Name: 인공 와우 수술 및 C57BL/6 마우스에 전기 evoked 청각 Brainstem 응답 기록 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: 학습하세요 C57BL/6 마우스에서 인공 와우 수술 및 청각 뇌간 반응 기록 방법을. 급성 난청 유도와 전기 자극 평가를 통해 청각 회복 기술 연구에 활용할 수 있습니다.

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저자는 피에르 Stahl, 오티 콘 의료, 니스, 프랑스에 대 한 제공 동물 자극 플랫폼 및 조언을 자극 패러다임, 그리고 제임스 B. 펄 롱과 앤드류 공화국 현명한 공학 연구소, 멜버른, 호주에서에서 수술 조언을 감사 하 고 싶습니다. . 이 작품은 스위스 국립 과학 재단 (T.R.B. ERC 이전 부여)에서 교부 금에 의해 지원 되었다.

모든 절차는 바젤 대학, 스위스, 동물 보호 및 지침에 따라 실시 했다. 그들은 구획의 바젤, 스위스의 수의 사무실에 의해 허가 했다.
참고: C57BL/6 성인 쥐, 8-12 주 (무게 20-30 g), 세이 연구에 사용 되었다. 왼쪽된 귀는 실험 귀로 사용 됩니다. 오른쪽 귀는 내 동물 제어 역할 하 고 수술로 변경 되지.
1. 수술 전 절차
<ol><li>
케 타 민/xylazine (80 mg/kg 케 타 민, 16 mg/kg xylazine, i.p., 볼륨 10 μ/g 몸 무게에 주입)의 복 막 내부 (i.p.) 주입을 통해 수술 전에 동물 30 분 anaesthetize
	<ol>
<li>긍정적인 페달 및 종을 (발가락-핀치) 반사와 케 타 민 (45 mg/kg, i.p., 10 μ g/몸 무게에서 주입)의 낮은 복용량으로, 수염의 움직임에 의해 심판을, 필요에 따라 마 취를 보충. 에이전트 및 복용량 정권 기관 지침 당 교체하실 수 있습니다. 참고: 일반적으로, 동물 필요 합니다 주사가 에이전트 및 복용량 정권 마다 45-60 분. 이식된 전극 배열 주위 폐쇄 초기 절 개에서 평균 시간은 일반적으로 1-1.5 시간 이다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>정기적인 호흡 속도 발가락-핀치 반사의 부족에 의해 표시 된 동물의 전체 진정에 대 한 확인 하십시오. 이 정도의 마 취를 유지 합니다.</li>
	<li>폐쇄 루프 난방 패드 36.6 ° C에서 동물의 체온을 유지 한다. 각 막의 탈수를 피하기 위해 눈 연 고를 적용 합니다. 이 또한 동물의 깜박임 반사는 레코딩에 소음을 추가할 수 있는 표시 되지 것입니다.</li>
	<li>Bupivacaine/Lidocaine의 피하 주사 (사우스 캐롤라이나) 통해 로컬 진통제 관리 (0.1 mg/mL bupivacaine 및 lidocaine 0.4 mg/mL, 0.1 mL 관리 사우스 캐롤라이나) 어떤 수술 불편을 최소화 하기 위해 의도 된 절 개 라인을 따라. 에이전트 및 복용량 정권 기관 지침 당 교체하실 수 있습니다.</li>
	<li>관리 muscarinic 적 아트로핀 (atropinesulfate 아미노산, 0.1 mg/mL, 20 μ 관리 사우스 캐롤라이나, PBS에 용 해) 점액 분 비를 줄이기 위해 호흡을 촉진 하는 목에서. 에이전트 및 복용량 정권 기관 지침 당 교체하실 수 있습니다.</li>
</ol>2. 미리 굉음 음향 청각 Brainstem 응답 (aABR)
참고: aABR 청각 굉음 전후 상태를 측정 하는 데 사용 됩니다. 테스트 하는 것은 왼쪽된 귀에와 전기적 차폐 방음 부스에서 수행 됩니다. 우리가 테스트 하 고 나중에 오른 손잡이 사람을 위해 왼쪽된 귀를 이식 하는 것이 좋습니다. 마우스에 ABR에 대 한 자세한 내용은13,14에서 찾을 수 있습니다. 터 커 데이비스 기술 (TDT) 하드웨어 및 소프트웨어 (BioSig) ABR을 기록 하는 데 사용 됩니다 하지만 다른 시스템을 사용할 수 있습니다.
<ol><li>동측 (왼쪽된) 귀에서 ABR 응답을 음향 거품 contralateral (오른쪽) 귀를 차단 합니다. 1 mL 주사기에 거품을 넣고 거품을 가진 전체 귀 운하를 마우스의 오른쪽 귀 운하에 주사 (0.1-0.2 mL의 거품). 있는지 확인 주사기 물개 밀접 하 게 귀에 거품 줄곧 외가도에 도착을 합니다.</li>
	<li>스피커 왼쪽된 귀에서 10 cm를 놓습니다. 참고: 이 설정에 대 한 스피커 refefence15에 설명 된 대로 PCB 마이크를 사용 하 여 측정 했다.</li>
	<li>70% 에탄올 솔루션 ABR 전극을 청소 합니다. 피부 아래 전극 배치: 액티브 (Ch1)는 정점에 동측 귀의 pinna 아래 (-)를 참조 하 고 뒷 다리 (그림 1)에서.</li>
	<li>광섬유 포트를 통해 청각 프로세서에 머리-무대와 프리 앰프를 연결 합니다.</li>
	<li>
활성의 임피던스 및 참조 전극 확인 합니다.
	<ol>
<li>임피던스 3 옴 이상 인 경우에, 그들을 재정비 하 고 다시 측량을가지고 가십시오. 최고의 녹음 전극 동일한 임피던스를가지고 얻을 수 있습니다. 방음 부스를 닫습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>클릭 자극을 제시 하 고 복잡 한 청각 프로세서와 소프트웨어 무료 필드 조건에 ABR를 기록 합니다. 소프트웨어에서 클릭 자극 표준화: 0.1 ms 단일 채널 monophasic 클릭 21 Hz; 시 제시 클릭 10 dB 단계; 10 dB SPL에서 90 dB SPL 레벨 감소 10 ms 윈도우 기록입니다. 각 dB 수준에서 512 응답의 총 평균.</li>
	<li>2000 Hz 저역 통과 필터와 300 Hz 고 역 통과 필터를 오프 라인으로 주문 품 Matlab 스크립트를 사용 하 여 기록에 소음을 줄이기 위해 적용 됩니다.</li>
	<li>ABR 웨이브 응답 (그림 2, 그림 3) 인식할 수 있는 가장 낮은 dB 수준으로 ABR 임계값을 결정 합니다.</li>
</ol>3입니다. 수술
참고: 사용 되는 일반적인 계기는 시저, 메스, 직선 또는 곡선 팁, 조직 견인 도구, 여러 흡입 웨지와 흡수 종이 포인트 금속 집게의 쌍을 포함 합니다. 수술은 왼쪽된 귀에 수행 됩니다.
<ol><li>그것의 오른쪽에 마우스를 넣어. 자 궁 경부 척추에 과도 한 비틀림 스트레스를 하지 마십시오. 기도 열어 바로 시체를 유지 해야 합니다.</li>
