Name: 뼈 재생을 위해 생체에서 생물학적 호환성 프로필 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: 배우세요 생체 내외 기법을 활용한 뼈 재생용 생물학적 호환성 평가 전략입니다. 이 다학제 플랫폼은 면역 반응 분석을 포함한 다양한 매개변수로 생체재료의 효능을 예측하여 임상 전 검증을 지원합니다.

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이 연구 프로젝트 부여 계약 번호 263363 아래 유럽 연합의 일곱 번째 기구 프로그램 (FP7 2007-2013 년)에서 자금을 받고 있다.

<ol><li>Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fracture+healing%3A+mechanisms+and+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Rheumatology%22%5BJournal%5D)">Fracture healing: mechanisms and interventions.</a> Nature Reviews Rheumatology. 11 (1), 45-54 (2015).</li>
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<li>El-Jawhari, J. J., Jones, E., Giannoudis, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+immune+cells+in+bone+healing%3B+what+we+know%2C+do+not+know+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Injury%22%5BJournal%5D)">The roles of immune cells in bone healing; what we know, do not know and future perspectives.</a> Injury. 47 (11), 2399-2406 (2016).</li>
<li>Changi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+and+immunogenicity+of+elastin-like+recombinamer+biomaterials+in+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility and immunogenicity of elastin-like recombinamer biomaterials in mouse models.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 106 (4), 924-934 (2018).</li>
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<li>Nakayama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarized+osteoclasts+put+marks+of+tartrate-resistant+acid+phosphatase+on+dentin+slices--a+simple+method+for+identifying+polarized+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Polarized osteoclasts put marks of tartrate-resistant acid phosphatase on dentin slices--a simple method for identifying polarized osteoclasts.</a> Bone. 49 (6), 1331-1339 (2011).</li>
<li>Deguchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+model+of+bone+to+facilitate+measurement+of+adhesion+forces+and+super-resolution+imaging+of+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">In vitro model of bone to facilitate measurement of adhesion forces and super-resolution imaging of osteoclasts.</a> Scientific Reports. 6, 22585(2016).</li>
<li>Epstein, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+noninstrumented+posterolateral+lumbar+fusions+performed+in+predominantly+geriatric+patients+using+lamina+autograft+and+beta+tricalcium+phosphate%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+Journal%22%5BJournal%5D)">An analysis of noninstrumented posterolateral lumbar fusions performed in predominantly geriatric patients using lamina autograft and beta tricalcium phosphate.</a> Spine Journal. 8 (6), 882-887 (2008).</li>
<li>Epstein, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta+tricalcium+phosphate%3A+observation+of+use+in+100+posterolateral+lumbar+instrumented+fusions%5BTitle%5D)+AND+%22Spine+Journal%22%5BJournal%5D)">Beta tricalcium phosphate: observation of use in 100 posterolateral lumbar instrumented fusions.</a> Spine Journal. 9 (8), 630-638 (2009).</li>
<li>Kallai, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcomputed+tomography-based+structural+analysis+of+various+bone+tissue+regeneration+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Microcomputed tomography-based structural analysis of various bone tissue regeneration models.</a> Nature Protocols. 6 (1), 105-110 (2011).</li>
<li>Lo, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repair+of+a+critical-sized+calvarial+defect+model+using+adipose-derived+stromal+cells+harvested+from+lipoaspirate%5BTitle%5D)+AND+%22Jove-Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repair of a critical-sized calvarial defect model using adipose-derived stromal cells harvested from lipoaspirate.</a> Jove-Journal of Visualized Experiments. (68), (2012).</li>
<li>Gosain, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenesis+in+calvarial+defects%3A+contribution+of+the+dura%2C+the+pericranium%2C+and+the+surrounding+bone+in+adult+versus+infant+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Osteogenesis in calvarial defects: contribution of the dura, the pericranium, and the surrounding bone in adult versus infant animals.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 112 (2), 515-527 (2003).</li>
<li>Levi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dura+mater+stimulates+human+adipose-derived+stromal+cells+to+undergo+bone+formation+in+mouse+calvarial+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Dura mater stimulates human adipose-derived stromal cells to undergo bone formation in mouse calvarial defects.</a> Stem Cells. 29 (8), 1241-1255 (2011).</li>
<li>Wang, J., Glimcher, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+matrix-induced+osteogenesis+in+rat+calvarial+bone+defects%3A+II.+Origins+of+bone-forming+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Characterization of matrix-induced osteogenesis in rat calvarial bone defects: II. Origins of bone-forming cells.</a> Calcified Tissue International. 65 (6), 486-493 (1999).</li>
</ol>

저자는 공개 없다.

