23 (1), 10-24 (2009).</li>
<li>Campbell, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laglambda-1%3A+A+Clinically+Relevant+Drug+Resistant+Human+Multiple+Myeloma+Tumor+Murine+Model+That+Enables+Rapid+Evaluation+of+Treatments+for+Multiple+Myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Laglambda-1: A Clinically Relevant Drug Resistant Human Multiple Myeloma Tumor Murine Model That Enables Rapid Evaluation of Treatments for Multiple Myeloma.</a> International Journal of Oncology. 28 (6), 1409-1417 (2006).</li>
<li>Miyakawa, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+New+Model+of+Human+Multiple+Myeloma+Using+Nod%2FScid%2FGammac%28Null%29+%28Nog%29+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Establishment of a New Model of Human Multiple Myeloma Using Nod/Scid/Gammac(Null) (Nog) Mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 313 (2), 258-262 (2004).</li>
<li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod%2FScid%2FGamma%28C%29%28Null%29+Mouse%3A+An+Excellent+Recipient+Mouse+Model+for+Engraftment+of+Human+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Nod/Scid/Gamma(C)(Null) Mouse: An Excellent Recipient Mouse Model for Engraftment of Human Cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li>
<li>Frost, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Antitumor+Effects+of+the+Mtor+Inhibitor+Cci-779+against+Human+Multiple+Myeloma+Cells+in+a+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">In Vivo Antitumor Effects of the Mtor Inhibitor Cci-779 against Human Multiple Myeloma Cells in a Xenograft Model.</a> Blood. 104 (13), 4181-4187 (2004).</li>
<li>Asosingh, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+Hypoxic+Bone+Marrow+Microenvironment+in+5t2mm+Murine+Myeloma+Tumor+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Role of the Hypoxic Bone Marrow Microenvironment in 5t2mm Murine Myeloma Tumor Progression.</a> Haematologica. 90 (6), 810-817 (2005).</li>
<li>Storti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-Inducible+Factor+%28Hif%29-1alpha+Suppression+in+Myeloma+Cells+Blocks+Tumoral+Growth+in+Vivo+Inhibiting+Angiogenesis+and+Bone+Destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-Inducible Factor (Hif)-1alpha Suppression in Myeloma Cells Blocks Tumoral Growth in Vivo Inhibiting Angiogenesis and Bone Destruction.</a> Leukemia. 27 (8), 1697-1706 (2013).</li>
<li>Fryer, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+Novel+Mouse+Model+of+Multiple+Myeloma+and+Its+Use+in+Preclinical+Therapeutic+Assessment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of a Novel Mouse Model of Multiple Myeloma and Its Use in Preclinical Therapeutic Assessment.</a> PLoS One. 8 (2), e57641(2013).</li>
<li>Gould, S. J., Subramani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Firefly+Luciferase+as+a+Tool+in+Molecular+and+Cell+Biology%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Firefly Luciferase as a Tool in Molecular and Cell Biology.</a> Analytical Biochemistry. 175 (1), 5-13 (1988).</li>
<li>Czernin, J., Phelps, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positron+Emission+Tomography+Scanning%3A+Current+and+Future+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+Medicine%22%5BJournal%5D)">Positron Emission Tomography Scanning: Current and Future Applications.</a> Annual Review Medicine. 53, 89-112 (2002).</li>
<li>Pandey, M. K., Bhattacharyya, F., Belanger, A. P., Wang, S. Y., DeGrado, T. R. <a target="_blank" href="https://www.ahajournals.org/doi/abs/10.1161/circ.122.suppl_21.A12657">Pet Imaging of Fatty Acid Oxidation and Glucose Uptake in Heart and Skeletal Muscle of Rats: Effects of Cpt-1 Inhibition.</a> Circulation. 122 (21), (2010).</li>
<li>Wang, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+Vivo+Molecular+Imaging+Probe+%2818%29F-Annexin+B1+for+Apoptosis+Detection+by+Pet%2FCt%3A+Preparation+and+Preliminary+Evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">An in Vivo Molecular Imaging Probe (18)F-Annexin B1 for Apoptosis Detection by Pet/Ct: Preparation and Preliminary Evaluation.</a> Apoptosis. 18 (2), 238-247 (2013).</li>
</ol>

저자 케빈 프랜시스 Perkin Elmer의 직원입니다.