	<li>한가 위를 왼쪽된 귀 뒤에 모피 (잘라내거나는 면도기로 면도) 피부를 노출. 70% 에탄올 솔루션 및 betadine (povidone/요오드) 피부를 소독.</li>
	<li>현미경 배율 (16 배속), 메스로 절 개 후 귀의 1-1.5 cm 확인.</li>
	<li>더 높은 현미경 배율 (25 x)으로 전환 합니다.</li>
	<li>집게와 가변 두께의 수, 피하 지방 층을 통해 둔 기 해 부를 수행 합니다. 참고: 외부 경 정 맥 통과이 지역으로 해 부 할 때 주의 해야 합니다. 이 구조에 손상을 과도 한 출혈이 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>귀 물집과 공개 sternocleidomastoid 근육을 철회. 주요 해부학 적 랜드마크로 안 면 신경을 사용 하 여 청각 물집의 식별을 돕기 위해. 안 면 신경 sternocleidomastoid 근육의 후부/등 쪽 가장자리 주위를 감싸는 고 pinna 향해 귀 운하를 따라 rostrally 실행 합니다. 부드럽게 물집 (그림 4)에 대 한 액세스를 쉽게 하기 위해 절 개에 자기 고정 견인 도구를 배치 합니다.</li>
	<li>Overlying mastoid 과정과 물집 사이 능선의 명확한 시각화 수 있도록 물집의 평점 등 지역 조직을 제거 합니다.</li>
	<li>부드럽게 회전 하는 물집 피어스 고 (뼈가이 쪽에 얇은) 능선의 후부 우수한 측에 구멍 (bullostomy) 30 G 바늘. 또는 치과 수술 드릴을 사용 합니다. 참고: 선호 하는 경우이 고 다음 단계 더 높은 현미경 확대 (40 x)와 함께 할 수 있습니다. 또한, 필요한 경우 현미경의 위치를 변경 합니다. 가운데 귀 공간 수술 보기를 최대화 하기 위해 중요 하다.</li>
	<li>
잘 밀고 집게를 사용 하 여 중간 귀 구멍을 노출 하는 작은 뼈 조각 곤란 하 여는 bullostomy를 넓히다. 둥근 창 틈새의 뼈를 overlying 분명 하다 때까지 dorsally mastoid 과정으로 bullostomy를 확장 합니다. Stapedial 동맥의 내부 경 동맥 분기 둥근 창 틈새 복 부 실행 됩니다.
	<ol>
<li>수 치명적일 수 있습니다 과도 한 출혈로 혈관을 손상 하지 않도록 주의 하십시오. 작은 출혈 귀 구멍에 있는 spongostan의 작은 조각을 눌러 중지 될 수 있습니다.</li>
		<li>등골, 타원형 창에 연결 하는 중간 귀 뼈를 시각화 하기 위해 우수한 앞쪽 방향으로 bullostomy를 확장 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>타원형 창 노출 집게와는 등골을 제거 합니다.</li>
</ol>4. 둥근 창 Ototoxic 에이전트의 응용 프로그램
<ol><li>부드럽게 무딘된 30g 바늘을 사용 하 여 둥근 창과 타원형 창 막 구멍. 그 perilymph 실행 확인 하십시오.</li>
	<li>천천히 0.05% 무게/볼륨 네오 마이 신 타원형 창을 통해 PBS (pH 7.4에 조정)에 용 해 perfuse. 액체는 둥근 창 밖으로 플러시 한다. 둥근 창에 동일한 절차를 반복 합니다. 수 perfuse 하는 데 사용 하는 바늘 창 뼈 구조를 손상 하지 않도록 주의 하십시오.</li>
	<li>Spongostan 라운드 창과 타원형 창 틈새 시장 내에서 네오 마이 신에 배어의 작은 조각 (1 m m2)를 배치 합니다.</li>
	<li>견인 도구 제거 절 개 닫고 30 분을 기다립니다.</li>
</ol>5. 후 굉음 음향 ABR
<ol><li>비슷한 방법으로 굉음 (단계 2.2 2.8) 전에 aABR을 기록 (그림 2b, 그림 3).</li>
</ol>6입니다. CI 전극 배열 삽입
참고: 백 금/iridum 파 릴 렌 절연 와이어 실리콘 튜브 (그림 5) 차폐와 4 개의 플래티넘 밴드 (Ø0.2 m m) intracochlear 전극 배열에 의하여 이루어져 있었다.
<ol><li>다시는 물집 액세스 절 개에 견인 도구를 놓습니다.</li>
	<li>둥근 창 (scala tympani) 깊이에 둥근 창 내 4번째 플래티넘 반지 위치에 전극 배열 삽입. 이 ~ 2 m m,16~ 30 kHz intracochlear 위치로 해당 삽입 깊이 제공 합니다.</li>
	<li>리드 와이어는 물집 내부 코일 하 고 접착제는 물집 위의 조직에 와이어. 와이어 감기 실험 내내 자리에 배열 유지 도움이 됩니다.</li>
	<li>조심 스럽게 견인 기를 제거 하 고 조직 접착제로 삽입을 닫습니다.</li>
	<li>어디 사이에 수직 목에 작은 절 개 (0.5 m m) 하 게 활성 참조 ABR 전극 조직이 위를 사용 하는 것입니다. 피하 포켓에 플래티넘 땅 볼을 놓고 조직 접착제 (그림 6) 작은 절 개를 닫습니다.</li>
	<li>전극 배열 보드 동물 자극 기 플랫폼에 연결 합니다.</li>
</ol>7. 전기 청각 Brainstem 응답 (eABR)
참고: 동물 자극 플랫폼 (ASP)는 전기적 자극 전극 배열 하는 데 사용 됩니다. 다른 전류 소스 및 소프트웨어 시스템을 사용할 수 있습니다.
<ol><li>ABR 전극으로 (2.3 ~ 2.5 단계) 전에 (그림 6)를 배치 합니다.</li>
	<li>ASP 소프트웨어 열고 전기 펄스 자극 패러다임을 정의 합니다. 충전 평형 복 형 펄스를 사용 하 여 50 μ s/단계는 우리와 10 μ interphase 간격 초 (조달 청) 당 23.3 펄스에서 발표. 전기 자극은 monopolar 전극 구성 현재 수준 증가 함께 전달 됩니다. 400 응답의 총 각 현재 수준에 평균 된다.</li>
	<li>전기 펄스 트레인을 제시 하 고 TDT headstage 통해 지속적으로 evoked eABR 응답, 프리 앰프와 청각 프로세서를 기록 합니다.</li>
	<li>플롯 및 맞춤 matlab 스크립트 (그림 7)를 통해 eABR 데이터 분석. 스크립트 및 녹음의 예는 보에 제공 됩니다.</li>
</ol>8입니다. 실험의 끝
<ol><li>실험의 끝에, 기관 지침에 따라 동물을 안락사.</li>
	<li>조심 스럽게 절 개를 열고는 임 플 란 트를 제거 합니다.</li>
	<li>울트라-sonicate 10 분 조직 파편을 제거 하기 위해 증류수에 전극 배열. 참고: 이식 전극은 그대로 하 고 제대로 실시 하는 경우 여러 번 다시 수 있습니다. 배열이 건조 할 때이 확인 하려면 멀티 미터와 전극의 임피던스를 측정 합니다.</li>
	<li>건조 한 장소에 전극 배열을 저장 합니다.</li>
</ol>