여기, 우리가 대표적인 바이오 뼈 재생 및 복구에 대 한 개발에 대 한 생체 적합성의 전 임상 평가 대 한 다양 한 접근 방식을 보여줍니다. 우리 OBs, OCs의 응답을 테스트 하 고 중요 한 뼈의 결함의 에 비보 치유 응답 모델 쥐 뿐만 아니라 에 체 외 그리고 vivo에서 면역 반응. 우리는 분석 작업과 데이터와는 생체 재료의 시험에서 파생 된 결론을 요약 설명 목적입니다. 우리는 우리의 전략 뼈 소재 생체 적합성의 귀중 한 프로필 생성을 보여줍니다.
1 차 셀 분석 OB와 OC 기능을 평가 하기 위해 사용 되었다. OBs는 뼈 형성과 생리 수리 하는 일을 담당 합니다. 그들은 가능한 유지, 차별화, 고 강화를 유도 해야 합니다. 이 연구에서 우리는 형성할 수 있는 능력으로 순수 차별화 된 세포의 표식으로 세포 생존 능력, ALP, 및 ARS에 대 한 분석을 수행 하는 방법을 보여줍니다. 분석에 대 한 컨트롤 포함 매체, 기준...

뼈 수리 혈 종 형성, 염증으로 시작 하는 복잡 한 과정, callus 형성 및1,2를 개장 하는 다음. 그러나, 뼈 재생 잠재적인 뼈 골절1,3의 크기로 제한 됩니다. 예를 들어, 큰 뼈 골절 외상, 암이 나 골다공증으로 인 한 치유 되지 않을 수 있습니다 그리고 비 연합 뼈 골절을 불린다. 이러한 뼈 병 변은 종종 건강 한 생리 뼈 수리 및 재생을 촉진 하는 치료를 필요로 합니다. 현재, autograft와 이식 뼈 이식 선택4 2.2 백만 뼈 대체 절차의 접근은 매년5. 비록 이러한 절차 높은 성공률을가지고, 합병증, 예를 들어 제한 된 가용성 뼈, 감염, 기증자 사이트 사망률, 그리고 거부4의 있을 수 있습니다. 뼈 조직 공학에 대 한 새로운 대안 이러한 과제를 해결 하기 위해 모색 되 고 있다.
천연 또는 합성 고분자, bioceramics 또는 세포 및 생리 활성 분자와 함께 금속 기반 생체 재료의 설계는 상승6에. 생리 뼈 치유와 생체의 맥락에서 치유의 우리의 현재 이해 기계적 특성 등 여러 요인 및 순환 및 골절 사이트7에서 셀을 포함 하 여 여러 로컬 및 조직 요인에 따라 달라 집니다. ,,89. 뼈 재생을 위한 바이오 osteogenicity 및 osseointegration10 홍보 하는 것을 목표로 고 이상적으로 생체, 생 분해성, 다공성 (추진 셀 마이그레이션, 산소, 영양분) 이다. 그들은 또한 고통을 구호 하 골절 사이트를 지원 하기 위해 충분히 강할 필요가. 또한, 선 동적인 요인 치유 과정을 시작 하려면 필요 합니다. 그러나, 경우는 소재는 과도 한 염증 및 알레르기 성 응답을 유도, 제한 하거나 뼈11,12치유를 억제 수 있습니다이. 따라서, 학 제 적인 접근은 뼈 수리를 위해 개발 하는 바이오 소재를 평가 하는 데 필요한.
이 연구에서는 거품 tricalcium 인산 염으로 구성 된 상용 수가 뼈 이식 대용품 이다 나노미터 크기의 순수한 β tricalcium 구성 1) Orthovita Vitoss 대표 물질의 전 임상 평가 소개 인산 (β-TCP) 입자와 유형 1 소 콜라겐 (C) (β-TCP/C 거품)과 2) β-TCP 디스크. 여기, 우리는 기본 osteoblast (OB)를 사용 하 여 이러한 생체 재료의 생체 적합성 테스트 설명 및 osteoclast (OC) 분석 실험, 뼈 복구, T 림프 구 확산 체 외에서 구성 된 면역학 평가의 vivo에서 모델 및 cytokine 생산, 그리고 vivo에서 immunogenicity allergenicity, 이전에 보고 된13.