M M6,9,11,,1213의 전 임상이 종이 식 모델의 다양 한에 불구 하 고 BM microenvironment 내 종양/BM 상호 작용을 공부 하는 능력 유지 곤란 14. 여기서 설명 8226 루크 노 그 쥐의 골격에 종양 세포의 신속 하 고 재현성 engraftment 허용.
이 프로토콜의 중요 한 단계 참여 luciferase 표현 MM 셀 라인의 설립 및 체 외에서luciferase15의 안정적인 식의 확인. 일단 셀 라인 설립 되어, 노 그 쥐 IV 주입에 의해 도전 되 고 뼈대...

MM 악성 플라스마 B 세포는 BM을 침투 하 고 뼈 파괴, 빈 혈, 신장 손상, 그리고 감염을 일으킬의 구성 하는 불 치의 질환입니다. MM 모든 혈액 악성 종양1 의 10%-15%를 만들고 뼈대2를 포함 하는 가장 빈번한 암 이다. MM의 개발은 결국 BM3귀환 하기 전에 림프 조직의 어린 싹 센터에 설정 되는 긴 플라즈마 세포의 종양 전이에서 유래한 다. 매우 이질적인 틈새;는 BM 특징 이다 다양 하 고 중요 한 세포 구성 요소, 낮은 포2 (hypoxia), 광범위 한 vascularization, 복잡 한 세포 외 매트릭스, 그리고 모두의 m M tumorgenesis4기여할 cytokine과 성장 인자 네트워크의 영역을 포함 하 여. 따라서, 엄격 하 게는 BM에 engrafted 종양 특징 전파 MM이 종이 식 모델의 개발 m M 병리학 vivo에서5,6공부를 매우 강력 하 고 임상 관련 도구 것입니다. 그러나, 수많은 기술적 장애물 적용 하기 어렵고 비용이 많이 드는 그들을 만드는 대부분의 종이 식 모델의 효과 제한할 수 있습니다. 이 능력을 직접 관찰 하 고 필요 없이 종양 성장/생존의 변화를 측정에 일관 되 고 재현 가능한 종양 engraftment BM 틈새 시장 내에서 종양 개발, 연장된 시간 제한과 관련 된 문제를 포함 실험7,8과정 쥐를 희생.
이 프로토콜 사용 하 여 Miyakawa 그 외 여러분 에 의해 처음 개발 된 수정된이 종이 식 모델 9, myeloma 세포는 정 맥 (IV) 도전 결과 "전파" 지속적으로 그리고 reproducibly BM의 NOD/SCID/IL-2γ(null) (노 그) 쥐10에 engraft 종양. 이 종양의 위치에 시각화 뤽 대립 유전자와 8226 인간의 MM 셀 라인의 안정 되어 있는 transfection에 의해 달성 하 고 이러한 engrafted 종양 세포6제작한 직렬로 씨에서 변화를 측정. 중요 한 것은,이 모델은 특히 노 그 쥐의 골격에 engraft 비슷한 성향을 가진 다양 한 다른 뤽 표현 인간의 MM 셀 라인 (예를 들어, U266 및 OPM2)를 활용 하 확장할 수 있습니다. 쥐의 발광 영상으로 종양의 식별 애완/코네티컷 함께 하 여 (예: 18F FDG) radiopharmaceutical 프로브의 이해를 측정 하 여 다음 수 있습니다 중요 한 추가 특성에 대 한 생화학 경로 (즉, 물질 대사, hypoxia, 변화 및 apoptosis 유도 변경) 종양/BM microenvironment 내. 이 모델의 주요 장점 다양 한 방사선, 발광 및 형광 프로브 및 m M 진행 및 병리학 비보를 공부 하는 데 사용할 수 있는 표시의 가용성에 의해 강조 될 수 있다.

<table><tbody><tr><td>8226 인간 골수종 세포주</td><td>ATCC</td><td>CCL-155</td><td></td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG)</td><td>Jackson Labs</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>VivoGlo Luciferin substrate</td><td>Promega</td><td>P1041</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxyprobe-1Kit</td><td>HPL</td><td>HP1-100</td><td></td></tr><tr><td>PE-CD45 (clone H130)</td><td>BD Biosciences</td><td>555483</td> BM exudate rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q)Cell Signaling<td>에서 human CD45+ tumor cells 를 확인하기 위한 유세포 분석에 사용됩니다</td></tr>.<tr><td></td><td> 기술</td><td>70527</td><td>절제 뼈의 면역 조직 화학에 사용되는 1 차 항체</td></tr><tr><td>염소 안티 토끼 IgG (HRP 접합)</td><td>ABCAM</td><td>ab205718</td><td>절제 뼈의 면역 조직 화학에 사용되는 Seconday 항체</td></tr><tr><td>이중 루시 페라 아제 리포터 분석 시스템</td><td>Promega</td><td>E1910</td><td></td></tr><tr><td>pGL4.5 루시 페라 아제 리포터 벡터</td><td>Promega</td><td>E1310</td><td></td></tr><tr><td>IVIS 루미나 XRMS In Vivo 이미징 시스템</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sofie G8 PET/CT 이미징 시스템</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