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</ol>

아니 경쟁 금융 관심사입니다. 저자는 공개 없다.

이 원고 급성 굉음 및 마우스, 청각 brainstem 응답 CI 자극의 기능 평가에 인공 와우 이식 수술 방법을 설명합니다. 마우스 달팽이 관은 작은 도전 수술, CI 마우스 모델 가능 그리고 청각 연구에 유용한 도구 역할.
Stapedial 동맥은 마우스의 중간 귀에. 동맥은 물집 후부 medially, 들어가고 inferiorly 둥근 창 틈새에 실행 그리고 타원형 창 틈새에 머리. 마우스 모델의 초기 개발에서 우리는 물집을 액세스 하는 동안 주로 stapedial 동맥에 치명적인 내부 요원 출혈 다음 외상을 경험 했다. 결과적으로, 우리는 더 제한 된 접근 방식을 적응 하 고 작은, 세련 된 절 개 단계에서 물집을 액세스. 출혈로 인해 더 합병증 그 후 관찰 되었다. 사실 그 stapedial 동맥 열화에에서 아무런 효과가 중요 한 청각 임계값 또는 나선형 ganglion 신경의 번호에 마우스5, 우리의 의견에도 불구 하 고 그것은 필요 하지 않습니다 너무 오랫동안 큰 관심과 주의 수술 중에 찍은. 좋은 정신 운동 기술을 개발 하 고 기술 능력에 도달 하는 데 필요한 시간을 복용 하는 것이 좋습니다. 이식된 전극 배열 주위 폐쇄 초기 절 개에서 평균 시간은 일반적으로 1-1.5 h 이다.
마우스에서 설명한 급성 CI 수술 "복 부" 절차 및 다른 설치류, 쥐와 gerbils20,,2122등에서 사용 하는 둥근 창 삽입 비슷합니다. 다른 설치류 학문 둥근 창 삽입, SA 완전히 삽입 배열 더 깊이6,,2324고 대신 기저 차례 cochleostomy와 "등 접근"을 사용 했습니다. 쥐에 만성 자극 어셈블리의 이식 임 플 란 트 및 수술 후 관리5해결 하기 위해 Dacron 메시의 추가 함께이 프로토콜에서 설명 된 대로 동일한 단계를 따릅니다.
주요 기술 과제 쥐에서 CI 수술을 수행할 때 큰 SA의 존재와 쥐와 gerbils, 달팽이 관에 비해 달팽이 관의 작은 크기 이다. SA는 또한 안에 gerbils 하지만 쥐에 존재. 또한, 쥐 쥐와 gerbils 보다 작은 이기 때문에, 그들은 수술 절차에 더 취약입니다.
EABR 녹음에서 electrophonic 응답을 제거 하 고 머리 세포 손실 대부분 CI 사용자에서 발견 모방 하 우리 CI 삽입 전에 동물 모습. 마우스는 ototoxicity 발생 하는 데 필요한 aminoglycosides의 조직 농도 좁은 복용량 창 때문에 ototoxically vivo에서25 를 멍 하 고 어려운: 낮은 반면에 머리 세포 손실 없이 몇 일 결과 주어진 복용량 단일 주사 더 높은 복용량의 치명적인26일 수 있다. 또한, aminoglycosides 민감성 스트레인 종속26이다. 그러나, 그것은 루프가 뇨 제와 함께에서 aminoglycosides의 단일 복용 과도 한 외부 머리 세포 손실 없이 치명적인 결과27CBA/CaJ 생쥐에서 생산할 수 있는 표시 되었습니다. 지연된 안 머리 세포 죽음은 모든 cochleae 검사27의 절반에 보고 되었다.
이 원고에서는 우리는 aminoglycosides 네오 마이 신 최근 C57BL/6 쥐5위해 설립 하는 프로토콜에 의해 영감된의 국 소 응용 프로그램 사용. 네오 마이 신 급성 적용 클릭 갖는 심리 임계값 46 dB ± 6.1 크게 증가. 이 증가 어 빙 외. 보고 35 dB 증가 보다 더 큰 (수술 전 vs 후: 41.6 dB ± 3.3 vs 76.6 dB ± 4.4, p = 0.02, n = 3) 5, 우리 같은 후 굉음 임계값 (75.7 dB ± 3.7 vs 76.6 dB ± 4.4) 달성. 0.05% 네오 마이 신 생각 된다 급속 한 외부 머리 세포 죽음에 의해 주로 청각의 부분적인 손실 안 머리 세포 손실27발생 하는 데 시간이 오래 걸립니다. 그것은 따라서 가능한 electrophonic 응답, 즉 내부에 의해 둘 다 생성 하 고 외부 머리 세포4,,89,10,11,12만 부분적으로 잔여 청각과 귀 동물에서 탈락. 도 불구 하 고 0.05% (무게/볼륨) 네오 마이 신 나선형 ganglion 신경의 수 4 주 후5굉음을 감소 하지 않습니다, 그것은 아직 알 수 없는 경우 네오 마이 신 우리의 급성 설치에 청각 신경 섬유에 영향을 미치는 또는 synaptopathy (시 냅 스의 손실을 촉진 내부 세포 유형 사이 나 청각 신경 섬유). 또 다른 불확실성은 국 소 네오 마이 신 치료는 달팽이 관의 길이 따라 머리 세포 손실의 균일 한 분포를 생성 하지 않을 수 있습니다. 미래의 연구는 이러한 질문에 대답 해야 합니다.
요약 하자면, 인간의 청각 및 생 화 확 적인 도구를 사용할 수에 대 한 유전자 모델의 증가 CIs의 필드를 포함 하 여 청각 연구를 위한 매력적인 동물 모델 마우스에 확인 합니다.