<table><tbody><tr><td>Biomaterials</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&beta;-tricalcium phosphate disks (&beta;-TCP, 14 mm)</td><td></td><td></td><td>디스크를 1150°C의 온도에서 머플 용광로에서 소결하였다. 제작에 대한 자세한 설명은 Zimmer et al (doi: 10.1002/jbm.a.34639)에서 찾을 수 있다. 샘플은 세포 배양에 사용하기 전에 UV 조사(각 면당 15분)되었습니다.</td></tr><tr><td>Orthovita Vitoss 폼 (&beta; -TCP / C 폼)</td> <td>Orthovita</td><td>2102-1405</td><td></td></tr> <tr><td>< 강> 마우스 골 세포 배양 < / 강></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Alizarin Red S</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5533</td><td></td></tr><tr><td>ALP 분석 버퍼 (2x) pH 10.4</td><td></td><td></td><td>초순수에 200 mM 글리신, 2 mM 염화 마그네슘, 2 mM 염화 아연을 용해하고 pH 10으로 조정하십시오.</td></tr><tr><td>뼈 성장 배지(BGM)</td><td></td><td></td><td>&알파;-MEM + 10% 열 비활성화 FBS + 1% 페니실린/스트렙토마이신</td></tr><tr><td>세포 용해 완충액: CyQuant 세포 용해 완충액 20배 농축</td>액 <td>Thermo Scientific</td><td>C7027</td><td>농축 세포 용해 완충액을 초순수에 20배 희석합니다.</td></tr><tr><td>세포 생존도 시약: Presto Blue 세포 생존도 시약</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>A13261</td><td></td></tr><tr><td>클로스트리듐 히스톨리티쿰의 콜라겐분해효소 IV형</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>DC 단백질 분석 키트 II</td><td>Bio Rad</td><td>5000112</td><td>DC 단백질 분석 키트에는 참조 표준물질에 대한 시약 A, 시약 B, 시약 S 및 BSA가 포함되어 있습니다. 시약 A'의 경우 20 &micro를 추가하십시오. L 시약 S에서 1000 &마이크로; L 시약 A.&nbsp;</td></tr><tr><td>디메틸설폭사이드(DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td>멸균 필터 DMSO 사용 전.&nbsp;</td></tr><tr><td>Dispase II (중성 프로테아제, 등급 II)</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td></td></tr><tr><td>EnzCheck 인산가수분해효소 분석 키트, 알칼리성 인산가수분해효소 활성을 위한 키트&nbsp;</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>E12020</td><td>EnzCheck 포스파타제 분석 키트에는 6,8-디플루오로-4-메틸룸벨리페릴포스페이트(DiFMUP), N,N-디메틸포름아미드 및 6,8-디플루오로-7-하이드록시-4-메틸쿠마린(DiFMU)이 포함되어 있습니다.</td></tr><tr><td>소 태아 혈청 (FBS)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>포르말린 용액 중성 완충 10 %</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>글리신</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>G8898</td><td></td></tr><tr><td>헥사 데실 피르 디늄 (세틸 피리디늄) 염화물 일 수화물</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>C9002</td><td></td></tr><tr><td>L- 아스코르브 산 2- 인산 세스키 마그네슘 염 수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8960</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘 육수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2670</td><td></td></tr><tr><td>MEM 알파 매체(&alpha;-MEM)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>11900-073</td><td></td></tr><tr><td>골형성 광물화 매체 (MM)</td><td></td><td></td><td>&알파;-MEM + 10% 열 비활성화 FBS + 1% 페니실린-스트렙토마이신 + 50 &마이크로; g/mL 아스코르브산 + 5 mM &beta;-글리세로포스페이</td></tr>트 <tr><td>페니실린-스트렙토마이신&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 1x (PBS) pH 7.4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>Sigmafast BCIP/NBT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5655</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.5%), 페놀 레드 없음 (10x)</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15400054</td><td>농축 원액을 1x PBS에 10배 희석합니다.</td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>초순수: 세포 배양수 발열원 무료</td><td>VWR</td><td>L0970-500</td><td></td></tr><tr><td>세척 버퍼</td><td></td><td></td><td>추가&nbsp; 0.05% Tween20 to 1x PBS.</td></tr><tr><td>염화아연</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1.08816</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Glycerophosphate disodium salt hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5422</td><td></td></tr><tr><td>24-well suspension culture plate</td><td>Greiner bio-one</td><td>662102</td><td></td></tr><tr><td>24-well tissue culture plate</td><td>Greiner bio-one</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conical tube</td><td>Greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>96웰 블랙 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>655076</td><td></td></tr><tr><td>96웰 투명 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>655001</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기: VWR Mega Star 600R</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 인큐베이터: HeraCell 240</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cryovial 2 mL</td><td>Greiner bio-one</td><td>122263</td><td></td></tr><tr><td>일회용 필터 유닛 FP30/0.2 CA-S</td><td>GE Healthcare Life Sciences Whatman</td><td>10462200</td><td>효소 용액의 멸균 여과용.</td></tr><tr><td>평판 스캐너: Epson Perfection 1200 Photo</td><td>Epson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Infinite M200 Pro 마이크로플레이트 리더</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로원심분리기 튜브: Eppendorf 튜브 safe-lock 0.5 mL</td><td>VWR</td><td>20901-505</td><td></td></tr><tr><td>마이크로원심분리기 튜브: Eppendorf 튜브 safe-lock 1.5 mL</td><td>VWR</td><td>21008-959</td><td></td></tr><tr><td>Shaker Swip (궤도 및 수평)&nbsp;</td><td>에드먼드 뷸러&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>쉐이킹 인큐베이터 GFL3032</td><td>GFL&nbsp;</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>일회용 피펫: 혈청 피펫</td><td>Greiner bio-one</td><td>612301</td><td></td></tr><tr><td>멸균 기구(가위, 핀셋, 곡선 집게)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>조직 배양 플레이트(10cm)</td><td>Greiner bio-one</td><td>664960</td><td></td></tr><tr><td>Mouse osteoblast-osteoclast co-culture</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1&alpha;,25- 디하이드록시비타민 D3</td><td>시그마-알드리치</td><td>17936</td><td>1000x 농축 주식 (10 &마이크로; M in ethanol 100%)</td></tr><tr><td>아세톤</td><td>VWR Chemicals</td><td>22065.327</td><td></td></tr><tr><td>뼈 성장 