다 발성 골 수 xenografts 노 그 쥐에서의 복합 발광 및 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 영상

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

다중 골 수 종 (MM) 종양이 골 수 (BM)에 engraft 그리고 그들의 생존 및 진행이이 microenvironment 내 존재 하는 복잡 한 분자 및 세포 상호 작용에 따라 결정 됩니다. 그러나 BM microenvironment 쉽게 복제 생체 외에서잠재적으로 많은 생체 외에서 그리고 vivo 전 실험 모델의 생리 적인 관련성을 제한 될 수 없습니다. 이러한 문제는 luciferase (루크)의 종이 식 모델을 이용 하 여 극복 될 수 있다-transfected 8226 m M 세포 특히 마우스 뼈대에 engraft 것입니다. 이러한 마우스 적절 한 기판 주어진, D-소, 종양 성장 및 생존에 치료의 효과 종양 비보를 제작한 (BLI) 발광 이미지에 변화를 측정 하 여 분석할 수 있습니다. 이 씨 데이터 결합 2 대사 마커를 사용 하 여 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 (PET/CT) 분석-의하여-2-(18F) 불 화-D-포도 당 (18F FDG)은 시간이 지남에 종양 물질 대사에 변화를 모니터링 하는 데 사용 됩니다. 이러한 이미징 플랫폼 종양/BM microenvironment 내의 여러 비 침 투 적인 측정을 허용 한다.

초기 파일럿 연구에서 끄 덕/SCID 쥐로 IV 주사 8226 뤽 셀의 개발 하지 않았다 BM engrafted MM 종양, 편평 MM 종양은 쉽게 형성 (100% 성공률) 비록. 반면, 노 그 쥐로 8226 셀 4 과제 생성 (15-25 일) 이내 종양에 해골 (간 또는 비장 등 비 골격 조직에만 거의 형성된 종양). 골격에 종양 실제로 동물을 검사 하 여 시각적으로 확인 수 없습니다, 이후 다른 방법 성공적인 종양 engraftment BM (그림 1) 내에서 종양의 위치를 확인 하 고 간주 했다. Miyakawa 그 외 여러분 에 의해 보고서와 마찬가지로 9, 인간의 IgG, 8226 세포에 의해 생산 ELISA (데이터 표시 되지 않음)를 사용 하 여 도전된 노 그 쥐의 혈 청에서 검출 될 수 있지만 이러한 데이터만 engraftment 하지 위치 또는...

여기 우리가 사용 발광, x 선, 그리고 양전자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 이미징 공부 어떻게 억제 mTOR 활동 영향이 종이 식 모델에서 골 engrafted 발성 종양. 이로써 순수 관련, 비-침략 적, 및 복합 요법 골 engrafted 발성 종양에서 vivo에서대상의 안티 발성 효과의 분석.

다 발성 골 수 Xenografts 노 그 쥐에서의 복합 발광 및 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 영상