달팽이 관 임 플 란 트 (CIs)는 사람들에 게 심각 하 고 심오한 청각 상실과 청각의 감각을 제공할 수 있는 전자 장치. 내가 달팽이 관 이식 수술 전극 사용 하 여 직접 청각 신경을 자극. 날짜 하려면, CI는 가장 성공적인 감각 족 이며 60 개 이상의 사람들이 전세계1있었습니다. 그러나, 장치는 단점. 첫째, 장치에서 제공 하는 혜택 받는 사람 마다 크게 다릅니다. 둘째, 환경 및 음악에 연설 여전히 저조한 대부분 CI 사용자에 의해 감지 된다.
몇 년 동안, 동물 모델 CI 연구에 이러한 문제를 더 잘 이해 하 고 지속적으로 안전 및 소자의 효능을 개선 하기 위해 사용 되었습니다. 모델 일어나 CI 이식2, 다음 뇌에 플라스틱 변화 등 여러 현상에 대 한 값진 통찰력 준 잔여 청각3및의 생물 속성을 유지 하기 위해 유전자 치료를 적용의 효과 전기 자극된 청각 신경4, 많은 다른 보기 사이에서.
마우스는 난청의 유전자 모델의 큰 가용성으로 인해 강력한 모델 유기 체. 다른 장점 마우스 게놈을 조작 하는 기능 (예:, CRISPR-Cas 시스템을 통해), 기회를 사용 하 여 고급 이미징 기술 메커니즘, 특히 뇌, 높은 재생 속도, 신속한 개발을 공부 하 고 쉽게 번 식 하 고 처리. 쥐에 있는 CI 수술을 수행에 주요 기술 과제는 달팽이 관의 작은 크기와 큰 stapedial 동맥 (SA)의 존재 있습니다. SA는 일반적으로 인간에서 배아 개발 하는 동안 사라집니다 그러나 설치류, 쥐, 쥐, gerbils 등의 여러 생활 내내 지속. SA는 달팽이 관에 대 한 액세스를 복잡 하 고 수술 위험 증가 둥근 창 틈새 아래 실행 됩니다.
이전 연구에서 쥐5,,67CI 이식의 타당성을 나타났습니다. 어 빙 외. 만성 intracochlear 전기 자극까지 한 달 동안 달성 될 수 있다 설명 했다. 급성 자극 또한 수행 하지만 녹음 하지 발표 했다. 그들은 보여주었다 stapedial 동맥을 cauterizing 심리 임계값 또는 나선형 ganglion 신경의 수에 아무런 상당한 영향 했다는 고 aminoglycoside 네오 마이 신, ototoxic 약물의 국 소 응용 프로그램에 효과적인 굉음 절차는 마우스5. Soken 외. 더 나은 청각 상태6을 유지 하기 위해 라운드 창을 통해 마우스 달팽이 관에 대 한 수정된 등 접근을 설명 합니다. 백 금-이리듐 와이어의 삽입, 다음 상당한 잔여 청문회는 28 dB의 (ABR) 임계값 증가 청각 brainstem 응답으로 관찰 되었다. Otoacoustic 방출 (OAE) 큰 ABR 임계값 교대6동물에서 분실 되었다. Mistry 외7전기 자극 부재에서 이식의 기능과 histopathological 효과 테스트. 청각은 저주파 수에서 3와 6 개월 된 이식된 생쥐에서 보존 되었다, 비록 주입 섬유 증 같은 조직 이식 주위와 osteoneogenesis bullostomy7주위 귀착되 었 다.
즉, 쥐에 있는 CIs에 3 개의 학문에서 단 하나는 CI 자극의 기능 녹음을 보여 줍니다. 어 빙와 동료 둘 다 급성과 만성 eABR 녹음을 수행 하지만 만성 CI 자극5에서 데이터. 그러나, 어 빙 연구진이 개발 완전 이식 장치 만성 모델은 기술적으로 도전 합니다. 그것은 아직 알려져 있지 경우 급성 CI 자극, 덜 도전적이 고 빠른, 모두 비슷한 결과 얻을 수 있습니다.
CIs는 보청기의 혜택을 더 이상 심각 하 고 깊은 청력 손실 가진 사람에 의해 사용 됩니다. 따라서 CI 사용자에 대 한 동물 모델은 일반적으로 동물 사용 됩니다 청문회 때 굉음 프로시저를 포함 해야 합니다. 청각 동물 멍 하 고 또 다른 이유는 농 아 또는 청각 달팽이 관의 전기 자극 다른 신경 응답4,,89,10,11, 생산 12. 귀 달팽이 관의 전기 자극은 직접 청각 신경 섬유를 활성화 하 고 electroneural 응답 (α) 생성. 그것은 짧은 대기 시간 및 주변8,10작은 동적 범위 특징 이다. 다른 한편으로, 청각 달팽이 관의 전기 자극은 또한 더 긴 대기 시간 및 더 큰 다이나믹 레인지4,11특징 이다는 electrophonic 응답 (β) 세포 흥분. Electrophonic 응답 내부 세포, 외부 머리 세포의 전기적 유도 수축 및 여행 파4의 생성에 의해 신경 섬유의 정상적인 구동에 기인 된다. Electroneural 및 electrophonic 응답 또한 중앙 신경 조직9에서 두 개의 다른 활동 패턴 발생. 사토 외. 네오 마이 신, electrophonic 기여 제거와 굉음 전후 CI 이식 기니 피그의 midbrain 뉴런을 기록 했다. 그들은 속도 수준 함수의 기울기는 험한와 심리 상태9에 귀 상태에서 높은 비해 발사 속도 보여주었다. 따라서, 명시 된 연구 질문에 따라 별도 electrophonic 및 electroneural 청각 신경의 전기 자극에 응답을 굉음 등을 고려 하는 중요 하다.
여기, 우리는 심각한 굉음에 대 한 절차와 마우스에 전극 배열의 달팽이 관 이식 청각 brainstem 전기 evoked 응답 (eABR) intracochlear 전기 자극의 기능 녹음 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>Hardware</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sound-proof booth</td><td>IAC Acoustics, Winchester, UK</td><td>Mac-2 Enclosure RF Shielded Box 2A</td><td></td></tr><tr><td>MF1 Speaker</td><td>Tucker Davis Technologies (TDT), FL, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCB 마이크</td><td>PCB Piezotronics, Inc, NY, USA</td><td>모델 378C01</td><td></td></tr><tr><td>저임피던스 헤드스테이지</td><td>TDT, FL, USA</td><td>RA4LI</td><td></td></tr><tr><td>Medusa 프리 앰프</td><td>TDT, FL, USA</td><td>RA4PA</td><td></td></tr><tr><td>RZ6 청각 프로세서</td><td>TDT, FL, USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Animal Stimulator Platform</td><td>ASP, Oticon Medical, Nice, France</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Multimeter</td><td>Fluks</td><td>#115</td><td></td></tr><tr><td>Surgical equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>폐쇄 루프 가열 패드</td><td>FHC, Inc. ME, 미국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>눈 연고</td><td>Alcon, CH</td><td>Lacrinorm Augengel</td><td></td></tr><tr><td>어쿠스틱 폼</td><td>Otoform Ak, Dreve Otoplastik GmbH</td><td>#464</td><td></td></tr><tr><td>일회용 피하 바늘 전극</td><td>Horizon, Rochester Electro-Medical Inc.</td><td>S83018-R9, 27G</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>자체 유지 견인기 도구(Mini Collibri 견인기)</td><td>Fine Science Tools</td><td>#17000-01</td><td></td></tr><tr><td>흡입 웨지</td><td>Agnthos, SE</td><td>#42-886-460</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 종이 포인트(중간)</td><td>WPI, FL, USA#</td><td>504182</td><td></td></tr><tr><td>Intracochlear 전극 어레이</td><td>Bionics Institute, 멜버른, 호주</td><td>4 채널</td><td></td></tr><tr><td>Spongostan 표준</td><td>Ferrosan 의료 기기</td><td>#MS0002</td><td></td></tr><tr><td>조직 접착제. Loctite 4161 Superbond</td><td>Henkel</td><td>Part No 19743</td><td></td></tr><tr><td>Animal Stimulator Platform (ASP)</td><td>Oticon Medical, Nice, France</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drugs/chemicals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamine (Narketan)</td><td>Provet AG, CH</td><td>100mg/mL, #VQ_320265</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (Rompun)</td><td>Provet AG, CH</td><td>Inj Diss 2%, # 1315</td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaine</td><td>Compendium, CH</td><td>Bupivacain Sintetica inj Diss 0.5%</td><td></td></tr><tr><td>Atropine (Atropinesulfat Amino)</td><td>Amino AG, CH</td><td>1 mg/mL</td><td></td></tr><tr><td>Betadine (Povidone/iodine)</td><td>Provedic, CH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neomycin (Neomycin trisulfate salt)</td><td>Sigma</td><td>N1876-25G, Lot#WXBB7516V</td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BioSigRZ</td><td>TDT, FL, 미국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matlab</td><td>MathWorks, MA, 미국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ASP 소프트웨어</td><td>Oticon Medical, 니스, 프랑스</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