매체(BGM)</td><td></td><td></td><td>&알파;-MEM + 10% 열 비활성화 FBS + 1% 페니실린-스트렙토마이신</td></tr><tr><td>증류수</td><td>Carl Roth</td><td>3478.4</td><td></td></tr><tr><td>에탄올(100% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>20821.365</td><td></td></tr><tr><td>에탄올(70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>패스트 레드 바이올렛 LB 염</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F3381</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청 (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>포르말린 용액 중성 완충 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>MEM 알파 배지(&alpha;-MEM)</td><td>Gibco Life Technologies&nbsp;</td><td>11900-073</td><td></td></tr><tr><td>N, N- 디메틸 포름 아미드</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>D4551</td><td></td></tr><tr><td>나프톨 AS-MX 인산</td>염 <td>시그마 - 알드리치</td><td>N4875</td><td></td></tr><tr><td>골 세포 분화 매체 (DM)</td><td></td><td></td> <td>&알파; -MEM + 10 % 열 비활성화 FBS + 1 % 페니실린 - 스트렙토 마이신 + 1 nM 1,25- (OH) 2- 비타민 D3 + 1 &마이크로; M 프로스타글란딘 E2&nbsp;</td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 1x (PBS) pH 7.4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>프로스타글란딘 E2 (PGE2)</td><td>Cayman Chemical Company</td><td>9003016</td><td>1000x 농축 주식 (에탄올 100 % 중 1 mM)</td></tr> <tr><td>아세트산 나트륨 삼수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7670</td><td></td></tr><tr><td>주석산 나트륨 이염기 이수화물</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8640</td><td></td></tr><tr><td>멸균 기기 (가위, 집게, 메스)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TRAP 완충기 pH 5.0</td><td></td><td></td><td>초순수에 40mM 아세트산나트륨, 10mM 주석산나트륨을 용해시키고 pH 5로 조정합니다.</td></tr><tr><td>초순수: 세포 배양수 발열원 무함유</td><td>VWR</td><td>L0970-500</td><td></td></tr><tr><td>24웰 현탁 배양 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>662102</td><td></td></tr><tr><td>24웰 조직 배양 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>662160</td><td></td></tr><tr><td>50mL 원추형 튜브</td><td>Greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기: VWR Mega Star 600R</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2-인큐베이터: HeraCell 240</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>다이아몬드 웨이퍼 블레이드(10.2 cm x 0.3 cm)</td><td>Buehler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isomet 저속 톱</td><td>Buehler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petri 접시(6 cm)</td><td>Greiner bio-one</td><td>628,161</td><td></td></tr><tr><td>스크류 캡 유리병 20 mL</td><td>Carl Roth</td><td>EXY4.1</td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 주사기 1 mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>일회용 피펫: 혈청 피펫</td><td>Greiner bio-one</td><td>612301</td><td></td></tr><tr><td>멸균 바늘: 피하 주사 바늘 RW 27 G x 3/4''</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003340</td><td></td></tr><tr><td>Mouse calvarial defect model</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>진통제: 부프레노르핀 (Bupaq)</td><td>Richter Pharma AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취 : 케타민 (Ketamidor), 자일라진 (Rompun)</td> <td>Richter Pharma AG / Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>냉 살균제 : SafeSept Max</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>9882765</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 (70 % vol / vol)</td> <td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>눈 연고 : VitA POS 5g</td><td>Ursapharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>생리 식염수 (0.9 % 염화나트륨 용액)</td><td>Fresenius Kabi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 1x(PBS) pH 7.4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>Povidone 요오드 용액: Braunol 1000 mL</td><td>B. Braun</td><td>3864154</td><td></td></tr><tr><td>Roti-Histofix 4.5% 완충 포르말린</td><td>Carl Roth</td><td>2213.6</td><td></td></tr><tr><td>조직 접착제: Histoacryl 5 x 0.5 mL&nbsp;</td><td>B. Braun Surgical</td><td>1050060</td><td></td></tr><tr><td>개인 보호 장비: 수술용 장갑, 모자 및 마스크, 가운</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>1045073, 1026614, 9009062, 370406</td><td></td></tr><tr><td>멸균 기구 (메스, 가위, 펜치, 바늘 홀더)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 바늘: 피하 주사 바늘 RW 27 G x 3/4'' 및 30 G x 1/2''&nbsp;</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>9003340, 9003630</td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 주사기 1mL</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>가열판: Physitemp</td><td>Rothacher Medical</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>멸균 거즈 면봉</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>220192</td><td></td></tr><tr><td>멸균 일회용 메스(그림 20)</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>9008957</td><td></td></tr><tr><td>외과/치과 드릴: 임플란트 SI-923</td><td>W& H Dentalwerk B&uuml; rmoos GmbH</td><td>16929000</td><td></td></tr><tr><td>핸드피스 유형 S-II</td><td>W& H Dentalwerk B&uuml; rmoos GmbH</td><td>30056000</td><td></td></tr><tr><td>트레핀, 직경 4mm</td><td>Hager& Meisinger GmbH</td><td>229040</td><td></td></tr><tr><td>관개 튜빙 세트 2.2m</td><td>W& H Dentalwerk B&uuml; rmoos GmbH</td><td>4363600</td><td></td></tr><tr><td>페리오스틸 엘리베이터 2 mm / 3 mm</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>472683</td><td></td></tr><tr><td>비흡수성 봉합사: 폴리에스터 그린, DS19, 충족. 1.5, USP 4/0 75 cm</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>300715</td><td></td></tr><tr><td>시험관내 면역 반응</td><td></td><td></td><td></td></tr>안락사<tr><td>를 위한 마취: 케타민(케타미도르), 자일라진(Rompun)</td><td>Richter Pharma AG/Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>세포 증식 ELISA, BrdU(비색) 분석 키트</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11647229001</td><td>키트에는 BrdU 라벨링 용액, 고정 용액(FixDenat), 항-BrdU 항체 용액, 세척 완충액 및 기질 용액이 포함되어 있습니다.