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

이 방법은 골수 마이크로 환경의 역할과 이식 된 골수종 종양의 생존에 대한 주요 질문에 대답하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차의 주요 장점은 종방향 항약물 연구에 적용될 수 있으며 비침습적 방식으로 여러 생화학 경로를 분석하는 데 사용될 수 있다는 것입니다. 실험 당일 8226 루시파라제는 얼음 감기 PBS에서 5분 동안 200 RCF에서 3회 세척하고 마우스당 얼음 차가운 PBS 200 마이크로리터당 5배에서 6번째 세포로 펠릿을 재해석한다.다음으로 마취 된 4 ~ 6 주 된 NOG 마우스에서 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인하고 동물의 눈에 안과 연고를 적용합니다. 26 게이지 바늘이 장착된 1밀리리터 인슐린 주사기에 세포를 적재합니다. 동물의 꼬리 정맥에 세포의 전체 볼륨을 주입, 그것의 케이지에 마우스를 반환하기 전에, 전체 복구 될 때까지 모니터링.10~20일 의 도전 후, 각 이식된 동물에게 생체내 200마이크로리터의 멸균 식염수 내의 소염을 주입한다. 마취된 동물을 주사 후 5~10분 이내에 작은 동물 이미징 시스템에 척추 위치에 놓습니다. 해당 이미징 소프트웨어 내에서 선택한 관심 영역에서평균 광채를 측정합니다.8226 루시파아제 종양의 표적 요법을 위해 각 동물의 기준선 생물발광을 측정한 후, 동물을 치료 그룹으로 무작위화하고 각 마우스를 템시롤리무스의 200 마이크로리터 IP 주입 또는 식염수 대조군으로 치료한다. 루시파아제 활성을 일주일에 두 번 측정하고 시간이 지남에 따라 생물 발광의 변화를 플롯합니다. 종양 대사의 변화를 측정하기 위해, 먼저 과잉 비특이적 방사선 표지 플루데옥시글루흡수를 피하기 위해 24시간 동안 마우스의 홈 케이지에서 음식을 제거한다.다음 날 18개의 플루오린 방사성 라벨이 부착된 플루데옥시글루컬 프로브를 멸균 식염수로 희석하여 마우스당 100마이크로리터의 최종 부피로 희석하고 용량 교정기로 프로브의 시간과 활성을 기록합니다. 프로브가 준비되면 머리가 멀리 향하고 있는 가열 패드에 첫 번째 마취 동물을 배치하고 26 게이지 바늘을 장착 한 차폐 된 1 밀리리터 인슐린 주사기를 사용하여 프로브의 100 마이크로 리터를 꼬리 정맥에 주입합니다. 투여량 교정기와 함께 바늘과 주사기의 잔류 방사능을 측정하고 활동 및 시간을 주목한다.그런 다음 작은 동물 PET CT 이미징 시스템에서 이식된 종양에 대응하는 관심의 선택된 영역에서 방사선 표지된 Fludeoxyglucose 활성을 측정합니다. 성공적인 골수 종양 이식은 입증된 바와 같이 생체 발광 화상 진찰에 의해 확인될 수 있습니다. 여러 동물의 연쇄 화상 진찰은 골수 이식 다발성 골수종 종양의 분포를 시각화하기 위하여 이용될 수 있습니다.추가로 광학 화상 진찰 엑스레이 분석은 마우스 골격 내의 다발성 골수종 종양의 정확한 위치 그리고 분포의 신속하고 비 침습적인 결정을 보여줍니다. 이식된 종양 세포에 의해 생성된 생물 발광은 종양 성장의 변화를 평가하기 위하여 연속적으로 비침습적으로 측정될 수 있습니다. 더욱이, mTOR 억제제 Temsirolimus로 치료된 마우스의 생존을 감시하고 양성근 방출 및 종양 방사선 표지플루데옥당 섭취에 대한 계산단층 촬영 분석을 통해 포도당 대사의 템시롤리무스 매개 변화를 입증하는 데 사용될 수 있다.이 절차를 수행하는 동안 세포 IEV를 주입하는 것이 중요합니다. 우리는 정맥으로 세포를 주입하는 실패가 주입의 사이트 근처 비 골수 이식 종양 세포의 형성에 결과 발견했습니다. 이 절차에 따라 면역 조직 화학 및 마이크로 CT와 같은 다른 방법은 골수 환경의 뼈 아키텍처 및 비 종양 세포 및 분자 구성 요소에 미치는 종양영향에 대한 질문을 해결하는 데 사용할 수 있습니다.

multimodal-bioluminescent-positronic-emission-tomographycomputational

Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

루시페라제 - 수정된 인간의 뇌 종양의 xenografts은 종양 성장과 bioluminescence 이미징을 사용하여 치료에 대한 응답의 후속 모니터링과 athymic 생쥐에 intracranially 설정할 수 있습니다. 생존 분석과 함께, bioluminescence 모니터링 뇌 종양 치료를위한 고려되는 요법의 사전 임상 시험을위한 필수적인 연구 도구입니다.

Bioluminescence 이미징을 사용하여 종양 성장과 치료에 반응 이후 분석 Intracranial 뇌종양의 Xenografts 구축

뼈 전이의 실험 마우스 모델은 루시페라제 내유 종양 세포를 표현 intracardiac 배달 아래 설립되었습니다. 종양 개발 및 osteolytic 병변을 발생은 bioluminescence과 마이크로 중부 표준시 이미징과 길이 방향 감시했다.