인공 와우 수술 및 c57bl/6 마우스에 전기 evoked 청각 brainstem 응답 기록

Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice

달팽이 관 임 플 란 트 (CIs)는 귀 머 거리 사람들에 게 청각의 감각을 제공할 수 있는 neuroprosthetic 장치. 그러나, CI는 청각의 모든 측면을 복원할 수 없습니다. 이식 기술의 개선 CI 사용자가 음악을 인식 하 고 경쟁 발음, 반사, 그리고 다른 소리는 목소리 듣고 같은 더 자연 스러운 환경에서 수행 하는 경우 필요 합니다. 이러한 개선 실험 동물을 달팽이 관에서 전기 자극 및 전체 청각 시스템에서의 응답의 메커니즘을 이해 하기를 요구 한다. 마우스 사용 가능한 많은 유전자 모델 점점 더 매력적인 모델입니다. 그러나, CI 모델이 종족의 한정 된 사용 주로 작은 전극 배열 이식의 어려움 때문입니다. 수술에 대 한 자세한 정보는 그러므로 CI 연구에서 마우스를 사용 하 여 확장을 큰 관심.
이 보고서에서 우리가 자세히 설명 급성 굉음과 인공 와우 이식 C57BL/6 마우스 스트레인에 전극 배열에 대 한 프로토콜. 우리 전기 evoked 청각 brainstem 응답 (eABR)이이 절차의 기능적 효능을 입증 하 고 안 면 신경 자극의 예를 보여. 마지막으로, 우리는 또한 일반적으로 청각을 사용 하 여 때 굉음 절차를 포함 하 여의 중요성을 논의 동물. 이 마우스 모델 CI 사용자에 대 한 관련성의 것 유전과 neurobiological 메커니즘 연구를 강력한 기회를 제공 한다.