</td></tr><tr><td>Concanavalin A (ConA)</td><td>MP Biomedicals</td><td>150710</td><td></td></tr><tr><td>배양 매체 플레녹세포</td><td></td><td></td><td>RPMI 매체 + 10% 열 비활성화 FBS + 1% 페니실린-스트렙토마이신 용액 + 0.1% 겐타마이신 + 0.2% &szlig;-메르캅토에탄올 + 1% 비필수 아미노산</td></tr><tr><td>에탄올 (70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청 (FBS)</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific& 주의;</td><td></td><td></td>10500064</tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Gibco, 써모 피셔 사이언티픽&nbsp;</td><td></td><td></td>15750037</tr><tr><td>마우스 IL-1&beta; ELISA 레디-셋-고!</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>88-7013-88</td><td></td></tr><tr><td>마우스 IL-2 ELISA MAX 표준</td><td>BioLegend</td><td>431001</td><td></td></tr><tr><td>마우스 IL-4 ELISA MAX 표준</td><td>BioLegend</td><td>431101</td><td></td></tr><tr><td>마우스 INF-&gamma; ELISA MAX Standard</td><td>BioLegend</td><td>430801</td><td></td></tr><tr><td>비필수 아미노산 솔루션</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>11140050 페니실린-스트렙토마이신&nbsp;</td><td>Gibco, 써모 피셔 사이언티픽&nbsp;</td><td></td><td></td>15140122</tr><tr><td>인산염 완충 식염수 1x(PBS) pH 7.4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>적혈구(RBC) 용해 완충액: BD Pharm Lyse</td><td>BD Bioscience</td><td>555899</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium, HEPES</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>52400025</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>31350010</tr><tr><td>50 mL 원뿔형 튜브</td><td>Greiner bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>96-well 조직 배양 플레이트</td><td>Greiner bio-one</td><td>655180</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기: VWR Mega Star 600R</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cell strainer 40 &micro; m</td><td>BD Bioscience</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Infinite M200 Pro 마이크로플레이트 리더</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 주사기 1 mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>멸균 수술 기구(집게, 유리 슬라이드)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><강력한>고처리량 복강내 모델</강력></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취: 케타민(케타미도르), 자일라진(롬푼)</td><td>Richter Pharma AG/Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>냉막제: SafeSept Max</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>9882765</td><td></td></tr><tr><td>에탄올(70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>눈 연고: VitA POS 5g</td><td>Ursapharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마우스 IL-1&beta; ELISA 레디-셋-고!</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher Scientific</td><td>88-7013-88</td><td></td></tr><tr><td>마우스 IL-2 ELISA MAX 표준</td><td>BioLegend</td><td>431001</td><td></td></tr><tr><td>마우스 IL-4 ELISA MAX 표준</td><td>BioLegend</td><td>431101</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 1x (PBS) pH 7.4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>포비돈 요오드 용액: Braunol 1000 mL</td><td>B. Braun</td><td>3864154</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Rapid-Chrome Kwik-Diff 염색 키트</td><td>Thermo Scientific</td><td>9990700</td><td>차등 세포 수용.</td></tr><tr><td>가열판: Physitemp</td><td>Rothacher Medical</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>혈구계: Neubauer 챔버</td><td>Carl Roth</td><td>PC72.1</td><td></td></tr><tr><td>비흡수성 봉합사: Ethibond Excel 4-0</td><td>Ethicon</td><td>6683H</td><td></td></tr><tr><td>흡수성 봉합사: Polysorb</td><td>Covidien</td><td>SL-5628</td><td></td></tr><tr><td>Shandon centrifuge for cytopsin</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 주사기 1mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>멸균 거즈 면봉</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>220192</td><td></td></tr><tr><td>멸균 바늘: 피하 주사 바늘 RW 27 G x 3/4'' 및 25 G</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003340, 420939</td><td></td></tr><tr><td>멸균 수술 기구(메스, 가위, 집게, 바늘 홀더)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypan 블루 솔루션 0.4%</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Subchronic 피하 모델</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마취: 케타민(Ketamidor), 자일라진(Rompun)</td><td>Richter Pharma AG/Bayer HealthCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>냉균제: SafeSept Max</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>9882765</td><td></td></tr><tr><td>에탄올(70% vol/vol)</td><td>VWR Chemicals</td><td>93003.1006</td><td></td></tr><tr><td>눈 연고: VitA POS 5 g</td><td>Ursapharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline 1x (PBS) pH 7.4</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>10010023</tr><tr><td>포비돈 요오드 용액: Braunol 1000 mL</td><td>B. Braun</td><td>3864154</td><td></td></tr><tr><td>Roti-Histofix 4.5% 완충 포르말린</td><td>Carl Roth</td><td>2213.6</td><td></td></tr><tr><td>가열판: Physitemp</td><td>Rothacher Medical</td><td>TCAT-2LV</td><td></td></tr><tr><td>비흡수성 봉합사: Ethibond Excel 4-0</td><td>Ethicon</td><td>6683H</td><td></td></tr><tr><td>개인 보호 장비: 외과적 장갑, 모자 및 마스크, 가운</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>1045073, 1026614, 9009062, 370406</td><td></td></tr><tr><td>일회용 멸균 주사기 1mL</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>9003016</td><td></td></tr><tr><td>멸균 거즈 면봉</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>220192</td><td></td></tr><tr><td>멸균 기구(메스, 가위, 집게, 바늘 홀더)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>멸균 바늘: 피하 주사 바늘 RW 27 G x 3/4''&nbsp;</td><td>Henry Schein 동물 건강</td><td>9003340, 420939</td><td></td></tr></tbody></table>