Bioluminescence 및 마이크로 중부 표준시 이미징과 함께 종양의 Metastases 및 Osteolytic 조직 손상을 모니터링

hypoxia inducible 인자 - 1α 활동 Bioluminescence 이미징은 유방암 뇌 전이의 마우스 모델에서 종양 intracranial hypoxia 개발을 모니터에 적용됩니다.

유방암 뇌 전이의 종양 Hypoxia 역학 생체내의 Bioluminescence 이미징에서는 마우스 모델에서

미만성 형광 tomography는 잠복기로 높은 걸쳐 상대적으로 저렴한 비용과 잠재적인 접근 방식을...

암 생체 현지화위한 작은 동물의 계산된 Tomography 주 도형 시간 도메인 미만성 형광 Tomography

우리는 누드 마우스 및 이후 일련의 뇌에 인간 glioblastoma multiforme의 세포의 정확한, stereotactic 주입을위한 통합 방법을...

Stereotactic Intracranial 주입 및<em&gt; 생체에</emGlioblastoma의 Multiforme의 마우스 모델 시스템에서 종양 Xenografts의&gt; 발광 생물 이미징

이 비디오에서는 마우스 모델에서 형광 단백질이 태그된 교모세포종 이종이식편의 생체 내 이미징을 위한 형광 분자 단층 촬영 또는 FMT에 대해 설명합니다. 이 기술은 분자 수준에서 항종양 치료제의 효과를 밝히는 데 유용합니다.

형광 분자 단층 촬영: 마우스 모델에서 형광 단백질 태그가 지정된 교모세포종 이종이식편의 생체 내 이미징을 위한 이미징 기술

출처: Clark, AJ, et al. 교모세포종에 대한 면역적격 동물 모델의 생물발광 영상. J. Vis. 경험. (2016년)이 비디오는 루시페라아제 발현 종양 세포와 루시페린을 사용하여 종양 성장을 비침습적으로 정량화하는 면역 적격 마우스 모델에서 교모세포종 진행을 추적하기 위한 생물 발광 이미징을 보여줍니다.

교모세포종에 대한 면역적격 마우스 모델의 생물발광 이미징

자가 및 동종 골 이식의 주입은 주요 두개 안면 뼈 손실을 치료하는 방법을 받아 구성한다. 그러나 혈관 신생, 세포 분화 및 골 형성 간의 상호 작용에 그래프트 조성물의 효과는 불분명하다. 우리는 이식 근접에서 혈관 신생 골 형성의 상호 의존성을 규명하는 것을 목표로 멀티 모달 이미징 프로토콜을 제시한다.

컴퓨터 단층 촬영 및 골 형성 - 혈관 신생 커플 링의 광학 이미징 두개골 뼈자가 이식과 동종 이식 통합을 평가하기 위해

여기, 우리는 암에 대 한 신뢰할 수 있는 전 임상 모델을 만드는 생물학 관련 사이트에서 초음파 유도 신경 (NB) 및 Ewing의 육 (ES) 세포의 주입을 활용 (설립 세포 및 종양 환자에서 파생 된 셀) 프로토콜 제시 연구입니다.

초음파의 이용 가이드 생물학 관련 전이성 종양 Xenografts의 설립을 위한 세포 이식 조직 감독

이 작업은 녹색 형광 단백질 및 생물 발광 신호의 검출뿐만 아니라 정량적 분자 검출 기술의 통합에 의해 종양 하중을 정확하게 평가하기 위한 고급 프로토콜을 미리 설정합니다.

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

Intravital microscopy 결과의 번역은 조직에 대한 얕은 깊이 침투로 인해 어려움을 겪고 있습니다. 여기에서는 직접적인 공간 상관 관계를 위해 생체 내 현미경 검사와 임상적으로 적용 가능한 이미징 양식(예: CT, MRI)을 함께 정합할 수 있는 등쪽 창 챔버 마우스 모델에 대해 설명하며, 이를 통해 생체 내 현미경 검사 결과의 임상 번역을 간소화할 수 있습니다.

중개 암 연구에서 생체 내 현미경 및 자기 공명 영상의 결합을 위한 Dorsal Skinfold Window Chamber 종양 마우스 모델

배우세요 다중 발광 및 PET/CT 영상을 이용해 NOG 쥐 골수 이종이식 다발성 골수종 종양에서 mTOR 억제 효과를 비침습적으로 분석하는 방법입니다. 이 기법은 종양 역학과 치료 반응을 종단적으로 연구하는 데 활용됩니다.

다 발성 골 수 Xenografts 노 그 쥐에서의 복합 발광 및 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 영상

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