이 연구의 목적은 귀 마우스에서 급성 CI 자극에 대 한 신뢰할 수 있는 모델을 설명 했다. 예약 하 고 수술 후 임계값 굉음 절차의 기능 판독 역임 했습니다. 0.05% 네오 마이 신 타원형과 둥근 창에서의 국 소 응용 프로그램 크게 46 dB ± 6 클릭 갖는 심리 임계값 증가 (사전 vs 사후 네오 마이 신: 30.0 dB ± 3.8 vs 75.7 dB ± 3.7, p = 0.0003, 쌍이 t-검정, n = 7) (그림 3). 마우스 크기의 전극 배열 (그림 4, 그림 5) 둥근 창에 삽입이 되었다. Intracochlear 전극의 전기 시뮬레이션 안정적으로 eABR 활동을 생성할 수 있습니다. (그림 7)입니다. 경우에 따라 CI 자극 얼굴 신경 활성화와 짧은 또는 긴 대기 시간으로 높은 진폭의 파를 생성 (그림 8A 와 그림 8B, 각각). 짧은 대기 시간 응답 웨이브 IV 약 3 ms의 급속 한 확대에 의해 특징 이었다 고 안 면 신경의 직접적인 응답 될 것입니다. 긴 대기 시간 응답 약 5-6 ms를 등장 하 고 안 면 신경에 의해 직접 불러 일으켰다 비 청각 근육 (조직적) 응답 될 것입니다. 안 면 신경 응답 거의 문학에서 동물 연구에서 보고 된 하지만 인간의 CI 사용자17,,1819에 잘 알려진 합병증. 그림 8, 안 면 신경 자극 나타나 상대적으로 중간 전류 레벨 (150-200 µ A)와 두 개의 서로 다른 동물. 다른 경우에 둘 다 응답 매우 높은 전류 레벨 (표시 되지 않음)에 같은 동물에 나타납니다. 안 면 신경 자극의 외관 아래 수준 현재 수준을 제한 하는 것이 좋습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig1.jpg"> 그림 1: 청각 Brainstem 응답 (ABR) 설치. 쳇 전극 (액티브/채널 1 [Ch1]), 동측 귀 ([Ref] 참조) 뒤에 정점에서 하 고 마 취 마우스의 뒷 다리 ([접지] 접지)에 배치 됩니다. 전극 신호는 증폭 하 고 TDT 시스템에 의해 기록 된. 청각과 전기 자극은 각각 마이크와 동물 자극 플랫폼을 통해 제공 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig2.jpg"> 그림 2: 야생-타입 마우스에서 자극 전과 0.05% 네오 마이 신으로 굉음 후 클릭 하 여 대표 aABR 파도. (A) 정상 청력 aABR 패턴 표시-V와 낮은 심리 임계값, 여기 30 dB SPL (화살표) 파도 의해 특징입니다. (B) 귀 aABR 패턴 증가 심리 임계값을, 여기 70 dB SPL (화살표)를 보여줍니다. 파도 더 긴 대기 시간 있고 더 많은 시간적 지터. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig3.jpg"> 그림 3: aABR 임계값 굉음 전후. 네오 마이 신에의 응용은 46 dB ± 6 aABR 임계값을 크게 늘어납니다. 사전 vs 사후 네오 마이 신: 30.0 dB ± 3.8 vs 75.7 dB ± 3.7, p = 0.0003, 쌍이 t-검정, n = 7. 오류는 의미의 표준 오류가입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig4.jpg"> 그림 4: 수술. (A) 청각 물집에 노출. bullostomy는 귀 물집 (검은 점선)에서 능선을 따라 (흰색 점선된 원)를 수행. (B)는 bullostomy의 stapedial 동맥 및 타원형 창, 둥근 창 시각화 수 있습니다. 네오 마이 신은 부드럽게 타원형 창 다음 라운드 창 처음 통해 플러시. 4번째 전극 둥근 창 틈새 내 위치 하 고 있습니다 때까지 (C)는 전극 배열 삽입 됩니다. 전극 와이어는 유지 하는 배열 절 개를 폐쇄 하기 전에 물집 내부 코일 이다. CN VII 두개골 신경 VII (안 면 신경), 유량 = 타원형 창, RW = 창, SA 라운드 = = stapedial 동맥, SCM sternocleidomastoid 근육, TB = = 귀 물집. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig5.jpg"> 그림 5: 마우스 耳. 직경 d와 0.4 m m 간격에서 간격의 플래티넘 밴드 4 개 이루어져 있다 (A) intracochlear 전극 배열: 0 [팁] (d = 0.21), 1 (d = 0.23), 2 (d = 0.25), 3 (d = 0.27). 각 전극의 폭은 0.2 m m. 4 개의 백 금/이리듐 (90/10) 파 릴 렌 절연 와이어 실리콘 튜브에 차폐 됩니다. 전극 배열 팁 (빨간색 점선된 사각형)의 (B) 확대. 전극 배열 및 백 금 기준 공 인쇄 보드에 연결 됩니다. 눈금 막대 = 1 m m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig5large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig6.jpg"> 그림 6: 전기 evoked ABR (eABR) 설치. 플래티넘 CI 땅 볼 (Gnd, 빨간색) 마우스의 목에서 피하 포켓에 배치 됩니다. 활성 (꼭지점에서 Ch1(+)) 및 참조 (Ref (-) 동측 귀에) ABR 전극 사이의 최고의 eABR 응답을 얻기 위하여 전극 배열와 바닥 사이의 수직입니다. EABR 접지 전극 (Gnd, 블랙) 뒷 다리에 배치 됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig6large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig7.jpg"> 그림 7: 대표 eABR 귀 마우스에 CI 자극에 파도. 복 형 맥 박 기차 전극 #1 초당 (pps) 400 반복 23.3 펄스에서 monopolar 구성에서 제공 됩니다. 자극 수준 0-175 µ A 25 μ A 단계 (단계 7.2에서 자극 정보 참조)에 표시 됩니다. 로마 숫자는 eABR 파 수를 나타냅니다. 파 진폭 및 대기 시간 증가 하 고 감소 하는, 각각, 현재 수준 증가 함께. 이 예제에서는 웨이브 II 약 1 등장 ms, 파 III 약 2 ms, 3 ms, 파 브 약 4 ms. 주위 웨이브 IV <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig7large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58073/58073fig8.jpg"> 그림 8: 얼굴 신경 자극의 예. 경우에 따라 CI 자극 안 면 신경 활성화 하 고 짧은 대기 시간 (A) (화살표)와 직접 응답 또는 더 긴 대기 시간 (B) (화살표)와 간접 응답을 보여주고 수 있습니다. 표시 된 예제에서는 두 개의 CI 이식 동물 로부터 0-300를 사용 하 여 복 형 맥 박 기차 자극 50 µ A에 μ A 단계 (단계 7.2에서 자극 정보 참조). 로마 숫자는 eABR 파 숫자를 나타냅니다. * 증폭기의 포화로 인해 eABR 웨이브의 클리핑을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58073/58073fig8large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>

달팽이 관 임 플 란 트의 동물 모델 영구 난청 전기 자극 치료의 기술 기반 지식을 사전 수 있습니다. 이 연구는 급성 굉음을 쥐 청각 brainstem 응답 기능 평가 있는 전극 배열 인공 와우 이식 수술 프로토콜을 제공합니다.

인공 와우 수술 및 C57BL/6 마우스에 전기 evoked 청각 Brainstem 응답 기록

Cochlear implants (CIs) are neuroprosthetic devices that can provide a sense of hearing to deaf people. However, a CI cannot restore all aspects of ...