뼈 재생을 위해 생체에서 생물학적 호환성 프로필

Biological Compatibility Profile on Biomaterials for Bone Regeneration

큰 비-연합 뼈 골절은 정형 외과 수술에 중요 한 도전입니다. 자동-및 수용자 뼈 이식 같은 병 변 치유를 위한 훌륭한 있지만, 그들의 사용을 가진 잠재적인 합병증이 있다. 따라서, 물자 과학자는 이러한 문제를 극복 하기 위해 합성, 생체 바이오 소재 개발 하 고 있다. 이 연구에서 우리는 뼈 수리에 대 한 생체 재료를 평가 하기 위한 종합 플랫폼 제시. 우리는 뼈 생물학 및 면역학 생체 외에서 osteoclast (OC)와 osteoblast (OB) 분석 실험 및 뼈 수리, immunogenicity, 및 allergenicity의 마우스 모델 vivo에서 포함 하는 플랫폼을 개발 하는 전문성을 결합. 실험을 수행, 결과 요약 및 생체 적합성 소재에 보고 하는 방법을 보여 줍니다. 특히, 테스트 산부인과 생존, 차별화, 그리고 강화 작용 및 OC 생존 및 차별화 β tricalcium 인산 (β-TCP) 디스크의 맥락에서. 우리는 또한 뼈 치료의 초기 단계에 대 한 효과 결정 하기 위해 뼈 수리 calvarial 뼈 크기의 중요 한 결함 마우스 모델에 대 한 임상 사용 상용 물자 인 β-TCP/콜라겐 (β-TCP/C) 거품을 테스트. 병렬 실험에서 우리는 쥐의 면역 및 알레르기 반응을 평가. 우리의 접근 방식은 다양 한 매개 변수 뼈 치유 및 복구 환자에 사용 하는 생체 재료의 생체 적합성 예측에 필요한 뼈 소재의 생물학 호환성 프로 파일을 생성 합니다.

Β-TCP 뼈 수리에 대 한 소재로 그것의 효과 대 한 평가, 우리는 생체 외에서 그리고 vivo에서 심사 방법 사용. 첫째, 우리는 초기 중간 혼자 컨트롤에 비해 β-TCP 디스크에 산부인과 응답 측정. 그림 2 문화의 7 및 14 일 OB 생존 β-TCP 디스크에 대 한 응답에서을 보여 줍니다. Β-TCP 디스크는이 소재는 강화도 산부인과 확산 억제를 나타내는 뿐만 아니라 조직 문화 플라스틱에서 매체와 문화 스에서 metabolically 활성 셀에서 측정 하는 세포 생존 능력 OBs에 대 한 동일 했다.
더 평가 OBs, 질적 및 양적 방법을 사용 하 여 차별화의 감 적으로 알프 활동을 측정 했습니다. 그림 2 는 문화의...

큰 뼈 장애 복구에 대 한 설계 새로운 생체 재료의 수는 지속적으로 뼈 이식 수술과 관련 된 합병증을 극복 하 고 뼈 치유 향상을 목표로 확장 됩니다. 여기, 우리는 뼈 수리에 대 한 생체의 전 임상 생체 적합성 테스트를 위한 종합 전략을 제시.

Large non-union bone fractures are a significant challenge in orthopedic surgery. Although auto- and allogeneic bone grafts are excellent for healing such ...

이러한 방법은 생체 재료 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 특히 뼈 재생에 대 한. 그들은 생체 재료와 잠재적인 면역 반응의 효과 평가 하는 데 사용 됩니다.이 종합 플랫폼의 주요 장점은 뼈 수리에 사용되는 생체 재료의 생체 적합성을 예측하기위한 다양한 매개 변수를 제공한다는 것입니다. 시험관 내 및 생체 내 뼈 기술의 의미는 그밖 뼈 무질서쪽으로 확장합니다. 때문에 새로운 정형 외과 생체 재료의 전임상 검사의 필요성.피부과 방법론은 뼈 치유를 위한 생체 재료에 대한 통찰력을 제공할 수 있으며, 다른 임상 적응증을 위한 생체 재료 평가에도 적용될 수 있다. 골성 미네랄화 배지의 첨가 후 14일 간 1차 골세포에서 흡인배기 배지. 1X PBS의 0.5 밀리리터로 두 번 헹구는 다.그런 다음 10%의 완충 된 포르말린 용액의 0.5 밀리리터를 추가하고 10 분 동안 실온에서 배양하여 세포를 수정합니다. 10분 후, 10% 버퍼링된 포르말린을 일회용 파이펫으로 흡인하고 0.5 밀리리터의 초순수로 두 번 세척합니다. 그런 다음 고정 된 골에 40 밀리머 알리자린 레드 S 염색 용액의 250 마이크로 리터를 추가합니다.그리고 분당 100 쉐이크에서 셰이커에 10 분 동안 실온에서 접시를 배양하십시오. 스테핑 용액으로 인큐베이션을 사용하여 염색 용액을 일회용 파이펫으로 흡인하고 1 밀리리터의 초순수로 헹구세요. 헹구는 용액이 명확해질 때까지 이 단계를 5~10회 반복하여 비특이적 얼룩을 제거합니다.마지막 세척을 한 후, 차가운 PBS의 1 밀리리터를 추가합니다. 그리고 이전과 같이 셰이커에 10 분 동안 실온에서 접시를 배양. 다음으로, 스테인드 베타 트리칼슘 인산염 디스크를 새로운 우물로 옮기고 평판 스캐너로 플레이트를 스캔하여 광물화를 기록합니다.이미지 캡처 후, 10% 세틸피리디늄 염화물 용액의 250 마이크로리터를 추가하고 15분 동안 흔들어 알리자린 레드 S 염료를 추출합니다. 다음으로, 우물에서 1.5 밀리리터 튜브및 원심분리기로 실온에서 5분 동안 000 x g로 용액을 옮긴다. 1.5 밀리리터 튜브에서 1:10~1:20의 희석 배급으로 10%의 세틸피리디늄 염화물 용액으로 추출물을 희석시 희석시.그런 다음 각 희석 된 샘플의 300 마이크로 리터를 96 웰 플레이트의 우물로 옮킨다. 염화10%만 함유한 빈 우물 2개를 포함합니다. 다음으로, 표준 곡선을 생성하기 위해 10%의 세틸피리디

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

후보 임플란트 표면에 테스트 뼈 고정 장치를 기계적으로하는 개선 된 방법이 제공됩니다. 이 방법은 정확하게 수직 또는 병렬, 임플란트 표면의 평면에 중단 힘의 정렬이 가능하고, 정확한 임플란트 지역으로 중단 힘을 지시하는 정확한 방법을 제공합니다.