인공와우의 동물 모델은 전기 자극으로 영구적인 감각 신경 난청 을 치료하는 기술적 기반에 대한 지식을 발전시킬 수 있습니다. 이 프로토콜은 마우스에 있는 심각한 귀가 들리지 않고 인공와우 이식을 보여줍니다. 그리고 청각 뇌 줄기 반응과 달팽이관 임플란트 자극의 기능적 평가.마우스에서 인공와우 수술을 수행하는 몇 가지 주요 과제는 달팽이관의 작은 크기와 둥근 창 틈새 시장 근처의 대형 저질 동맥의 존재입니다. 정상적인 청력 상태를 측정하기 위해 음향 폼을 1밀리리터 주사기에 적재하고 마취된 8~12주 된 C57 블랙 6 마우스의 반대외운에 100~200마이크로리터의 거품을 주입하여 침경뇌 줄기 반응을 입각성 귀에서 분리하여 모든 귀에 밀접하게 전달되도록 주의하십시오. 다음으로, 입각형 귀에서 스피커 10센티미터를 놓고 70%에탄올로 aVR 전극을 청소합니다.입각 귀의 정점 아래 피부 아래에 기준 전극을 놓고 정점의 피부 아래에 활성 전극을 놓습니다. 뒷다리의 피부 아래에 접지 전극을 넣습니다. 헤드 스테이지와 프리앰프를 광섬유 포트를 통해 청각 프로세서에 연결합니다.그리고 활성 및 기준 전극의 임피던스를 확인합니다. 전극이 동일한 임피던스를 표시하면 방음 부스를 닫고 클릭 자극을 표시합니다. 적절한 복잡한 청각 프로세서 및 소프트웨어로 무료 필드 조건에서 aVR을 기록합니다.클릭 자극을 0.1밀리초 단일 채널 모노파시 클릭으로 표준화하여 21 헤르츠에서 표시되는 클릭 레벨은 90데시벨에서 10데시벨 단계로 10밀리초 의 음압 레벨로 감소합니다. 그런 다음 aVR 임계값을 인식 가능한 aVR 웨이브 응답으로 가장 낮은 데시벨 수준으로 결정합니다. 귀가 들리지 않도록 마우스를 오른쪽에 놓고 기도가 열려 있도록 신체를 똑바로 유지하십시오.입시측 귀 뒤에 있는 털을 제거하고 순차적인 70%에탄올 용액과 포비도오-요오드 솔루션 스크럽으로 노출된 피부를 소독합니다. 해부 현미경으로 동물을 이동하고 16 배 목표와 메스를 사용하여 1 - 1 센티미터 반 후소변 절개를합니다. 25~40배율 하에서, 포셉을 사용하여 노출된 피하 지방 층을 무디게 하고 흉부라고도마스토이드 근육을 철회하여 팀패닉 불라 간음절을 드러냅니다.얼굴 신경은 흉골 의 뒤쪽 등쪽 가장자리를 감싸고 피나쪽으로 외이도를 따라 장밋빛으로 실행됩니다. 청각 황소의 식별을위한 랜드 마크로 얼굴 신경을 사용하여 부드럽게 황소에 대한 액세스를 위해 절개에 자기 유지 re트랙터 도구를 배치합니다. 황소의 메디오도르살 부위를 과도하게 배합하여 황소와 마스토이드 과정 사이의 능선을 명확하게 시각화하고 30 개의 거지 바늘을 불라로 부드럽게 회전하여 능선의 후방 우수한 측면에 구멍을 생성합니다.작은 뼈 조각을 미세한 기울어진 집게로 꼬집어 중이 구멍이 노출될 때까지 황소 절제술을 넓히게 합니다. 둥근 창 틈새 시장이 뼈를 덮치 때까지 매스토이드 프로세스쪽으로 구멍을 확장합니다. 가장 중요한 단계는 창 틈새 시장을 준비하는 것입니다.변태 동맥을 손상시키지 않도록 시간을 내어야 합니다. 테이프동맥을 손상시키지 않도록 주의하고, 전방에서 황소 절제술을 확장하여 타원형 창에 연결된 중이 뼈인 스테이프를 시각화합니다. 그런 다음 스테이프를 제거하여 타원형 창을 노출합니다.이토독성제를 적용하려면 무딘 30개의 구지 바늘을 사용하여 둥근 및 타원형 창 막을 부드럽게 천공을 하여 peri림프가 다 떨어지는 것을 확인합니다. 그리고 30 게이지 바늘을 장착한 밀리리터 주사기를 사용하여 타원형 창을 통해 PBS에 용해된 부피 네오마이신에 의해 0.2 밀리리터의 5%의 무게를 서서히 견딜 수 있습니다. 에이전트의 전체 볼륨이 전달되었을 때 경질 창에 용액을 주입하여 창 골격 구조를 손상시키지 않도록주의하십시오.그리고 둥근 창과 타원형 창 틈새 시장 안에 네오마이신에 흠뻑 젖은 1 평방 밀리미터 의 스폰지 를 놓습니다. 그런 다음 방신을 제거하고 절개를 닫고 30 분 후에 입증 된 대로 청각 장애가있는 음향 aVR을 기록합니다. 달팽이관 임플란트 전극 어레이를 삽입하려면 리트랙터 도구를 절개에 다시 배치하여 불라에 다시 액세스하고 전극 어레이를 스칼라 티파니에 삽입하여 배열의 네 번째 백금 링이 둥근 창 바로 안쪽에 위치하도록 합니다.전극 어레이의 삽입도 까다로울 수 있습니다. 따라서 와이어를 리드하는 하나의 forcep 도구를 사용하여 좋은 삽입 각도를 찾고 다른 하나는 배열을 삽입합니다. 황소 내부의 리드 와이어를 코일하고 황소 위의 조직에 와이어를 접착제.리트랙터를 조심스럽게 제거하고 조직 접착제로 삽입을 닫은 후 스케일펠을 사용하여 목에서 0.5 밀리미터 절개를 하고 활성 및 참조 aVR 전극이 있는 곳 사이의 선에 수직으로 만듭니다. 접지공을 삽입에 놓고 전극 어레이 보드를 동물 자극기 플랫폼에 연결합니다. 성능 및 전기 aVR을 위해 이전에 설명한 대로 전극을 배치하고 동물 자극기 플랫폼 소프트웨어를 엽니다.그런 다음 전기 펄스 자극 패러다임을 정의하고 TBT 헤드 스테이지, 프리 앰프 및 청각 프로세서를 통해 지속적으로 erpg 전기 aVR 응답을 기록하는 전기 펄스 열차를 제시한다. 외과 적 청력 임계값을 사전 및 게시하는 것은 귀가 들리지 않는 절차의 기능적 판독역할을합니다. 타원형 및 둥근 창에 5 %의 네오마이신을 국소 적용하여 클릭 한 청력 임계값을 크게 증가시킵니다.인코일라 전극 포스트 귀가 들리지 않는 전기 자극은 전기 aVR 활성을 안정적으로 생성할 수 있다. 경우에 따라, 인공와우 자극은 안면 신경을 활성화하고 3밀리초 전후의 Wave III의 급속한 증폭을 특징으로 하는 짧은 대기 시간으로 높은 진폭파를 생성하고 안면 신경의 직접적인 반응일 가능성이 높거나, 5~6밀리초 정도 나타나는 긴 대기 시간이 비 청각 myogenic 반응일 가능성이 높습니다. , 얼굴 신경에 의해 간접적으로 호출됩니다. 이 연구에서 우리는 달팽이관 임플란트 마우스 모형이 또한 인공와우 임플란트가 작고 수술:도전적이다는 것을 보여주었습니다.이 절차를 시도하는 동안, aVR 기록에서 전기 전도 반응을 제거하고 대부분의 C.I.사용자에서 발견 된 탈모를 모방하기 위해 귀가 먹는 프로토콜을 고려하는 것이 중요합니다. 요약하면, 인간 청각 장애의 유전 모델의 증가와 마우스에서 사용할 수있는 생물 의학 도구는 인공 와우 를 포함하여 도구 연구를위한 매력적인 동물 모델을 만든다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오는 미니피그에서 부드러운 피질 검사 배열의 이식과 장기 피질 기록을 보여줍니다. 이 연구는 미니피그의 청각 피질에 배열을 외과적으로 이식하고 기준선 및 소리 자극으로 유발된 뉴런 활동 전위를 모두 기록하는 데 필요한 단계를 간략하게 설명합니다.