뼈 이식 앵커리지 평가하는 향상된 기계적 시험 방법

우리는 뼈 에어컨 매체 (BCM)을 준비하고 시험 관내에서 활동을 테스트하는 방법을 여기에 대해 설명합니다.

뼈 조정 배지 : 준비 및 생물 검정

엔지니어링된 마이크로 채널이 있는 뼈대와 같은 템플릿을 만드는 단계별 일반 프로세스가 제공됩니다. 템플릿의 높은 흡수 및 유지 능력은 마이크로 채널을 통한 모세관 작용으로 입증됩니다.

마이크로 채널로 독특한 모세관 액션 뼈 같은 템플릿 대형 나폴레옹 결함의 복원에 대한 세포의 모집을 향상시킬 수 있습니다

생체 재료 뼈 Morphogenetic 단백질 2 (BMP2) 실수로 비-연합 뼈 골절을 치유 하 새로운 치료 전략으로 사용 되었습니다. 요인의 통제 자료에서 발생 하는 부작용을 극복 하기 위해 제안 하는 사이트를 새로운 전략-직접 따라서 향상 된 osteogenic 기능으로 자료를 만드는 요소를 고정.

뼈 Morphogenetic 단백질의 2 고체 표면에 화학 클릭 하 여 사이트 감독 동원 정지

여기, 선물이 세균성 세포 생존 및 형태학 상 특성의 분석을 포함 하 여 치과 보 철물 abutments에 대 한 티타늄 및 지 르 코니 아 재료에 구두 biofilm 형성 평가 하는 프로토콜. 현장에서 모델 관련 강력한 현미경 검사 법 기술 된 구두 biofilm 분석에 사용 됩니다.

치과 임 플 란 트에 대 한 다른 자료에 구두 Biofilm 형성

우리는 생분해성 임플란트 재료의 시험관내 세포 적합성을 평가하기 위해 직접 배양, 직접 노출 배양 및 노출 배양의 세 가지 방법을 소개합니다. 이러한 시험관 내 방법은 상이한 생체내 세포-임플란트 상호작용을 모방하고 다양한 생분해성 물질을 연구하는데 적용될 수 있다.

체외에서 생분해성 임플란트 재료를 연구하기 위한 직접 및 간접 배양 방법

이 연구에서는 식물 기반 생체 재료의 탈세포화, 물리적 특성화, 이미징 및 생체 내 이식 방법과 스캐폴드의 세포 파종 및 분화 방법을 자세히 설명합니다. 설명된 방법을 통해 뼈 조직 공학 응용 분야를 위한 식물 기반 생체 재료를 평가할 수 있습니다.

뼈 조직 엔지니어링을 위한 탈세포화된 사과 유래 스캐폴드 , In Vitro 및 In Vivo

제안된 프로토콜은 다중 모드 분석을 사용하여 뼈 재생의 맥락에서 뼈 형성을 평가하기 위한 글로벌 접근 방식을 수반합니다. 새로운 뼈 형성에 대한 정성적 및 정량적 정보를 제공하여 기초 및 전임상 조사의 엄격성과 타당성을 향상시키는 것을 목표로 합니다.

Ex vivo 모델에서 조직 광물화의 포괄적인 특성 분석

이 연구는 내고정 또는 외부 고정 없이 하중 지지 조건에서 뼈 대체 재료의 기계적 및 골형성적 성능을 평가하기 위해 쥐 대퇴골 반분절 결손 모델을 구축하였습니다.

하중 지지 부위에서 뼈 대체 성능 평가를 위한 쥐의 반분절 골단골 결손 모델

우리는 다양한 계층적 수준에서 뼈 재생을 평가하는 프로토콜을 제안합니다. 이 다중 모달 접근법은 다양한 길이 척도에서 구조 분석을 가능하게 하여 시료 준비의 문제를 효과적으로 해결합니다. 또한 생체 재료가 뼈 재생을 촉진하는 효과를 평가하는 신뢰할 수 있는 워크플로우를 제공합니다.

골 재생 및 스캐폴드 성능 평가를 위한 다중 모드 접근법

배우세요 생체 내외 기법을 활용한 뼈 재생용 생물학적 호환성 평가 전략입니다. 이 다학제 플랫폼은 면역 반응 분석을 포함한 다양한 매개변수로 생체재료의 효능을 예측하여 임상 전 검증을 지원합니다.

뼈 재생을 위해 생체에서 생물학적 호환성 프로필

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