Minipigs의 피질 전기생리학 기록을 위한 소프트 전기 피질 판독 어레이의 경막하 이식

이 비디오는 청각 자극을 처리하는 마우스 뇌의 특정 영역에서 신경 세포 활동에 대한 연구를 보여줍니다. 이 기술은 억제성 신경 전달 차단제를 적용하고 약물이 국소 뇌 영역에 적용되기 전과 후의 청각 자극에 대한 신경 반응을 비교하는 것을 포함합니다.

억제성 신경전달물질 차단제가 있는 상태에서 깨어 있는 쥐의 청각 신경 반응 조사

이 비디오는 전극 어셈블리를 마우스의 뇌에 이식하는 기술을 보여줍니다. 어셈블리에는 해마의 활동을 기록하기 위한 양극성 전극과 소뇌에서 기준선 활동을 얻기 위한 참조 전극이 포함되어 있습니다. 마취된 마우스를 입체성 프레임에 놓고 전극 어셈블리를 표적 뇌 영역에 이식합니다. 그런 다음 동물은 전기 생리학적 기록을 수행하기 전에 회복하도록 허용합니다.

전기생리학적 기록을 위해 마우스 뇌에 전극 어셈블리를 이식합니다.

이 동영상은 청각 장애가 있는 쥐에게 인공와우를 이식하고 전기 자극을 가하여 청각 뇌간 반응을 기록하는 절차를 보여줍니다. 이 절차를 통해 전기 청력의 기본 메커니즘을 이해할 수 있으며 인공와우 기술 및 청각 신경 과학의 발전에 기여할 수 있습니다.

귀가 먹먹한 쥐에서 전기적으로 유발된 청각 뇌간 반응 기록

이 비디오는 쥐 달팽이관의 특정 영역에서 리본 시냅스를 평가하는 방법을 보여줍니다. 면역염색 및 컨포칼 이미징 기술을 활용하여 각 달팽이관 회전에서 서로 다른 주파수 영역에 걸쳐 기능적 시냅스를 식별합니다.

Mouse Cochlea의 특정 주파수 영역에서의 리본 시냅스 평가

출처: Lee, D., et. al입니다. 마우스의 소음성 난청에 대한 수정된 실험 조건과 청력 기능 및 외부 유모 세포 손상 평가. J. Vis. 특급. (2023)이 비디오는 마우스의 청각 뇌간 반응(ABR)을 측정하는 방법을 보여줍니다. 전극은 마취된 쥐의 머리, 귀 뒤, 꼬리 근처에 배치됩니다. 다양한 강도의 음향 자극이 전달되고 생성된 전기 신호가 파형으로 기록됩니다.

마우스의 청각 뇌간 반응 측정(Measuring the Auditory Brainstem Response in Mice)

내이로의 국소 약물 전달을 위한 두 가지 미세수술 접근법이 여기에 설명되어 있으며 청력 매개변수, 달팽이관 세포 구조 및 염증 마커 발현에 미치는 영향 측면에서 비교됩니다.

마우스 내부 귀를 대상으로 약물 전달 방법의 비교 연구 : Bullostomy 대 Transtympanic 주입

이 원고는 정상 마우스에서 리본 시냅스의 형태학적 특성 및 기능 상태를 평가하기 위한 실험 프로토콜을 설명합니다. 본 모델은 또한 소음 유발 및 노화 관련 달팽이관 시냅토병 제한 모델에 적합합니다. 이전 마우스 연구의 상관 결과 또한 논의.

마우스 달팽이관의 특정 주파수 영역에서 리본 시냅스의 형태학적 및 기능적 평가

뇌간 은 임상 신경 생리학에서 중요한 도구입니다 반응 청력 측정을 불러 일으켰다. 요즘, 뇌간 은 약리학 및 유전 동물 모델 모두를 포함하는 기초 과학 및 전임상 연구에서도 반응 청력 측정을 불러 일으켰다. 여기에서 우리는 청각 뇌간 반응이 마우스에서 성공적으로 기록되고 분석될 수 있는 방법에 대한 상세한 설명을 제공합니다.

마우스에서 뇌간 에서 데이터 수집 및 분석 음성 응답 청력 측정

우리는 전극 제조를 위한 간단하고 비용 효율적인 접근 방식을 개발했으며 자유롭게 움직이는 마우스에서 여러 영역에 걸쳐 신호를 기록했습니다. 다중 지역 전기 생리학 및 칼슘 신호 기록과 함께 광유전학을 활용하면 발작 점화 모델에서 여러 지역의 신경 활동을 밝힐 수 있었습니다.

Multi-Region In vivo Recording을 위한 유연하고 편리한 전기생리학적 Optrodes를 제작하기 위한 통합 방법

학습하세요 C57BL/6 마우스에서 인공 와우 수술 및 청각 뇌간 반응 기록 방법을. 급성 난청 유도와 전기 자극 평가를 통해 청각 회복 기술 연구에 활용할 수 있습니다.

인공 와우 수술 및 C57BL/6 마우스에 전기 evoked 청각 Brainstem 응답 기록

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